LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA KLINIK
Nama: Melany AmdiraNIM: 08121006027Jurusan / Kelompok: Farmasi /
IDosen Pembimbing: 1. Dr.rer.nat Mardiyanto, M.Si., Apt: 2. Dr.
Budi Untari, M.Si., AptAsisten Praktikum: Alifa Syafira Putri
(08111006049)
PERCOBAAN: DETEKSI GULA PEREDUKSI
LABORATORIUM BIOKIMA KLINIKPROGRAM STUDI FARMASIFAKULTAS
MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAMUNIVERSITAS
SRIWIJAYA2014PRAKTIKUM IDETEKSI GULA PEREDUKSI
I. TUJUAN PERCOBAANMahasiswa mampu memahami prinsip deteksi gula
pereduksi secara umum yang merupakan keterampilan dasar dalam
bidang keahlian biokimia klinik.
II. PRINSIP KERJAMendeteksi gula pereduksi (glukosa) dalam
berbagai konsentrasi larutan dengan menggunakan reagen Benedict dan
Fehling (A dan B).
III. DASAR TEORIKarbohidrat merupakan senyawa yang terbentuk
dari molekul karbon, hidrogen dan oksigen. Karbohidrat paling
banyak ditemukan di alam yang didapatkan dari hasil proses
fotosintesis dengan bantuan energy matahari. Sebagai salah satu
jenis zat gizi, fungsi utama karbohidrat adalah penghasil energi di
dalam tubuh. Tiap 1 gram karbohidrat yang dikonsumsi akan
menghasilkan energi sebesar 4 kkal dan energi hasil proses oksidasi
(pembakaran) karbohidrat ini kemudian akan digunakan oleh tubuh
untuk menjalankan berbagai fungsi-fungsinya seperti bernafas,
kontraksi jantung, dan otot serta juga untuk menjalankan berbagai
aktivitas fisik seperti berolahraga atau bekerja. (Marks, B Dawn,
dkk. 2000)Karbohidrat dibagi menjadi tiga kelompok berdasarkan
ukuran dan kelarutannya. Monosakarida mengandung satu unit gula
(sakarida) dan larut dalam air. Disakarida mengandung dua unit gula
(sakarida) dan larut dalam air. Serta polisakarida mengandung
banyak unit gula (sakarida) dan tidak larut dalam air. (Sutresna,
Nana. 2007)Monosakarida mengandung gugus keton atau aldosa. Awalan
aldo- dan keto- menunjukan jenis gugus aldehida atau keton di dalam
suatu sakarida, sedangkan akhiran osa menunjukkan karbohidrat.
Terdiri atas 3-6 atom C dan zat ini tidak dapat lagi dihidrolisis
oleh larutan asam dalam air menjadi karbohidrat yg lebih sederhana.
Monosakarida yang penting diantaranya glukosa (terdapat pada buah),
fruktosa (terdapat pada buah dan madu), dan galaktosa. (Sunarya,
Yayan dan Agus Setiabudi. 2007)Disakarida atau oligosakarida adalah
suatu karbohidrat yang jika dihidrolisis oleh larutan asam dalam
air akan terurai menjadi 2 molekul monosakarida. Misalnya maltosa
dapat mereduksi Fehling atau Tollens sehingga disebut gula
pereduksi. Disakarida terbentuk dari 2 molekul monosakarida yang
sejenis atau tidak. Disakarida dapat. Disakarida yang penting
anatara lain maltose (terdapat pada biji-bijian), sukrosa (pada
gula tebu dan gula bit), dan laktosa (pada susu). (Ferdinand,
Fictor dan Moekti Ariebowo. 2007)Polisakarida adalah senyawa yang
terdiri dari ratusan bahkan ribuan monomer monosakarida di alam.
Senyawa ini bisa dihidrolisis menjadi banyak molekul monosakarida.
Beberapa di antara polisakarida berfungsi sebagai materi simpanan
atau cadangan, yang nantinya ketika diperlukan akan dihidrolisis
untuk menyediakan gula bagi sel. Polisakarida lain berfungsi
sebagai materi pembangun (penyusun) untuk struktur yang melindungi
sel atau keseluruhan organisme. Arsitektur dan fungsi suatu
polisakarida ditentukan oleh monomer gulanya dan oleh posisi ikatan
glikosidanya. Polisakarida yang penting diantaranya amilum (sebagai
simpanan energi pada hewan), selulosa (sebagai simpanan energi pada
tumbuhan), dan glikogen (pada serat tumbuhan). (Sunarya, Yayan dan
Agus Setiabudi. 2007)Banyak tes digunakan untuk mengetahui
karakteristik karbohidrat. Uji Molisch adalah pengujian paling umum
untuk semua karbohidrat, ini berdasarkan kemampuan karbohidrat
untuk mengalami dehidrasi asam katalis untuk menghasilkan fulfural
atau 5 hydroxymethylfurfural. Uji Selliwanoff digunakan untuk
membedakan ketosa (enam karbon gula yang mengandung keton pada
ujung sisi) dan aldosa (enam karbon gula yang mengandung aldehid
pada ujung). Uji Benedict digunakan untuk menentukan monosakarida
dan disakarida yang mengandung gugus aldehid yang dapat dioksidasi
oleh asam karboksil. Gula akan mereduksi ion kupri pada larutan
Benedict. Uji Barfoed untuk memisahkan antara monosakarida dengan
disakarida yang dapat mereduksi ion kupri. (Sutresna, Nana.
2007)Uji gula pereduksi adalah suatu pemeriksaan kolorimetrik yang
didasarkan pada prinsip bahwa suatu oksidasi selalu disertai oleh
reduksi. Apabila karbon anomerik pada suatu gula mengalami
oksidasi, senyawa lain akan tereduksi membentuk warna, dimana
intensitas warnanya ini akan menentukan jumlah glukosa yang
mengalami oksidasi. Gula yang mengalami oksidasi disebut gula
pereduksi. (Marks, B Dawn, dkk. 2000)Gula yang termasuk kelompok
gula pereduksi, yaitu semua monosakarida (glukosa, fruktosa, dan
galaktosa), dan beberapa disakarida (maltose dan laktosa). Pereaksi
yang digunakan untuk menguji gula pereduksi adalah pereaksi
Fehling, pereaksi Benedict, dan pereaksi Tollens. Pengujian
menggunakan pereaksi Fehling dan pereaksi Benedict berdasarkan pada
reduksi Cu2+ (dari pereaksi) menjadi Cu+ sehingga membentuk endapan
merah bata. Uji ini dapat digunakan untuk mengetahui ada tidaknya
glukosa dalam urin pada penderita Diabetes Mellitus. Sedangkan
pengujian dengan menggunakan perekasi Tollens akan membentuk cermin
perak. (James, Joyce, dkk. 2008)
IV. ALAT DAN BAHANAlat: 1. Tabung Reaksi 2. Rak tabung reaksi 3.
Beaker Glass4. Bunsen5. GelasUkur6. Penjepit tabung7. Pipet
tetes
Bahan: 1. Glukosa2. Benedict3. Fehling A dan B4. NaOH5.
Aquadest
V. CARA KERJA1. Masukkan glukosa ke dalam 6 tabung reaksi
masing-masing 2 ml glukosaReagen Benedict
Ditambahkan
Aquadest pada keempat tabung reaksi berisi glukosa masing-masing
2 ml, 4ml, 6 ml, 8 ml dan 10 ml
Ditambahkan
Reagen Benedict 1 ml pada setiap tabung reaksi
Diamati
Perubahan warna yang terjadi
Dipanaskan
Diatas Bunsen selama 30 detik
Ditambahkan
NaOH 1 tetes
Diamati
Perubahan warna larutan dan catat waktu perubahan serta tentukan
kadar glukosa pada setiap larutan
2. Reagen Fehling A dan B
Masukkan glukosa ke dalam 6 tabung reaksi masing-masing 10
tetes
Ditambahkan
Aquadest pada kelima tabung reaksi berisi glukosa masing-masing
1 ml, 2 ml, 3 ml, 4 ml, dan 5 ml
Ditambahkan
Reagen Fehling A 1 ml pada setiap tabung reaksi
Diamati, ditambah
Reagen Fehling B 1 ml pada setiap tabung reaksi
Diamati
Perubahan warna larutan dan catat waktu setiap terjadi perubahan
warna
DipanaskanDiatas Bunsen hingga terjadi perubahan warna yang
konstan dan catat waktu perubahan
VI. DATA HASIL PENGAMATAN1. Reagen BenedictTabungZatBenedict (1
ml)PemanasanNaOHKadar Glukosa
I2 ml GlukosaBelum tercampurDetik ke-24 : Warna bercampur (biru
tosca)Tidak tercampur (kuning & biru muda) dikocok menjadi
coklat ke abu-abuan(+++)1,5-2,5 g/dl
II2 ml Glukosa +2 ml AquadestDetik ke-58 : Warna biru tosca
Detik ke-6 : Warna pudar Detik ke-30 : Orange total (+++)1,5-2,5
g/dl
III2 ml Glukosa +4 ml AquadestDetik ke-64 : Warna biru tosca
Detik ke-20 : Warna pudar Kuning kecoklatan(+++)1,5-2,5 g/dl
IV2 ml Glukosa +6 ml AquadestDetik ke-70 : Warna biru tosca
Detik ke-19 : Warna pudar Orange total(+++)1,5-2,5 g/dl
V2 ml Glukosa +8 ml AquadestDetik ke-77 : Warna biru tosca Detik
ke-22 : Warna pudar Hijau kebiruan(+)0,5-1,0 g/dl
VI2 ml Glukosa +10 ml Aquadest----
2. Reagen Fehling A dan Fehling BTabungZatFehling A(1 ml)Fehling
B(1 ml)Pemanasan
I10 tetes GlukosaWarna biru muda 12 detik : biru gelap 25 detik
: bagian bawah memudar, semakin atas semakin hijau kekuningan 42
detik : bawah hijau, semakin atas semakin biru muda 54 detik :
terbentuk endapan 102 detik : bawah kuning, atas hijau lumut > 2
menit : bawah orange atas hijau zaitunDetik ke-17 : menjadi merah
bata
II10 tetes Glukosa +1 ml AquadestWarna biru muda 2 detik : biru
dongker 42 detik : bagian bawah pudar 80 detik : bagian bawah
menguning 1 menit, 15 detik : bagian bawah coklat, tenggah kuning,
dan atas biru >3 menit : atas hijau zaitun bawah coklat
kemerahanDetik ke-35 : menjadi merah bata
III10 tetes Glukosa +2 ml Aquadest 2 detik : biru dongker 52
detik : bagian bawah memudar 1 menit 2 detik : hijau
kecoklatanDetik ke-42 : menjadi merah bata
IV10 tetes Glukosa +3 ml AquadestWarna biru muda 2 detik : biru
dongker 1 menit 6 detik : memudar 2 menit : hijau kecoklatan 3
menit : bagian bawah menghitamDetik ke-48 : menjadi merah bata
V10 tetes Glukosa +4 ml AquadestWarna biru muda 2 detik : biru
dongker 1 menit 14 detik : warna memudar 2 menit 9 detik : hijau
kecoklatan1 menit 18 detik : menjadi merah bata
VI10 tetes Glukosa +5 ml AquadestWarna biru muda 2 detik : biru
dongker 1 menit 28 detik : warna memudar 2 menit 18 detik : hijau
kecoklatan1 menit 20 detik : menjadi merah bata
VII. PEMBAHASANPada praktikum deteksi gula pereduksi ini,
praktikan dituntut untuk mendeteksi kadar gula pereduksi (glukosa)
dalam berbagai konsentrasi larutan dengan menggunakan reagen
Benedict dan Fehling (A dan B). Metode yang digunakan untuk
menentukan kadar glukosa dalam sampel adalah metode Luff Schoorl.
Ini merupakan prinsip deteksi gula pereduksi secara umum yang
merupakan keterampilan dasar dalam bidang keahlian biokimia
klinik.Reagen benedict dibuat dengan melarutkan Natrium Sitrat dan
zat anhydrous. Jika pada sampe tidak mengandung gula pereduksi,
maka larutan akan tetap jernih. Namun, jika mengandung gula
pereduksi, maka ion Cu2+ pada reagen benedict akan direduksi oleh
gula menjadi Cu2O melalui pemanasan sehingga membentuk endapan
coklat atau merah bata.Pengujian menggunakan reagen benedict pada 6
sampel menghasilkan warna yang berbeda, sehingga kadar glukosanya
pun berbeda. Pada sampel 1 dan sampel 3 mengandung glukosa dengan
kadar antara 1,5-2,5 g/dl. Pada sampel 2 dan sampel 4 setelah
pemanasan didapatkan warna orange yang menunjukkan bahwa sampel 2
dan sampel 4 ini mengandung glukosa dengan kadar antara 1,5-2,5
g/dl. Sampel 5 setelah pemanasan didapat warna hijau kebiruan, dan
warna ini menunjukkan bahwa sampel 5 terdapat glukosa dengan kadar
anatara 0,5-1,0 g/dl. Sampel 6 tidak diujikan karena kandungan
aquades yang terlalu banyak sehingga sampel glukosa menjadi encer.
Akibatnya, kadar glukosa tidak dapat dideteksi. Untuk percobaan
menggunakan reagen benedict ini mengalami beberapa kali perubahan
warna, yakni dari biru tosca setelah sampel diberikan reagen
benedict, warna menjadi pudar setelah pemanasan, dan akhirnya
menjadi kuning dan kemerahan setelah ditambahkan Natrium
Hidroksida. Waktu yang dibutuhkan sampel untuk berubah warna
menjadi kemerahan ini tidak sama. Sampel 1 memiliki waktu yang
lebih cepat dibandingkan sampel lainnya karena konsentrasi glukosa
yang terkandung pada sampel 1 lebih besar daripada sampel lainnya.
Pada sampel 5 kadar glukosa yang didapat tidak sama dengan sampel
lainnya karena terjadi kesalahan saat penambahan larutan glukosa
yang tidak sampai 2 ml, akibatnya kadar glukosanya lebih rendah
dari pada sampel lainnya. Larutan Fehling A dibuat dengan
melarutkan Kristal tembaga (II) ke dalam air yangmengandung
beberapa tetes asam sulfat encer. Larutan Fehling B dibuat dengan
melarutkan Natrium Hidroksida dan Natrium Tartrat ke dalam air.
Reagen fehling yang digunakan berasal dari Fehling A dan Fehling B
dengan volume yang sama yakni masing-masing 1 ml. Jika terdapat
gula pereduksi dalam sampel maka warna biru pada fehling akan
hilang dan endapan merah / kuning akan terbentuk.Pengujian
menggunakan reagen fehling A dan B pada keenam sampel yang
digunakan menunjukkan waktu yang berbeda untuk menjadi warna merah
bata setelah dilakukan proses pemanasan. Setelah dipanaskan, sampel
1 menjadi warna merha bata pada detik ke 17, detik ke 35 untuk
sampel 2, detik ke 42 untuk sampel 3, detik ke 48 untuk sampel 4,
detik ke 78 untuk sampel 5, dan detik ke 80 untuk sampel 6. Hasil
ini membuktikan jika seluruh sampel yang diujikan mengandung gula
pereduksi. Sampel 1 memiliki waktu yang lebih cepat untuk menjadi
warna merah bata dari pada sampel lainnya, karena konsentrasi
glukosa pada sampel 1 lebih pekat dari pada sampel lainnya.
Sehinnga reagen Fehling A dan B lebih cepat beraksi dengan senyawa
gula tersebut dan warna merah bata dari tembaga (II) oksida juga
lebih cepat terbentuk.
VIII. KESIMPULANBerdasarkan praktikum deteksi gula pereduksi
yang telah dilakukan, maka dapat disimpulkan bahwa :1. Semua sampel
yang diuji dengan metode Luff Schoorl didapatkan hasil bahwa semua
sampel positif terdapat gula perduksi dengan konsentrasi yang
sama.2. Uji benedict menunjukkan bahwa sampel 1 memiliki waktu yang
paling cepat dari pada sampel lainnya karena kadar glukosa pada
sampel 1 lebih tinggi dibandingkan pada sampel lainnya, karena
sampel ini tidak mengandung aquadest. 3. Uji Fehling A dan B
menunjukkan bahwa sampel 1 memiliki waktu yang paling cepat untuk
menghasilkan warna merah bata dibandingkan sampel lainnya karena
kadar glukosa pada sampel 1 lebih tinggi dari pada sampel
lainnya.4. Warna merah bata dapat terbentuk karena ion tembaga (II)
pada reagen direduksi oleh gula menjadi endapan tembaga (II) oksida
sehingga terbentuk warna merah bata.5. Semakin banyak kandungan air
dalam sampel, maka waktu yang dibutuhkan untuk mendeteksi gula
pereduksi akan semakin lama.
IX. DAFTAR PUSTAKA
Ferdinand, Fictor dan Moekti Ariebowo. 2007. Praktis Belajar
Biologi. Jakarta : Visindo Media PersadaJames, Joyce, dkk. 2008.
Prinsip Sains untuk Keperawatan. Jakarta : Penerbit ErlanggaMarks,
Dawn B. 2000. Biokimia Kedokteran Dasar. Jakarta : Penerbit
EGCSutresna, Nana. 2007. Cerdas Belajar Kimia. Bandung : Grafindo
Media PratamaYayan, Sunarya dan Agus Setiabudi. 2007. Mudah dan
Aktif Belajar Kimia. Bandung : Seia Purnama Inves
