MALDI-TOF Mass 의 원리 및 응용(Matrix Assisted Laser Desorption Ionization – Time Of Flight Mass Spectrometry)

+20 kV

LaserSample plate h

VariableGrid

Ground Grid

AH+

1. 시료 (A) 가 과량의 매트릭스 (M) 과 혼합되어 MALDI plate에 건조됨 .

2. 레이저 섬광이 매트릭스 분자들을 이온화함 .

3. 시료분자들이 매트릭스로부터 proton transfer 에 의해 이온화됨 :

MH+ + A M + AH+.

• 매트릭스 는 유기산 (organic acid : M) 종류를 사용• 여기에서는 시료가 protonation 되는 것을 설명하고 있으나 , 물질에 따라 deprotonation 이 쉽게 되어 이온화 되는 경우도 있음 .• 측정되는 질량값은 시료분자 (A)\ 의 분자량 +1 이거나 , 분자량 -1 임

MALDI 시료 플레이트에 준비

가벼운 이온들은 무거운 이온들보다 먼저 검출기에 도착한다 .

Flight Tube (0.5 – 4m)

DetectorIon Source (4 – 25 KV)

TOF 에서 분자 이온들의 분리

Flight TubeDetector

Ion Source

4-25 kV

Reflector (Ion Mirror)

주어진 진공상태의 비행관 (tube) 내에서 이온이 비행할 수 있는 거리를 길게 해주어

분리능 (resolution) 을 향상 되는 디자인

Peptide 등의 정확한 질량 분석이 필요한 Proteomics 응용에 적합함

Reflector (ion mirror) 를 비행관의 끝에 설치하여 이온 비행 방향을 바꾸어 주고 또 하나

의 검출기 (detector) 를 반대편에 설치함 .

이 디자인의 장비로는 응용에 따라 Linear 또는 Reflector 모드로 사용함

Reflector 또는 ion mirror 는 이온발생 부위에서 동일한 질량의 이온들이 초기 에너지 분포 (initial energy spread) 를 갖는 것을 보정하여 분리능을 증가 시킨다 .

Reflector TOF 내 분자이온의 비행

•

2. Target 를 MS 의 고진공 상태 내부로 도입

4. Ions 은 전기장에 의해 가속되어 빈관 내부로 비행함 (fly down)

el Flight tube

1. 시료는 matrix 와 혼합하여 target 에 건조함

High vacuum

Time

High voltage

3. Sample spot 에 laser 를 발사하여 , ions 은 기체상으로 탈착되며시계를 시작하여 배행시간 을 ( time of flight) 측정

20 - 30 kV

5. Ions 은 질량대 전하 (mass to charge) 에 따라 각기 다른 시간 (times) 에 검출기에 도착

시료와 matrix 준비 시료 플레이트를 질량 분석기 내로 주입 레이저로 이온화 이온 분자들이 TOF 내 비행 ( m/z 가 적은 분자들이 더 빨리 비행 )

이온 분자들이 검출기에 도달하는 시간을 측정하여 분자량 측정

분 석 과 정

Compound Concentration0.1 to 10 pmol/µL

10 to 100 pmol/µL

Peptides and proteins

Oligonucleotides

Polymers 100 pmol/µL

Ideal Sample Concentration for MALDI

1 pmole/ul = 10-6M

Matrix 종류 응용Sinapinic Acid Proteins >10kDa

-Cyano-4-hydroxy-cinnamicacid (CHCA)

Peptides<10kDa

2,5-Dihydroxybenzoic acid(DHB)

Neutral Carbohydrates, SyntheticPolymers

Super DHB Proteins, Glycosylated proteins

3-Hydroxypicolinic acid Oligonucleotides

HABA Proteins, Oligosaccharides

Matrix

분자량 측정 : 이온화 과정에서 분자구조가 깨어지지 않아 분자량을 측정가능

큰분자량 물질 분석 : 단백질 , 펩타이드 , DNA, 폴리머 등 분자량이 큰 고분자 물질의 정확한 분자량

측정이 가능함 (> 400 kDa)

혼합물 분석 : 한 종류의 성분이 아닌 몇 종류가 혼재해 있어도 분석이 가능함 ( 예 , 전기영동 한 단백질 sp

ot 분석 - 보통 몇 개 단백질이 혼재 하는 경우도 있음 , 단백질을 protase 에 의해 분해 하여 여러 종류의

펩타이드가 혼재 되어 있는 경우 , 순수분리 이전 합성 DNA oligo ( 합성이 실패된 oligo 도 혼재함 ) 분석

미량분석 : 매우 민감하여 미량의 시료도 분석 가능 함 : 펩타이드 경우 fmol 분석 가능

데이터 분석이 쉬움 : 분자 구조가 깨어 지지 않고 , 보통 다 전하를 (multiple charging) 않으므로 데이터가

다른 질량 분석기에서 보다 단순하여 해석이 용이함

염의 영향이 적음 : 생체단백질 분리에 이용되는 완충용액 , 염 등에 LC/MS 보다 영향을 덜 받음

분석이 신속함 : 시료와 Matrix 섞어 sample plate 에 떨어뜨려 용액을 말리는 시간 ( 약 5~10 분 ), MALDI-

TOF 로 분석하는 시간 (1 분 이내 )

기기 사용 및 유지하기 위한 비용이 저렴 : LC/MS, GC/MS 처럼 질소 또는 아르곤 가스를 사용하지 않고 ,

미량의 Matrix 와 ACN, TFA 등을 이용함으로 시약 비용도 저렴함

사용이 쉬움 : 쉽게 사용법을 배울 수 있고 다양한 응용에 이용됨으로 공동 기기실 장비로 적합

MALDI-TOF 질량분석기의 장점