METODE PEMERIKSAAN DAN IDENTIFIKASI BAKTERI Aeromonas hydrophila. PADA KOMODITI MAS KOI (Cyprinus carpio )

OLEH :NURULFUADAHARIFINPEMBIMBING:Drs.YakubSulaeman,M.PdDANLilianaJafar,S.PiABSTRAK:Dibalaibesarkarantinaikanpengendalianmutudankeamananhasilperikananuntukmengidentifikasibakterikitaharussterilterlebihdahuludanalatdanbahanyangdigunakanjugaharussterilagartidakterjadikontaminasisilangmakadariitukeberhasilmengidentifikasitergantungdarikesterilanalatdanbahanyangdigunakan,dalampemeriksaankitahanyainginmengetahuiapakahsampeltersebutpositifbakteriAeromonashydrophilaataunegatifAeromonashydrophilaDalampemeriksaanbakteribanyaktahapyangharusdigunakanyangutamanyayaitusterilisasialatdanbahan,kemudiandilakukanisolasibakteri,pemurnianbakteri,ujilanjut/ujibiokimaidanyangterkhirialahpembacaanujibiokimia/identifikasibakteri.PENDAHULUAN A.LatarBelakangKondisigeografisprovinsiSulawesiSelatanuntuksektorperikananmempunyaipotensiyangsangattinggiuntukdikembangkansebagaikegiatanusahaperikanan.Kegiatanusahaperikanantersebutharusdilakukansebaik-baiknya,yangdapatmemberimanfaatkepadamasyarakat,jugaharusmelindungisumberdayahayatisecaraberkesinambungan.BerkembangnyausahaperikanantersebutdiikutipuladenganmeningkatnyafrekuensilalulintaskomoditiperikananyangsesuaidenganUU.NO.16Tahun1992,yaitumencegahmasukdantersebarnyaHPIKbaikmasukdankeluarwilayahRepublikIndonesia,maupundarisuatuareakeareayanglain.DalamusahapencegahanmasuknyaHamaPenyakitIkanKarantina(HPIK)dariluarnegerikeIndonesiadanmencegahpenyebarannyaantarwilayahdiIndonesia,diperlukansuatutindakankarantina,halinidiperlukansebagaiupayapemcegahanpenyebaranbibitpenyakit.BeberapakasuspenyakitbakterialtelahterjadidibeberapanegaramisalnyadiAmerikaSerikat60-70%dariikanhiasimporadalahdariasiatenggaratermasukIndonesia.dariAmerikaSelatan5%dansisanyaadalahikanasliterutamadariflorida,dimanahasilpengamatanbakteriologimenunjukan68%ikanyangdariAsiaTenggaramengandungbakterididalamdarah,lendir,daging,danairmedium.DampakmeningkatnyalalulintasperikanantersebutadalahsemakinmemberipeluangterjangkitnyaHPIKdiwilayahRepublikIndonesiakhususnyadidaerahSulawesiSelatan.BalaiBesarKarantinaIkanPengendalianMutudanKeamananHasilPerikananMakassarmelakukanpengawasanterhadapkomoditiperikananyangdilalulintaskantermasukkomoditimaskoi(Cyprinuscarpiosp)yangdisertaidengansertifikat(HealthCertificate).UntukituperludiadakanupayamencegahmasukdantersebarnyaHamaPenyakitIkan(HPI),dilakukanmelaluikegiatanKarantinaIkandimanaberdasarkanUndang-UndangNomor:16tahun1992tentangKarantinaHewan,ikandantumbuhandandalamPeraturanPemerintahNomor:15tahun2002tentangKarantinaIkanadalahinstitusipemerintahyangmemilikiTugasdanFungsi(Tusi)sebagaipengamatanterdepandidalamupayamencegahmasukdantersebarnyaHamadanPenyakitikanKarantina(HPI/HPIK)yangmempunyaipotensimerusakkelestariansumberdayahayatiperikanan,baikyangberasaldarikegiatanantararea,dalamnegeri(domestikmasuk/keluar),maupunkegiatanEkspor/impor.Selainitudiperlukanpenerapansistempemeriksaandanmetodediagnosa/identifikasiHamadanPenyakitIkansecaratepatyangdidukungolehsaranadanprasaranayangsesuaidenganpendekatansistemdanmetodeterbaru.HamadanPenyakitIkanKarantina(HPIK)adalahsemuaHamadanPenyakitIkanyangbelumterdapatdan/atautelahterdapathanyadiareatertentudiwilayaNegaraRepublikIndonesiayangdalamwakturelatifecepatdapatmewabahdanmerugikansosialekonomiatauyangdapatmembahayakankesehatanmasyarakat.Maskoimerupakankomoditiperikananyangsaatinimempunyainilaiekonomistinggidimanamaskoimerupakankomoditiperikananyangbanyakdiminatikarenadayatarikyangtinggi,selaindayatarikyangtinggiwarnadancorakpadatubuhikanmaskoiyangbanyakdiminati,sehinggapermintaanikanmaskoiterusmeningkat,baikekspormaupundomestik.Berdasarkanpadahal-haldiatas,makajudulyangpenulisambildalamPraktikKerjaLapang(PKL)iniyaituMetodePemeriksaandanIdentifikasiBakteriAeromonashydrophylapadakomoditiikanmaskoi(Cyprinuscarpio)diBalaiBesarKarantinaIkan,PengendalianMutudanKeamananHasilPerikananMakassarB.Kegiatan-Kegiatan1.SterilisasiAlatDanBahanSterilisasiadalahsuatuprosesataukegiatanyangbertujuanuntukmembebaskansuatualatataubahandaribentukkehidupan.SterilisasialatdanbahanyangdilakukandiBBKIPMadalahsebagaiberikut:a.SterilisasiKeringSterilisasikeringyangdigunakanyaitudenganmenggunakanoven.Sterilisasiinidigunakanuntukmensterilkanalat-alatyangterbuatdarikacaataugelassepertitabungreaksi,cawanpetri,tabungerlenmeyer,pipetdansebagainya.Alatyangakandisterilkanterlebihdahuludimasakmenggunakankompordengansuhutinggihinggapanciyangberisialatdanbahanbekasbakterimendidih,laludilakukankegiatanmencucialatdanbahanmenggunakandeterjentkemudianitudibilasmenggunakanlarutanalkohol70%setelahitudikeringkandandibungkusmenggunakankertasbersih(kertaskopi)denganrapijangansampaiadacelaagartidakterjadikerusakansepertialatdanbahanpecahatauhanguslaludimasukkankedalamovendisusundenganrapi.Suhuyangdigunakanpadaovenyaitu1600Cselama2jam,halinidimaksudkanuntukmengoksidasicairanyangadapadatubuhbakterisehinggaterjadisuatudehidrasidanpadaakhirnyadapatmembunuhmikroorganismetersebutyangtidakdiinginkan.b.SterilisasibasahSterilisasiBasahyaitusterilisasiyangmenggunakansuhupanasdanuapairsecarabersamaandenganmenggunakanautoclave.Umumnyadigunakanuntukmensterilkanbahanyangakandigunakansepertibahanujiataupunbahanmediatumbuh.HalinisesuaidenganpendapatHadioetomo(1993)yangmenyatakanbahwasterilisasidilakukandalamautoclavedengansuhu1210Cdalamwaktu15menitdengantekanan1atm.Suhuinimerupakanketetapan,karenaumumnyaorganismetidakdapatbertahanhiduppadasuhudanwaktutersebut.Setelah15menit,makaautoclavedapatdimatikan.Biarkanautoclavesampaitekanannyamenjadi0atmdansuhukurangdari1000C,setelahitumediadapatdikeluarkan.2.PembuatanMediaTumbuhMediabiakanmerupakansuatuzatyangdigunakanuntukmenumbuhkanjasadrenikdilaboratorium,fungsidarisuatumediabiakanadalahmemberikantempatkondisiyangmendukungpertumbuhandanperkembangbiakandarimikroorgansmeyangditumbuhkan.Olehsebabitusetiapmediaharusmemenuhinutrientyangditumbuhkanolehbakteriagardapatberkembangbiak.Mikroorganismeyangdikembangkanolehmanusiadiantaranyamelaluisubstratyangdisebutmedia.Sejumlahbesarmikroorganismememerlukanunsur-unsuryakniunsurlengkap,vitamin-vitamindansenyawatambahlain.UmumnyamediayangdigunakanTSA(TrypticSoyAgar)danBHIA(BrainHeartironAgar).MedianinidilarutkandenganaquadesdandihomogendiatashotplatedanStirrerlaludiautoclaveuntukmenghindariterjadinyakontaminasi,kemudiandituangkedalamcawanpetrisebanyak20mldantabungreaksisebanyak10ml.penuanganmediatumbuhdilakukandilaminaryflowuntukmencegahagarmediatumbuhyangdituangtidakterkontaminasidengandunialuar.Setelahitu,dilakukanpenuangandicawanpetridalamlaminariflow,mediadituangsebanyak20mlpadacawanpetridan10mlpadatabungreaksidandilakukansterilisasikembalimenggunakanultraviolet(UV).B.HASILDANPEMBAHASANa.IsolasiBakteriIsolasimerupakancarauntukmemisahkanataumemindahkanmikrobatertentudarilingkungannyasepertiyangterdapatpadaorganorganisme(ikan),sehinggadiperolehkulturmurniataubiakanmurnibakteri.Mengisolasibakteridilakukandidalamlaminaryflowsecaraaseptikdanteliti.Teknikisolasibakteriterdiridari2yaituteknikulasdanteknikgores,untukikanyangmasihlarvadigunakanteknikulasyaitudenganmenggeruslarvatersebuthinggahalusmenambahkanpengencerberupaaquades2ml,hasildaricampurantersebutdiambilmenggunakanpipetkemudiandimasukkankedalammediatumbuhlaludiulassecaramerata.PadaikanMasmenggunakanteknikgores.Bakteridiisolasimenggunakanjaruminokulum(ose)yangterlebihdahuludipanaskandiapibunsen,halinidilakukanagartidakterjadikontaminasibakteridariudara.JarumoseyangtelahdipanaskanlaluditusukkankeorgantargetyangdidugamengandungpathogendanselanjutnyadigoreskankepermukaanmediaBHIAsecarazig-zagdanhati-hati.Setelahprosesisolasibakteriselesai,makamediatumbuhtersebutdimasukkankedalamikubatordengansuhu270C300Cdandiinkubasiselama2448jam.b.PemurnianBakteriKulturmurniialahkulturyangsel-selmikrobanyaberasaldaripembelahandarisatuseltunggal.Pemurniandilakukandariisolasibakteriyangtelahdiinkubasiselama2428jam,bakteriyangtelahdiinkubasibiasanyaterdiridaribeberapakolonibakteri.SehinggadiperlukanpemurnianbakterisecaraaseptikagarkitahanyamemperolehsatujenisbakterisajadidalammediatumbuhtersebutBanyakkesulitanyangdihadapidalammengidentifikasibakterikarenapenggunaansediaanbakteriyangtidakmurnisejakawalkegiatanisolasidanidentifikasibakteridilakukan.Sebelumorganismedapatdiidentifikasi,bakteritersebutharusdipersiapkanterlebihdahuludalamkeadaanmurni(kulturmurni).Haliniberartibahwabakteriyangtumbuhberasaldarisatuinduk.Jikaada2organismeataulebihyangtumbuhpadamediakultur,satudari4kemungkinandapatterjadi:1).Setiaporganismetumbuhsecaraindependen.2).Satujenisbakterimungkinmemproduksisubstansiyangmenunjangpertumbuhanbakterilainnya(sinergi),3)Satujenisbakterimenghasilkansubstansiyangmenghambatperkembanganbakterilainnya,4)Satujenisbakteridapattumbuhlebihcepatdarilainnyadanmenghambatbakterilainnyaterhadapbeberapaelemenpentingdalamsuplaimakanan.Pemurniandilakukandengan4goresan,bakteridiambildarimediatumbuhBHIAsecaraaseptikdandigoreskanpadamediakulturmurniBHIA,setelahgoresanpertamaselesai,lalujarumosedipanaskandansetelahdingindilakukangoresankedua,darigoresankeduakegoresanketigatidakperlumemanaskanjarumose,halinidimaksudkanjumlahkolonibakteridarigoresankeduasudahmulaisedikit,sedangkangoresankeempatterpisahdarigoresan1,2dan3.Setelahkulturmurniselesai,bakteritersebutdiinkubasidengansuhu270C300Cselama2428jamdiinkubator.Prosespemurnianbakteriinidilakukanunukmendapatkankolonibakteriyangbenar-benarmurni.UntukbakteriAeromonashydrophilamempunyaikarakteristiksebagaiberikut,cembungdenganpigmenyangagakkecoklatan(Alifuddin.1993).Tabel5.KarasteristikAeromonashydrophilaKARAKTERISTIKAeromonashydrophila

AcidProductionFrom:

1.Lactose-(+)

2.Maltose+

3.Sucrose(+)-

4.Phenylalaninediaminase-

Oksidase+

Christensensurea-(+)

SimmonsCitrate(+)-

Motility+

Argininedihydrolase+

Lysindecarboxylase-(+)

Ornithindecarboxylase-

Sumber:MarvinL.Speck,1977c.UjiLanjut/ujibiokimiaUjibiokimiadilakukanuntukdapatmengidentifikasibakteriyangmenyerangikan,selaindenganmelihatbentukdanwarnakolonibakteri.1)PewarnaangramTujuandaripewarnaanbakteriadalahMengamatibentukmorfologidanmembedakanstrukturyangterdapatdalamselbakteri.Penentuangram(+)dangram(-)dilakukanberdasarkanpembentukanreaksiwarnaterhadappigmenselnya.Warnaungu/violetmenunjukkangram(+)sedangkanwarnamerahmenunjukkangram(-).Salahsatuteknikperwarnaanyangpalingpentingdanpalingluasdigunakanuntukbakteriialahpewarnaangram(irawan,2008).Ujipewarnaangramdilakukanuntukmengetahuibentukdarikolonibakteritersebutdanuntukmenentukanwarnabakteriapakahtermasukdalamgramnegativeataugrampositif.Dalamprosesiniolesanbakteriyangterfiksasidikenailarutan-larutanantaralainKristalviolet,larutanyodium,alkohol(bahanpemucat),dansafraninataubeberapapewarnatandinganlainyangsesuai.Beberapaprosespewarnaangramyaitumengambilbiakanbakteri,laludigoreskandiatasobjekglassdandiratakantipis-tipisagarbakteritersebuttidakmenumpuksehinggamudahdiamati,setelahkeringlaludifiksasidiatasapiBunsenagarbakteritersebutbenar-benarmelekatpadaobjekglass,tetapiperludiingatbahwaprosesfiksasijanganterlalulamadanpanaskarenadapatmenyebabkanbakterirusak.SetelahfiksasidilakukanpewarnaanyaitugramA(Kristalviolet)yangmenberikanwarnaungupadabakteridandilakukanselama1menit,kemudiandicuciataudibilasdandikeringkan.SetelahgramAdilanjutkanpadagramB(iodine)selama1menit,laludibilasdenganairmengalirdandikeringkan.SetelahkeringdilanjutkanpadagramC(ethanol)selama30detik,laludibilasdandikeringkan,danyangterakhiradalahgramD(safaranin)selama2menitlaludibilasdandikeringkan.Setelahkeringlaludiamatidibawahmikroskop.HasilPewarnaanGramA.hydrophilaAdapunhasilyangdiperolehpadasampelyangdiisolasidaribakteriikanMaspadatargetlesidibadandanginjalsetelahmelakukanpengamatanditemukanbakteriAeromonashydrophillaberwarnamerahmudabersifatnegatif(-)denganbentukbatang(Road),makapewarnaangramadalah(R-).(Gambar15).2)MediaoksidaseUjioksidasedilakukanuntukmengetahuiadatidaknyaenzimoksidasepadabakteritersebut.jikakertasoksidaseberwarnabirumakaujioksidasepositif,sedangkanapabilatidakterjadiperubahanwarnamakaujioksidasenegatif.3)MediaMIOUjiMIOterdiriterdiridarimotil,indoldanornithin.dilihatperubahanyangterjadi.Apabilabiakanbakterimenyebardarigaristusukanmakamotilpositive,sedangkanapabilaterjadiperubahanwarnamenjadiungumakaornithinpositivedanapabilaterjadicincinmerahsetelahpemberianlarutankovaksmakaindolpositive.4)MediaLysinedecarboxilaseMediaLIAterdiridarigoresanmiring/slant(diaminase)dantusukanlurus/butt(decarboxylase),JikaterjadiperubahanwarnapadaslantdanbuttmenjadiungutuamakaujiLIAinipositif,danapabilatidakterjadiperubahanwarnamakapembacaannyanegative.Mediaakanberubahwarnamenjadihitamapabilabakteriyangdiujimampumenghasilkangas(H2S).5)MediaUreaseUjiureaseinibertujuanuntukmengetahuikemampuanbakterimenghasilkanenzimUrease.Jikaterjadiperubahanwarnadarikuningmenjadimerahmuda,makaujiUrasepositifdanapabilatidakterjadiperubahanwarnapadamediaureamakaujiUreasenegative.6)MediaLactose,maltose,dansukrose,L-phenyleUjigula-gulainidilakukanuntukmengetahuikemampuanbakterimelakukanfermentasikarbohidrat.Jikaterjadiperubahanwarnamakapengujiantersebutpositifdanapabilatidakterjadiperubahanwarnamakapengujiantersebuthasilnyanegatif.7)MediaSimonscitrateagar(SCA)UjiSCASetelahdiinkubasi,diamatiperubahanwarnayangterjadi.JikaterjadiperubahanwarnadarihijaumenjadibirumakaujiSCApositif,sedangkanapabilatidakterjadiperubahanwarnamakaujiSCAnegatif.8)MediaArginineUjiArgininedihydrolisisJikaterjadiperubahanwarnadarikuningmenjadimerahmudaberartiujiArgininepositive,sedangkanapabilatidakterjadiperubahanwarnamakaujiArgininenegative.c.IdentifikasiBakteriIdentifikasibakteriadalahmembandingkanbakteriyangbelumdiketahuidenganbakteriyangsudahIdentifikasimikrobabergunauntukmempelajarisecaradetailkarakterfisik,kimiawi,danbiologismikroba.

C.KesimpulandansarankesimpulanAdapunkesimpulanyangdapatdiambildaripraktekkerjalapangdiBalaiBesarKarantinaIkanPengendalianMutuDanKeamananHasilPerikananMakasaradalahsebagaiberikut:a.SeluruhkegiatanMikrobiologiharusdilakukandalamkeadaansterildanalatdanbahanyangakandigunakandalamkegiatanMikrobiologiharusdisterilisasikanterlebihdahuluuntukmenghindarikontaminasidariluar.b.KegiatanmetodeIdentifikasimeliputiisolasibakteri,pemurnianbakteri,pewarnaangram,ujilanjut,pembacaanujilanjutdanidentifikasibakteri.c.MediayangdigunakandalammetodeIdentifikasibakteriiniyaitumediatumbuhBHIAdanmedia-mediaujilanjutyangterdiridariujipewarnaanGram,ujiOksidase,Mio,Urease,SCA,ArgininDihydrolisis,Laktosa,Sukrosa,MaltosadanL-phenil.d.IndikatordarihasilpengujianbiokimiabakteriAeromonashydrophilamemilikikarasteristikyaitubentukselbatang(road),motil,gram(-),oksidase(+),arginine(+),danornithindecarboxylase(-),danmaltosa(+).B.Sarana.DalamsetiapkegiatanpemeriksaansesuaidenganproseduryangtelahdibuatsetiapmelakukankegiatanharusmemenuhiprosedurdiantaranyaMenggunakanmasker,Handscool,danbajulaboratorium,namunterkadanghalinidiabaikan,setiapmelakukankegiatandiLaboratoriumseharusnyamemenuhisegalabentukproseduryangadaagartidakterjadikontaminasisilangpadasaatpengujianbakteri.b.Hendaknyaselalumenjagamutudankesterilanmediauji(baikmediaagarmaupunmediacair),alat,sertakeadaanruangandarikontaminasiluarsehinggatidakterjadikesalahandalammengidentifikasibakteripadawaktupembacaanhasilpengujian.c.Sebaiknyapadawaktukegiatanpemeriksaanbakteri,tidakmenggunakanACuntukmeminimalisirterjadinyakontaminasisilangterhadapmanusia,sebabkontaminasidalamjumlahyangbesarakanmemberikanefekterhadapkesehatanmanusia.DAFTARPUSTAKAAfriantodanLiviawathy.1999,identifikasipenyakit.Alifuddin,1993,kulturmurni,Anonim,1992.http://id.wikipedia.org/wiki/Perikanan.Austin,B.danDawn.1993.9http://id.wikipedia.com/go).Buller,N.B.,2004.Bacterialfromfishandotheraquaticanimals:Apracticalidentificationmanual.CabiPub.Massachusetts,USACraig,2007.DirectoratKesehatanIkandanLingkungan.KementrianKelautandanPerikanan.(http://id.wikipedia.com/go),Fulton,MacDonald.2003,aeromonashydrophila.Hadioetomo,RatnaSiri.1993.MikrobiologiDasarDalamPraktek.Pt.GramediaPustakaUtama.Jakarta,diakses20maretHerudanAgus.1996penyakitAeromonashydrophila.Marvin,L.Speck.1976,klasifikasiAeromonashidrophila.TaupikdanBastian.2003.Aeromonashidrophila.Yuasa,Kei,dkk.2003.PandunganDiagnosaPenyakitIkan.(www.lintasberita.com/go)