6|Jurnal Sangkareang Mataram ISSNNo.2355-929

Volume 4, No. 3, September 2018 http://www.untb.ac.id/September-2018/

ISOLATION AND IDENTIFICATION OF BARTONELLA SPP. FROM BAT BLOOD ATTANJUNG RINGGIT CAVE ON EAST LOMBOK

By :

Andreyani Attamimi, Rima Nurmayani, Erni, Kunti Kartikasari, KholikFaculty of Veterinary Medicine Universitas Nusa Tenggara Barat,

Abstrac : Many research explained that bats are an important reservoir for Bartonella spp. On LombokIsland has many caves for breeding house of bats. The purpose of this research is to isolate and identifyBartonella spp. at Tanjung Ringgit Cave on East Lombok. An Observational survey with explorativelaboratory was carried out on Tanjung Ringgit bat cave during May 2018. The bats were captured by nettrap and blood samples were collected by puncturing the axillaries vein of bats for blood smears andexamination of the presence of intraerythrocytic corpuscles. Each of blood samples was dipped in sterileBHI and they were incubated over the night. After 24 hours the samples were inoculated in Blood Agarunder aerobic conditions at Laboratory of Public Health and calibration, Province of Nusa Tenggara Barat.The colonies were purified and characterized by biochemical methods. The result of blood smears byshowed that 3 (30%) of 10 bat blood samples were found intraerythrocytic corpuscles. The morphologicalcolonies of bacteria of the three bat blood that found intraerythrocytic corpuscles on Blood Agar areHeterogenic colonies, small regular to irregular larger forms and No hemolysis on blood agar. The resultof the biochemical test showed that bacteria was non fermentative, urease, and indole negative. It also didnot utilize citrate and Triple Sugar Iron (TSI) showed alkaline. Bartonella-like was isolated from bat bloodat Tanjung Ringgit Cave on East Lombok besides on blood smears examination, The morphologicalcolonies on Blood Agar and biochemical test of isolated bacteria of this research.

Keywords : Bartonella spp, Bat blood, Lombok

PENDAHULUAN

Bartonellosis merupakan penyakit zoonosisdan menjadi perhatian dunia karena dapat berakibatfatal pada kesehatan hewan dan manusia.Bartonellosis yang disebabkan oleh Bartonella spp.telah dinyatakan sebagai potensial zoonoticpatogen yang dapat menyebabkan bakterimia,namun tanpa menyebabkan sakit pada inangreservoir (Bemis dan Kania, 2007). Kelelawar telahdinyatakan menjadi reservoir alami dari beberapabakteri termasuk Bartonella spp. telah ditemukanpada kelelawar yang hidup liar pada beberapanegara di dunia (Reeves et al., 2005). Bartonellosisadalah penyakit yang disebabkan oleh bakteriBartonella spp merupakan bakteri gram negative,pleomorfik, dan bersifat intraselluler yang dapatmenginfeksi manusia dan hewan liar. Bartonellaspp. bisa menyebabkan demam Orroya, demamTrench, dan Cat Scratch disease (Pasavento et al.,2005).

Bartonella spp. merupakan bakteri yang dapatmenginfeksi darah manusia dan kelelawar sertahewan lain seperti anjing dan kucing. Karateristikbartonella pada darah mamalia termasuk kelelawaradalah dengan adanya intraerythrocytic bacteremia(Regier et al., 2016). Kelelawar jenis Eonycterisspeleae yang terdapat di Gua Kabupaten TanjungRinggit Lombok Timur diduga telah terinfeksiBartonella spp. dengan korpuskel bodyintraeritrosit dan terdapatnya ektoparasit penghisap

darah sebagai vektor bakteri tersebut (Kholik et al.,2017).

Gua kelelawar yang terletak di TanjungRinggit Kecamatan Jerowaru Kabupaten LombokTimur. Gua tersebut berdekatan dengan lokasiPantai Pink yang merupakan salah satu tujuanwisata turis domestik maupun manca negara. Guadi Tanjung ringgit tersebut berlokasi pada titikkoordinat -8.614710 S, 116.5944200E danmerupakan gua kelelawar yang dihuni olehkelelawar jenis Eonycteris speleae tersebut (Kholiket al., 2017).

Kelelawar mempunyai kebiasaan mencarimakan dan terbang dengan jarak yang cukup jauhsehingga dapat membahayakan kesehatan hewan,manusia dan lingkungan di sekitar Gua di TanjungRinggit maka dari itu diperlukan isolasi danidentifikasi dari bakteri Bartonella spp. Pada darahkelelawar jenis Eonycteris speleae di Gua TanjungRinggit untuk memastikan keberadaan penyakitBartonellosis.

MATERI DAN METODE

Jenis penelitian ini adalah epidemiologideskriptif dengan rancangan survei observasional.Pada penelitian ini Populasi kelelawar di GuaTanjung Ringgit tidak diketahui, sehingga

ISSNNo.2355-9292 JurnalSangkareangMataram|7

http://www.untb.ac.id/September-2018/ Volume 4, No. 3, September 2018

pengambilan sampel menggunakan nonprobabilitas dengan metode Purposive samplingyang dilakukan pada bulan Mei tahun 2018.

Gua Kelelawar yang menjadi lokasipengambilan sampel terletak di desa TanjungRinggit, Kabupaten Lombok Timur Provinsi NusaTenggra Barat. Adapun letak Gua tersebut padatitik koordinat -8.614710 S dan 116.5944200 E.

Besar sampel dalam penelitian ini ditentukanberdasarkan jumlah kelelawar per roaster.Berdasarkan obsevasi terlihat 25 ekor per roaster,maka jumlah estimasi populasi adalah sebagaiberikut: 25/ß = 25/0,25 = 100, maka Jumlah sampeladalah 10% x 100 = 10 ekor. ß adalah fraksipopulasi (FAO, 2011).

Penangkapan kelelawar dilakukan denganmenggunakan jaring (Net trap) pada pukul 16.00WITA s/d pukul 19:00 WITA. Kelelawar yangtertangkap akan dimasukkan terlebih dahulukedalam kandang. Kelelawar yang terkumpul akandiidentifikasi jenis dan kelaminnya terlebih dahulu,kemudian dilakukan pengambilan darah pada venaaksilaris. Darah yang keluar dari vena tersebuatakan dimasukkan kedalam tabung EDTA dan BHIbroth untuk dibawa ke laboratorium.Sampel darahdari lapangan dibuat preparat ulas darah dandilakukan penanaman bakteri. KarateristikBartonella pada darah mamalia termasuk kelelawaradalah dengan adanya intraerythrocytic bacteremia(Regier et al., 2016). Ulas darah dengan pewarnaanGiemsa dilakukan untuk mengetahui intraeritrositkorpuskel yang merupakan salah satu ciri adanyaBartonella spp. pada eritrosit.

Penanaman bakteri dengan tujuan untukisolasi Bartonella spp. dilakukan denganmemasukkan darah dari lapangan ke dalam BHIbroth, kemudian diinkubasi pada suhu 350C selama18-24 Jam. Pertumbuhan bakteri akan terihatadanya hemolisis, terbentuk gas atau gelembungpada media BHI dan butiran putih pada lapisandarah. Koloni yang tumbuh akan diinokulasikanpada media agar darah dan Mac Conkey Agar(MCA), kemudian diinkubasi pada suhu 350Cselama 18-24 (KemenKes, 2014).

Koloni yang tumbuh pada media tersebutdiatas akan dilanjutkan dengan pewarnaan gram.Hasil dari koloni yang telah tumbuh pada mediadalam cawan petri dipindahkan dalam objec glassidentifikasi yang meliputi pengamatan mikroskopisdan uji biokimia mengacu pada pedomanidentifikasi bakteri (Bergey’s ManualDeterminative Bacteriology tahun 1948) (Holt etal., 1994).

HASIL DAN DISKUSI

Hasil pengamatan preparat ulas darahkelelawar menunjukan adanya intraeritrositkarpuskel, dari 10 sampel didapatkan 3(30%)

sampel yang yang positif. Intraeritrosit karpuskeldapat dilihat pada Gambar 1 berikut ini :

Keterangan: Intraeritrosit karpuskelditunjuk oleh panah

Dilakukan penanaman sampel positif yangmenunjukan adanya intraeritrosit karpuskel padamedia Blood Agar Plate. Karakteristik danmorfologi bakteri yang tumbuh pada media dapatdilihat pada gambar 2 dan tabel 1 berikut ini:

Gambar 2. Morfologi Koloni pada Media BloodAgar Plate

Table 1. Karakteristik dan Morfologi Koloni padaMedia Blood Agar Plate

MediaJenisGram

Morfologi Koloni

BAP(BloodAgarPlate)

Negatif(-)

Koloni yang tumbuhpada media agarberukuran kecil,berbentuk bulat, denganpermukaan sedikitcembung, tepian halusdan berwarna putihseperti susu.

Gambar 2 menunjukan pada Blood Agar Platebakteri yang tumbuh berwarna putih seperti susu,berukuran kecil, berbentuk bulat, denganpermukaan sedikit cembung dan tepian halus. Padapewarnaan gram menunjukan isolate bekteritermasuk dalam golongan bakteri gram negativeberbentuk plemorfic basil.

Morfologi Bartonella spp. sampai saat inipada media agar bervariasi tergantung jenisBartonella. Urushadze et al. (2017) menyatakanbahwa koloni Bartonella-like tampak kecil,

8|Jurnal Sangkareang Mataram ISSNNo.2355-929

Volume 4, No. 3, September 2018 http://www.untb.ac.id/September-2018/

sirkuler, dan raised dengan morfologi halus ataukasar. Berdasarkan hal tersebut koloni bakteri yangtumbuh pada Media Blood Agar Plate menunjukankemiripan.

Hasil Uji biokimia dari isolat koloni bakteriyang tumbuh pada media Blood Agar Plate dapatdilihat pada Tabel 2 :

Tabel 2. Hasil Uji biokimia Koloni Bakteri yangTumbuh pada Media Blood Agar Plate

Uji Biokimia HasilGlucose fermentationLactose fermentationSucrose fermentationSorbitol fermentationIndol productionMalonatUrea utiliySimon Citrate AgarSulfide Indole MotiltyTriple Sugar Iron Agar

--------+Alkalin (Gas +)

Hasil Uji Biokimia Koloni Bakteri yangtumbuh pada Media Blood Agar Plate menunjukanbahwa bakteri tidak memfermentasi karbohidrat(glukosa, laktosa, maltose dan sukrosa), Ureasenegatife, indol negatife, TSIA menunjukan alkalin-alkalin hal tersebut sesuai dengan penelitian Diddi,Kavita et al. (2013) yang menyatakan bahwa B.henselae. bakteri tidak memfermentasi karbohidrat.Oxidase, urease, indol negative. Hanya sajaterdapat perbedaan pada TSIA yang menyatakanbahwa tidak ada perubahan, sedangkan di hasilpenelitian menunjukan adanya gas. Hal tersebutmenunjukan bahwa bakteri hasil isolate dari darahkelelawar dapat menggunakan besi untukmenimbulkan H2S.

Berdasarkan hasil pengamatan intraeritrositkarpuskel, morfologi koloni bakteri di Blood AgarPlate dan uji biokima dapat diduga hasil isolatedari darah kelelawar adalah Bartonella-like.

SIMPULAN

Penelitian ini telah mengisolasi danmengidentifikasi 3(30%) sampel dari 10 sampelyang diduga positif terdapat bakteri Bartonella spp.pada darah kelelawar jenis Eonycteris speleae yanghidup di Gua Tanjung Ringgi Kabupatern LombokTimur Provinsi Nusa Tenggara Barat.

Hasil pengamatan preparat ulas darahmenyatakan adanya intareritrosit karpuskel pada3(30%) sampel. Morfologi koloni bakteri di BloodAgar Plate dan uji biokima dapat diduga hasilisolate dari darah kelelawar adalah Bartonella-like.

SARAN

Perlu dilakukan penelitian analisis genomisdengan menggunakan PCR (Polymerase ChainReaction) untuk memastikan keberadaanBartonella spp. serta perlu dilakukan penanamanpada media coklat agar dan BHI Plate (Brain HeartInfusion Plate) dengan suasana anaerob untukmemastikan karakteristik dan morfologi dariBartonella spp.

UCAPAN TERIMA KASIH

Peneliti mengucapakan terima kasihkepada Kementrian Riset Teknologi danPendidikan Tinggi (KEMENRISTEK DIKTI)Republik Indonesia yang telah membiayaipenelitian ini. Peneliti juga mengucapkan terimakasih kepada Badan Kesatuan Bangsa dan Politik(BAKESBANGPOL) Provinsi Nusa TenggaraBarat atas izin penelitian yang diberikan, sertatidak lupa pula Balai Laboratorium Kesehatan danKalibrasi (BLK PK) yang telah membantu dalamisolasi dan mengidentifikasi Bartonella spp. yangberasal dari darah kelelawar di Gua TanjungRinggit, Kabupaten Lombok Timur Provinsi NusaTenggara Barat.

DAFTAR PUSTAKA

Holt, J.G. Krieg, N.R.,Sneath,P., Staley, J.T., andWilliams, S.T. 1994. FamilyEnterobacteriaceae; in Bergey's manual ofdeterminative bacteriology (9th edition.),edited by W.R. Hensyl (Lippincott Williams& Wilkins, Baltimore, Maryland ), pp. 175-194.

Reeves, W. K., Loftis, A. D., Gore, J. A., &Dasch,G. A. 2005. Molecular evidence for novelBartonella species in Trichobius major(Diptera: Streblidae) and Cimexadjunctus(Hemiptera: Cimicidae) from twosoutheastern bat caves, U.S.A. J. Vector.Ecol. 30:339-341.

Bemis, D.A., and Kania, S.A. 2007. Isolation ofBartonella sp. from Sheep Blood. EmergingInfectious Diseases 13 (10): 1565-1567

(FAO) Food and Agriculture Organisation of theUnited Nations.(2011) Investigating the roleof bats in emerging zoonoses: Balancingecology, conservation and public healthinterests. Editedby S.H. Newman, H.E.Field, C.E. de Jong and J.H. Epstein. FAOAnimal Production and HealthManual No.12. Rome.

ISSNNo.2355-9292 JurnalSangkareangMataram|9

http://www.untb.ac.id/September-2018/ Volume 4, No. 3, September 2018

Diddi, K ., Chaudhry, R., Sharma, N., Dhawan, B.,2013. Strategy for Identification andCharacterization of Bartonella henselae withConventional and Molecular Methods, pp380-387

KemenKes RI. 2014. Prosedur PemeriksaanBakteriologi Klinik. Sub dit Bina PelayananMikrobiologi dan Imunologi, pp: 34-37.

Regier, Y., O’Rourke, F and Kempf, V.A.J. 2016.Bartonella spp. - a chance to establish OneHealth concepts in veterinary and humanmedicine. Parasites & Vectors 9:261.

Kholik., Permatasari, F.B., Legowo, D.,Rohmawati, R., Rachmawati, Wicaksono,A.B., Saputra, M.I.R. 2017. Bat flies fromcave-dwelling bats and their potential role ofBartonella spp. transmission on LombokIsland, Indonesia (Abstract). The 26thInternational Conference of the WorldAssociation for the Advancement ofVeterinary Parasitology (WAAVP), KualaLumpur, Malaysia.

Urushadze, L., Bai, Y., Osikowicz, L., McKee, C,Sidamonidze, K., Putkaradze, D., Imnadze,P., Kandaurov, A., Kuzmin, I., Kosoy, I.2017. Prevalence, diversity, and hostassociations of Bartonella strains in batsfrom Georgia (Caucasus). PLOS Negl TropDis 11(4): e0005428 .https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0005428.