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UNAM, FES Zaragoza. Microbiología Médica - Hemocultivo. Equipo 1.El traslape de información se debe a que la presentación contiene gran cantidad de animaciones.Requiere que el lector de pdf maneje transparencias.
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Alumno:Pérez Pérez José Manuel
Asesor:
QFB Ma. De las Mercedes Zamudio Durán
Definiciones
• Presencia de bacterias en sangre
Bacteremia
• Manipulación de tejidos
• Abscesos, forúnculos, celulitis, cepillado, estreñimiento.
• Instrumentación sobre superficies mucosas
• Extracción dentaria, caterización uretral
Transitoria
• Abscesos intraabdominales o viscerales no drenados
• Osteomielitis, artritis, meningitis, neumonía
Intermitente
• Endocarditis bacteriana
Continua
• Por lo menos dos manifestaciones
• 1) Fibre mayor a 38°C o hipotermia menor a 36°C. 2) Frecuencia cardiaca mayr a 90 cpm; 3) Frecuencia respiratoria mayor a 20 rpm, o pCO2 menor a 32 mm de Hg. Leucocitosis mayor a 12000 o menor a 4000/mm3; o mas de 10% de formas inmaduras.
Sindrome de Respuesta inflamatoria sistemica(SIRS)
• Situación de sepsis asociada a hipotención, pese a reposición de fluidos
Shock septico
• Sindrome severo asociada a infección aguda y falla orgánica relacionada con mediadores del tipo citoquinas en circulación
Septicemia
• Infección por pyogenos. S pyogenes.
Piemia
• Presencia de bacterias en sangre
Toxiemia
PRINCIPALES AGENTES DE BACTEREMIA
• Afecta
• Endocardio y valvulas
Endocarditis
• Biota normal de la boca y tracto gastronistestinal
• Streptococcus del grupo viridans
• Staphylococcus aureus (drogadictos)
Causantes
• Endocarditos aguda
• Valvulas normales o lesionadas con progreso rápido y mortal (S. aureus)
• Endocarditis subaguda (cronica)
• Válvulas anormales, con deformacionscongénitas y lesiones reumaticas o escleroticas (S. viridans)
Tipos
• Insuficiencia renal
• Embolias en cerebro y riñon
• Insuficiencia valvular aguda
Secuelas
Endocarditis infecciosa
Video que muestra cómo se observa una válvula normal y una con
endocarditis y cuerpos vegetativos.
Endocarditis
¿Qué es un hemocultivo?
• Sepsis: 20 y 80% de mortalidad en UCI
IMPORTANCIA y ETIOPATOGENIA
• Tratamiento excesivo o inadecuado
• Fármacos inmunosupresores
Tratamiento antimicrobiano
• Enterococcus, gramnegativos y hongos
Microorganismo responsable
• Mayores de 40 años, recién nacidos
Edad
• Genitourinario>respiratorio>absesos
Foco infecciosos
• Nosocomial>Comunitaria
Entorno de Infección
• Polimicrobiana>Monomicrobiana
Naturaleza de la bacteriemia
• Neoplasias Hematológicas y no hematológicas, diabetes, insuficiencia renal en etapap de diálisis, cirrosis hepática, SIDA-
Enfermedades subyacentes
• Shock
Complicaciones de la Sepsis
• Catéteres, cirugías del tracto digestivo y genitourinario, endoscopia.
Procedimientos invasivos
Clasificación de Hemocultivos
Polianetol Sulfonato de Sodio (SPS) a 0.025-0.05%
Para: Peptostreptococcus, Gardnerella, y algunascepas de Neisseria spp agregar 1.2% de Gelatina
Mayor riesgo de contaminación.
Incubación desición del microbiologó basado en el diagnóstico clínico.
Micoorganismo intracelulares y cuantificación.
Hongos, Micobacterias.
SPS: Anticoagulante
Saponina: Agente lítico de eritrocitos y leucocitos
Polipropilenglicol: Antiespumante
Hemocultivos cuantitativos.
Diagnóstico de bacteremia relacionada a CatéterVenoso Central (CVC)
Rapides en detección, sensibilidad, mejora en lasbacterteremias y terapia antimicrobiana.
Botellas con diverversos medios: (aeróbicos, anaeróbicos, hongos, micobacterias con resinas).
Detección de productos del metabolismo (CO2) mediante técnicas radiometricas, espectrofotometricas,
fluorométricas, y/o colorimetricas.
El computador relaciona los indices del crecimientobacteriano.
Automatizados
Semi-automatizados
Lisis-Centrifugación
Manuales
Monofásico
Bifasico
Según el tipo de Paciente
Pediátrico
Adulto
Inmunocompetente
Inmosuprimido
Según toma de la Muestra
Central
Periféricos
Según el Tipo de Microorganismo
Bacterias aeróbicas
Bacterias anaeróbicas
Bacterias Fastidiosas
Micobacterias
Hongos
Según la Metodología
Cerrado o Abierto
Manuales
Semi-automatizados
Automatizados
Clasificación de los hemocultivos.
Según tipo de paciente, toma de muestra, tipo de microorganismo y metodología.
CLASIFICACIÓN DE SISTEMAS DE HEMOCULTIVO MANUEL
Clasificación de Hemocultivos
BACTEC 13A - RADIOMETRICO
Sustratos marcados con C14, la cantidad de CO2 (C14) es medida porsu ionización y transformada a un numero, proporcial al crecimientobacterinano
Reacción del CO2 con material colorimetrico en el fondo (gas permeable) con vire de verde a amarillo.
BACTEC SERIES 9000 Fluorescencia.
Reacción del CO2 con material fluorescente al fondo esproporcional a la luz absorbida. Monitoriea cada 10 minutos.
BACTEC 9000 SeriesFluorescence
Becton Dickinson BD
BacT/AlertColorimetriaBiomerieux
Bactec 13A Radiometrico
Becton Dickinson BD
FUNDAMENTO DE ALGUNOS AUTOMATIZADOS
Your Logo
Arrow ProcessWhy use graphics from PowerPointing.com?
ECONOMICO
Sensibilidad y velocidad de detecciónMejora en diagnóstico y mejora en el trabamiento
Disminución de carga de trabajo y contaminación
Estadistica de positividad y contaminación, control de bacteremias intrahospitalarias
Costo de 2-4 veces el convencional
Costo equipo
EPIDEMIOLOGICOMICROBIOLOGICOCLINICO
IMPACTO DE HEMOCULTIVOS AUTOMATIZADOS
Dismunución de horas/hombreMaterial de resiembreDisminuye riesgo de cortopunzantes
Se ideo para el diagnóstico de Brucelosis.Medio para el cultivo de bacterias como estafilococos, pseudomonas, E. coli, Salmonella, Neumococo, a partir de muestras sanguíneas y líquido céfalo raquídeo.Observar crecimiento en medio solido sin abrir el frascoEvita contaminación y riesgo de infección.•Fase solida: Agar Soya Tripticasa (AST)•Fase líquida: Caldo Soya Tripticasa•SPS: 0.025%•Cisteína: 0.025%•Sacarosa: 10%
MEDIO “RUIZ CASTAÑEDA” SISTEMA BIFASICO
Concentración por sedimento.
Diagnóstico de bacteremia relacionada a CatéterVenoso Central (CVC)
Micoorganismos intracelulares y cuantificación.
Hemocultivos cuantitativos.
•SPS: Anticoagulante
•Saponina: Agente lítico de eritrocitos y leucocitos
•Polipropilenglicol: Antiespumante
Micobacterias y Hongos (25 – 50%)
MEDIO LISIS-CENTRIFUGACIÓN (ISOLATOR)
• Recolección y Transporte
•Número de Hemocultivo
•Tiempo e intervalo de toma de muestras
•Volumen de sangre por frasco
•Relación Sangre-Caldo
•Medios de cultivo y Anticoagulante
•Duración de la Incubación
PROCEDIMIENTO EN LA TOMA DEL HEMOCULTIVO Your Logo
TOMA DE MUESTRA
• 2 horas a 30 minutos antes del pico febril. (puede ser precedida por escalofríos)
• Si no de puede predecir.
• Tomar de forma arbitraria 2 hemocultivos a intervalos de 30 a 90 minutos (Endocarditis)
• Tomar 2 Hemocultivos al mismo tiempo de diferente sitio de punción
Intervalo de la toma de muestra
• Periférica (venosa o arterial) y ser la primera del examen, el catéter se coloniza a las 48 h de instalado.
Método de Obtención de Muestra
• Lavado de piel (Pavidona Yodada)
• Desinfección con Tintura de Yodo o Clorhexidinaalcohólica y remoción con alcohol al 70%
• Guantes estériles
Preparación de la Piel (CRITICO)
• Bacterias en sangre 1 a 10 UFC/mL
• Adolescentes y adultos: 10 mL
• Recien nacidos: 1 -2 mL
• Lactantes (1 mes – 2 años): 2-3 mL
• Mayores de 2 años: 5 mL
Volumen de la muestra
• 1:5 a 1:10
• Mayor: Dilución del microorganismos
• Menor: inhibición bactericida del suero
Relación Sangre-Caldo de Cultivo
• Desinfectar el tapón de las botellas (alcohol 70%)
• Sistemas manuales hay mayor contaminación
Inoculación de las Botellas
• 2 a 3 H apropiados (95% de bacteremias)
• 2 H para endocarditis en 24h (98%) sin Txantibiótica, si los primeros son negativos tomar otro set a las 24-48 h.
• Antes de la siguiente administración antibiótica
• 3-5% contaminación
• Más de 4 hemocultivos provoca anemia al paciente Hospitalizado.
Numero de Hemocultivos
• Medios de Cultivo
• Aeróbicos y anaeróbicos facultativos
• Caldos: Soya-Tripticasa, Columbia, Brucela, BHI, peptona complementada
• Sistemas bifasicos: Setpi-Chek (BectonDickinson)
• Lisis centrifugación
• Sistemas automatizados: Bactec 6A, 16A, 26 Plus, PEDS Plus (BectonDickinson). BacT/Alert (Biomeriuoux)
Medios de cultivo
• Anaerobios facultativos
• Líquidos: BHI anaerobios, Caldo Tioglicolato
• Automatizados: Bactec 7A, 17A, litico
• Hongos
• Isolator y Bactec para hongos
• Micobacterias.
• Isolator, Bactec 13A
Medios de Cultivo
• Anticoagulante: Polyanetol Sulfonato de Sodio
• 0.025 – 0.05%
• Inhibe:
• Complemento, fagocitosis, antibióticos (amino glucósidos), lisozimas
• Gelatina: 1.2% por efecto inhibitorio PSS
• Neisseria spp. Peptostreptococcus spp, Gardnerella sp.
• Estabilizadores osmóticos (pared deficiente)
• Sacarosa, manitol (10%)
• Resinas
• Inhibe antibióticos
• Aditivos y otros
• Piridoxal (B6) Streptococcus viridans
• L-cistenia
Anticoagulante y Aditivos
Hemocultivo: procedimiento de toma
Video que muestra cómo se toma la muestra para un hemocultivo,
cuidados y precauciones. Las botellas pertenecen al sistema
BacT/ALERT (aerobio y anaerobio).
Hemocultivo Parte I
Incubación y seguimiento manual
Observación macroscopicaIncubación
TA 25°C maximo 2
horas.
Incubar a 35°C.
Nunca refrigerar
Manual: Observación
díaria
Automatizado: Por
ordenador
Aspecto
macroscopico
Microoganismo asociado
Hemólisis Streptococus, Staphylococcus, Listeria
spp. Clostridoum, Bacillus spp.
Turbidez Bacilo gramnegativo aerobio,
Stpaphylococcus, Bacteroides spp.
Formación de gas Bacilo gramnegativo aerobio, anaerobios
Formación pelicula Pseudomonas spp., Bacillus spp.,
levaduras
Coágulo Staphylococcus aureus
Colonias visibles Staphylococcus, Streptococcus.
Hemocultivo, sistema automatizado BACTEC™
Video que muestra cómo se procesa la muestra en un hemocultivos
automatizado BACTEC PEDS PLUS/F después que el equipo detecta
que es positivo.
Hemocultivo parte II
• Interpretación a la luz del cuadro clínico.
• Hemocultivo positivo en diferente sitio de punción.
• Bacterima verdadera (90%)
• S. aureus, > Bateremia intrahosp.
• Enterobacterias
• S. pneumoniae
• Micobacterias,
• Hongos levaduriformes
Hemocultivo positivo
• Corynebacterium spp.
• Bacillus spp.
• Propionebacterum acnes.
• Staphylococcus coagulasanegativa.
Contaminantes
• Cultivo positivo en Hemocultivo y Catéter para el mismo mo. <15 UFC
Hemocultivo CVC
• Hemocultivos positivos para el mismo microogranismo en una toma
• Indadecuada desinfección de piel
• Indadecuada desifección del frasco (tapón)
Falsos posivos
• Virus
• Endocarditis no infecciosa
• Microoganismos de dificil desarrollo
• Cultivos al final de un proceso crónico
• Endocardoitis causada por Chlamidiaspp., Rickettsia spp. Coxiellabuernetti, Legionella pneumophila.
Hemocultivos negativos
INTERPRETACION
• Recolección y Transporte
SELECCION DE MEDIOS DE CULTIVO Your Logo
GRAM ASC5% AC MAC CNA ANA BRUC
Cocacea grampositivo X X X X
Bacilo grampositivo X X X X
Cocacea gramnegativo X X X X X
Bacilo gramnegativo X X X X X
ASC: Agar Sangre de Carnero; AS: Agar Chocolate; CNA: Agar Columbia Cistin-ácido nalidixicoBRUC: Agar Vrucela
• Desinfectar con yodo 3% una zona de aproximadamente 2 cm de diámetro sobre la piel de la vena escogida.
• Eliminar con alcohol al 70% el exceso de yodo.
• Realizar punción extrayendo 3mL de sangre y depositarlos inmediatamente el frasco del medio de cultivo.
• Agitar lentamente el frasco por unos segundos e incubar a 37°C por 30 min en posición horizontal , para hacer contacto con la fase solida
• Enderezar el frasco e incubar a 37°C y observar cada 24 hrs, si hay crecimiento en fase solida turbidez en la liquida por una semana. Continuar la observación semanalmente
• 7. Si hay cambios en el medio, realizar frotis y teñir con la técnica de Gram y hacer resiembras para aislamientos de m.o en A.S, EMB Y Staph 110 e incubar a 37°C por 24 hrs.
• Hacer pruebas especiales según la morfología colonial y microscópica.
• Antibiograma una vez identificado el m.o
PROCEDIMIENTO DE PRACTICA
Referencias:Koneman E. Diagnóstico microbiológico. 5ª edición. Editorial médica panamericana. México. 2003.
García C, Pérez C. Hemocultivos. Instituto de Salud de Chile. Pontificia Universidad Católica de
Chile: 2003 [LINK]
Macedo M, Algorta G, Vola M, Pardo L. Bactermias y sepsis. Endocarditis. Instituto de Salud.
Facultad de Medicina; Uruguay: 2006. pp 197-211 [LINK]
Sitios visitados.
BIOMERIEUX. BacT/Alert [LINK]
Becton Dickenson (BD) Bactec™ [LINK]
Material audio-visual
Introduction to Bloodcultures. Dalhousie University Faculty of Medicine. [LINK]
Lancashire Teaching Hospital. NHS. The University of Manchester [LINK01], [LINK02], [LINK03]
Blood culture. BlackBearl [LINK]
Use of the BacT/ALERT® 3D microbial detection system in the biopharmaceutical industry [LINK]
Fail mitral valve due to inefective endocarditis [LINK]
How the hearth animation video [LINK]
Mitral Valve Prolapse and Mitral Regurgitation [LINK]
Diseño Designado EK790M: http://ark461.wordpress.com
ANCIENT REPOSITORY KNOWLEDGE 461
Pérez Pérez José Manuel
Diseño Designado EK790M: http://ark461.wordpress.com