PEMBUATAN MEDIA KULTUR JARINGAN TANAMANPENDAHULUANLatar Belakang
Kultur in vitro atau kultur jaringan tanaman merupakan suatu teknik
untuk mengisolasi bagian tanaman (sel, jaringan, dan organ
tanaman), untuk ditumbuhkan pada media dengan kondisi aseptik agar
bagian tanaman tersebut dapat memperbanyak diri dan membentuk
tanaman yang sempurna (Gunawan 1992). Sukmadjadja dan Mariska
(2003) menyatakan bahwa terdapat beberapa kelebihan dari penggunaan
teknik kultur jaringan dibandingkan dengan cara konvensional yaitu
faktor perbanyakan tinggi, tidak tergantung pada musim karena
lingkungan tumbuh in vitro terkendali, bahan tanaman yang digunakan
sedikit sehingga tidak merusak pohon induk, tanaman yang dihasilkan
bebas dari penyakit meskipun dari induk yang mengandung patogen
internal serta tidak membutuhkan tempat yang sangat luas untuk
menghasilkan tanaman dalam jumlah banyak.Media dasar dan zat
pengatur tumbuh diperlukan dalam metode perbanyakan tanaman secara
in vitro. Media yang seing digunakan dalam kultur in vitro adalah
media Murashige dan Skoog atau media Gamborg (B5) (Gamborg 1995).
Menurut Wattimena (1988), peran ZPT dalam pertumbuhan dan
perkembangan kultur adalah mengawali reaksi-reaksi biokimia dan
mengubah komposisi kimia di dalam media tanam, yang mengakibatkan
terbentuknya organ tanaman. Dalam media diberikan berbagai garam
mineral, air, gula, asam amino, zat pengatur tumbuh, pemadat media
untuk pertumbuhan dan perkembangan, serta kadang-kadang arang aktif
untuk mengurangi efek penghambatan dari persenyawaan polifenol
(warna coklat-hitam) yang keluar akibat pelukaan jaringan pada
jenis-jenis tanaman tertentu. Gula, asam amino, dan vitamin
ditambahkan karena eksplan yang ditanam tidak lagi sepenuhnya hidup
secara autotrof (hidup dari bahan-bahan anorganik dari alam). Dalam
kultur in vitro, segmen tanaman hidup secara heterotrof (mendapat
suplai bahan organik) (Gunawan 1995).Komposisi nutrisi medium
kultur dapat dikatagorikan dalam : garam-garam mineral,
karbohidrat, vitamin dan bahan organik lain zat tumbuh dan
senyawa-senyawa organik kompleks seperti air kelapa, sari tomat,
ekstrak yeast dan lain-lain (Hattmann and Kaster 1968). media
kultur yang memenuhi syarat adalah media yang mengandung nutrien
makro dan mikro dalam kadar dan perbandingan tertentu, serta sumber
tenaga (umumnya digunakan sukrosa). Garam-garam anorganik atau
garam-garam mineral terdiri atas : unsur-unsur makro nitrogen,
phospor, potasium, kalsium, magnesium dan sulfur sangat penting
untuk seluruh jaringan tanaman dan pertumbuhan bagian tanaman
secara in vitro. Dan unsur-unsur mikro yaitu B, Co, Fe, Mn, Zn, Cu,
Mo, penting di tambahkan tetapi pada beberapa media dapat
dihilangkan. Unsur-unsur esensial dalam suatu media berfungsi untuk
mengatur proses-proses fisiologis, serta mengaktifkan enzim dan
mengatur kecepatan proses enzim (Epstein 1972). Disamping itu juga
untuk mengatur proses-proses metabolisme. Kekurangan unsur-unsur
esensial akan menimbulkan gangguan fisiologis. Dalam praktikum ini
dilakukan pembuatan media tanam kultur jaringan dan melakukan
pengamatan jumlah media yang steril dan kontam. Pengamatan media
dilakukan pada perbanyakan cepat tanaman pada tanaman Krisantimum
karena media yang dibuat digunakan untuk perbanyakan tanaman
krisantimum. TujuanMengetahui bagaimana cara membuat media tanam MS
pada teknik kultur jaringan. BAHAN DAN METODEBahanLarutan stok,
gula, agar-agar, plastik penutup, karet gelang. Alat yan digunakan
adalah labu takar dan botol kultur.MetodeCara membuat media dengan
Media Dasar MS0 sebagai berikut:Larutkan 15 gram gula dengan
menambahkan akuades sebanyak 500 ml dan campurkan ke dalam labu
takar. Tambahkan 10 ml larutan stok A dan B, masukkan ke dalam labu
takar.Tambahkan 2,5 ml masing-masing larutan stok C, stok D, stok
ETambahkan 5 ml masing-masing larutan stok F, Myo dan VitaminTera
PH media dengan menambahkan HCl 1 N atau KOH 1 N sampai mencapai
5,9Tambahkan media ke dalam tempat yang volumenya 1 liter, lalu
tambahkan 3,5 gram agar-agar.Panaskan media sampai agar-agar larut
(sambil diaduk)Tuangkan media ke dalam botol kultur
sterilSterilisasi media selama 15-20 menit, pada suhu 121 C tekanan
17,5 psiUntuk media MS13 setelah langkah ke 4 ditambahkan dengan
Zat Pengatur Tumbuh dan langkah selanjutnya sama. HASIL DAN
PEMBAHASANtabel 1. Media kultur jaringan pada perbanyakan cepat
pucuk krisntimumHasil ULANGAN
MST1234111002110031110411115111161111711118111191111101111111111121100tabel
2. Media kultur jaringan pada perbanyakan cepat batang
krisantimumket: 1 = steril, 0 = kontam ULANGAN
MST1234111112100031100411005111161111711118111190000101111111111121111ket:
1 = steril, 0 = kontamtabel 3. Jumlah Media kultur jaringan yang
steril dan kontam krisntimum mediajumlah media1 mst2 mst3 mst4
mststeril 23221514kontam1278Pembahasan Dalam pengamatan media ini,
digunakan media pada perbanyakan cepat tanaman Krisantimum karena
media hasil praktikum digunakan pada perbanyakan cepat tanaman
Krisantimum. Berdasarkan hasil praktikum, dapat dikatahui bahwa
jumlah media yang steril dari 1 MST sampai 4 MST mengalami
penurunan. Pada 1 MST media yang steril paling banyak yaitu 23 dan
1 yang kontam sedangkan pada 4 MST media yang steril paling sedikit
yaitu 14 dan 8 yang kontam. Penurunan tersebut kemungkinan
dikarenakan oleh serangan patogen yang terbawa saat pembuatan media
ataupun saat penanaman Krisantimum. Kendala yang dialami dalam
praktikum ini adalah keterbatasan autoclave sehingga harus
bergantian dalam penggunaannya, ada beberapa ulangan yang mengalami
kontaminasi oleh patogen, hal tersebut dikarenakan kurang streril
pada saat penanaman sehingga patogen dapat terbawa. Patogen yang
menyerang berdasarkan pengamatan fisik dari golongan bakteri putih
berlendir dan cendawan putih hifa membentuk benang dan cendawan
hitam. Jenis cendawan dan bakterinya tidak diketahui karena tidak
ada pengujiannya. Pembuatan media harus dilakukan dengan cara yang
baik dan benar kerena media merupakan elemen penting dalam teknik
kultur jaringan. Baik tidaknya hasil perbanyakan cepat sangat
ditentukan oleh media tanam. KESIMPULAN Dalam pembuatan media harus
dilakukan dengan baik dan benar supaya menghasilkan perbanyakan
tanaman banyak dan tidak terkontaminasi. DAFTAR PUSTAKA Epstein E.
1972. Mineral Nutrition of Plants. Principles and Perspectives. New
York: John Wiley and Sons. Inc.Hartmann HT, Kester DE. 1968. Plant
Propagation, Principles and Practices. New York: Prentice Hall.
IncGamborg, O.L. 1995. Metode Kultur Jaringan Tanaman. Dalam L.R.
Wetter dan F. Constabel (Eds). Metode Kultur Jaringan Tanaman.
Institut Teknologi Bandung. Bandung. Hal 1-13. Gunawan, L. W. 1992.
Teknik Kultur Jaringan Tanaman. Departemen Pendidikan Tinggi. Pusat
Antar Universitas Bioteknologi Institut Pertanian Bogor. Bogor. 165
hal.Sukmadjadja, D. dan I. Mariska. 2003. Perbanyakan Bibit Jati
melalui Kultur Jaringan. Balai Penelitian Bioteknologi dan
Sumberdaya Genetik Pertanian. Bogor. 17 hal.Wattimena, G.A. 1988.
Zat Pengatur Tumbuh Tanaman. Pusat Antar Universitas Bioteknologi
Institut Pertanian Bogor. Bogor. 145 hal.
