INZUNREZISZTENCIA KEZELÉSÉRE SZÁNT NÖVÉNYI HATÓANYAGTARTALMÚ KÉSZÍTMÉNY

PREFORMULÁCIÓS VIZSGÁLATA

Szendi Nóra

V. éves gyógyszerész hallgató

Témavezető: Dr. Bácskay lldikóKonzulens: dr. Sinka Dávid Zsolt

1

BEVEZETÉS I:

INZULINREZISZTENCIA

Vázizom, máj, zsírszövet sejteinek glükóz felvétele csökken

Oka: inzulin receptor tirozin-kináz aktivitása csökken

Szerin foszforiláció

GLUT-4 csatorna transzlokációja gátolt

2-es típusú diabetes mellitus és metabolikus szindróma kialakulása

PREVENCIÓ!

Inzulin szekréció fokozódása, majd a β-sejtek kimerülnek

2

/International Diabetes Federation/3

BEVEZETÉS II:

CÉLKITŰZÉSEK

Görögszénamag- és paprikakivonat felszívódásának vizsgálata Caco-2 sejtvonalon keresztül

Labrazol és ciklodextrin abszorpcióra kifejtett hatásának tanulmányozása

MTT vizsgálat: a kivonatok bélhámsejtekre való ártalmatlanságának bizonyítása

SMEEDS formulálása, transzport elvégzése

Kioldódás vizsgálat indirekt módszerrel, DPPH reagens segítésével

4

ANYAG I:

GÖRÖGSZÉNAMAG Antidiabetikus hatás:

inzulinszekréció fokozása,

glükóz perifériás hasznosulását növeli

Koleszterinszint csökkentő

PMS tüneteit enyhíti

Fő komponensek:

Poliszacharidok: galaktomannán

4-OH-izoleucin *

Trigonellin *

Szapogeninek: dioszgenin * 4-OH-izoleucin

5

/*antioxidáns hatású vegyületek/

ANYAG II:

PAPRIKABelsőleg: emésztést javító, savhiány esetén

Külsőleg: reuma, diabeteses neuropathia

Kapszaicin:

Inzulinszekréciót stimulál

Szérum leptin szintet csökkenti

Glükóztolerancia javítása

Fő komponensek:

Kapszaicin

Karotinoidok: kapszantin és kapszorubin

Flavonoidok: apigenin, kvercetin, luteolin *

C- és E-vitamin *

6

/*antioxidáns hatású vegyületek/

ANYAG III:

HIDROXI-PROPIL-β-CIKLODEXTRIN

Oligoszacharid

Membránmoduláló hatás

Membránpermeabilitásfokozása

Biohasznosulás javítása

Komplexképző

Vízoldhatóság javítása: lipofilhatóanyagok esetén

Belső üreg: hordozómolekulák

Biztonságos per os és IV

7

SMEEDS: Self-microemulsifyingdrug delivery systems

Önemulgeáló rendszerek

Igen magas tenzid koncentráció

Spontán képződik

Hatóanyagok stabilitása fokozódik

8

OLAJEMULGENS

SEGÉDEMULGENSSMEEDS O/V TÍPUSÚ

MIKROEMULZIÓ

+hatóanyagHígulás a GI traktusban

ANYAG IV:

SMEEDSTerner-diagram

ANYAG IV:

SMEEDSHEZ FELHASZNÁLT ANYAGOK

FELÜLETAKTÍV ANYAG NEVE

LABRASOLTRANSCUTOL

HPIZOPROPIL-MIRISZTÁT

SZERKEZET

Kapril- és kaprinsav PEG-8

és gliceridekmono- ésdiészterei

Nagy tisztaságú dietilén-glikolmonoetil éter

Mirisztinsavizopropil-alkoholos

zsírsav-észtere

SZEREPE

O/V felületaktív anyag

mikremulzióképzésére,

szolubilizálószer

KoszolvensSMEEDS

képzésére

Szintetikus olaj O/V mikremulzió

képzésére, külsőleg bőrpuhító

HLB ÉRTÉK 12 - 11,5

A labrasolkomponensei

9

MÓDSZER I:

CACO-2 SEJTVONAL

Humán colon adenocarcinomaeredetű sejtvonal

Nemzetközileg elfogadott in vitro modell

Vékonybélből történő felszívódás modellezése

TEER: Trans-epithelial electricresistence

7-800 Ω*cm2 transzport

10

MÓDSZER II:

MTT VIZSGÁLAT

Sárga MTT

Abszorbancia mérés: 570 nm-en

Caco-2 sejtek mitokondriális változásának mérése

MITOKONDRIÁLISDEHIDROGENÁZOK

FLUOstar OPTIMA MicroplateReaderrel

/MTT=metil-tiazol-tetrazólium/

11

Lila formazán kristályok

MÓDSZER III:MÓDOSÍTOTT

HATÓANYAG KIOLDÓDÁSI VIZSGÁLAT

Indirekt módszerrel, DPPH szabadgyök segítségével

Antioxidáns hatást a gátolt szabadgyök %-os mennyiségével fejeztük ki

SMEEDS kioldódása zselatin és HPMC kapszulából

Kevertetés mágneses keverővel, fordulatszám: 120 fordulat/perc

Lila szabadgyök sárga oldat

Abszorbancia mérés: 517 nm-en

12

EREDMÉNY I:

DPPH HÍGÍTÁSI SOROZAT

13

EREDMÉNY II:

SMEEDS -MÓDOSÍTOTT HATÓANYAG KIOLDÓDÁS VIZSGÁLAT

Shimadzu UV spektrofotométerΛ= 517 nm

14

FELHASZNÁLT ANYAGOK MENNYISÉG

Görögszénamagkivonat 2 ml

Paprikakivonat 2 ml

Labrasol 0,666 ml

Transcutol HP 0,666 ml

Izopropil-mirisztát 0,666 ml

Összmennyiség: 3 ml

SMEEDS összemérése

Kapszulába töltés

Mintavétel

Abszorbancia mérése

+ 0,06 mM DPPH-o.

EREDMÉNY III:MÓDOSÍTOTT

HATÓANYAG KIOLDÓDÁS VIZSGÁLAT

15

EREDMÉNY V:

MTT VIZSGÁLAT - PAPRIKA

16

EREDMÉNY VI:

MTT VIZSGÁLAT - GÖRÖGSZÉNAMAG

17

ÖSSZEFOGLALÁS

TOVÁBBI LEHETŐSÉGEK Transzportfolyamatok elvégzése koncentráltabb

kivonatokkal

HMPC kapszulából történő kioldódás vizsgálat elvégzése savas körülmények között

18

A paprika- és görögszénamagkivonatok Caco-2 sejtekre nézve bizonyítottan ártalmatlanok

Olyan önemulgeáló rendszert hoztunk létre, mely zselatin és HPMC kapszulából kedvező kioldódási profillal rendelkezik

HMPC kapszulával retard hatóanyag-leadást tudunk biztosítani

A kivonatok antioxidáns hatását igazoltuk

KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!

Köszönöm a Gyógyszertechnológiai Tanszék minden munkatársának a lehetőséget a kísérleti munkára.

Köszönöm témavezetőmnek, Dr. Bácskay Ildikónak, valamint konzulensemnek, Dr. Sinka Dávidnak az értékes szakmai segítséget

és a hasznos tanácsokat.

19

Caco-2 sejtvonal passzálása, inzertre helyezése

TEER mérése, transzportkísérletek elvégzése

MTT citotoxicitási vizsgálatok

DPPH hígítási sorozat felvétele

SMEEDS formulálása, zselatin és HPMC kapszulába töltése

Módosított hatóanyag kioldódási vizsgálat elvégzése

UV spektrofotometriás mérések

TÉMAVEZETŐ SEGÍTSÉGÉVEL ELVÉGZETT FELADATOK

Eredmények összesítése

Következmények levonása

20

ÖNÁLLÓAN VÉGZETT MUNKA