Ingrid Johanna Escudero HernándezAna María Cano Valencia

Introduction

Streptococcus pneumoniae

• Is a medically important pathogen

That causes a number of

community- acquired infections

• chronic bronchitis• otitis media• acute bacterial

sinusitis• pneumonia

PNEUMOCOCCAL PNEUMONIA IS A MAJOR

CAUSE OF MORBIDITY AND MORTALITY IN

DEVELOPING COUNTRIES

GenderSpecies

Introduction

Dru

g-re

sist

ant S

. pn

eum

onia

ehas occurred around the world including

Thailand

Infections caused by resistant can be difficult to treat, resulting in greater risk of

death

Pneumococci resistant to more than three separate classes of antibiotics are

considered to be multidrug resistant

IntroductionMDR-SP

(multidrug-resistant S. pneumoniae)

have been isolated from both adults and children

They are resistant to:Penicillin

Clindamycincotrimoxazole erythromycin

Colonization rates are high in children aged

less than 5 years

Introduction

Antibiotic-resistant strains

Is attributed to antimicrobial acquisition

or inappropriate use of

antibiotics

S. Pneumonia e that

possesses horizontal gene

transfer

Little is known about the epidemilology

and antibiotic resistance pattern of nasal colonization S.

pneumoniae in healthy children in

Thailand

This mechanism allows the acquisition of antibiotic-

resistant genes which increases the resistance to a

variety of antibiotics.

¨The aim of this study was to determine the prevalence of carriage rate, the antibiotic sensitivity profile and the

genetic diversity of S. pneumoniae isolated from Thai

children¨.

Materiales y Métodos

Aislamiento

Medio de leche descremada

triptona glucosa glicerol

(LDTGG)

Muestras de Hisopos

recogidas en

Polvo de leche descremada (difco)

2 gramos

Caldo de triptona soya (Oxoid)

3 gramos

Glucosa 0,5 gramos

Glicerol 10 mL

Agua destilada

100 mL

Medio de conservación:

mantiene viable bacterias

Tintorial

Fisiología

Morfología

Aislamiento Todd

Hewitt Caldo

Suero de ternera

fetal

Extracto de

lavadura

Caldo para Crecimiento neumococica

Aporta hormonas y factores de crecimiento

Estimula crecimiento bacteriano

Aislamiento

LAS COLONIAS TÍPICAS NEUMOCÓCICAS ERAN PEQUEÑAS Y GRISÁCEA

RODEADA POR UNA ZONA VERDOSA.

Las colonias neumocócicas sospechosas

fueron recogidas y

se identificados por tinción de

Gram.

Detección por PCR

Cebadores: 5-AGTCGGTGAGGTAACCGTAAG-35-AGGAGGTGATCCAACCGCA-3

Cebadores:5-CAACCGTACAGAATGAAGCGG-3, 5-TTATTCGTG-CAATACTCGTGCG-3

Las reacciones se realizaron con ADN genómico

de S. pneumoniae

¨ATCC 49619 como control positivo.¨

16S rRNA

Gen lytA

Susceptibilidad a los antibióticos

Método de antibiograma por disco difusión

Para microorganismos de crecimiento rápido

Incapacidad de predecir la

sensibilidad porque esta puede presentar

resistencia

Estudios epidemiológicos

Se debe realizar un

cultivo puro

En estudios de nuevos antibióticos

SE UTILIZA :

La lectura se realiza por la medición de los halos de inhibición y según el diámetro se define la resistencia, sensibilidad y sensibilidad intermedia

Susceptibilidad a los antibióticos

Todos los aislamientos se definen como resistente a múltiples fármacos (MDR) cuando había resistencia a ≥3 clases de antibióticos.

Antibiótico Gramos

ampicilina amp; 10 g

azitromicina Azm; 15 g

cefepima FEP; 30 g

ceftriaxona CRO; 30 g

eritromicina E:15 g

oxacilina Ox; 1 g

tetraciclina TE;30 g

trimetoprim / sulfametoxazol

SXT;1,25 mg / 23,75 m

PFGEElectroforesis

en gel de campo

pulsante (PFGE)

Comparar diversidad genética

S. Peumoniae

en todos los

distritos

Los tapones de

ADN con Smal

Pocillos gel agarosa con TBE

Después de la PFGE

Gel tiñe con

bromuro de etidio

Visualiza por UV

Analiza con dendograma

PFGE

SmaI : enzima de restricción, endonucleasa.

TBE buffer discrimina pequeños fragmentos de ADN menor a 500 p.b en

agarosa

Bromuro de etidio: tiñe el DNA y revelar la posición

en el gel de agarosa.

Un dendrograma es una forma de clasificación

jerárquica que representa estos patrones de

semejanza entre unidades estudiadas.

RESULTADOSTABLA 1. Características demográficas y distribución

• S. Pneumoniae fue aislado de los hisopos nasales de 38 de 237 niños (16.0%)

RESULTADOS

• Todos los S.pneumoniae aislados fueron positivos para la amplificación de 16S RNAr y genes lyTA.

RESULTADOSTABLA 2. Factores de riesgo

181 padres devolvieron los cuestionaros pero no todos contestaron todas las preguntas

Ninguno de los factores de riesgo fue significativo

RESULTADOSAntibiograma de la resistencia a múltiples fármacos de S. pneumoniae

Todos fueron testados

Antibiotico %

Amp 5.3%

Azm 26.3%

Fep 2.6%

C 18.4%

E 18.4%

Ox 21.1%

TE 44.7%

SXT 78.9%

T 15.8%

CEFTRIAXONA

RESULTADOS

Análisis genotípico de los aislamiento de S. pneumoniae

por PFGE

PFGE mostró 25 patrones de

restricción de ADN diferentes

que constan de 9-15 tamaños de los

fragmentos de ADN.

DISCUSSIONAuthor What he said Yes NoChen CJ, et al “High rates of S. pneumoniae colonization have been

reported in children less than 5 years old”

Rey LC, et al “As previous study reported that more than 40% of S. pneumoniae iso- lated from children are resistant to cotrimoxazole”

Bhattacharya SD, et alBae S, et alBogaert D, et al

“In the healthy population, risk factors such as children with HIV infection, respiratory tract infections, otitis media and children who attend day-care centers have been determined to be associated with high pneumococcal carriage rates”

Warda K, et alBae S, et alYatim MM, et al

“MDR-SP was found with incidence rates of 20.3—43.3% in Korea, Malaysia and Morocco”

✔

✔

✔

✔

CONCLUSIONS

• It is necessary to realize this worldwide study to see the prevalencia of the multiple drug resistance of the streptococcus pneumoniae and to try a treatment for this.

• It is important to realize this type of epidemiological studies since the increase of diseases caused for streptococcus pneumoniae is worrying worldwide

• The multidrug resistance number is increased every day, is important to research more about the risk factors and lay down what are the causes more frequently submitted, in this way it´s posible reduce the prevalence of this

• In the treatment of infections caused for S. Pneumoniae is important to know wich are the resistant antibiotic and search other options, for example the ceftriaxone is a good option because all the isolates are sensitive

MAPA

MAPA

Bibliografía

• http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/BacteCEFA36.pdf• http://www.mastgrp.com/IFUS/IFU011_SPA.pdf• http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/toddhewittcaldo.htm• http://

www.medicina.unal.edu.co/Departamentos/microbiologia/Docs/W_IDENTIFICACION_BACTERIANA%20I%2014.pdf

• http://www.genomica.uaslp.mx/Protocolos/Gral_Buffer_TAE_TBE.pdf• [PPT]Enzimas de Restriccin 2009.ppt• http://biomodel.uah.es/tecnicas/elfo/reactivos/reactivos.htm• https://sites.google.com/site/visionbiogeografica/laboratorio-2• http://www.scielo.org.co/img/revistas/unsc/v18n2/v18n2a08f1.jpg• http://

image.slidesharecdn.com/tcnicasdediagnsticomolecular-130707122538-phpapp01/95/tcnicas-de-diagnstico-molecular-uap-aqp-8-638.jpg?cb=1373229842