LP1 Reactia Antigen-Anticorp Nutritie

8/11/2019 LP1 Reactia Antigen-Anticorp Nutritie

1/28

REACIA ANTIGEN-

ANTICORP


2/28

Noiuni generale

Imunogenicitate

Imunogen

Antigenicitate

Hapten

Epitop (determinant antigenic)

Antigen

Anticorp


3/28

Proprietile fundamentale ale sistemuluiimun

Specificitatea antigenic

Memoria imun

Recunoaterea self-ului i nonself-ului


4/28

Dinamica rspunsului imun


5/28

Generarea celulelor efectoare i a

celulelor cu memorie


6/28

Interaciunea Ag -Ac

Legturi necovalente ntre epitop i domeniulregiunii variabile a anticorpului: legturi de hidrogen

legturi ionice

interaciuni hidrofobe

fore van der Waals

Concept lact-cheie

Reversibilitate

Posibilitatea existenei

legturilor multiple


7/28

Interaciunea Ag -Ac

Interaciuni primare:

Interaciuni secundare:


8/28


9/28

Afinitatea

Intensitatea interaciunii dintre un singur determinantantigenic i un singursitus de pe suprafaa Ac.

Afinitatea = forelor de atracie i de respingere

Ac

Ag

Afinitate mare

Ac

Ag

Afinitate mic


10/28

Calcularea afinitii

Ag + AcAgAc

Keq =[AgAc]

[Ag] x [Ac]

Aplicarea legii aciunii maselor:

Keq= constanta de echilibru


11/28

Aviditatea

Intensitatea total a interaciunii dintre Ag cu

mai muli determinani i Ac multivaleni

Keq= 104

Aviditatea

106

Aviditatea

1010

Aviditatea


12/28

VALENTA SI AVIDITATEA

INTERACTIUNILOR ANTIGEN-ANTICORP


13/28

Specificitatea

capacitatea unui situs de combinare al unui

Ac de a interaciona cu un singur determinant

antigenic.

capacitatea unei populaii de molecule de Acde a interaciona cu un singur Ag.


14/28

Reactivitatea ncruciat

Capacitatea unui situs de combinare al unui Ac de a

interaciona cu mai mult de un determinant antigenic.

Capacitatea uneipopulaii de molecule de Ac de a

interaciona cu mai mult de un Ag.

Ac

anti-A

Ag A

Ac

anti-A

Ag B

Epitop identic

Ac

anti-A

Ag C

Epitop similar

Reacii ncruciate


15/28

Factori care influeneaz reaciile

Ag-Ac

Afinitatea

Aviditatea

Raportul Ag:Ac

Forma fizic a Ag

Ac n exces Ag n exces

Echivalen => formarea unei reele


16/28

Utilizarea anticorpilor n laborator

Ac policlonali

Ac monoclonali


17/28

Anticorpi policlonali


18/28

Producerea Ac policlonali / monoclonali


19/28

Producerea anticorpilor

himerici


20/28

Aplicaiile analitice ale interaciunilorsecundare Ag-Ac

reacii de aglutinare

reacii de precipitare


21/28

Aglutinarea

Aglutinarea cnd un anticorp interacioneaz cu unantigen multivalent, insolubil, cu legarea ncruciat aparticulelor antigenice de ctre anticorp i formarea unoragregate mari, insolubile, vizibile macroscopic saumicroscopic. Aglutinarea nu are loc n cazul haptenelor.Dimensiunea agregatelor depinde de raportulconcentraiilor de antigen i anticorp.

Aglutinarea poate avea loc n dou situaii diferite: cnd un antigen unideterminat, multivalent (care conine mai multe

copii ale epitopului A) interacioneaz cu un singur tip de anticorp(anti-A) cnd un antigen multideterminat, univalent (cu epitopii A, B, C etc.)

interacioneaz cu cel puin dou tipuri diferite de anticorpi (anti-A ,anti-B etc.)


22/28

Ag is corpuscular (bacteria,

erythrocytes-hemagglutination,inert particles-latex))

agglutinate is formed

agglutinate is visibleby naked eyes

application limited to infection

serology(specific antibodies determination)

application limited to determination

of autoantibodies

(rheumatoid factors)

AGGLUTINATION

IgMIgG

BACTERIA

AGGLUTINATE

FORMATION


23/28

Aglutinarea


24/28

Precipitarea

Recia de precipitare se desfoar dup acelai principiu ca ireacia de aglutinare, cu diferena c antigenul este solubil.

La un anumit raport ntre cantitatea de Ag i cea de Ac, legareaantigenului de ctre anticorp duce la formarea de complexeinsolubile.


25/28

Precipitarea

Pentru o concentraie fix a anticorpului, cantitatea de precipitat formatdepinde de cantitatea de antigen.

La concentraii mici de antigen, anticorpul este n exces i se comportunivalent, iar formarea precipitatului este inhibat (efect de prozon).

n zona de echivalen, antigenul i anticorpul sunt prezente n proporiiaproximativ egale i se formeaz o cantitate maxim de precipitat.

La concentraii mari de antigen, acesta se comport univalent, excesulsu nepermind formarea unei reele mari, insolubile de precipitat.


26/28

Ag is soluble

Precipitation in:semi-solid medium (gel)visual determinationin fluid:instrumental determination

direct determination of precipitates:turbidimetry,

nephelometry

indirect determination of precipitates

by secondary antibody labeled by:

- enzyme: EIA (enzyme immunoassays)

- isotope: RIA (radio immunoassays)

- luminofore: LIA (luminiscence immunoassays)

PRECIPITATION:

PRECIPITATE

FORMATION


27/28

IgM IgG

BACTERIA

AGGLUTINATE

FORMATION

Ag CORPUSCULAR Ag SOLUBLE

PRECIPITATE

FORMATION

1. AGGLUTINATION 2. PRECIPITATION


28/28

Clasificare

Reactia Ag-Ac

n solutie

Tehnicicalitativ

e

Latex-aglutina

re

Tehnicicantitative

Nefelometria

Turbidimetria

n gel

Tehnici calitative

Dublaimunodifuziu

neOUCHTERLO

NY

Imunelectroforeza

Tehnici

cantitative

Imunodifuziunea

radialasimpla

MANCINI

Electroimunoprecipitarea simpla

TehnicaLAURELL

Ag/Ac fixatpe suport

solid

TehnicaELISA

Chemi-luminescen

ta

Documents

LP1 Reactia Antigen-Anticorp Nutritie