INFORME DE PRCTICA N 7NOMBRES Y APELLIDOS : Josue Fidel Limahuaya Apaza.DOCENTE ENCARGADO : Q.F. Bertha Viza QuispeASIGNATURA : Bioqumica IIGRUPO DE PRACTICA : lunes de 9:30 a 11:30FECHA DE ENTREGA : 15 / 06 /2015TEMA : HIGADO GRASO EXPERIMENTAL

HIGADO GRAso experimental

I-. MARCO TEORICO:El hgado es el rgano diana que sirve de indicador para las alteraciones metablicas inducidas por txicos. El dao estructural o funcional que se produce por estas sustancias se denomina hepatotoxicidad. Se ha reportado gran cantidad de agentes hepatotxicos entre los que se encuentra el tetracloruro de carbono. El mecanismo de dao heptico inducido por este agente qumico genera peroxidacin lipdica a travs de los radicales libres(01). El cloruro de carbono puede entrar al cuerpo por va endgena o exgena, ya sea por va inhalatoria o aspirado, por absorcin a travs de la piel y mucosas, por va ocular, por va oral o por heridas abiertas sin cicatrizar. Se elimina por orina o exhalacin. Si uno hubiese ingerido depresores del sistema nervioso central como diazepam o clonazepam, o una ingesta abusiva de alcohol, el cuadro clnico se vera mucho ms comprometido, pudiendo ocasionar la muerte por fallo heptico grave llegando a mostrar una grfica plana o paro cardiorespiratorio. Asimismo es un cancergeno conocido, y puede ser causa de leucemia linfoide, tricoleucemia, cirrosis y cncer de hgado y cncer de pulmn. Todos estos daos son irreversibles. Afecta al sistema nervioso siendo depresor del mismo y conllevando leves alucinaciones. Tambin, dependiendo la cantidad ingerida, puede causar mareos, visin borrosa, desmayos, vrtigo, vmitos, arcadas, graves alucinaciones con prdida del conocimiento, bajada en la presin arterial, aumento de la temperatura corporal, fiebres, delirios, agresividad, estados sedativos similares al del coma y dolores de cabeza(02).El tetracloruro de carbono -.es un lquido voltil transparente, incoloro, con un olor dulce caracterstico. Es miscible con la mayor parte de los disolventes alifticos y tiene a su vez propiedades disolventes. Se lleg a la conclusin de que puede inducir efectos embriotxicos y embrioletales, pero slo a dosis txicas para la madre, como se observ en los estudios de inhalacin realizados en ratas y ratones. El tetracloruro de carbono no es teratognico. Se han realizado numerosas valoraciones de la genotoxicidad del tetracloruro de carbono. Tomando como base los datos disponibles, se puede considerar que este producto es un compuesto no genotxico. Induce la formacin de hepatomas y carcinomas hepatocelulares en ratones y ratas. Las dosis que inducen la formacin de tumores hepticos son ms elevadas que las que producen toxicidad celular. En el ser humano, los sntomas agudos tras la exposicin a tetracloruro de carbono son independientes de la ruta de ingestin y se caracterizan por sntomas gastrointestinales y neurolgicos, como nuseas, vmitos, dolor de cabeza, desvanecimiento, disnea y la muerte. Despus de las 24 horas o ms aparecen lesiones hepticas. Son evidentes los trastornos renales con frecuencia slo dos o tres semanas despus de la intoxicacin.2.1.- TOXICOCINETICA: La va de entrada del txico puede ser respiratoria, por inhalacin de vapores, digestiva, o a travs de la piel, concentrndose posteriormente en el tejido adiposo. Aproximadamente el 50% de la dosis absorbida se excreta a travs de los pulmones sin metabolizar, y la mayor parte del otro 50% restante se metaboliza en el hgado. Tiene una vida media muy prolongada en el cuerpo(04). Su absorcin lenta en el tracto gastrointestinal se ve favorecida por la presencia de aceites y grasas de origen animal o vegetal esto se debe a que las sustancias no polares que se disuelven en lpidos difunden con mayor rapidez, ya que, la membrana celular que es permeable, se encuentra constituida principalmente por fosfolpidos, y cuya permeabilidad est determinada por las caractersticas fisicoqumicas de las sustancias. 2.2.- TOXICODINAMIA: El CCl4 ejerce su efecto txico al generar el radical libre altamente txico (CCl3) por accin de oxidasas ligadas al sistema P-450 en el retculo endoplsmico, paralelamente por una reaccin de reduccin (va de eliminacin cloro), se formara el CCl2. El CCl3 inicia la rpida peroxidacin de lpidos de membrana, lo que provoca una reduccin de la fluidez de la membrana la cual es esencial para preservar la funcin celular. Se rompen las membranas del RE, se liberan los ribosomas. Se acumulan triglicridos al no existir sntesis de las apoprotenas necesarias para su salida del hgado. Esto se traduce en esteatosis. Por otro lado, la peroxidacin de lpidos que afecta a la membrana plasmtica se traduce en trastornos en el transporte de iones, ingreso masivo de agua, sodio y calcio. De manera que dependiendo de la magnitud y tiempo de la accin del txico las consecuencias fisiopatolgicas difieren, pudiendo encontrarse esteatosis o necrosis masiva. UNIVERSIDAD LOS NGELES DE CHIMBOTE CURSO: TOXICOLOGIA I Tetracloruro de Carbono Pgina 7

Dado lo anterior, la necrosis inducida por CCl4 es ms severa en las clulas centro lobulillares del hgado quienes contienen la ms alta concentracin de la isoenzima P-450, la cual es la responsable de la activacin del CCl4. Adems, se ha observado que el dao heptico, se expresa a travs de dos tipos celulares morfolgicamente diferentes, necrosis balonizante y necrosis hialina, los cuales alcanzan su mximo a las 24 horas luego de administrado el txico(04).Es una acumulacin de grasas en las clulas del hgado. Los sntomas del hgado graso suelen ser fatiga crnica, dolor en la parte superior derecha del abdomen, malestar general y sensacin de pesadez despus de las comidas aunque tambin es cierto que hay muchos pacientes sin ningn sntoma.El hgado graso (esteatosis) suele estar tambin un poco agrandado aunque no suele producir dolor. El problema es que si no tratamos esta enfermedad (esteatosis) algunos casos pueden terminar en una cirrosis irreversible.Aunque algunos casos de hgado graso se relacionan con el alcoholismo la mayora se deben, hoy en da, a la obesidad y a altos niveles de colesterol y triglicridos. La mayor incidencia de la diabetes tipo dos (la que no necesita inyectarse insulina) tambin favorece el desequilibrio metablico. Por qu se produce la esteatosis heptica?La causa de la acumulacin de grasa en el hgado no se conoce con certeza, pero hay algunos mecanismos que se han demostrado muy importantes en el desarrollo de la enfermedad: Resistencia a la insulina, responsable del sndrome metablico, tan frecuente en el hipertenso. Estrs oxidativo. Liberacin de citoxinas. El hallazgo de hgado graso es extremadamente frecuente. Esta enfermedad se asocia a los siguientes factores de riesgo: Obesidad Diabetes Hipercolesterolemia Hipertrigiceridemia Sexo femenino Produce sntomas? El hgado graso frecuentemente es asintomtico y solo es descubierto a raz de una ecografa abdominal. La otra forma de llegar al diagnstico es a travs del hallazgo de elevaciones de las transaminasas descubiertas en un anlisis de sangre realizado por cualquier motivo. Algunas personas se quejan de dolor abdominal leve a moderado en el hipocondrio derecho. Slo un pequeo porcentaje de pacientes presentan sntomas de insuficiencia heptica, como por ejemplo trastorno de la coagulacin, aparicin de ictericia o retencin de lquido en el abdomen.

- III-. OBJETIVOS:

Conocer el mecanismo bioqumico por el cual el tetracloruro induce el hgado graso. Demostrar mediante la practica las diferencias entre un hgado normal y un hgado inducido a hgado graso. Determinacin experimental del porcentaje de gasto de la muetra patrn y la muestra a experimentar. Demostrar la mportancia que tiene la determinacin de un hgado graso. Y las posibles consecuencias que esta podra realizar en el organismo humano. Poder de demostrar las posibles formas de producir hgado graso .tanto de forma aguda o crnica. Inducir a hgado graso aun animal de experimentacin,III-. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: Mtodos:Observacin, experimentacin1 era experiencia: induccin de hgado graso experimental.Para la realizacin de la prctica de laboratorio se utilizaron dos cobayos, de las cuales una fue administrado con 3.0 ml de una solucin compuesta de tetracloruro de carbono y aceite mineral en partes iguales. Y el otro cobayo fue administrado con una solucin salina tomndolo como patrn para la comparacin en la prctica,( la solucin de tetracloruro de carbono debe ser administrada un da antes de la realizacin de la prctica.

2da experiencia: determinacin de los acido grasos en el hgado.Como primera parte de la experiencia 2, sacrificamos los animales ,con la posterior diseccin del cobayo con el objetivo de extraer el hgado de cada uno de los cobayos.

Para continuar con la practica ser necesario, primero pesar cada uno de los hgados extrados de forma separada .anotar los resultados . Luego proseguir con la observacin caracterstica de cada uno de los hgados y notamos las observaciones.

Para la determinacin de los cidos grasos , antes debemos preparar la soluciones siguientes: Solucin de KOH AL 33 % cps 50 ml Solucin de NaOH 0.1 N csp. 100 ml Solucin de HCl al 2.5 % cps. 50mlLuego proseguimos con la trituracin de una cantidad determinada de cada uno de los hgados luego pesamos 2.5 gramos de muestra de hgado, la cual la depositamos en un Erlenmeyer.

Para proseguir con la prctica empezamos cargando, la bureta con la solucin de NaOH 0.1 N

Luego de esto preparamos la muestra para titular : La cual preparamos en el matraz colocando la muestra ,luego 10 ml de KOH AL 33% y 40 ml de una solucin preparada de ( 20 ml de etanol y 20 ml de alcohol isoamilico). Luego lo llevamos a bao maria durante 20 minutos.

Una vez sacada del bao maria proseguimos colocando 17 ml de HCl al 2,5 % Dejamos en reposo 5 minutos. Luego a l matraz aadimos 25 ml de ter de petrleo aadimos enrgicamente durante un minuto. Dejamos en reposo 10 minutos para conseguir una adecuada separacin de las fases.

Una vez separada en dos fases ,con la ayuda de una pipeta extraemos 5 ml de la capa etrea ( superior) y colocamos en otro matraz para su posterior titulacin. Antes debemos colocar un indicador que es el azul de timol. Finalmente titulamos y anotamos las observaciones y el gasto generado.

Resultados:1era. Experiencia: caractersticas del hgado

PESOCOLORCONSISTENCIA

COBAYO CONTROLnormal normo color(un color normal propio del hgado)Contenido biliar: normal.consistencia: normalSuperficie heptica: lisa, presenta rugosidades.

COBAYO CON CCl4ligeramente aumentado Presento un color oscuroContenido biliar: aumentado (1.5 ml.)consistencia: rgidasuperficie heptica:, presenta rugosidades

2da-. experiencia: determinacin de los cidos grasos.Contenido de cidos grasos

Gasto de la solucin patrn de NaOH 0.1 N

COBAYO CONTROL

COBAYO CON Cl4C

DISCUSION DE LOS RESULTADOS:- la practica se realizo de manera satisfactoria pudiendo ver la diferencia de las titulacines de cada uno de las muetras utilizadas, donde podemos ver que el gasto que mas se obtuvo fue de la muestra de hgado con Cl4C. lo cual significa que hay mayor porcentaje de acidez en la muestra de hgado con Cl4C.CONCLUSIONES: Concluimos que el tetraclururo a parte de producir hgado graso ,tambin es un potente toxico que produjo ciertas causas al cobayo Adems se demostr que las consecuencias que produce un hgado graso ,pudindolo observar las claras diferencias de cada hgado que se extrajo de los cobayos. la esteatosis es la alteracin morfolgica ms frecuente, hallable en un 80% de los pacientes estudiados. Entre las grasas se encuentran triglicridos en una concentracin 10 veces superior a lo habitual. Es una consecuencia directa de la oxidacin del etanol en el hgado, Cuestionario :1-.porque resulta conveniente la utilizacin de ratas hembras en el experimento de induccin de hgado graso por tetracloruro de carbono? En varias investigaciones experimentales que se hicieron ,para determinar el efecto toxico de ciertas sustancias se pudo demostrar que las ratas hembras son mas susceptibles a desarrollar los efectos toxicos de ciertas sustancias como es el caso en esta que es el tetracloruro de carbono produciendo a la rata hembra mayores efectos toxicos que a los machos.2-.porque mecanismo el etanol induce el hgado graso?Aparecen diferentes grados de dao heptico ante la exposicin a dosis similares de alcohol, se ha postulado que el avance de formas leves a formas graves de dao heptico alcohlico exige losefectos acumulados de varias noxas separadas (es decir, mltiples injurias). Por falta de tiempo, en estaexposicin se tratar la manera como el alcohol daa los hepatocitos, que son las clulas predominantes en el hgado; pero es importante reconocer que otras clulas, particularmente las clulas de Kpffer,macrfagos residentes en el hgado, y las clulas estrelladas, que producen el tejido fibrtico que se acumula en los hgados cirrticos, tambin se alteran con la exposicin al alcohol.De acuerdo con esta teora, el etanol se metaboliza a acetaldehdo, producto intermedio txico, por accin de enzimas del hepatocito (diapositiva 10). En condiciones de exposicin infrecuente al etanol, ste se oxida y forma acetaldehdo, predominantemente por accin de la alcohol deshidrogenasa (ADH) citoslica,y el acetaldehdo resultante es destoxificado rpidamente convirtindose en acetato por accin de la aldehdo deshidrogenasa (ALDH) mitocondrial. El acetato, a su vez, pasa a ser un sustrato para el metabolismo intermediario y genera CO2 y H2O. Los polimorfismos de ADH/ALDH y los frmacos (Antabuse) que causan la sobreactividad de la ADH respecto a la ALDH, se han asociado con aumento del dao heptico en las personas, lo que apoya la importancia del acetaldehdo como sustancia hepatotxica3-.porque la deficiencia de acido pantotenico puede determinar el hgado graso?El cido pantotnico tambin se conoce como vitamina B5. El cido pantotnico se forma de -alanina y cido pantoco. El pantotenato se requiere para la sntesis de la coenzima A (CoA), y es un componente del dominio de la protena transportadora de grupos acilos (ACP) de la sintasa de cidos grasosLa deficiencia del cido pantotnico es extremadamente rara debido a su extensa distribucin en los cereales integrales, las legumbres y la carne. Los sntomas de la deficiencia del pantotenato son difciles de determinar puesto que son sutiles y se asemejan a los de otras deficiencias de la vitamina B.En conclusin una deficiencia de cido pantotenico, producir que el cido graso no se active y esto produzca que no pueda empezar la beta oxidacin esto producir que el acido graso se vaya acumulando y produzca una acumulacin de acidos grasos ,lo cual producir la condicin clnica de hgado graso. 4-.cite por lo menos 4 alteraciones bioqumicas que se producen en los animales con tetracloruro de carbono? incremento del nivel de los perxidos lipdicos y las transaminasas sanguneas induce la formacin de hepatomas y carcinomas hepatocelulares inducen la formacin de tumores hepticos trastornos en el transporte de iones, ingreso masivo de agua, sodio y calcio. Nefrotoxicidad necrosis balonizante y necrosis hialina,5-.que es esteatosis heptica? 1. Qu es la esteatosis heptica o hgado graso?Es la acumulacin de grasa en las clulas hepticas (hepatocitos). Otro trmino frecuentemente utilizado para llamar esta condicin es infiltracin de grasa en el hgado o esteatosis.Se presenta entre el 10 a 24% de la poblacin.2.Qu lo origina?La acumulacin de grasa en el hgado puede verse en las siguientes condiciones:

- Sndrome metablico.- Desnutricin.- Prdida rpida de peso.- Ingesta excesiva de alcohol.- Corticoesteroides.- Estrgenos sintticos.- Aspirina.- Cocana.- Medicamentos antirretrovirales.- Lipodistrofias.- Enfermedad heptica aguda del embarazo.- Enfermedades inflamatorias intestinales.- Diverticulosis con sobrepoblacin bacteriana.- Virus de la inmunodeficiencia humana.- Virus C de la hepatitis.- Tuberculosis.- Ciruga para obesidad.

3. Cules son los factores de riesgo?La presencia de diabetes mellitus tipo 2, la obesidad, sobre todo a nivel del tronco, el aumento de triglicridos y una historia familiar de esteatosis o esteatohepatitis son algunos de los factores ms comnmente asociados a esta enfermedad.4.Cules son los sntomas?El hgado graso generalmente se sospecha en los pacientes con enfermedades o condiciones descritas anteriormente. En la mayora de los casos el paciente se encuentra asintomtico; pero puede presentar fatiga, sensacin de "llenura" abdominal o puede presentar aumento de tamao del hgado.5.Cmo se hace el diagnstico?Varios estudios han demostrado que el hgado graso es la causa ms comn del aumento deenzimas hepticas en los exmenes sanguneos de rutina. Pueden encontrarse otras alteraciones sugestivas de disfuncin heptica avanzada, como son aumento de bilirrubinas y disminucin de las protenas sanguneas.Las imgenes por ultrasonido o tomografa computarizada nos pueden sugerir la presencia de un hgado graso. En el ultrasonido, el hgado graso produce una imagen clara (brillante) y un patrn ondulado. En la tomografa computarizada se observa un hgado con menor densidad que el normal. La resonancia magntica nuclear con espectroscopia permite cuantificar la infiltracin de grasa al hgado.Para saber con seguridad si un paciente tiene hgado graso se requiere de la toma de una biopsia heptica, la cual tambin nos permite investigar el avance de la enfermedad. 6. Cmo se acumula grasa en el hgado?An no se sabe con certeza. Pero un paciente tiene un hgado graso, cuando la grasa incrementa el peso del hgado un 5%. Una posible explicacin del hgado graso es que haya una transferencia de grasa de otras partes del cuerpo, o una dificultad para eliminar grasas del mismo hgado, o bien una alteracin con los sistemas antioxidantes del organismo. Tambin se ha encontrado que la resistencia a la insulina esotro factor precipitante. Se ha demostrado incluso, que elconsumo de alimento alto en grasas produce por si slo un hgado graso.7. Puede originar otras enfermedades hepticas?El hgado graso simple no est asociado con otras anormalidades hepticas como son la cicatrizacin (cirrosis) o la inflamacin (hepatitis). Es comn encontrarlo en pacientes con sobrepeso o con diabetes mellitus.Los pacientes que tienen durante varios aos una alta ingestin de alcohol pueden desarrollar un hgado graso.La inflamacin del hgado asociada con un incremento en el depsito de grasa puede presentarse a mediana edad, en personas con sobrepeso, y frecuentemente en diabticos que no tienen ingestin de alcohol. Esta enfermedad se asemeja a una hepatitis por alcohol, la cual es llamada esteatosis heptica no alcohlica.

Se considera que 3 de cada 10 pacientes con esteatosis pueden evolucionar a una forma ms grave de dao heptico, inflamando las clulas del hgado, fenmeno llamado esteatohepatitis. Esta condicin con el tiempo puede evolucionary el paciente puede desarrollar cirrosis (hgado cicatrizado).8. Cul es el tratamiento?-.Se recomienda que los pacientes diabticos y con obesidad tengan un adecuado control de sus padecimientos. Debido a que una disminucin acelerada del peso puede ser nociva para el hgado, se ha recomendado una disminucin paulatina de peso de 500 g por semana en nios y de 1600 g en adultos.

Ningn medicamento ha probado reducir 100% el acumulo de grasa en el hgado. Algunos medicamentos que se utilizan son: Vitamina E, metformina, gemfibrozil, cido ursodeoxiclico, betana, entre otros