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7/23/2019 Metoso de cultivo "Microbiologia"
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CULTIVOS DEPREPARACIONDE MEDIOS
1
NIVERSIDAD NACIONAL DE H ANCAVELICA
FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERA
ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL DE INGENIERA AMBIENTAL Y
SANITARIA
TEMA
:
ASIGNATURA :
MICROBIOLOGIA
SECCION :A
DOCENTE :
ESTUDIANTES:
ACUA MONTAEZ NOEMI
ANCCASI ESTEBAN CINTHIA
APUMAYTA HUAMANI ISHER
ARECHE QUISPE RENZO
CENTENO SOTO SECARIO
DIAZ ERNANDEZ IVAN
LEDESMA GIRALDEZ WILDER
ORTIZ ZUARNABAR RA AEL
RAMOS GOMEZ EDITH
ZEBALLOS APARCO ERNESTO
HUANCAVELICA !"#
GRUPO $: CAZADORES DE MCROBIO
NOTA
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ESTE PRESENTE TRABAJO LE DEDICAMOS A DIOS POR LA VIDA QUE NOS DA YPARA ENSEAR.
CULTIVOS DEPREPARACIONDE MEDIOS
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NIVERSIDAD NACIONAL DE H ANCAVELICA
PRACTICA N2
INTRODUCCION:
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin de las bacterias, para
observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio, los medios de cultivos son
fuentes nutritivas naturales que se asemejan al nicho ecolgico de los
microorganismos en la cual se desarrollan.
Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de enriquecimiento
que tratan de aumentar el nmero de bacteria existente, si consideramos que se
encuentran en cantidad muy exigua, a la ve que inhiben la flora de asociacin
acompa!ante y de aislamiento "que tienen por fin conseguir una colonia o clon, es
decir, grupo de bacterias procedentes de una sola, con todas sus propiedades#$ Los
medios selectivos son aquellos que poseen algn componente que permite el
crecimiento de una especie bacteriana, car%cter de importancias para su
identificacin, y los diferenciales, aquellos que las diversas especies que hay que
testar alteran de forma distinta, por lo que suelen llevar indicadores "sustancias
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que var&an su coloracin segn el p' del medio# u otros &ndices de reacciones
qu&micas definidas.
(ara estudiar los microorganismos es necesario cultivarlos en los medios
apropiados. La t)cnica y el medio seleccionado dependen de la naturalea de la
investigacin en general se pueden presentar tres situaciones:
*e puede levantar una cosecha de c)lulas de una especie en particular que se tiene.
(uede ser necesario determinara el nmero y tipos de microorganismos
+l objetivo cl%sico del aislamiento es la separacin de los microorganismos en
grupos, que puedan identificarse siguiendo los principios de la microbiolog&a.
"Ledesma, -/#
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NIVERSIDAD NACIONAL DE H ANCAVELICA
I% OB&ETIVO: OB&ETIVO GENERAL
(roporcionar al estudiante el conocimiento cient&fico y las habilidades
pr%cticas de los m)todos y t)cnicas utiliados en 0icrobiolog&a para el
aislamiento e identificacin de los principales agentes patgenos para el
hombre a partir de muestras.
OB&ETIVO ESPECI ICO
(racticar el manejo as)ptico de medios de cultivo. 1prender a esteriliar el asa bacteriolgica. 2onocer las diferentes t)cnicas de siembra. 3ealiar la transferencia "repique# de bacterias desde un cultivo puro
"cepa# a diferentes tipos y medios de cultivo.
4rabajar con una muestra real. 0arcar "identificar# adecuadamente los medios de cultivo. 1prender a tomar una muestra de la pseudomona putida.
II% FUNDAMENTO TE'RICO:
5e manera general se denomina 6medio de cultivo7 a cualquier material que presenteuna adecuada combinacin de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento
del nmero de c)lulas de una poblacin microbiana. +n los Laboratorios de
0icrobiolog&a se utilia una gran variedad de medios de cultivos para mantener las
cepas, aislar o identificar microorganismos, tienen un uso creciente en
la 8iotecnolog&a y la proteccin medioambiental, por lo que es una necesidad de
mantenerlos de manera que las propiedades que los hacen importantes permanecan
estables.
http://www.ecured.cu/index.php/Biotecnolog%C3%ADahttp://www.ecured.cu/index.php/Biotecnolog%C3%ADa7/23/2019 Metoso de cultivo "Microbiologia"
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Uno de los sistemas m%s importantes para la identificacin de microorganismos es
observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. +l material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el 0edio
de 2ultivo y el crecimiento de los microorganismos es el 2ultivo.
(ara que las bacterias crecan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de ox&geno adecuado, as& como un grado correcto de acide o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.
+l agar es un elemento solidificarte muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. *e lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 9- grados. 2on m&nimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento
de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en )l. La elatina es otro
agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan
su licuacin.
+n los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los
hidratos de 2arbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el
valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. +l suero y la sangre completa se a!aden
para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
+l desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado
por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por
completo al propio medio.
1- DISPONIBILIDAD DE NUTRIENTES ADECUADOS
Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener,
como m&nimo, carbono, nitrgeno, aufre, fsforo y sales inorg%nicas. +n muchos
casos ser%n necesarias ciertas vitaminas y otra sustancia inductoras del crecimiento.
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*iempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o
captadores de electrones para las reacciones qu&micas que tengan lugar.
2iertas bacterias tienen necesidades nutritivas espec&ficas por lo que se a!ade a
muchos medios sustancias como suero, sangre, l&quido asc&tico, etc. ;gualmente
pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio,
magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento,
generalmente de naturalea vitam&nica.
0uy a menudo se a!aden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como
indicadores de ciertas actividades metablicas o bien por sus capacidades de ejercer de
inhibidores selectivos de ciertos microorganismos.
2- CONSISTENCIA ADECUADA DEL MEDIO
(artiendo de un medio l&quido podemos modificar su consistencia a!adiendo
productos como albmina, gelatina o agar, con lo que obtendr&amos medios en estado
semislido o slido.
Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto
de fusin de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.
1ctualmente los medios slidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad,
pero hay tambi)n gran cantidad de medios l&quidos cuyo uso est% ampliamente
extendido en el laboratorio.
3- PRESENCIA (O AUSENCIA) DE OXGENO Y OTROS GASES
ran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera con tensin de ox&geno
normal. 1lgunas pueden obtener el ox&geno directamente de variados sustratos. (ero
los microorganismos anaerobios estrictos slo se desarrollar%n adecuadamente en una
atmsfera sin ox&geno ambiental. +n un punto intermedio, los microorganismos
microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosf)ricas parcialmente anaerobias
"tensin de ox&geno muy reducida#, mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capa de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
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4- CONDICIONES ADECUADAS DE HUMEDAD
Un nivel m&nimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las c)lulas vegetativas microbianas en los
cultivos. 'ay que prever el mantenimiento de estas condiciones m&nimas en las estufas
de cultivo a
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crecimiento microbiano normal del o de los espec&menes inoculados en dichos medios.
+l sistema cl%sico para esteriliar los medios de cultivo es el autoclave "que utilia
vapor de agua a presin como agente esteriliante#.
(odemos decir que la microbiolog&a empiea su verdadero desarrollo como ciencia en
el momento en que se descubre el microscopio y comiena la observacin de los
primeros microorganismos, pero es indudable que la puesta a punto de los medios de
cultivo y la utiliacin del agar como solidificante, marcan dos importantes puntos de
inflexin en su evolucin.
La primera noticia de la utiliacin de medios de cultivo nos llega del miclogo
8refeld, que consigui aislar y cultivar esporas de hongos en medios slidos realiados
a base de gelatina.
*in embargo este sistema no era adecuado para las bacterias "por su menor tama!o# y
no fue hasta el a!o B>B cuando Lister populari un m)todo enfocado al cultivo puro
basado en diluciones seriadas en un medio l&quido.
Cochreali sus investigaciones utiliando en un primer momento rodajas de patata
como soporte nutritivo slido, pero no tard en recurrir al caldo de carne l&quido,
dise!ado por Loeffler, al que, en BB, a!adi gelatina, logrando un medio slido
transparente ideal para la observacin de la morfolog&a macroscpica de las colonias
microbianas.
+n el a!o BB tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiolog&a en relacin
con los medios de cultivo: el m)dico alem%n Dalter 'esse introduce el agar=agar
"polisac%rido extra&do de algas rojas# como solidificante.
+n BB> un ayudante de Coch llamado (etri, comiena a utiliar placas de cristal
planas, que se llaman desde entonces placas de (etri, para sustituir a las cl%sicas
bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.
8eijerincE y DinogradsEy, que desde de BBB realiaron sus investigaciones sobre las
bacterias quimioauttrofas "utiliacin de nitrgeno y aufre sobre todo# tuvieron gran
importancia en el desarrollo de los medios selectivos y de enriquecimiento. 5ise!aron
este tipo de medios de tal forma que su especial composicin qu&mica favorec&a el
http://www.danival.org/gente/koch.htmlhttp://www.danival.org/gente/koch.html7/23/2019 Metoso de cultivo "Microbiologia"
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crecimiento de ciertos tipos de microorganismos que, en funcin de sus procesos
metablicos, eran los nicos capaces de utiliar para su desarrollo ciertos nutrientes
del medio.
III% MATERIALES Y METODOS:3.1. MATERIALES:
MATERIAL
#UNCI$N IMAGEN
MEDIOSDE
CULTIVO
H%&'% * *+ ,*+. / 0.% %* * +%0+.% %'% *+ '*,'. * %'%,*,*'*, %'%+*, ,. * '% +'&*
ASA
BACTERE
OLOGICA
S* *+*% %% %,.%7 %%,%, .%,%,% '8+., (*9*:. .+*9* '** .;%',. * ,,*,'8)*,* +% ,.+'.* * %&%
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EMBUDO
DE
VIDRIO
+l embudo es un instrumento empleado
para
canaliar l&quidos y materialesslidos gran
ulares en recipientes con bocas estrechas.
+s usado principalmente en cocinas,
laboratorios, actividades
de construccin, industria, etc.
(ude ser devidrio,pl%stico.
VASO
PRECIPIT
ADO
Un vaso de precipitados o vaso de
precipitado es un recipiente cil&ndrico de
vidrio fino que se utilia muy comnmente
en ellaboratorio,sobre todo, para preparar
o calentar sustancias y traspasar l&quidos.eneralmente de vidrio pero tambi)n hay
de pl%stico y metal.
PROBETA
MILIMET
RADA
+s un instrumento volum)trico, que
permite medir volmenes considerables
con un ligero grado de inexactitud. *irve
para contener l&quidos.
5e vidrio.
MECHER
O
DE ALCO
HOLO
RON
*irve para calentar sustancias con alcohol
o ron.
5e vidrio o metal.
TUBO DE
ENSAYO
+s un tubo cil&ndrico peque!o utiliado en
la contencin de muestras l&quidas y
tambi)n para calentarla, etc.5e vidrio.
MATRAZ 3ecipiente de cristal donde se meclan las
soluciones qu&micas, generalmente de
forma esf)rica y con un cuello recto y
estrecho, que se usa para contener l&quidos$
se usa en los laboratorios.
5e vidrio.
http://www.monografias.com/trabajos14/propiedadmateriales/propiedadmateriales.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos35/materiales-construccion/materiales-construccion.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos16/industria-ingenieria/industria-ingenieria.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos5/plasti/plasti.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos14/propiedadmateriales/propiedadmateriales.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos35/materiales-construccion/materiales-construccion.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos16/industria-ingenieria/industria-ingenieria.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos11/vidrio/vidrio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos5/plasti/plasti.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos15/informe-laboratorio/informe-laboratorio.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtmlhttp://www.monografias.com/trabajos/alcoholismo/alcoholismo.shtml7/23/2019 Metoso de cultivo "Microbiologia"
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PLACA
PETRI:
La placa de (etri es un recipiente redondo,
de cristalopl%stico,con una cubierta de la
misma forma que la placa, pero algo m%s
grande de di%metro, para que se pueda
colocar encima y cerrar el recipiente,
aunque no de forma herm)tica. +s parte de
la coleccin conocida como Fmaterial de
vidrioG. *e utilia en 0icrobiolog&apara
cultivar c)lulas, observar la germinacin
de las semillas o examinar el
comportamiento de peque!os animales.
ESPTUL
A:La esp%tula es un material de laboratoriopara extraer los reactivos con sumo
cuidado para no contaminar el reactivo.
BALANZA
ANALTIC
A
8alana de laboratorio dise!ado para
medir peque!as masas.
3.2. METODO DE PREPARACION DE MEDIOS
DE CULTIVO:
+n este m)todo utiliamos 9 pasos muy b%sicos que son:
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x=(400ml )(38 gr)
1000ml
x=15.2gr de agar pseudomona .
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Utiliando < m)todos de cultivo de microorganismo para el agar
pseudomonas que son$ incorporacin, por superficie y por estr&a.
3.3. METODO DE CULTIVO DE
MICROORGANISMOS:
3.3.1 SIEMRA POR INCORPORACION: +steriliando nuestra %rea de trabajo con un poquito de ron y fuego libre.
se abre la placa de (etri con mucho cuidado, con un %ngulo peque!o
para evitar el ingreso de las bacterias del aire.
se toma ml de muestra "bacteria (utida en disolucin# y se vierte
sobre una placa de petri.
la superficie del frasco que contiene el agar licuado debe soportar la
mano"estar frio# , para luego agregar este agar nutritivo de
pseudomona" aproximadamente -ml y la mitad de la placa# , sobre el
centro de una placa de (etri que contiene la bacteria en dislocacin y se
tapa,
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poner la placa sobre la mesa previamente esteriliado y hacer los
movimientos de homogeniacin con la mano uno en forma antihorio,
otro en forma horario otra en direccin hacia arriba y hacia abajo.
se procede al rotulado de la palca de (etri con : el nH de masa
nombre de la bacteria
nombre del personal que hace esta siembra
seccion:
invertir las placas de petri e encubar las a Hc por 9 a 9B horas
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luego usaos el m)todo de la observacin y se describe las formas de
colonias que crecieron sobre el agar.
3.3.2. SIEMRA POR SUPER!ICIE: 5esinfectar el %rea de trabajo con la ayuda del ron de J>H y con el mechero
prendido en esa %rea.
1l lado del mechero se realiara el cultivo de los microorganismos.
*e le agrega a la placa de (etri el caldo de cultivo hasta la mitad, y esperarhasta que se solidifique, pero siempre al lado de la flama para que no se
contamine el ambiente.
+stando ya solidificada agregar -. ml de la muestra 6solucin madre7 con laayuda de la pipeta.
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Limpiar el aa drigalEy con la ayuda del ron y llevarlo al mechero para as&desinfectar el material.
Una ve desinfectada, la aa se le enfr&a en la parte de la tapa de la placapara as& no da!ar a las bacterias.
Ia enfriada la aa, se esparce por toda la placa a las bacterias.
2on el fin de que las bacterias se reproducan aliment%ndose de todo elnutriente que se encuentran en toda la superficie.
3otular todas las muestras "placa de (etri#:
el nH de masa
nombre de la bacteria
nombre del personal que hace esta siembra
seccion:
invertir la placa de (etri e ;ncubarlas a H grados en la mufla por 9h o 9Bh.
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luego usaos el m)todo de la observacin y se describe las formas de colonias
que crecieron sobre el agar.
3.3.3. SIEMRA POR ESTRIA: +steriliando nuestra %rea de trabajo con un poquito de ron y fuego libre.
se abre la placa de (etri con mucho cuidado, con un %ngulo peque!o
para evitar que entren las bacterias del aire y contaminen nuestro
resultado.
se vierte sobre una placa de (etri el medio de cultivo "agar nutritivo de
pseudomona# previamente licuado, es decir sin ninguna acumulacin de
grumos, aproximadamente la mitad de la placa de (etri "- ml de
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cantidad#, y se deja enfriar para luego poder solidificarse "condensarse o
fundirse# segn baje la temperatura.
*e realia el proceso de esteriliacin de la aa bacteriolgica de la
siguiente manera.
se sumerge la punta de la aa bacteriolgica en un poco de ron para
luego ser calentada al calor del mechera de forma verticalmente, es
decir formando un %ngulo de J-H hasta que este de color rojo brillante.
se toma con la otra mano el tubo de ensayo que esta contenido de la
bacteria (utida en solucin y con la otra enfriar la punta de la aa
bacteriolgica en las paredes del tubo"bacteria# para luego sumergirlo y
sacar "cargar# una pel&cula de bacteria (utida
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IV% RESULTADOSK. 5e las die siembras que realiamos solo unos el - M de las placas se reprodujeron
y Los resultados obtenidos se explican en el siguiente recuadro:
MTODOS DE CULTIO DE MICROORGANISMOS1 *iembra por
;ncorporacin
(or este m)todo
obtuvimos
menos resultados
solo de < se
reprodujeron.
2 *iembra en
superficie
(or este m)todo
solo de < las
cuales nos
indican que es
m%s preferible.
3 *iembra por estr&a (or este m)todo
obtuvimos
mejores
resultados < de