LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA DASAR

PERCOBAAN KE 1

REAKSI UJI TERHADAP ASAM AMINO dan PROTEIN

Disusun oleh:

Santalum Alba

10512093

Kelompok 8

Assisten Praktikum: Kak Zihnil ( 10510011)

Tanggal percobaan : 24 September 2014

Tanggal pengumpulan : 25 September 2014

LABORATORIUM BIOKIMIA DASAR

PROGRAM STUDI KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT TEKNOLOGI BANDUNG

2014

PERCOBAAN 1

REAKSI UJI TERHADAP ASAM AMINO DAN PROTEIN

I. Tujuan Percobaan

Menentukan asam amino serta gugus gugus yang terkandung dalam larutan

Gelatin dan Albumin Telur

Menentukan pengaruh suhu dan pH serta penambahan Garam & Logam berat

terhadap kelarutan larutan Albumin Telur

II. Teori Dasar

Asam amino adalah molekul organik dengan massa molekul kecil yang

mengandung setidaknya satu gugus karboksil dan satu gugus amino dan merupakan

komponen penting untuk biosintesis protein.Hanya ada duapuluh asam amino yang

lazim dijumpai dalam protein tumbuhan dan hewan. Keduapuluh asam amino

tersebut digabungkan dalam berbagai cara untuk fungsi tertentu sesuai jenis asam

aminonya. Fungsi fungsi biologis yang dapat dilakukan oleh asama amino adalah

pembentuk otot, urat , kulit,kuku ,Hemoglobin, enzime , dan antibodi.

Asam asam amino yang terdapat dalam protein adalah asam alfa-

aminokarboksilat. Variasi dalam struktur struktur monomer-monomer ini terjadi

dalam rantai sampingnya. Struktur asam amino sendiri dibagi menjadi 4 jenis yaitu

struktur primer , sekunder, tersier dan kuarterner. Struktur primer berupa struktur

yang dibangun berdasarkan ikatan kovelennya yaitu ikatan peptida . Struktur

sekunder berupa ikatan hidrogen dan interaksi antar molekul. Ikatan yang lebih

kompleks lagi yaitu dengan interaksi dengan unsur lain atau polimer lain disebut

struktur tersier. Struktur terakhir adalah struktur kuarterner yaitu struktur kompleks

dengan molekul lain untuk membentuk sistem mobilisasi biologis atau fungsi lain

dalam makhluk hidup.

III. Data Pengamatan

1. Uji reagen Millon

Tabung reaksi Warna yang

terbentuk

Setelah

pemanasan Endapan

Tb. 2% gelatin - - -

Tb. Albumin Dua fasa ungu

bening

Ungu memudar

kemerahan -

2. Uji Hopkins-Cole

Tabung reaksi Warna yang terbentuk

(cincin ungu) Uji +/- Endapan

Tb. 2% gelatin Cincin ungu - -

Tb. Albumin Tidak berwarna + -

3. Uji Ninhidrin

Tabung reaksi Warna yang terbentuk Uji +/- Endapan

Tb. 2% gelatin Ungu muda + -

Tb. Albumin Ungu pekat + -

4. Reaksi sistein dan sistin

Reaksi Warna endapan Uji +/-

Sistein - -

Sistin Hitam keruh +

5. Uji Biuret

Tabung reaksi Warna yang terbentuk Uji +/- Endapan

Tabung 1 Ungu muda + -

6. Pengendapan dengan logam

Tabung reaksi Warna Endapan Pengamatan lain

Tb. HgCl2 Dua Fasa Putih Dua fasa

Tb. Pb-asetat Dua Fasa Putih -

7. Pengendapan dengan garam

Tabung reaksi Warna Endapan Pengamatan lain

Tabung 1 Ungu kemerahan Ungu kemerahan -

Uji endapan Bening Merah muda Endapan tak larut

Uji filtrat Keruh Putih Tak terjadi

8. Denaturasi protein

Tabung reaksi Warna Endapan Pengamatan lain

Tabung 1 Dua fasa Gumpalan Gumpalan di

tengah

Tabung 2 Bening Tidak ada -

Tabung 3 Keruh - -

IV. Pembahasan

Pada praktikum ini ada dua sampel yang akan kita lakukan analisis kualitatif.

Keduanya adalah Albumin telur (1:5) dan Gelatin, yang merupakan sumber dari asam

amino . Keduanya adalah jenis protein namun memiliki susunan asam amino yang berbeda

.Oleh karena kita mencoba identifikasi jenis asam amino apa saja yang terkandung dalam

sumber protein tersebut

Uji pertama yang dilakukan adalah uji Millons.Prinsip dasar Millons ini adalah

reagen Millons akan menitrasi asam amino Tirosin. Hanya Tirosin yang mampu bereaksi

dengan reagen Millons karena tirosin masuk dalam jenis aromatik dengan gugus OH .

Karena nitrasi hanya bisa dialami oleh senyawa aromatik di mana NO3+

berfungsi sebagai

elektrofilik dan aromatiknya berupa nukleofilik. Gugus OH akan mengaktifkan cincin

Benzena sehingga baik Fenil alanin dan Triptofan tidak akan ikut bereaksi. Hal ini

diakibatkan triptofan berupa senya heterosiklik aromatik sehingga relatif struktur nya lebih

kompak untuk di serang oleh elektrofilik. Sedangkan untuk fenil analin adalah gugus

murni benzene yang yang terikat di CH- sehingga relatif sulit terjadi subtitusi elektrofilik.

Adanya Tirosin akan ditandainya warna merah karena terbentuk garam merkuri dari tirosin

yang ternitrasi. Penambahan merkuri juga dapat membuat protein terkoagulasi karena

struktur primernya akan rusak oleh terbentuknya ikatan antara kation Hg dan Anion

protein.

Uji Millons Reaksi dalam Uji Millons

Pada Uji Hopkins cole, triptofan akan mengalami kondensasi dengan aldehid dalam

suasana asam sulfat membentuk senyawa kompleks berwarna. Siklik amina akan

berkondensasi bersama aldehid dengan protonasi Asam dari asam sulfat. Terbentuknya

cincin ungu akan memberikan identifikasi positif kalau adanya triptofan. Dua fasa yang

terbentuk adalah fasa air dan fasa organik , fasa air disini adalah larutan asam sulfat dan

fasa organiknya berupa aldehidnya. Pada identifikasi ini albumin memberikan respon

positif denganadanya cicncin ungu antara fasa tersebut dan gelatin tidak terbentuk apa apa.

Jadi di dalam albumin telur terdapat asam amino triptofan.

Uji Hopkins cole

Reaksi Uji Hopkins Cole

Uji selanjutnya adalah Uji Ninhidrin ,Uji ini dapat digunakan untuk kualitatif

ataupun kuatitatif dengan melihat intensitas warna yang terlihat melalu kolorimetri.

Ninhidrin akan men dekarboksilasi oksidatif asam amino untuk menghasilkan Amonia di

mana amonia akan akan bereaksi dengan Ninhidrin lain dan ninhidrin tanpa H. Uji

memperlihatkan bahwa albumin telur memberikan warna ungu lebih pekat sedangkan

ungu yang lebih muda dihasilkan dari gelatin. Bisa kita simpulkan jumlah kompleks yang

terbentuk pada albumin telur lebih banyak mengandung NH3 dari pada gelatin.

Uji Ninhidrin Reaksi Ninhidrin

Reaksi sistein adalah reaksi yang menyerang gugus sulfohidril dan peptida.

Kompleks Fe akan berekasi dengan amonium dan gugus sulfohidril membentuk kompleks

Fe dengan CN, NO, dan S. Hanya akan positif dengan sistein karena sistein mengandung

gugus sulfur. Untuk jenis asam amino lain tidak mengandung sulfur tidak akan bisa

memberikan uji positif termasuk metionin karena metionin lebih sterik dibandingkan

sistein.

Uji sistein

Uji Biuret Proses yang terjadi pada percobaan ini adalah ikatan peptida akan

mengalami pengikatan kompleks denga ion Cu 2+

. Harus ada minimal dua peptida yang

ada dalam asam amino untuk menghasilkan uji positif terhadap ikatan peptida tersebut.

Histidin , dan serin tidak memberikan uji positif karena tidak bisa membentuk kompleks

dengan Cu 2+

karena keduanya tidak bisa membentuk dipeptida dengan Cu2+

. Biuret

memberikan warna ungu muda untuk hasil positif karena kompleks yang terbentuk

berwarna. Uji positif diberikan pada albumin dan negatif pada gelantin.Kelebihan

menggunakan uji biuret adalah tidak terjadi reaksi antara asam amino dengan vitamin,

proses pengujiannya berlangsung secara cepat dan hasilnya dapat terlihat dengan cepat.

Sedangkan kerugian yang dapat ditimbulkan menggunakan pengujian biuret adalah mahal,

dapat mengalami gangguan dari zat- zat lain yang bereaksi dengan pereaksi biuret kecil,

tidak dapat mendeteksi nitrogen non peptide serta konsentrasi NH4+ yang tinggi dapat

mengganggu proses reaksi sehingga NH4+ harus distandarkan terlebih dahulu.

Uji Biuret Reaksi Uji biuret

Pengendapan Logam,Karakteristik lain yang dapat dilihat dari protein adalah kelarutannya

dalam air. Kelarutan protein dalam air relatif baik jika kita bandingkan dengan massa

molekul yang relatif besar. Karena massa yang besar kita bisa saja mengendapkannya

dengan memberikan kation logam berat pada larutan protein. Namun larutan protein harus

di bentuk dalam bentuk ion negatif dengan cara menambahkan basa agar terbentuk ion

karboksilat. Maka menurut konsep asam basa keras lunak keduanya akan bisa bereaksi

membentuk endapan. Logam berat seperti Pb dan Hg dapat digunakan sebagai asam lunak

dan anion protein membentuk basa lunaknya. Pada pengendapan protein dengan

pengendapan logam, melalui penambahan HgCl2 dan (CH3COO)2Pb ke dalam larutan

albumin menyebabkan terjadinya reaksi sehingga larutan yang sebelumnya jernih berubah

menjadi keruh dan terdapat endapan. Penambahan HgCl2 dan (CH3COO)2Pb ini karena

diketahui bahwa protein mampu menawarkan racun sebab asam amino yang merupakan

penyusun suatu protein dapat mengikat logam seperti Hg (merkuri klorida) dan Pb (timbal

asetat), racun atau logam yang terikat dalam reaksi ini ditandai dengan adanya endapan

putih. Pada saat ditambahkan ke dalam protein, HgCl2 dan (CH3COO)2Pb akan terionisasi

dalam bentuk Hg2+

dan PbSO4 sehingga dapat menghasilkan endapan. Ikatan yang amat

kuat dari reaksi protein yang ditambahkan dengan HgCl2 dan (CH3COO)2Pb akan

memutuskan ikatan jembatan garam, sehingga akan terjadi denaturasi, secara bersama

gugus COOH dan gugus NH2 yang terdapat pada protein dapat bereaksi dengan ion

logam berat dan dapat membentuk senyawa kelat.

Pengendapan dengan logam

Garam garam anorganik akan berkompetisi dengan protein untuk merebutkan air

sebagai media solvasi nya. Proses ini yang dinamakan salting out . endapan yang diperoleh

adalah protein karena tidak ada yang mensolvasinya sedangkan filtratnya berupa amonium

sulfat. Pada uji yang dilakukan terhadap endapan dengan uji millon memberikan warna

merah muda keungungan sehingga terbukti adanya tirosin dalam endapan tersebut.

Sedangkan pada filtratnya wana tetap keruh dan tidak memberikan respon apa apa. Artinya

semua protein sudah diendapkan dan yang tersisa difiltrat hanyalaha garam amonium

sulfat.

Pengendapan dengan garam

Pengaruh pH pemberian asam pada larutan protein menyebabkan adanya gumpalan

membentuk cincin pada larutan , kemungkinan karena protein terkoagulasi. Selanjutnya

penambahan NaOH membuat warna menjadi bening dan buffer asam memberikan warna

keruh pada larutan albumin. pH dipengaruhi oleh titik isoelektrik dimana pH saat keadaan

larutan asam amino netral. Penambahan asam atau basa pada pH tertentu akan

mengakibatkan keluar dari titik isoelektrik dan bisa saja jika penambahan berlebihan akan

mengakibatkan larutan protein terkoagulasi atau terdenaturasi.

Pengaruh pH

V. Kesimpulan

1. Di dalam albumin telur terdapat asam amino tirosin , triptofan, dan

beberapa asam amino lain karena memberikan respon positif dalam semua

uji kialitatif yang dilakukan

2. Gelatin merupakan protein yang tidak memiliki asam amino tirosin dan

triptofan , Namun tetap memiliki asam amino terbukti dengan uji Ninhidrin

3. Kelarutan suatu larutan protein dipengaruhi oleh interaksinya dengan logam

berat dengan Ph tertentu dan garam anorganik dari efek salting out

4. Ph memberikan pengaruh terhadap keadaan protein karena bisa jadi protein

terkoagulasi atau terdenaturasi

VI. Daftar pustaka

Fessenden, R.J., dan Fessenden, J.S., 1986, Kimia Organik Jilid 2, Erlangga,

Jakarta.(P.364-401)

M.Berg, Jeremy.,L.Tymozako, John., Styrer, Robert, Biochemistry, 5th ed.,

W.H. Freeman and Company, 2006, (pdf.file)

Nelson, D.L., Cox, M.M., Lehninger Principles of Biochemistry, 4th ed., Mc.

Graw-Hill Company, 2004, (pdf. File)