LAKTAT DEHIDROGENAZA

5/25/2018 LAKTAT DEHIDROGENAZA

1/22

LAKTAT

DEHIDROGENAZA

Mirjana Vuk


2/22

Laktat dehidrogenaza (LD) je NAD+oksidoreduktaza ikatalizira oksidaciju laktata u piruvat koristei NAD+kaoakceptor vodikovih iona

Reakcija je reverzibilna i kod fiziolokog pH favoriziranaje redukcija piruvata u laktat

LAKTAT DEHIDROGENAZA


3/22


LD je prisutna u razliitim koliinama u citoplazmi svihstanica organizma

Povienje ukupne aktivnosti LD su naene u mnogimpatolokim stanjima, ali su ograniene diferencijalnedijagnostike vrijednosti zbog nedostatka specifinosti zapojedini organ

Ipak, ako je ukupna LD poviena kvantitativnadiferencijacija izoenzima moe omoguitidijagnostiki korisnu informaciju vezanu zapojedini organ


4/22

Sastoji se od 4 polipeptidna lanca koji pripadaju tipuH(heart) i M(muscle) 5 izoenzima, specifini zaodreeni organ

H podjedinica prevladava u tkivima sa poveanompotronjom kisika, a M u tkivima sa visokom glikolitikomaktivnou



5/22

IZOENZIMI

Specifini za odreeni organ

LD1H4 srce i eritrocitiLD2H3M1 retikuloendotelni sustav

LD3H2M2 plua, slezena, limfni voroviLD4H1M3 bubreg, posteljica, guteraaLD5M4 jetra, popreno prugasti mii

Razliiti izoenzimi imaju razliito vrijeme

poluraspada pa se razliito dugo mogu pratiti u

krvi


6/22

DIFERENCIJACIJA IZOENZIMA

ELEKTROFOREZOM na agaroznom ili celuloza-acetatnom gelu u alkalnom pH

Izoenzimi koji sadre H podjedinice putuju bre, dokizoenzimi koji sadre M podjedinice putuju sporije

LD1 putuje najbre, a LD5 najsporije


7/22

PRIMJER SPECIFINOGODREIVANJA LD1

KEMIJSKOM INHIBICIJOM

Dodatkom natrijeva perklorata ili 1,6-heksandiola inhibiramo sve izoenzime kojisadre M podjedinicu

LD1 ima samo H podjedinicu pa nije inhibiran i

moemo ga odrediti


8/22

INDIKACIJE

infarkt miokarda i monitoring

pluna embolija

diferencijacija utice hemolitika anemija

dijagnoza oteenja organa (kvantitativnom analizomizoenzima)

u dijagnozi i praenju malignih bolesti


9/22

METODE ODREIVANJA

Odreivanje ukupne LD spektrofotometrijski

U reakcijama se mjeri promjena apsorbancije NADH

U reakciji pretvorbe laktata u piruvat povienje

apsorbancije NADH mjeri se pri 334, 340 ili 366 nm, a u

reverzibilnoj reakciji pad apsorbancije NADH zbog

njegove oksidacije u NAD+


10/22

KLINIKO ZNAENJE

LD je citoplazmatski enzim i prisutan je u svim tkivima

Proputanje u plazmi moe se dogoditi ak i nakonmanjeg oteenja tkiva

Kako je LD koncetracija u tkivima 500 puta via nego uplazmi oteenje male koliine tkiva moe dovesti do

znaajnog povienja aktivnosti u serumu


11/22

KLINIKO ZNAENJE

Najei uzroci povienja LD su bolesti jetre, srca,skeletnih miia i eritropoetskog sustava

Ukupni LD nije marker oteenja specifinog organa islabiji je od aminotransferaza u dijagnozi hepatobilijarnebolesti

Kako bismo dobili organ specifinu detekciju, moramokvantitativno odrediti izoenzime


12/22

KLINIKO ZNAENJE

Smanjena koncentracija laktat dehidrogenaze nemaklinikog znaenja


13/22

KVANTITATIVNA ANALIZA

IZOENZIMA Razdvajanje elektroforezom

U dijagnostici su istaknuta tri elektroforetska izoenzimskauzorka:

Anodni - LD1+LD2

Katodni - LD4+LD5

Srednja grupa - LD3


14/22

KVANTITATIVNA ANALIZA

IZOENZIMA Poveana aktivnost izoenzima:

LD1 i LD2 infarkt miokarda, hemoliza,

miina distrofija, infarkt bubrega LD4 i LD5 bolesti jetre, oteenje skeletnih

miia, maligne bolesti

LD3destrukcija trombocita, limforetikularnebolesti, oteenje slezene, maligni tumori


15/22

PRIKUPLJANJE UZORAKA (plazma,

serum)

oksalati i fluoridi se ne smiju upotrebljavati kaoantikoagulansi jer oni inhibiraju LD

plazmakoristi se samo nakon vrlo brze centrifuge jerinae zaostaju trombociti koji sadre viskokukoncentraciju LD


16/22

UZORAK

Nakon tjelesne aktivnosti mogue su poveanekoncentracije LD zbog njenog oslobaanja iz miia

Zbog hemolize tijekom koagulacije koncentracija LDmoe biti vea u serumu nego u plazmi


17/22

INTERFERENCIJE S KRVNIM

STANICAMA Javljaju se kod kontaminacije uzorka plazme

trombocitima

Tijekom mjerenja uzorak se pipetira u hipotoninuotopinu, dolazi do lize stanica i izlaenja unutarstanineLD, to dovodi do lanog povienja LD u mjerenju

lano niske LD vrijednosti izmjerene su ako je tijekomreakcije LD maskiran poveanjem apsorbancijeuzrokovane apsorpcijom svjetlosti od strane trombocita


18/22

INTERFERENCIJE S

LIJEKOVIMA Neki lijekovi vode do poveanja razine LD:

androgeni ili anaboliki steroidi, alopurinol,aspirin/salicilati, kaptopril, karbamazepin,klorpromazin, cisplatin, kumarini, dakarbazin,

diltiazem, eritromicin, naproksen, fenitoin,

metildopa, paracetamol, penicilinamin,

fenilbutazon


19/22

STABILNOST

Uzorak seruma pri sobnoj temperaturi (20 0C) stabilan jedo 7 dana

Ne smije se pohranjivati na hladnijim temperaturamazbog osjetljivosti izoenzima LD4 i LD5 na hladnou


20/22

BOLESTI KOJE UZROKUJU POVIENUAKTIVNOST LD U SERUMU

INFARKT MIOKARDA znaajno povienje LD vrijednosti nakon 6-12 h, LD1 > 45% , max. vrijednosti

nakon 24-60 h i do 10 puta vie od referentnih, normalizacija nakon 7-15 dana

OSTALE BOLESTI SRCA miokarditis, srane aritmije, kateterizacija srca, transplatancija zalistaka

poviena razina enzima slino kao i kod infarkta miokarda

PLUNA EMBOLIJA kod 30% pacijenata tijekom 24h zamijeeno je blago poveanje LD,

osobito LD3

niska koliina LD1 i LD2 vana je zbog razlikovanja od infarkata

miokarda


21/22

APSCES JETRE

TUMOR JETRE

povieni LD4 i LD5 kod pacijenata sa karcinomom stanica jetre, dok su kodmetastaza povieni svi izoenzimi LD

HEPATOBILIJARNA BOLEST

posebno poveani LD4 i LD5

INFEKTIVNA MONONUKLEOZA

PORTALNA HIPERTENZIJA



22/22


BOLESTI POPRENOPRUGASTIH MIIA DUCHENNEOVA MIINA DISTROFIJA

poveani su izoenzimi LD1, LD2, LD3

ARAN-DUCHENNEOVA I KUGELBERG-WELANDEROVA MIINAATROFIJA

POLYMYOSITIS (kronina bolest vezivnog tkiva, propadanje miia)

EPILEPTIKI NAPAD (GRAND MAL)

HEMOLITIKA ANEMIJA, MEGALOBLASTINE ANEMIJE

OK

Documents

LAKTAT DEHIDROGENAZA