ESE HOSPITAL LOCAL DE PUERTO ASISPROTOCOLO

PLC-006

FECHA DE ACTUALIZACIONFEBRERO 2014Manual de limpieza y desinfeccin del material que se utilice en el procesamiento de las muestras y/o de los elementos que se reutilicen.

VERSION 015

PAGINA 1 DE 16

INTRODUCCINDurante la rutina detrabajo diario que se realizan en todas las secciones dellaboratorioclnico del Hospital Local de Puerto Ass, se manipulan diferentes tipos de muestras, los cuales pueden contener agentes infecciosos importantes, que requieren ser eliminados antes de descartar los envases respectivos.

Por otro lado, existenmaterialesde laboratorio reusables que requieren posterior a su utilizacin, de una limpieza apropiada, tal que puedan ser utilizados posteriormente.

Es importante recordar que al realizar cualquierprocedimientode limpieza y desinfeccin, se deben tener presente las precauciones universales, los equipos de bioseguridad requeridos y considerar TODAS las muestras como de altoriesgo.

DEFINICIONESEsterilizacin:Procesoque destruye toda forma de vida microbiana. Un objeto estril (en sentido microbiolgico) est libre de microorganismos vivos.

Desinfeccin:Es la destruccin, inactivacin o remocin de aquellos microorganismos que pueden causar infeccin u ocasionar otros efectos indeseables; la desinfeccin no implica necesariamente esterilizacin.

Desinfectante: Agente usualmente qumico, que mata las formas en crecimiento de los microorganismos, pero no necesariamente las esporas. El trmino se refiere a sustancias utilizadas sobre objetos inanimados.

Antisptico: Sustancia que impide el crecimiento o laaccinde los microorganismos, ya sea destruyndolos o inhibiendo su crecimiento y actividad. Se aplica sobre superficies corporales.

Germicida: Agente que mata a los microorganismos, pero no necesariamente a sus esporas.

Bactericida: Agente que mata a lasbacterias.

Bacteriosttico: Agente que inhibe el crecimiento de las bacterias, mientras permanece en contacto con ellas.

Fungicida: Agente que mata loshongos.

FACTORES QUE INFLUYEN EN LAVELOCIDAD DE DESTRUCCIN DE LOS MICROORGANISMOS

TemperaturaLas temperaturas elevadas tienen efectos dainos sobre los microorganismos y se debe tener en cuenta que cuando, adems de latemperatura, tambin se utiliza un agente antimicrobiano, los incrementos en la temperatura aceleran la destruccin de los microorganismos. Por ejemplo,la muertede una suspensin bacteriana por fenol es mucho ms rpida a 42C que a 30C.

Tipo de microorganismosLas especies de microorganismos difieren en su susceptibilidad a los agentes fsicos y qumicos. En las especies formadoras de esporas, lasclulasvegetativas son mucho ms susceptibles que las formas esporuladas.

Estado fisiolgico de las clulasElestadofisiolgico de los microorganismos puede influenciar la susceptibilidad a un agente antimicrobiano. Las clulas jvenes, metablicamente activas, son ms fcilmente destruidas que las clulas viejas cuando el agente acta interfiriendo con elmetabolismo.

AmbienteLas propiedades fsicas y qumicas del medio o sustancia donde se encuentran los microorganismos, tambin tienen una profunda influencia sobre laeficaciade la destruccin microbiana, por ejemplo, el calor es mucho ms eficaz en materialescidosque en materiales alcalinos. La consistencia del material influye notablemente en la penetracin del agente. La presencia de material orgnico puede reducir significativamente la eficacia de un agente qumico, ya sea inactivndolo o protegiendo de l a los microorganismos si estn presentes.

LIMPIEZA DE MATERIAL REUSABLE NO CONTAMINADO

La limpieza se define como el proceso de remover, a travs demediosmecnicos y/o fsicos, el polvo, la grasa y otros contaminantes de las superficies, equipos, materiales, personal, etc. Este proceso, junto con un adecuado proceso de desinfeccin, es indispensable para controlar la presencia de los microorganismos en elambiente.

El primer paso del proceso de desinfeccin es la limpieza. La limpieza remueve restos de tejido, moco,sangre, etc., que podran interferir con la accin del desinfectante.Para realizar una limpieza adecuada se deben considerar el tipo de accin del agente utilizado (remocinmecnica, disolucin o detergente), las condiciones requeridas para aplicar la solucin limpiadora y eltiempode contacto necesario para que sta ejerza su efecto.Los instrumentos con partes removibles debern desensamblarse de acuerdo con las instrucciones del fabricante, para asegurarse que todas las superficies se expondrn al procedimiento de limpieza.

Aproximadamente 99.8% del material orgnico puede ser removido con una limpieza meticulosa. La limpieza puede ser acompaada de lavadomanualo mecnico. Debe haber en el laboratorio recipientes paraproductospotencialmente infectados:

Vasijas de un solo uso para recibir portaobjetos, pipetas Pasteur y pequeos artculos a desechar.

Vasijas altas para pipetas graduadas (reusables).

Bolsas deplsticopara materiales combustibles tales como cajas para muestras y envoltorios que puedan estar contaminados.

Todos estos recipientes deben ir a la seccin de limpieza y esterilizacin para el tratamiento final y esterilizacin de aquellos potencialmente contaminados.

TRATAMIENTO Y ELIMINACIN DE MATERIALES POTENCIALMENTE CONTAMINADOSEn primer lugar, todo material " sucio " de laboratorio, deber considerarse como de alto riesgo con el potencial de transmitir infecciones. Por lo que se deben tomar las medidas adecuadas en su manejo y descontaminacin.

Existen tresmtodosprcticos para el tratamiento de los materiales de laboratorio desechados y de los desechos contaminados:

La esterilizacin por autoclave.

La incineracin ( no utilizada en los laboratorios )

La desinfeccinqumica.

La eleccin se realiza atendiendo a lanaturalezade los materiales; si es desechable o recuperable y, en este ltimo caso, si se ve afectado por el calor. Con ciertas excepciones, ninguno de estos mtodos excluye a los dems. La desinfeccin sola es aconsejable nicamente para las pipetas graduadas recuperables.

Materiales de vidrio contaminados

El tipo de lquido o polvos de lavado que se utilice depender de la dureza delaguasuministrada y delmtodode lavado. Deben tenerse en cuenta las recomendaciones de varios fabricantes de detergentes de laboratorio. Un requisito previo es un buen aporte de agua destilada o desionizada.

Si se realiza el lavado a mano, son necesarias piletas dobles, para el lavado y para el aclarado posterior y adems, cuencos de plstico o de acero inoxidable para el aclarado final en agua destilada.El aguadestilada de alambiques no revestidos, independiente de la conduccin de vapor, es raro sea satisfactoria para el trabajo bacteriolgico. Latecnologamoderna tiene a disposicin maquinas lavadoras automatizadas para ste fin. Los revestimientos de goma de los tapones a rosca deben separarse y lavarse por separado los revestimientos y los tapones y unirlos despus. Son tiles para esto los coladores o tamices fabricados de polipropileno.

El material de vidrio nuevo, excepto el fabricado de borosilicato o material similar, puede requerir neutralizacin. Cuando se esterilizan al autoclave lquidos en tubos o frascos de vidrio sdico puede liberarse lcali y alterar elpH. La inmersin durante varias horas en cido clorhdrico al 2-3% es por lo general suficiente, aunque es conveniente comprobar unamuestrallenndolos de agua destilada neutra ms unas gotas de un indicador apropiado y esterilizndolos en el autoclave.

METODOS DE DESINFECCIN Y ESTERILIZACIN

Mtodos Fsicos:

Calor Hmedo (Ej. Autoclave). Calor Seco (Ej. Horno). Radiaciones (Ej. Ultravioletas). Filtracin (Ej. Filtros Millipore ).

Mtodos Qumicos:

Antispticos (Ej.Alcohol). Desinfectantes / Esterilizantes (Ej. Cloro).

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LOS MTODOSMtodos Fsicos:

Calor Hmedo: Autoclave

El Autoclave es el aparato ms comnmente utilizado en los laboratorios para esterilizar cultivos ysolucionesque no se desnaturalicen a temperaturas mayores a 100C. Una temperatura de 121 C (15 Lbs. de presin) con un tiempo deexposicinde 15 minutos sirve para destruir microorganismos, incluso los formadores de esporas.

Ventajas del calor hmedo

Rpido calentamiento y penetracin. Destruccin de bacterias y esporas en corto tiempo. No deja residuos txicos. Hay un bajo deterioro del material expuesto. Econmico.

Desventajas del Calor Hmedo

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua. Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metlicos.

Materiales que se pueden esterilizar con vapor

Material textil Material de vidrio Material de goma Instrumental quirrgico de acero inoxidable Soluciones acuosas Todo aquel material cuyo fabricante certifique pueda ser esterilizado por vapor.

Materiales que no se pueden esterilizar con vapor

Sustancias oleosas Sustanciasgrasas Polvos Instrumental quirrgico cromado o niquelado Artculos elctricos sin cobertura especial Todo material que no tolera la exposicin al calor y a la humedad.

Calor Seco: Horno

Todos los microorganismos son susceptibles en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca en ellos coagulacin y desnaturalizacin de sus protenas. La efectividad del calor como mtodo de esterilizacin depende de:

Temperatura Tiempo de exposicin

La estufa de esterilizacin (Horno), es el artefacto utilizado en los laboratorios para esterilizar por calor seco. Se requiere mayor temperatura y tiempo de exposicin que el autoclave. La temperatura vara entre 120 y 180C, requirindose distintos tiempos de exposicin. A 140C se necesitan por lo menos 5 horas de exposicin, mientras que a 160C se requieren al menos 2 horas de exposicin.

Ventajas del Calor Seco

No es corrosivo parametalese instrumentos. Permite la esterilizacin de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no voltiles.

Desventajas del Calor Seco

Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo, debido a la baja penetracin del calor.

Materiales que pueden esterilizarse por calor seco

Instrumental quirrgico cromado- Materiales de vidrio,aluminioo porcelana- Aceites, parafina, sustancias grasas, vaselina- Polvos (talco).

Materiales que NO se pueden esterilizar por calor seco

Material textil (algodn, sedas, lino, etc.) Gomas - Materiales sintticos - Todo material que se altere a la temperatura trabajo.

Temperatura

La temperatura de esterilizacin por Calor Seco deber estar entre 160 C 170 C.

Tiempos

El tiempo de exposicin del material se determina mediante la correspondiente validacin del ciclo. El material a esterilizar se deber cargar con el esterilizador fro, teniendo en cuenta las siguientes recomendaciones: Cada unidad deber quedar separada de las vecinas. Los materiales no debern estar en contacto con las paredes, piso y techo del esterilizador. La carga del esterilizador ser homognea y no deber superar el 80% de la capacidad total de la cmara

Etapas del ciclo de esterilizacin por calor seco

Colocar el material dentro del Esterilizador Encender el Esterilizador Verificar que los instrumentos de control de ciclo, tiempo y temperatura se encuentren en la posicin correcta Esperar hasta que losinstrumentos de medicinregistren la temperatura seleccionada para el ciclo Cuando se alcance la temperatura seleccionada, se comenzar a descontar el tiempo de esterilizacin Cumplido el tiempo de exposicin se apagar el Esterilizador La descarga del Esterilizador se efectuar una vez que el material se haya enfriado

Precauciones

Durante el ciclo de Esterilizacin no deber abrirse la puerta del Esterilizador porque ello implicara abortar el ciclo, debiendo en este caso recomenzarlo.

Otros agentes fsicos:

Radiaciones ionizantes (rayos Gamma) Luzultravioleta Filtracin (Filtros Millipore ) Ultrasonido.

Mtodos Qumicos:

La efectividad de estos agentes depende de las condiciones bajo las que actan:

Concentracin: vara con el tipo de agente y demicroorganismo, pues una misma concentracin del agente puede producir un efecto diferente en distintos microorganismos.

Tiempo: Los microorganismos no son susceptibles a un agente en la misma forma, por lo que no todos los microorganismos mueren al mismo tiempo.

pH: Determina el grado de disociacin y la efectividad del agente qumico, pues a menor disociacin, mayor permeabilidad y mayor efectividad.

Listado de Desinfectantes (agrupados por su radical qumico)

Compuestos Fenlicos: Fenoles Cresoles

Alcoholes: Etlico Isoproplico

Halgenos: Yodo Cloro

Oxidantes: Perxido de hidrgeno Permanganato de potasio

Colorantes: Azul de metileno Giemsa Acridina

Metales Pesados: Bicloruro de mercurio Nitrato de plata

Vapores yGases: Formaldehido (2 5 %) Ozono (O3) Oxido de etileno Glicol.

cidos: cido actico (1%) cido brico

RECOMENDACIONES GENERALES PARA EL USO DE LOS DESINFECTANTES

No deben mezclarse en un mismo recipiente productos antispticos o desinfectantes de distinta composicin. No se debe modificar la concentracin establecida para cada procedimiento. Nunca se deben tapar utilizando cubiertas de metal, algodn, gasa, corcho o papel. Usar la tapa original. Una vez que se vierte el contenido del desinfectante o antisptico, no deben retornarse a su envase original. Nunca debe llenarse un envase semivaco a partir de otro. Las diluciones deben hacerse a la temperatura, y segn el procedimiento indicado por el fabricante. Deben almacenarse en reas secas, ventiladas y protegidas de la luz. Vigilar y controlar la fecha devencimientode los antispticos y desinfectantes

Seleccin de un desinfectante

Tipo y cantidad aproximada de microbios. Tipo y cantidad de materia orgnica presente. Tiempo de contacto. Tipo de superficie a ser desinfectada. Descripcin de la fecha de eficacia e instrucciones de su uso. Seguridad y aceptabilidad ambiental delproducto. Buena actividad residual. Costos. No necesariamente lo mejor es lo ms costoso.

LOS TIPOS DE GERMICIDAS Y SUS MECANISMOS DE ACCIN

Inorgnicos

Metales: Los ms efectivos son elmercurio, plata, cobrey zinc. Actan inactivando las protenas celulares al combinarse con ellas. Entre los compuestos demercurioque se emplean como antispticos en heridas superficiales de lapiely mucosas estn el mercurocromo (mercromina) y el mertiolato. Entre los compuestos deplatautilizados como antispticos est el nitrato de plata (AgNO3). Entre los compuestos decobrese encuentra el sulfato de cobre (CuSO4) que se utiliza como algicida en los recipientes abiertos que contienen agua. Los compuestos dezinctambin son fungicidas por lo que se utilizan para tratar el pie de atleta

cidos y lcalis: Actan alterando la permeabilidad y coagulando las protenas. En general los cidos son ms eficaces que los lcalis. Dentro de estos compuestos se encuentran elsulfrico(H2SO4),ntrico (HNO3),hidrxido sdico(NaOH) ehidrxido potsico(KOH).

Compuestos inorgnicos oxidantes: actan oxidando los componentes de la membrana yenzimas. Elaguaoxigenada (H2O2) al 6% (20 volmenes) se utiliza como antisptico en pequeas heridas de la piel.

Halgenos: Los halgenos especialmente el cloro y el iodo son componentes de muchos antimicrobianos. Los halgenos son agentes fuertemente oxidantes por lo que son altamente reactivos y destructivos para los componentes vitales de las clulas microbianas. El iodo es un antisptico y el cloro un desinfectante.

Cloro: Lamuertede los microorganismos por accin del cloro se debe en parte a la combinacin directa del cloro con las protenas de las membranas celulares y los enzimas. El cloro es un desinfectante que actan sobre protenas y cidos nucleicos de los microorganismos. El producto clorado ms utilizado en desinfeccin es el Hipoclorito de sodio (NaOCl), que es activo sobre todas las bacterias, incluyendo esporas. El hipoclorito de sodio al 1% se puede utilizar como desinfectante domstico y hospitalario, y de hecho es el ms barato, pero tambin el ms efectivo. La nica desventaja reconocida es su relativa toxicidad provocando reacciones alrgicas en algunas personas. Aparte se describen los sntomas.

Concentracin del cloro puro casero: 5.25 %Concentracin til : 1 al 2 %

El Cloro es un biocida de amplio espectro barato y eficaz, que se utiliza en disoluciones de 500- 5000 ppm para desinfeccin medioambiental Sin embargo, una vez disuelto, los tomos de cloro tienen una vida media muy corta y para que el formulado tenga efecto, debe ser preparado in situ antes de su utilizacin.

NOTA: Si la solucin comercial de Hipoclorito de Sodio es al 5.25%, la solucin al 1% se prepara mezclando 1 litro de solucin comercial y 4.25 litros de agua.

Tambin se puede utilizar el siguiente mtodo:

Ejemplo: Tenemos Cloro comercial al 5% y deseamos preparar un litro al 0.5% (5000 ppm).

FORMULA:

CD x VDV = -------------- CC

VD: Volumen deseado.CD: Concentracin deseada.CC: Concentracin conocida.

0.5% x 1000 c.c.V = -------------------- = 100 c.c. 5%

Por tanto, se debe agregar 100 c.c. de hipoclorito de sodio al 5% a 900 c.c. de agua para tener 1000 c.c. de una dilucin al 0.5%.Compuestos de amonio cuaternarios:

Son agentes desinfectantes por su accin detergente, rompen la membrana citoplasmtica debido a que disuelven las capas lipdicas, adems desnaturalizan las protenas. Son detergentes catinicos eficaces contra bacterias vegetativas y algunos hongos, aunque no contra las mycobacterias ni esporas. Son inactivados por las protenas y por una diversidad de materiales naturales yplsticos, por los detergentes no inicos y por el jabn. Su utilizacin en el laboratorio es por tanto limitada, aunque tienen la clara ventaja de ser estables y de no corroer los metales. Se emplean generalmente a diluciones de 1-2% para la limpieza de superficie e instrumentos.

Los compuestos de amonio cuaternario no son txicos y son inofensivos para la piel y los ojos. Ejemplo: Cetrimida, Cloruro de benzalconio, etc.

Iodo: El mecanismo mediante el cual el iodo ejerce su accin antimicrobiana es debido a su accin oxidante. El iodo se puede utilizar como antisptico bajo dos formas:

Tintura de iodo, es una solucin alcohlica (tintura) de iodo (I2) ms ioduro potsico (KI) o ioduro sdico (NaI).

Iodforos, sonmezclasde iodo (I2) con compuestos que actan como agentes transportadores y solubilizadores del iodo. Por ejemplo, la povidona iodada (Betadine) es un complejo de iodo y polivinil pirrolidona (PVP).

Los agentes alquilantesactan aadiendo pequeas cadenas de tomos decarbonoa las enzimas, que como consecuencia quedan inactivadas, lo que ocasiona la muerte de las clulas. El formaldehido, la formalina y el glutaraldehdo son algunos de estos compuestos.

El xido de etilenoes un compuesto gaseoso que se utiliza como agente esterilizante para el tratamiento de material termosensible y objetos voluminosos que no pueden ser esterilizados mediante otrossistemas. Sin embargo, es un compuesto muy txico para la especie humana y su uso ya ha sido reemplazado por otros ms seguros.

Orgnicos

Alcoholes: Losalcoholesactan desnaturalizando las protenas, disolviendo las capas lipdicas y como agentes deshidratantes. Se recomienda la utilizacin del Alcohol Etlico, no desnaturalizado, o Alcohol Isoproplico al 70%. La accin deshidratadora de ambos alcoholes al 95% limita suutilidad, ya que las protenas deshidratadas resisten la desnaturalizacin. Eletanolal 70% se usa como antisptico de la piel y como desinfectante en los termmetros clnicos orales y algunos instrumentos quirrgicos. El etanol y el isopropanol son utilizados como desinfectantes y antispticos clnicos. Tomar en cuenta que el alcohol etlico al 70% tiene un efecto bacteriosttico y que al 95% su efecto es bactericida. Su actividad cae bruscamente en concentraciones menores al 50%. Las bacterias sometidas a la accin de alcohol concentrado sufren destruccin de la pared celular, permitiendo el paso de contenido intracelular y componentes de la pared celular al medio externo (endotoxinas). Las bacterias sometidas a la accin de alcohol al 70% sufren una deshidratacin menos violenta, conservando la integridad celular. El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se usa en la desinfeccin de superficies y artculos no crticos. El alcohol tiene la ventaja de no ser corrosivo. El alcohol Isoproplico es hasta cierto grado ms germicida que el Etlico, pero es altamente deshidratante.

Las desventajas de los alcoholes en los equipos son que daan la cubierta de los lentes, tienden a alterar y endurecer el material de goma y plstico, se inactivan en presencia de materia orgnica y se evaporan rpidamente. Esto condiciona que no se deben usar alcoholes como mtodo de desinfeccin de alto nivel ni para materiales en inmersin.

Fenol y compuestos Fenlicos: Una solucin acuosa al 5% defenolmata rpidamente a las clulas vegetativas de los microorganismos. Sin embargo, las esporas son mucho ms resistentes al fenol. Debido a que el fenol es txico y tiene un olor desagradable ya casi no se usa como desinfectante o antisptico, siendo reemplazado porcompuestos fenlicosque son sustanciasderivadasdel fenol menos txicas y ms activas frente a los microorganismos. Lysol es una mezcla de compuestos fenlicos que se utiliza para desinfectar objetos inanimados como lossuelos, paredes y superficies. El fenol y compuestos Fenlicos actan alterando la permeabilidad de la membrana citoplsmica as como desnaturalizando protenas. El hexaclorofeno es un compuesto Fenlicos que ha sido reemplazado por la clorhexidina, menos txica para la especie humana.

BIBLIOGRAFA

The Pharmacopeia of the United States of America. Cap 1211Sterilization and Sterility.Assurance of Compendial Articles. 31 Edition. Rockville: USP; 2008.

Favero MS and Bond WW.Chemical Disinfection of Medical and surgical Materials. In SS, Block (Ed) Sterilization and Preservation (4th Edition) Philadelphia Lea & Febiger, 1991 Pg 617 641

Rowe D PhD.Principles of Sterilization in: Disinfection Sterilization and Antisepsis in Health Care. Edited by W. Rutala. 1997

Rutala WA Apic.Guideline for selection and use of disinfectantes. Am. J. Infect. Control 1990: 18:99.

Rutala WA Gergen MFWeberDJ.Sporicidal activity of chemical sterilants used in hospitals. Infect Control Hosp. Epidemiol 1993; 15: 36-39.

Caballero E.Manual de bioseguridad en microbiologa. 2002.http://www.monografias.com

Marimargaret Reichert, Jack H Young.Sterilization Technology for the Health Care Facility. Second Edition 1997. Chap 5-11

Gua para preparar y esterilizar paquetes envueltos. Especialistas en Esterilizacin y envases. Mxico

Elaborado por:Revisado por:Aprobado por:

ngela RosalesBacterilogaWilliam MartnezCalidadMarino RincnGerente.