Meteri Sse

7/29/2019 Meteri Sse

1/5

Spektrofotometri UV-Vis

Spektrofotometri UV-Vis adalah metode analisi s spektroskopi k yang memakai sumber

radiasi elektromagnetik UV dekat (190-380 nm) dan sinar tampak (380 -780 nm) dengan

memakai instrumen spektrofotometer. RadiasiUV jauh (100190 nm) tidak dipakai, sebab pada

daerah tersebut, udara jugamengalami absorbs radiasi (Tim Penyusun, 2008).Radiasi di daerah

UV/Vis diserap melalui eksitasi elektron-elektron yangterlibat dalam ikatan-ikatan antara atom-

atom pembentuk molekul sehinggaawan elektron menahan atom-atom bersama-sama

mendistribusikan kembaliat om -a to m it u se nd ir i da n or bi ta l yan g di te mp at i ol eh

e l ek t ron -e l ek t r on pengikat tidak lagi bertumpang tindih (Watson, 2007).Ketika sinar

melewati suatu senyawa, energi dari sinar digunakan untuk mendorong perpindahan elektron dari

orbital ikatan atau orbital non-ikatan kesalah satu orbital anti-ikatan yang kosong (Clark, 2007).

Perpindahan/lompatanelektron yang mungkin terjadi akibat adanya sinar adalah:Lompatan

yang lebih besar membutuhkan energi yang lebih besar danmenyerap sinar dengan

panjang gelombang yang lebih pendek. Lompatan yangditunjukan dengan tanda panah abu-abu

menyerap sinar UV dengan panjanggelombang yang lebih rendah dari 200 nm (Clark, 2007).

Lompatan yang penting diantaranya adalah lompatan dari orbital pi ikatanke orbital pi anti-

ikatan; dari orbital non-ikatan ke orbital pi anti-ikatan; dandari orbital non-ikatan ke orbital

sigma anti-ikatan. Artinya untuk menyerapsinar pada daerah antara 200 800 nm (pada daerah

dimana spektra diukur),molekul harus mengandung ikatan pi atau terdapat atom dengan orbital

non-ikatan. Perlu diingat bahwa orbital non-ikatan adalah pasangan elektron bebas,misalnya pada

oksigen, nitrogen, atau halogen (Clark, 2007).An a l i s i s ku an t i t a t i f de n gan met ode

spektrofotometri UV-Vis dapatdigolongkan atas tiga macam pelaksanaan

pekerjaan, yaitu: (1) analisis zattunggal atau analisis satu komponen; (2) analisis

kuantitatif campuran duamacam zat atau analisis dua komponen; dan (3) analisis kuantitatif

campurantiga macam zat atau lebih (analisis multi komponen) (Gandjar dan Rohman,2007).

Analisis Komponen Tunggal

Jika absorpsi suatu seri konsentrasi larutan diukur pada panjang gelombang,suhu, kondisi pelarut

yang sama; dan absorbansi masing-masing larutandiplotkan terhadap konsentrasinya maka suatu

garis lurus akan teramati sesuaidengan persamaan A = bc. Grafik ini disebut dengan plot hukum

Lambert-Beer dan jika garis yang dihasilkan merupakan suatu garis lurus maka dapatdikatakan


2/5

bahwa hukum Lambert-Beer dipenuhi pada kisaran konsentrasi yangteramati (Gandjar dan

Rohman, 2007).Cara lain untuk menetapkan kadar sampel adalah dengan

menggunakan perbandingan absorbansi sampel dengan absorbansi baku, atau

denganmenggunakan persamaan regresi linier yang menyatakan hubungan konsentrasi baku

dengan absorbansinya. Persamaan kurva baku digunakan untuk menghitung kadar dalam sampel

(Gandjar dan Rohman, 2007).

Analisis Dua Campuran secara Bersama-sama

Spektrofotometri merupakan metode relatif (bukan metode absolut), artinya perlu senyawa baku

sebagai pembanding. Pengukuran absorbansi sampel maupun baku untuk campuran beberapa

senyawa (multicomponent ) dapat diukur pada beberapa maksimum masing-masing senyawa.

Selanjutnya konsentrasi masing-masing senyawa dihitung berdasarkan persamaan simultan

sederhana (SSE = simple simultan equation). Determinasi secara simultan akan diasumsikan

pada total absorbansi pada masing-masing panjang gelombang yang dijumlahkan (Khopkar,

2003).

Kadar larutan campuran dua zat dapat ditentukan dengan metode spektrofotometri tanpa harus

dipisahkan lebih dahulu. Kedua zat harus memiliki panjang gelombang maksimum yang tidak

berimpit. Absorpsi larutan sampel atau campurannya pada panjang gelombang pengukuran

merupakan jumlah absorpsi dari masing-masing zat tunggalnya. Kadar masing-masing zat

ditentukan menggunakan metode simultan (Pitri Susanti, dkk, 2011). Jika absorbansi suatu seri

konsentrasi larutan diukur pada panjang gelombang, suhu, kondisi pelarut yang sama, dan

absorbansi masing-masing larutan diplotkan terhadap konsentrasinya, maka suatu garis lurus

akan teramati sesuai dengan persamaam A=abc. Grafik ini disebut dengan plot hukumLambert-

Beer dan jika garis yang dihasilkan merupakan suatu garis lurus makadapat dikatakan bahwa

hukum Lambert-Beer dipenuhi pada kisaran konsentrasiyang diamati (Gandjar dan Rohman,

2007).Bila diinginkan dua buah senyawa secara bersama-sama secaraspektrofotometri, maka

dapat dilakukan pada dua panjang gelombang yang mana masing-masing komponen tidak saling

mengganggu atau gangguan darikomponen yang lain paling kecil. Dua buah kromofor yang

berbeda akan mempunyai kekuatan absorbsi cahaya yang berbeda pula pada satu daerah panjang

gelombang. Pengukuran dilakukan pada masing-masing larutan padadua panjang gelombang

sehingga diperoleh dua persamaan hubungan antara


3/5

absorbansi dengan konsentrasi pada dua panjang gelombang, akibatnya konsentrasi masing-masing

komponen dapat dihitung. Mula-mula dipilih panjang gelombang yang mana perbandingan absorptivitas

maksimum, yaitu :

.Gambar 2. Spektra dua buah senyawa, senyawa I dan senyawa II

Absorban jumlah suatu campuran beberapa senyawa yang mengabsorpsi pada masing-masing panjang

gelombang merupakan jumlah absorban masing-masingnya. Pada campuran dua komponen akan terlihat

absorban yang diukur pada 1serta 2 merupakan jumlah dari absorban komponen tunggal

pada panjang gelombang tersebut. Hal ini memungkinkan untuk pemeriksaankemurnian senyawa obat

secara spektrofotometri serta penentuan campuran beberapa komponen (Rot dan Blaschke, 1985).Dari

hukum Lambert-Beer, dapat diketahui bahwa

absorbansi berbandinglurus dengan absortivitas ( a ), tebal kuvet ( b ), dan konsentrasi (c). Supaya nilai b

tetap maka selama pengukuran digunakan kuvet yang sama.

Absorbansi senyawa 1, A1=a1b1c1......................(1)

Absorbansi senyawa 1, A1=a2b2c2......................(2)

Selama kuvet yang digunakan sama, maka nilai b tetap sehingga persamaan 1 dan 2 menjadi persamaan 3

dan 4.

A1=a1c1.......................(3)

A2=a2c2.......................(4)


4/5

Pengukuran campuran 2 senyawa dilakukan baik pada panjang gelombang 1(1) maupun pada panjang

gelombang 2 (2), oleh karena itu absorbansi padakedua panjang gelombang tersebut merupakan jumlah

dari absorbansi senyawa1 dan absorbansi senyawa 2, yang secara matematis dapat dituliskan

sebagai berikut:

A1= (a1c1)1+ (a2c2)2.......................(5)

A2= (a1c1)2+ (a2c2)1.......................(6)

Keterangan: Nilai a (absortivitas) dapat juga diganti dengan absorptivitasmolar. Yang mana:

C1: konsentrasi senyawa 1

C2: konsentrasi senyawa 2

(a1) : absorpsivitas senyawa 1 pada panjang gelombang pertama

(a2) 2: absorpsivitas senyawa 1 pada panjang gelombang kedua

(a2) 1: absorpsivitas senyawa 2 pada panjang gelombang pertama

(a2) 2: absorpsivitas senyawa 2 pada panjang gelombang kedua

A1: absorbansi senyawa campuran pada panjang gelombang pertama

A2: absorbansi senyawa campuran pada panjang gelombang kedua

(Gandjar dan Rohman, 2007).

Data spektra UV-Vis secara tersendiri tidak dapat digunakan untuk identifikasi kualitatif

obat atau metabolitnya. Sedangkan pada aspek kuantitatif, suatu berkas radiasi dikenakan pada

cuplikan (larutan sampel) dan intensitassinar radiasi yang diteruskan diukur besarnya. Radiasi

yang diserap oleh cuplikan ditentukan dengan membandingkan intensitas sinar yang diteruskan

dengan intensitas sinar yang diserap jika tidak ada spesies penyerap lainnya.Intensitas atau

kekuatan radiasi cahaya sebanding dengan jumlah foton yang melalui satu-satuan luas

penampang per detik. Besarnya intensitas energi REM yang diabsorpsi proporsional dengan

jumlah kromofornya (konsentrasinya).

Gandjar, Ibnu Gholib dan Abdul Rohman. 2007.Kimia Farmasi Analisis, PustakaPelajar :

Yogyakarta


5/5

Documents

Meteri Sse