5
cell biochemistry and function Cell Biochem Funct 2001; 19: 191±195 DOI: 10.1002/cbf.915 Is e4 allele of apolipoprotein E associated with more severe end-organ damage in essential hypertension? Hu Èlya Yilmaz, Turgay Isbir * Bedia Ag Æac Ëhan and Makbule Aydin Institute of Experimental Medical Research, Department of Molecular Medicine, University of Istanbul, Istanbul, Turkey The aim of the present study comparing patients with mild to moderate hypertension with controls, was to explore a possible association between hypertension-related target organ damage and evaluation found in the gene encoding apolipoprotein E apo E) genotype. Detailed medical history was recorded and physical examination was performed for all patients in the study 88 hypertensives, 63 normotensive controls). PCR Polymerase Chain Reaction), RFLP Restriction Fragment Length Polymorphism), and agarose gel electrophoresis techniques were used to determine the apo E genotypes. The frequencies of apo e2, apo e3, and apo e4 alleles were 3.97, 88.06, and 9.95%, respectively in the hypertensive group. The frequencies of apo e2, apo e3, and apo e4 alleles were 5.5, 92.0, and 2.38%, respectively in the control group. There were about twice as many individuals in the heterozygote hypertensive group who had apo E3/4 as compared to the control group 7.30 vs. 2.38%) p 0.07). The hypertensive patients who were carriers of the apo e4 had signi®cantly higher organ damage left ventricular hypertrophy p < 0.001). dilated left atrium p < 0.05), retinopathy p < 0.05)) as compared to those who were not carriers of apo e4. These results showed a trend for the e4 allele to be associated with a higher prevalence of target organ damage in patients with mild to moderate hypertension. Copyright # 2001 John Wiley & Sons, Ltd. key words Ð apolipoprotein E gene; mild to moderate hypertension; left ventricular hypertrophy abbreviations Ð apo E, apolipoprotein E; apo B, apoliporotein B; LDL, low density lipoprotein; CAD, coronary artery disease; LVH, left ventricular hypertrophy; DLA, dilation of left atrium; HR, hypertensive retinopathy INTRODUCTION Apolipoprotein apo) E is a major protein constituent of plasma lipoprotiens that serves various functions, including maintenance of the structure of lipoprotein particles and regulation of the metabolism of several different lipoproteins 1 . Apolipoprotein E, a protein with a relative molecular mass Mr) of 34 000, is a constituent of very low density lipoproteins VLDL) synthesized by the liver, which function primarily in the transport of triglyceride form the liver to peripheral tissues, and of a subclass of high density lipproteins HDL), which participate in cholesterol redistribution among cells. In addition, apo E becomes a major protein constituent of intestinally- synthesized chylomicrons, which transport dietary tri- glyceride and cholestrol. 1 A major physiological role for apo E in lipoprotein metabolism is its ability to mediate high-af®nity binding to the low density lipo- protein LDL) receptor, also referred to as the apo-B, E LDL) receptor. 1±3 Lipoprotein binding initi- ates cellular uptake and degradation of the lipo- proteins, which leads to the use of the lipoprotein cholesterol in the regulation of intracellular choles- terol metabolism. Apo E shares this function with apo B, the protein constituent of plasma LDL. In humans, three major isoforms of apo E can be recognized, designated apo E2, apo E3, and apo E4, according to their relative position after isoelectric focusing. 4,5 The biosynthesis of these isoforms is under the control of three independent co-dominant Copyright # 2001 John Wiley & Sons, Ltd. Received 7 June 2000 Accepted 15 August 2000 * Correspondence to: Professor Dr Turgay Isbir, Director of Molecular Medicine, University of Istanbul, Institute for Experi- mental Medical Research, Department of Molecular Medicine, PO Box: 7 Kocamustafapas Ëa, 34311 Istanbul, Turkey. E-mail: [email protected] Contract/grant sponsor: University of Istanbul Research Foundation; Contract/grant number: T-77/160695.

Is ε4 allele of apolipoprotein associated with more severe end-organ damage in essential hypertension?

Embed Size (px)

Citation preview

���� ���������� �� ����������� ������ ��� ����� ��� �������

���� �������� ���

�� �� ������ � �������������� � ���������� ���� ���� ��������� ��!�� ����!� �� ��������� �"����������#

$%&�"� '����() *%�!�" �����+ ,���� -!.��/��� ��� 0�1�%�� -"���

��� � � � �� �������� �� ������� ��������� ����� �� �� ��������� ��������� �������� � �� �� ������ �� ������ ��� ��

*�� ��� � ��� ������� ��%�" ��������! �������� ���� ���� �� �������� �"���������� ���� ��������) ��� �� �2����� � ������������������� ������� �"���������� ������� ���!�� ��!�� ����!� ��� ����%����� �%�� �� ��� !��� �������! �������������� �3��� �4 !����"�� 5������� ������� ������" ��� �������� ��� ��"����� �2��������� ��� ��� ����� �� ��� �������� �� �����%�" 366 �"�����������) 78 ������������ ��������4 9:; 39��"������ :���� ;�������4) ;<=9 3;���������� <��!���� =��!��9��"��������4) ��� �!����� !�� ��������������� ������>%�� ���� %��� �� ��������� ��� ��� � !����"��� *�� ��>%������ � ��� ��) ��� �8) ��� ��� �� ������� ���� 8�?) 66�7) ��� ���@) �����������" �� ��� �"���������� !��%� *�� ��>%������ � ��� ��) ��� �8) ��� ��� �� ������� ���� ��) ���) ��� �86@) �����������" �� ��� ������� !��%� *���� ���� ���%� ����� �����" �������%��� �� ��� ������("!��� �"���������� !��%� ��� ��� ��� �8� �� �������� �� ��� ������� !��%� 3?8� ���86@4 3 �� ��?4 *�� �"���������� �������� ��� ���� �������� � ��� ��� �� ��� ��!��A�����" ��!��� ��!�� ����!� 3�� ��������%��� �"��������" 3 �� ����4 ������� �� � ����%� 3�� ���4) ����������" 3�� ���44 �� �������� �� ����� ��� ������� �������� � ��� �� *���� ���%��� ������ � ����� �� ��� �� ������ �� �� ���������� ���� � ��!��� ���������� � ���!�� ��!������!� �� �������� ���� ���� �� �������� �"���������� :��"��!�� � ���� B��� C���" D E���) =��

��� ����F�������������� � !���� ���� �� �������� �"����������� �� � �������%��� �"��������"

������ ���F��� �) �������������� �� ��� ,) ������������� ,� =5=) ��� ������" ������������ :-5) �������" �����"�������� =G$) �� � �������%��� �"��������"� 5=-) �������� � �� � ����%�� $;) �"���������� ����������"

�H*;I5J:*�IH

-������������� 3���4 � �� � ��K�� ������� �������%���� ������ ������������ ���� ������ �����%� %�������)����%���! ����������� � ��� ���%��%�� � �������������������� ��� ��!%������ � ��� ���������� � ��������� ����� ������������� -������������� �) � ����������� � �������� �����%��� ���� 30�4 � 8� ���) �� ��������%��� � ���" ��� ������" ������������ 3G=5=4�"������(�� �" ��� �����) ����� %������ ��������"�� ��� ��������� � ���!�"������ ��� ��� ����� ��

���������� ����%��) ��� � � �%������ � ��!� ������"����������� 3$5=4) ����� ����������� �� ��������������������%���� ����! ����� �� ��������) ��� �������� � ��K�� ������� �������%��� � �����������" �"������(�� ��"���������) ����� ��������� ������" ��� !�"������ ��� ����������� - ��K�� ��"�����!���� ���� �� ��� � �� ����������� ���������� �� ��� ������" ��������� ��!� � A���" ������! �� ��� ��� ������" ���� ������� 3=5=4 ��������) ���� �� ����� �� �� ������ ,) � 3=5=4 ����������8 =���������� ������! ����� ���� ����%��� %���1� ��� ��!�������� � ��� ���� ��������) ����� ����� �� ��� %�� � ��� ���������������������� �� ��� ��!%������ � ���������%��� ������ ����� ���������� -�� � ������ ���� %������ ������� ,) ��� ������� �������%��� � ������ =5=

�� �%����) ����� ��K�� ��� ���� � ��� � ��� ������!��(��) ����!����� ��� ��) ��� �8) ��� ��� ��)��������! �� ����� �������� �������� � ��� ����������� ��%���!�)� *�� ����"������� � ����� ��� ���� ��%���� ��� ������� � ����� ����������� �� ��������

:��"��!�� � ���� B��� C���" D E���) =�� �������� ! "��� #$$$%���� �� &' %�(�� #$$$

+:������������� ��� 9�� ����� 5� *%�!�" �����) 5������� � 0����%��� 0�������) J��������" � ������%�) ������%�� �� �2���� ������ 0������ ;�������) 5��������� � 0����%��� 0�������)9I ,�2� ? L����%��� ����)�) 8�8�� ������%�) *%�1�"� ����� ������M�%������������

:�������!���� �������� J��������" � ������%� ;�������<�%��������:�������!���� �%����� * ??�7�7��

�������) ��) �8) ��) �� � ���!�� -9I� !��� ���%� ������������ ��>�8�7)? *�� ��>%������ � ��� ��)�8) ��� �� ������ ��� ���������" �������� ������ ��%������� ���%������� 36) ?6) ��� ��@) �����������"46

�� ������" �������%���) ���� ���� ��@ � ��� ��� ��� ����� �������%�� ��������� �� ������ ����������������� ��� �� ������%��� �� ���� ������ ��� � ���" ���������6��� �������%��� ����"��! ��� �� ������ ��� ���" ��!� ������ � =5= ������������ ��� ������� ������������ ��%������)�� ��� � �� ���%������ �������%����)�8)�� ���� ������������ ���� ��� �� ������ ������������ ���� ��������� :$5 ���1) ���� � ��� ��K%�� ���� �� ����������� �������" ���1 ������ ��� ������

�� ��� ���� ������������ ���� �"���������� �� ���� ������ ���� �"���������� ������� ���!�� ��!�� ����!�)����� �� 1���� �� �� �� ����������� ���1 ����� ��:$5 -�� � !��� ���"�������� ��� ��� "�� ���� ��% ���� �� �� ����������� ���1 ������� C� �%�� ���� ������ �� ������ �� ��� �"���������� !��%� ��� � ��!��� ��>%���" ���� ��� ������� !��%� 3�������������4=������ ���� ���������! ����������� ������� ������� ���� ������) ����%���! ��� � �����) ��� �"�������������� ���� �%��������7

*�� ��� � ��� ������� ��%�" ��� �� �������!��� ��������� ��>%������ � ��� � �� �������� ���� ���� ���������� �"���������� ��� �� � ������� !��%� *�������� ��� � ���� ��%�" ��� �� �2����� ��� ��������������� ��� � !����"�� ��� �"���������� ����������!�� ��!�� ����!�

0�*$I5E

*��+�� �

�� ����� �� ��%�" ��� ����������� ������� ��� �������"� ���!�� ��!�� ����!� �� �"���������� ��� �� �������� � !����"���) � ����� � 66 ��%�� �������� �������� �� �������� �"���������� ���� ������ ������������� �� ��� ��%�" *�� ����������" ���%��� � ��� A��� 66 �������� ������ �� ����������! ������������ � ���� ������ ��%��� � �"���������� ���� ������ �� ������

5������� ������� ������" ��� ��"����� �2���������)���%� ����� ���A��) ���������� ���������) %�����" ��� �����%��� �2�������) ����� %��������!����") ������ ���� � �"���������� ����������" �" �����������!"��� ���������� � �� � �������%��� �"��������" 3=G$4��� �� � ����%� ���������� �" ����������!����" ������ ����� �� ��� �������� �� ��� ��%�" *�� ��������� �������" �����" ������� 3:-54 ��� �����������������! �� ������%� ������� ������" �%����� �"�� ���� � ��!��� �������� ��� �LN ����!�� $��!����� ���!�� ��� ����%��� ��� ���" ���� ����2 ���

����%����� 3���!�� �� 1���!���� ������� �" ��� �>%���� ���!�� �� ������4� ������" �� ���������� ������� � ��� ���" ���� ����2 �2����� �7? �� ��� �� �?8 ������� 3��%!��" 8�@ ����� ����� ���!��4 9��������������! ��!������ %�� �%���! ��� "��� ����� �� �2�� ������� ���� ������A�� �� ���1��� *���� ��� �� ��! ��A���� �� ������ ������� �������� ���� �"������������� ������� �%�K���� �� �!� 3�"�����������) �7�7���� "����� ��������) �?�7� ���� "����4

=� � �������%��� ���� ��� ��������� %���! ��� ���%�� ��� 5�����%2 ��� ;�����1�? 3O9���P����������4

0�������%���%��� ��� ��A��� �� � ������ � ���% ��� �2������� ������� �� ��� ��� �! ���� � 38� ��8�� �! ��"� �

�,% ����� ���

,���� ��������� ���� ��������� �� �%��� ���������!�5*-) ��� 5H- ��� �������� ��� ��� ��%1��"�������� �" E5E �"���) ������%� ������� �2����������� ������� ��������������6

-�������� ����� ���� ��� .-��/ ��� ���������� ���� (��� ����������0

N����� 5H-� 3����� �!4 ���� �����A�� �" %���! � ������ ������ ��) �� -*N N-: N-N -:: -*N--N N-N **N --N 8P3������ 7��?�4 ��� �������� ������ ��) �� *:N :NN N:: ::N N::*NN *-: - 8� 3������ �7���764 *�� 5H- ��������3� ��4 ��� ����%��� �� ��� �� �� �������� ��2�%�� ��� ������! � � �� ��� �������� �% �� 3��� �� *��� $:�)�$ 66 �� �� �:) ��� �� L:�) �6@ ������� 9��)�� �� 0!:��) � �� 3�� ����4 � ���� ������) �� ���H*9 ��2�%�� 3�-*9) �N*9) �**9) �:*94 3������4� �8 �� *����%� �>%����%� 3��>4 5H- ���"������30,� <��������4� ��� 8�? �� ������� ������(�� �����)����� ��� ����� �� ��� 5H- �������� 0������ ���3�� ��4 ��� ������ ���� ��� A��� 9:; ����������2�%�� -����A������ ��� �������� �" 8� �"���� � �����%������ 3� ��� �� �7 �:4) ��������! 3� ��� ��7? �:4) ��� �2������� 3� ��� �� ?� �:4 ������� �"�2������� �� � ��� �� ?� �: *�� �����A�� 8�� ��9:; ����%�� ��� �������" ��!����� ���� ��� �������������("�� $�� � 3�� %���� ��� �4 *�� ��!����� 5H-����� ��������� �� �@ ��������� �!����� !�� ����*��� ������ �5*- �% �� ������� �" �������! ����������%� ������� ���%���� ��� ��� ��� � ���"����� ��� ��� �"��� �" ���%���(����� %���� %���������� ��!����� ��� �����!������ ���� � 9������� ��������

*�� ��� ����("!��� �������� ���) ��) ?6) �6) ����7 �� ��!����� ���������! ��� ������� � ��� $�� �

��� ����� ���� � � ��

:��"��!�� � ���� B��� C���" D E���) =�� ���� ������ ��� ����� ��� �������

����������� ���� �� ����� ��� 3:"�4 ��� ��6 3:"�4)����� ��� ��� ����("��� �������� ���) ?�) �6) 8�)��) �6 ��� �7 �� ��!����� ���������! ��� ��������� ��� $�� � ����������� ����� �� ������ ��� 3-�!4��� ��6 3-�!4 *�� ���� ������ �88 ����("!���������� �� �������� � ��) ��) �6) 8�) �6) ��� �7 �� ��!����� ��Q�����! ��� ������� � ��� $�� � ������� ���� ���� �� ����� ��� 3:"�4 ��� �������� � ���� ���� ������� ��6 3-�!4

* � �� ���� � ����

E���������� ����"���) %���! E9EE ������� ��) ����%������ �� ���� �� !����"�� ��� ������ ��>%���" ������ ���� -�� � ������ ��>%������ ���� ��������� �" !�����%����! ������� *�� � ���� � ��� �� ������ �� ��� !�� ��!�� ����!� �� �"���������� ���� ������ �" ����� ���� 5� ������� ������� ��� ����� � ��� ���!��%�� ���� ����%���� ���� � E�%����P� ���� - ���%�� �� ��� ��� ���������� ��!��A����

;�EJ=*E

*�� ��������������� � ��� 66 �������� ��� 78 ���������� ����" ��� ����� �� *���� � *���� ��� �� ��!��A������ ������ �� ���%� ����� ���A�� ������� �"������������� ������� !��%�� �%� ����� ���� ��!��A���� �� �� ����� �� ,0�) E,9) 5,9 ��� �������� ����" ������"������� ��� ��� !��%�� ,0�) E,9) ��� 5,9 ������!��� �� ��� �"���������� !��%� ���� ������� ����� ��������

*���� � ����� ��� �������%���� � ��� � !����"����� ������ ��>%������ �� ��� �"���������� ��� �������!��%�� *�� ���� ������ !����"�� �� ��� �"������ ���� !��%� ��� ��� �88 3?��@4 ������� �" ����8� 3���@4) ��� ��8 376@4) ��� ��� 3��@4��� ��� ��� 3�84 *�� ��>%������ � ��� ��) ����8) ��� ��� �� ������� �� ��� �"���������� !��%� ����8�?) 66�7) ��� ?��@) �����������" *�� ���� ��� ��� !����"�� �� ��� ������� !��%� ��� ��� �8836?8@4) ������� �" ��� ��8 378@4) ��� �8�38�@4) ��� ��� 3�7@4 ��� ��� ��� 3�7@4 *�� ��>%������ � ��� ��) ��� �8) ��� ��� �� ������� ����� ������� !��%� ���� ��) ���) ��� �86@) ������ �����" *�� !����"�� ��� ������ �������%���� � ���

*���� � :������� ��� ����������� ���������� � ��%�" �%�K����

1���� ������� 3�� 664 ,��� ������� 3�� 784

5%������ � �"���������� 3"����4 ��� � 8�8 �-!� 3"����4 �?�7 � ���� �7?� � ���� HE,0� 31!��4 �?�6 � ��� ���� � ��� +9������� ����" ������" ���? @ ��? @ ++E,9 3��$!4 ��7�? � ��7� ���?� � ��8+5,9 3��$!4 ��6? � �7� ?��6 � 8�� +=� � �������%��� �"��������" 8�76 @ �5����� �� � ����%� �867 @ �0�������%���� 3�! ��"� �4 ��7? � ���7 �$"���������� ����������" �8�� @ �*���� ����������� 3�! ��� �4 ��7�� � ��7� ���7� � 8�8� HE*��!�"������ 3�! ��� �4 �7�6� � ?��� ����� � �8�� HE=5= ����������� 3�! ��� �4 ����� � ���� ����� � 87?� HE$5= ����������� 3�! ��� �4 ��6� � ��?� �8�� � ��87 HEG=5= ����������� 3�! ��� �4 8��� � ���� 8��? � ��?7 HE

,0�) ���" ���� ����2� E,9) �"������ ����� �����%��� 5,9) ��������� ����� �����%��� HE) ��� ��!��A����� +�� ���� ++�� ���� *�� ���%������ ��������� ���� � E5� �) �%���� � �������

*���� � 5������%���� � ��� � !����"��� ��� ������ ��>%������ ���"����������� ��� ��������

N��%� :������ $"�����������3�� 784 3�� 664

N����"���� �7 @ 3�4 � @�8 78 @ 3�4 76 @ 374�� �7 @ 3�4 �� @ 3�488 6?8 @ 3��4 ?�� @ 3?48� 8� @ 3�4 ��� @ 3�4�� � @ �8 @ 3�4

-�������� �� @ 3?4 8�? @ 3?4�8 ��� @ 3��74 66�7 @ 3���4�� �86 @ 384 ?�� @ 3��4

H%���� � �������%��� �� �����������

:��"��!�� � ���� B��� C���" D E���) =�� ���� ������ ��� ����� ��� �������

�� � �� ����� �� ������� � � � �� �� ���� � ���������� ��8

� 8� �� ���� ��!��A�����" ������� ����� !��%�� -��������� �� ��� ������������ ��������) �����2� �����" ����� �� ���" �"����������� ��� ��� � 8�3?8� �� �86@4

:��������� � ��� �������� ��� �� ������ �� �"��� ������� ��� ������� �%�K���� �� ����� �� *���� 8-��������� � 66 �������� ������ ���� �� ���� ���� ���� � ��� ��� �� ������� E���� � ����� �������� ������������� �� � �������%��� �"��������" ��� �8� �!��"� � �������� %�����" ��������%��� ��� ���� ���� ���� �� ��� �������� � �"���������� ����������"� A��� ����� �������� ��� � ������� �� � ����%� E������������ ���� �������� �� ��� ��� �� ������� ��� � ���� ��� ���������� �"��������" ��� ������� �� �����%� �� ����������!������ �2��������� H��� � ����� �������� ��� �������� %�����" ��������%����2������� �� �"���������� ����������" 3�� ���4*�� � ���� � ��� �� ������ �� ���!�� ��!�� ����!��� ���� �� �������� �"���������� �%�K���� �� ������� <�!%�� � �� ���� !��%�) ��� ��>%���" � ��� ����� ������ ��������� ���������! �� � �������%��� �"��� �����" 3 �� ����4 ��� ���������� � ��� �� � ����%�3 �� ���4 I� ��� ����� ����) ����� ��� �� ��!��A������ ������ �� ����������" ��� ��� �� ������ ��>%���"3 �� ���4

5�E:JEE�IH

-�� � �� ��� � ��� ��K�� ������� �������%���� � ������ ������������ ���� ����� ������� �����A� %�� ����� �� ����������� ��������� ��� ���������� �� ������������ �" ����� ������ ������� 3��) �8) �����4�)6 �������%��� ����"��! ��� �� ������ ������" ��!������� � ����� ��� =5= �����������) ��� ������������������� ��%���� ���� ������������ ���� ��� �������� �� ���������� ���� �������" ����� �������3:$54 ���1 ���� � ��� ��K%������ �� ����������� ��� ����" ���1 ������ ��� �������)6)��)����� �� � ������%���%�"�� �� �%�� ���� ��� �� ������ ��>%���" �����!��� �� ��� �"���������� ������� !��%� ���� �� ��� ���� �������������

*�� ��� �� ������ �� ��� ���" ���������� ���� ��� ����� ������ ����������� ��� ��� , ������ �%� ��� �������� ���������� ���� ��������������� ������� �� ����������� ��� ��������� ������ ��� ��������� ���1 � ����� ��������6)�� �� ���� ��%�") �� �������� � ��!��� ��>%���" � ��� ��� �� ������ �� ��� �"����������!��%� ���� �� ��� ������� !��%� 3?�� �� �86@4*�� !����"�� ��� ������ �������%���� � ��� ��� �������� �� ���� ������� ����� !��%�� 3�� ��?4 C� �%�� ���� ��� �"���������� !��%� ���� �� ��� � 8� ��>%���" ���� ��� ����� ��� ���� � ��� ������� !��%�3��� �� 8�@4

C� �������� ��!��A�����" ��!��� ����������� � �� ��������%��� �"��������" 3 �� ����4) ��� ���������� � ��� �� � ����%� 3 �� ���4 �� �"���������� �%�K������� ���� ��� ��� �� ������ �������� ���� ��� �������� � ��� ��� �� ������

*�� ����������" ���%��� � �� �������� ��� ���� ����� ������ ������ ���� ����� ��" �� � �������" �� �������� ���������� �� �� ���������� ���� ��!��� ����� ����� � ���!�� ��!�� ����!� �� �������� ���� ������ �������� �"���������� <%����� ���� ��� ��������"

*���� 8 :��������� � ��� �� ������ �������� �� �"���������� ���������� �%�K����

-�� �� H������������ $"�����������������

<��>%���" 3@4 � <��>%���" 3@4 �

��3� 4 ��� 7� 67� ?7��3�4 �6 8 �87 ��

��3� 4) ������� � ��� �� ������� ��3�4) �������� � ��� ��������3��� 8�8 �� ��?4

<�!%�� � � ���� � ��� �� ������ �� ���!�� ��!�� ����!� �� ���� �� �������� �"���������� �%�K���� �� 3� 4) ������� � �� ������� �� 3�4)�������� � �� ������� =G$) �� � �������%��� �"��������"� 5=-) �������� � �� � ����%�� $;) �"���������� ����������"� +�� ����) ++�� ���)+++�� ���

��� ����� ���� � � ��

:��"��!�� � ���� B��� C���" D E���) =�� ���� ������ ��� ����� ��� �������

�� �%����� ���� ����������� � �� ����������� ��������� ������ ���� ���� ������ ������������� � ����������"����������

-:LHIC=�5N�0�H*E

*��� ��%�" ��� �%������� �" � !���� ��� ��� J����� ���" � ������%� ;������� <�%������� 3���K��� �%�����* ??�7�7��4

;�<�;�H:�E

� 0����" ;C -������������� �� ����������� ���������������� ���� �2������! ���� �� ���� �����!" *������ ��66����� 7���78�

� $���� ;B) :��� ':) C������ ��) L����� =) N%� =EE ���������������A���" �� ��� ������� %���1� � �������������� � ��� ��������!������ � ������� �"���������������� -��� ,� � %���*�� �*% ��6�� � �8����8�8

8 E������ ,:) ���������" *=) 0����" ;C ;���� ������� ���������� ��� ������ ������������ ���������! ���" ��� � ���������� �"��!� � A���" �������� " ���� ��� ��6�� ��� �6����6�?

� R����� G�) B%�� 9C) ,������ B= $%��� �������������� ����������� �%�������� ��� !���������" ���������� % " 1�2��� ��6�� ��� �����

� R����� G�) ,������ B=) J������� N � ��0 9������� ����� ����%�� � ��� � �����������) ��� � !����"���) ��� ������"���" 3���� ��� ��6�� ��� �������

7 5�� $L) 0�9������ B) ,�%�� N-9) L����������� EL) ,������B= ���������) ����������(�����) ��� ������! �� ���������� ��� ��� �%��� �������������� !��� " ���� ��� ��6�� ����7����7��?

? I������ ,) *������! 9) N���� 5��� * B� *�� ���%� ���������������� � 3��� �4 �� ���1�� �� ��� ���������� ����� ���� :8 ���%� �� ���������� �� �� ��� 1� 2��� ��6�� ����88��87

6 5���!��� B) N��!! ;�) E��! :< -������������� � ���"����� ��� ��� ��������������� %� ������������� ��66� � ����

� ,������1�� �) G����1�� E) C���� 5) E�������( B) $����� E0)E��! :< *�� %�� � ����%��� !����"�� �� �������� ����� ����"��� � >%���������� ������"��� �� ��� �� *�� ����� ��� �������������� � ���"�������� �� ����������! ������)����������") ������������" � �����������) ���� �����������) ������!�"������� �� � ������ � %�������� �������%��� % " ���2��� ��6?� �� �7?��6�

�� ,������1�� �) J������� N E��%������%� � ���� � ��� ��� ����������� � ���"�������� �� �������������� �) ���������� ���� ,) ��� ����������� ���������� % " 1� 2��� ��66� ����������

�� G�� ,��12���� <0) 0������ :5 -������������� ������� �����("!����" �� "�%�! ��� ���� �������" ����� �������3���� ����� ���� 6?��66�

�� H������� 0E) 0������ LB) -���� E����� L =����������� �������� !������ ��������� �� �%�K���� ���� ��� �����%� ��!��!�� �������" ����A�� �������" �����" ������� %� ��������� ���������� ��� �6�7�

�8 C����� 9C<) 0"��� ;$) =����� 0N) I������ B0) C�� 9-)E���� �� �B -������������� � �������) �"����������) ��� ��� ����" ����� ������� "%�% ����� ��� �777��7?�

�� ������� B�) L%���� =$) I������ *B ;������� � ��������������� ������"�� �� �"�������� �� ������� ��� ��������" ����������" ����� ������� % " ������� ���8� ���7���7?

�� ����� *) '����( $) ,������ -) -1�!.�% � 0��� �� ���������"���������� ��� �������������� � !��� ���"�������� % "1���� ��� ���?� ��� 6�?�6�6

�7 :������� 0) -������ -) :��(���!� N) E���!�� ;) =������� -E��%� ������ ��� ��������������� �� �������� ���� ����������"���������� % ������������� ��6�� � �?���

�? 5�����%2 ;,) ;������� H ����������!������ ������������� � �� � �������%��� ���� �� ���� �������� ���������� � ��� ������������� ��� ��??� � 7�8�7�6

�6 0����� E-) 5"1�� 55) 9����1" $E E����� ������! �%� ����� �%�� �� �2�������! 5H- ��� �%��� �%������� ����� ,������%��� ��� ��66� ��384� ����

�� L���%�� L) -���� E���&��& L) L%%�� *) $��������� =) E"�����- : -������������� � ���"�������� ���������� �" �������������("�� ����"��� � 5H- �����A�� �" ���"������ ����� ���� ���� � ���������� ����������� �� ������"���! ����������� ��%� ��! ���� ��� ����� ��� ��6?�����

�� � �� ����� �� ������� � � � �� �� ���� � ���������� ���

:��"��!�� � ���� B��� C���" D E���) =�� ���� ������ ��� ����� ��� �������