Kelompok 1 (78-82)_Ciri-Ciri Fisiologis

8/19/2019 Kelompok 1 (78-82)_Ciri-Ciri Fisiologis

1/20

LAPORAN AKHIR PRAKTIKUM FARMAKOTERAPI PENYAKIT

INFEKSI

CIRI-CIRI FISIOLOGIS

Kelompok 1

260110140078 Ayu Aprilini Pembahasan

260110140079 Putri Raraswati Pembahasan

260110140080 Ummi Habibah Teori Dasar

260110140081 Ayyu Widyazmara Data Pengamatan, Prosedur

260110140082 Anggia D. Amaliah Tujuan, Prinsip, Simpulan,

Revisi,dan Kirim.

HARI/TANGGAL PRAKTIKUM : RABU, 30 SEPTEMBER 2015

ASISTEN :1. BETHARY K.

2. HIMMATUL ULYA

LABORATORIUM FARMAKOTERAPI PENYAKIT INFEKSI

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS PADJADJARAN

JATINANGOR

2015


2/20

CIRI-CIRI FISIOLOGIS BAKTERI

I. Tujuan

Mengamati secara langsung atau tidak langsung produk kegiatan enzimatik.

II. Prinsip

1. Uji Biokimia

Uji biokimia merupakan salah uji yang digunakan untuk menentukan

spesies kuman yang tidak diketahui sebelumnya. Setiap kuman memiliki

sifat biokimia yang berbeda sehingga tahapan uji biokimia ini sangat

membantu proses identifikasi. Setelah sampel diinokulasikan pada media

differensial atau selektif, kemudian koloni kuman diinokulasikan pada

media uji biokimia. Ada 12 jenis uji yang sering digunakan dalam uji

biokimia walaupun sebenarnya masih banyak lagi media yang dapat

digunakan (Adam, 2001).

2.

Sifat Fisiologis Bakteri

Bakteri merupakan organisme bersel tunggal dan mampu bereproduksi

sendiri. Bakteri tidak memiliki inti sel. Bakteri terdiri dari sitoplasma yang

dikelilingi oleh sebuah dinding sel yang kaku terbuat dari peptidoglikan,

didalam sitoplasma terdapat materi genetik (Waluyo, 2007).

3.

Inkubasi

Inkubasi yaitu perlakuan terhadap bakteri yang dilakukan pada suhu

optimum untuk pertumbuhan bakteri (350C –

370C)dan kelembapan udara

yang mengandung CO2 sekitar 3 – 5% (Pelczar, 1986).

4. Teknik Aseptis

Teknik aseptis adalah suatu metode dalam memindahkan atau mentransfer

kultur bakteri dari satu tempat ke tempat lain agar tidak terjadi

kontaminasi oleh mikroba lain dalam medium kultur (Curtis, 1999).


3/20

5. Uji gula-gula

Uji ini digunakan untuk mengetahui apakah kuman memfermentasi

masing-masing gula diatas membentuk asam. Media gula-gula ini terpisah

dalam 5 tabung yang berbeda dan media yang digunakan adalah masing-

masing gula dengan konsentrasi 1% dalam pepton. Masing-masing gula

gula ditambahkan indikator phenol red (Adam,2001).

6. Uji TSIA

Tujuan dari tes ini adalah untuk mengetahui kemampuan kuman untuk

memfermentasikan karbohidrat. Pada media TSIA berisi 3 macam

karbohidrat yaitu glukosa, laktosa dan sukrosa. Indikatornya adalah phenol

red yang menyebabkan perubahan warna dari merah orange menjadi

kuning dalam suasana asam. Glukosa berada di dasar media sedangkan

laktosa dan sukrosa berada di bagian lereng (Buchanan, 2003).

III. Teori Dasar

Pada praktikum kali ini akan dibahas mengenai ciri-ciri Fisiologis

Bakteri. Tujuan dari praktikum ini yaitu mengamati secara langsung atau

tidak langsung produk. kegiatan enzimatik bakteri. Prinsip yang gunakan

adalah Uji Biokimia, sifat Fisiologis Bakteri, Inkubasi ,Teknik Aseptis, Uji

gula-gula, Uji TSIA.

Uji fisiologis biasanya identik dengan uji biokimia. Uji-uji

biokimia yang biasanya dipakai dalam kegiatan identifikasi bakteri atau

mikroorganisme yaitu antara lan uji koagulase, uji katalase, uji nitrit,

hidrolisis gelatin, uji hidrogen sulfida (H2S) dan lain-lain. Pengujian

biokimia merupakan salah satu hal yang sangat penting di dalam dunia

mikrobiologi (Lim, 1998)

a. Uji katalase.

Diletakkan 2 tetes H2O2 pada kaca objek yang bersih. Isolat bakteri

diambil menggunakan jarum ose, kemudian dipindahkan ke atas kaca

objek dan dicampurkan. Uji positif ditandai dengan terbentuknya


4/20

gelembung-gelembung oksigen yang menunjukkan bahwa organisme

yang bersangkutan menghasilkan enzim katalase yang mengubah

hidrogen peroksida menjadi air dan oksigen (Hadioetomo, 1993). Fungsi

uji katalase pada bakteri berbentuk kokus adalah untuk membedakan

antara stsphylococcus dan streptococcus, dimana kelompok

staphylococcus bersifat katalase positif. Katalase merupakan enzim

yang mengkatalisa penguraian hidrogen peroksida menjadi H O dan O .

2 2Hidrogen peroksida bersifat toksik terhadap sel karena bahan ini

menginaktifkan enzim dalam sel. Hidrogen peroksida terbentuk

sewaktu metabolisme aerob, sehingga mikroorganisme yang tumbuh

dalam lingkungan aerob pasti menguraikan bahan tersebut . Menurut

Schliefer semua galur staphylococcus adalah katalase positif (Dewi,

2013).

b.

Uji motilitas

Isolat bakteri ditusukkan ke dalam media SIM semi padat pada

tabung reaksi menggunakan jarum ose tusuk steril. Kemudiandiinkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC. Uji positif ditandai dengan

pertumbuhan bakteri yang menyebar, maka bakteri tersebut bergerak

(motil) dan bila pertumbuhan bakteri tidak menyebar hanya berupa satu

garis, maka bakteri tersebut tidak bergerak (non motil) (Sudarsono,

2008).

Uji positif ini dapat dilihat dengan adanya pertumbuhan koloni bakteri

yang menyebar. isolat yang positif motil ditunjukkan dengan penyebaran

isolat ke seluruh media (Tantu, Tumbol & Longdong. 2013).

c. Uji Indol

Diambil satu koloni terpisah dengan menggunakan jarum ose, kemudian

diinokulasi ke dalam media SIM dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu

37ºC. Setelah inkubasi ditambahkan 10-12 tetes reagen Kovac. Uji


5/20

positif ditandai dengan terbentuknya lapisan berwarna merah di

bagian atas biakan (Hadioetomo, 1993).

Indol merupakan senyawa yang mengandung nitrogen yang terbentuk

sebagai hasil pemecahan amino tryphosphat. Pentingnya uji indol ini

adalah karena hanya beberapa jenis bakteri saja yang dapat

membentuk indol dan produk ini dapat diuji sehingga dapat digunakan

sebagai identifikasi (Yulvizar, 2013).

d.

Uji MR

Diambil satu koloni terpisah dengan menggunakan jarum ose, kemudian

diinokulasi ke dalam media MR-VP dan diinkubasi selama 24 jam pada

suhu 37ºC. Pada uji MR, ditambahkan3-4 tetes indikator merah metil.

Uji positif ditandai dengan perubahan warna medium menjadi merah,

artinya terbentuk asam (Hadioetomo, 1993).

uji merah : metil (methyl red test) bertujuan untuk mengetahui

kemampuan bakteri untuk mengoksidasi glukosa dengan memproduksi

asam dengan konsentrasi tinggi sebagai hasil akhirnya. Jika media

MR-VP akan menjadi merah setelah ditambahkan merah metil

menunjukkan bahwa hasil uji positif, sedangkan jika media tetap berwarna

kuning menunjukkan hasil uji negatif (Yulvizar, 2013).

e. Uji Simmons Citrate.

Diambil satu koloni terpisah dengan menggunakan jarum ose dan

diinokulasikan pada media Simmons Citratelalu diinkubasi pada

temperatur 37ºC selama 24 jam. diamati adanya perubahan warna

pada medium biakan (Hadioetomo, 1993). Uji positif ditandai dengan

berubahnya warna medium menjadi biru (Sudarsono, 2008).

f. Uji TSIA.


6/20

Diambil sebagian kecil koloni bakteri dengan menggunakan ose dan

diinokulasikan pada media TSIA, kemudian dilakukan dengan cara

menusuk tegak lurus pada bagian butt (tusuk) dan cara zig zag pada

bagian slant (miring). Diinkubasi pada temperatur 37ºC selama 24 jam.

Diamati perubahan warna medium yang terjadi. Apabila bagian slant

berwarna merah dan butt berwarna kuning maka bakteri mampu

memfermentasi glukosa, sedangkan apabila bagian slant dan butt

keduanya berwarna kuning maka bakteri mampu memfermentasi

sukrosa dan laktosa (Yusuf, 2009).

Uji TSIA ini bertujuan untuk mengetahui kemampuan dari suatu

bakteri dalam memfermentasi gula untuk menghasilkan asam atau gas.

Warna merah pada agar menunjukkan reaksi basa, sedangkan warna

kuning menunjukkan reaksi asam. Warna merah pada permukaan agar

dan kuning di bagian bawah agar menunjukkan bahwa terjadinya

fermentasi glukosa. Warna kuning pada bagian permukaan dan bawah

tabung menunjukkan terjadinya fermentasi laktosa dan sukrosa (Yulvizar,2013).

IV. Alat dan Bahan

Peralatan dan bahan yang digunakan dalam praktikum kali ini yaitu suspensi

bakteri x, Biakan bakteri x dalam trypticase soy broth (TSB), Biakan

bakteri x dalam agar miring trypticase soy agar (TSA), tabung Durham

berisi kaldu glucose dengan indikator merah fenol, indol reagen Kovac,

kertas plumbum asetat, tabung, kaldu urea, tabung medium MR-VP (Methyl

Red-Voges Proskauer), tabung agar miring sitrat Siminons, reagen Barritt.

V. Prosedur

Untuk melakukan praktikum uji fisioligi kali ini, prosedur yang

dilakukan adalah memijar kawat ose lalu mengoleskan suspensi bakteri

kepada 12 media yang telah disiapkanya itu motil, glukosa, laktosa, manosa,


7/20

maltose, sakarosa, indol, H2S, urea, MR, VP dan Simon sitrat. Lalu setelah

suspensi bakteri dioleskan pada media, maka media tersebut diinkubasi

dalam inkubator dengan suhu 370Cdan dibiarkan selama 18 – 24

jam.Diamati perubahan warna yang terjadi dan di bandingkan dengan

persyaratan.

VI. Data Pengamatan

No Perlakuan Hasil

1 Dilakukan pemijaran ose untuk

mensterilisasi

Ose telah steril dari kontaminasi

mikroba

2 Pengolesan suspense bakteri ke

media motil

Sebelum di inkubasi :


8/20

Setelah diinkubasi selama 22 jam:


media glukosa




media laktosa



9/20



media manosa




media maltosa



10/20



media sakarosa


Setelah diinkubasi selama 22 jam


media indol



11/20



media H2S




media urea



12/20



media MR




media VP



13/20



media Simon sitrat



VII.

Pembahasan

Pada praktikum uji fisiologi baketri ini bertjuan untuk mengamati

secara langsung atau tidak langsung produk kegiatan enzimatik bakteri..

Dalam praktikum ini dilakukan identifikasi dengan uji biokimia dengan uji

motil,uji gula-gula (glukosa, laktosa, maltosa, mannose dan sukrosa), uji

indol, uji H2S, uji hidrolisis urea, uji MR, uji VP, dan uji simon sitrat.


14/20

Ciri fisiologi ataupun biokimia merupakan kriteria yang amat

penting di dalam identifikasi spesimen bakteri yang tak dikenal karena

secara morfologis biakan atau pun sel bakteri yang berbeda dapat tampak

serupa, tanpa hasil pengamatan fisiologis yang memadai mengenai organik

yang diperiksa maka penentuan spesiesnya tidak mungkin dilakukan.

Karakteristik dan klasifikasi sebagian mikroba seperti bakteri berdasarkan

pada reaksi enzimatik ataupun biokimia. Mikroba dapat tumbuh pada

beberapa tipe media memproduksi tipe metabolit tentunya yang dideteksi

dengan interaksi mikroba dengan reagen test yang mana menghasilkan

perubahan warna reagen (Murray, 2003)

Sebelum melakukan semua uji terlebih dahulu lakukan fiksasi

.Fiksasi adalah proses pengawetan dan pelekatan atau penempelan struktur

sel mikroorganisme pada suatu posisi. Selain itu fiksasi juga berfungsi

untuk menonaktifkan enzim lytic sehingga bakteri tidak mengalami lisis

dan berubah bentuk pada saat diamati. Fiksasi yang digunakan pada

percobaan kali ini adalah fiksasi panas, yaitu dengan cara melewatkan Osedan tabung yang berisi suspensi bakteri di atas api. Fiksasi dilakukan

sampai kawat ose bewarna merah terasa hangat apabila ditempelkan pada

punggung tangan. Fiksasi yang dilakukan tidak boleh terlalu panas dan

lama, karena bakteri yang ada pada preparat bisa hangus terpanggang dan

terjadi perubahan bentuk dan penyusutan sel.

Ose berfungsi untuk memindahkan atau mengambil koloni suatu

mikrobia ke media yang akan digunakani. Ose terdiri dari ose lurus untuk

menanam dan ose bulat untuk menggores yang biasanya berbentuk zig-

zag.Jarum inokulum biasanya terbuat dari kawat nichrome atau platinum

sehingga dapat berpijar jika terkena panas. Bentuk ujung jarum dapat

berbentuk lingkaran (loop) dan disebut ose atau inoculating loop/transfer

loop, dan yang berbentuk lurus disebut inoculating needle/Transfer needle.

Inoculating loop cocok untuk melakukan streak di permukaan agar,


15/20

sedangkan inoculating needle cocok digunakan untuk inokulasi secara

tusukan pada agar tegak .

Uji pertama yang dilakukan adalah uji motil ,mengambil suspense

bakteri dengan ose lurus kemudian menginokulasi ke dalam media cair

pertumbuhan dalam tabung reaksi.

Dari hasil pengamatan uji motil emnunjukkan hasil negatif yang

ditandai dengan tidak berubahnya cairan menjadi keruh yang artinya tidak

terjadi pergerakan pada bakteri. Motilitas merupakan salah satu ciri

penting pengkarakterisasian bakteri. Sifat ini diakibatkan oleh adanya alat

moler cambuk yang disebut flagella sehingga sel bakteri dapat berenang

didalam lingkungan air.

Uji selanjutnya yaitu uji gula-gula, mengambil suspense bakteri

dengan menggunakan ose bulat yang sebelumnya telah difiksasi kemudian

dimasukkan dalam tabung reaksi yang didalamnya terdapat tabung

Durham . Tabung Durham merupakan alat yang digunakan di duniamikrobiologi untuk mendeteksi produksi gas yang dihasilkan dari

mikroorganisme.Alat ini berukuran sangat kecil, ditempatkan pada tabung

reaksi yang telah berisi cairan pertumbuhan mikroorganisme dan zat

indikator yang dapat menandai terjadinya perubahan warna karena adanya

perubahan derajat keasaman dan gas yang dihasilkan.Produksi gas

dicirikan dengan terdapatnya gas di ujung tabung durham setelah

mikroorganisme diinokulasi dan diinkubasi.Uji gula disini yaitu

diantaranya ujiglukosa, laktosa, maltosa, mannose dan sukrosa .Hasil

positif bila terjadinya perubahan warna larutan uji dari semula berwarna

merah menjadi larutan berwarna kuning, dan untuk hasil negative tidak

akan ada perubahan warna pada larutan, artinya bakteri uji tersebut tidak

melakukan fermentasi pada sakarosa. Pada hasil percobaan menunjukan

adanya perubahan warna menjadi larutan berwarna kuning, sehingga

sampel bakteri yang diuji adalah jenis bakteri yang dapat melakukan


16/20

fermentasi membentuk asam dan gas, gas terlihat jelas pada tabung

durham yang terapung keatas.

Pengujian yang selanjutnya adalah uji indol. Dalam uji indol ini

media yang dipakai adalah pepton 1%. Uji indol digunakan untuk

mengetahui apakah sampel bakteri memiliki enzim triptophanase sehingga

bakteri tersebut dapat mengoksidasi asam amino tryptophan membentuk

indol. Tryptophan merupakan asam amino esensial yang dapat mengalami

oksidasi dengan cara kegiatan enzimatik oleh beberapa bakteri. Hasil

positif akan menunjukan terbentuknya lapisan cincin berwarna merah pada

permukaan biakan dan sebaliknya pada hasil negative tidak terbentuk

lapisan cincin berwarna merah pada permukaan biakan. Pada hasil

percobaan menunjukan bahwa uji indol yang dilakukan adalah negative

karena tidak terbentuk lapisan cincin berwarna merah pada permukaan

biakan ini dapat diartikan bahwa sampel bakteri tidak membentuk indol

dari tryptophan sebagai sumber karbon.

Pengujian yang berikutnya yaitu uji hydrogen sulfide. Pada uji

hydrogen sulfide dikatakan positif bila terjadi perubahan warna menjadi

hitam kecoklatan, dan untuk hasil negative bila tidak terjadi perubahan

warna menjadi hitam kecoklatan. Hasil percobaan menunjukan hasil yang

positif karena terjadi perubahan warna menjadi hitam kecoklatan, artinya

terjadi ikatan antara media H2S dengan plumbum asetat menghasilkan

plumbum sulfide yang berwana hitam kecoklatan.

Pengujian yang selanjutnya adalah uji hidrolisis urea. Tujuan dari uji

ini adalah untuk mengetahui apakah sampel bakteri yang diuji mempunyai

enzim urease yang dapat menguraikan urea membentuk amoniak.

Interpretasi hasil negative apabila tidak terjadi perubahan warna media

menjadi pink atau merah jambu sedangkan interpretasi hasil positif adalah

terjadinya perubahan warna media menjadi pink atau merah jambu. Hasil

yang diperoleh pada saat percobaan adalah negative karena tidak terjadi


17/20

perubahan warna media menjadi pink atau merah jambu, artinya sampel

bakteri yang diuji tidak memecah urea membentuk amoniak.

Pengujian yang berikutnya adalah uji MR. Uji MR adalah pengujian

yang bertujuan untuk mengetahui adanya fermentasi asam campuran

metilenglikol. Hasil positif menunjukan bila pada media terjadi perubahan

warna menjadi merah setelah ditambahkan metilen red 1%, sebaliknya bila

pada media tidak terjadi perubahan warna menjadi warna merah berarti uji

MR ini negative. Hasil yang diperoleh dari percobaan adalah

negative,karena tidak terjadinya perubahan warna menjadi merah, artinya

sampel bakteri yang uji tidak menghasilkan campuran asam metilenglikol.

Pengujian yang selanjutnya adalah uji VP. Tujuan dari uji ini adalah

untuk mengetahui pembentukan asetil metal karbinol (asetoin) dari hasil

fermentasi glukosa. Bila terjadi perubahan warna menjadi warna merah

artinya pengujian berjalan positif, dan sebaliknya bila tidak terjadi

perubahan warna menjadi merah berarti pengujian berjalan negative. Hasil

yang diperoleh dari percobaan adalah negative karena tidak adanya

perubahan warna menjadi merah, artinya sampel bakteri uji tidak

membentuk asetil metal karboinol (asetoin).

Pengujian yang terakhir adalah pengujian menggunakann simon

sitrat. Tujuan dari pengujian ini adalah untuk mengetahui apakah sampel

bakteri uji menggunakan sitrat sebagi sumber karbon. Didalam media

simon sitrat berisi indicator BTB (Brom Tymol Blue), apabila bakteri

menggunakan sitrat sebagai sumber karbon maka media berubah menjadi

basa dan berubah menjadi biru. Hasil percobaan menunjukan hasil positif

karena terjadinya perubahan pada media menjadi warna biru.

Dari semua hasil pengujian fisiologis diatas dapat disimpulkan

bahwa sampel bakteri uji yang digunakan adalah Eschericia freundii.


18/20

VIII. Simpulan

Berdasakan data dan hasil pengamatan dapat disimpulkan identifikasi

bakteri dengan uji biokimia menggunakan uji motil,uji gula-gula (glukosa,

laktosa, maltosa, mannose dan sukrosa), uji indol, uji H2S, uji hidrolisis

urea, uji MR, uji VP, dan uji simon sitrat, menunjukkan hasil yang positif.

Kemudian dapat dilakukan perkiraan bakteri yang digunakan adalah

Eischerichia freundii.


19/20

DAFTAR PUSTAKA

Adam,MR. 2001. Microbiology of Fermented Food .Elsivier Applied Science

Publisher,Ltd. New York.

Buchanan,RE. & Gibbons,NE.2003. Bergey’s Manual of Determinative

Bacteriology. The William & Wilkins Company Baltimore.USA.

Curtis, Helena. 1999. Biology 5 th edition. New York : Worth Publisher Inc.

Dewi, Amalia Krishna. 2013. Isolation, Identification and Sensitivity test of

Staphylococcus aureusagains Amoxi cillinof the Milk Sample in the

Mastitis Crossbreed Ettawa Goat at Girimulyo Area, Kulonprogo,

Yogyakarta. JS 31 (2).

Hadioetomo RS. 1993. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek Teknik dan

Prosedur Dasar Laboratorium. Jakarta : Gramedia.

Lim, D. 1998. Microbiology. WCB Mcgraw-Hill. Missouri.

Murray, R.K. dkk. 2003. Biokimia Klinik Edisi 4. Jakarta :EGC.

Pelczar MJ, Chan E. C. S. 1986. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : UI Press.

Sudarsono A. 2008. Isolasi dan Karakterisasi Bakteri pada Ikan Laut dalam

Spesies Ikan Gindara (Lepidocibium flavobronneum). Bogor: Institut

Pertanian Bogor.

Tantu. W., Tumbol, R. A., Longdong, S.N.J. 2013. Deteksi keberadaan bakteri

Aeromonas sp pada ikan nila yang dibudidayakan di karamba jaring apung

danau Tondano. Budidaya Perairan. Vol. 1 No. 3: 74-80.

Waluyo, L. 2007. Mikrobiologi Umum. Malang : Universitas Muhammadiyah

Malang.

Yulvizar, Cut. 2013. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Probiotik pada Rastrelliger

sp.Isolation and Identification of Probiotic Bacteria in Rastrelliger sp.

Biospecies. Vol. 6 No.2, Juli 2013, hal. 1-7.


20/20

Yusuf RW.2009. Isolasi dan Identifikasi Bakteri Gram Negatif pada Luka Ikan

Maskoki (Carassius auratus) Akibat Infeksi Ektoparasit Argulus sp.

Surabaya: Unversitas Erlangga.

Documents

Kelompok 1 (78-82)_Ciri-Ciri Fisiologis