MICROBIOLOGIE (partie théorique) · Spécialité: Microbiologie et Hygiène Alimentaires et Biotechnologie Fonctions: Professeur de l’Enseignement Supérieur (ex. IAV Hassan II;

MICROBIOLOGIE(partie thorique)

Formationau profit de

GSK, Rabat25 & 26 avril 2008

2

Donnes techniques

Partie thorique suivie de Travaux Pratiques

Document pdagogique; projection Data Show

Discussion sur cas concrets Evaluation de lanimateur par les

participants Evaluation chaud des participants Dure: 2 jours Programmation: 25 & 26/04/2008

3

L animateur

Nom: Abdelrhafour TANTAOUI ELARAKI Spcialit: Microbiologie et Hygine

Alimentaires et Biotechnologie Fonctions: Professeur de lEnseignement Suprieur

(ex. IAV Hassan II; SUPAGRO) Directeur de SUPAGRO Animateur TP: Prof. Hamid AMAROUCHE

4

Objectifs Connaissance des

microorganismes et de leurs principales proprits;

Connaissance des exigences de la croissance microbienne;

Connaissance des principes de la culture et de la recherche des microorganismes dans les produits pharmaceutiques.

5

Plan gnral

o 1- Nature biologique des microbeso 2- Contamination des produits par les

microbeso 3- Croissance des microorganismeso 4- Lutte contre les microorganismes

indsirableso 5- Principes des techniques de

recherche et de numration

6

Plan gnralo 1- Nature biologique des 1- Nature biologique des

microbesmicrobeso 2- Contamination des produits par les


indsirableso 5- Principes des techniques de


7

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbes

Dfinition Notion de vie Les bactries Les levures et moisissures

(microorganismes fongiques) Les protozoaires Les virus

8


Dfinition: Les Microbes sont des tres vivants

microscopiques, invisibles lil nu- Virus: taille < 0,3 m- Bactries: 1 10 m environ- Levures: 10 25 m environ- Moisissures: myclium taille

indtermine- Protozoaires: jusqu 300 m

9

Taille compare des Bactries et des virus

10


Notion de vie

o Manifestations de la vie: - Nutrition - Respiration - Reproductiono Vie: Interactions entre tre vivant

et son milieu

11

Souris en plastique Souris vivante

bl bl

12

Microbes

Virus Bactries Lev. Algues unic. Protoz.

Micr. fongiques

Microorganismes

Diffrentes catgories de microbes

Moisis.

13


Les Bactries

- Morphologie- Classification Gram + / Gram - Structure cellulaire- Sporulation- Mode de division

14

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbesLes bactries

Morphologie

Diffrentes formes de cellules bactriennes

15

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbesLes bactries Morphologie

Formes dominantes: ronde (coccus) ou allonge (btonnet)

16

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbesLes bactries Morphologie

Formes dassociation- paires: diplocoque, diplobacille;- Chanettes: Streptocoques;- Grappes: Staphylocoques;- Gerbes: bacille de Koch.

Streptocoque Bacille de KochStaphylocoque

http://www-iut-bv.univ-fcomte.fr/HSEPrjFo/LAURENT/microbes%20page1.htmlhttp://usinfo.state.gov/fr/img/assets/8136/bacille_de_koch.jpghttp://www-iut-bv.univ-fcomte.fr/HSEPrjFo/LAURENT/microbes%20page1.html

17


Structure cellulaire- Cellules procaryotes (simples):

paroi, membrane cytoplasmique, cytoplasme, noyau avec un chromosome unique circulaire et sans paroi nuclaire

- Prsence de flagelles ou de capsule chez certaines espces

19

Structure dune cellule bactrienne avecflagelle et capsule

http://fr.wikipedia.org/wiki/Image:Diagramme_d_une_cellule_procaryote.jpg

20

Schma de la coloration de Gram

Classification en Gram positives et Gram ngatives (coloration de Gram)

21

Observation microscopique de bactries Gram positif et de bactries Gram ngatif

+

-

22

Structure de la paroi desBactries Gram positif

Structure de la paroi desBactries Gram ngatif

Comparaison paroi des bactries Gram

positif et Gram ngatif

23


Sporulation- Formation de spores rsistantes

(certaines espces)

Spores

24

Forme vgtative

Spore libre

SPORULATION

GERMINATION

Survie

Multiplication

Sporulation et germination de la spore bactrienne

Conditions favorables Conditions dfavorables

LIBERATIO

N

25


Reproduction Reproduction

par division de la cellule mre en 2

cellules filles identiques

http://www.gch.ulaval.ca/agarnier/bcm20329/ecolism.gifhttp://www.gch.ulaval.ca/agarnier/bcm20329/ecolism.gif

26


Les Levures

Morphologie Structure cellulaire Reproduction Formation de pseudomyclium

27

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbes Les Levures

Morphologie- Etat unicellulaire dominant, formes

varies, souvent ovode ou globuleuse

http://www.csdm.qc.ca/fseguin/classe/fseguin.3aj/0405/terre/levures/images/levure2.jpg

28

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbes Levures

Structure cellulaire Cellule eucaryote avec paroi, membrane cytoplasmique, cytoplasme, noyau vrai (membrane nuclaire et plusieurs chromosomes)

Structure cellulaire variable selon conditions doxygnation

29

1: paroi2: membrane nuclaire3: noyau4: vacuole5: rticulum endoplasmique6: membrane cytoplasmique7: inclusions cytoplasmiques8: mitochondries

Lgende:

30


Reproduction- Reproduction surtout par

bourgeonnement

bourgeons

Cicatrices de bourgeonnement

31


Pseudomyclium- Parfois pseudomycelium

http://images.google.fr/imgres?imgurl=http://membres.lycos.fr/microzoo/levure.jpg&imgrefurl=http://membres.lycos.fr/microzoo/biotech.html&h=651&w=932&sz=73&hl=fr&start=12&tbnid=6UFnrDVRysNwfM:&tbnh=103&tbnw=147&prev=/images%3Fq%3Dlevures%26gbv%3D2%26hl%3Dfr%26sa%3DG

32


Levures mieux adaptes que les bactries aux

milieux acides et/ou

riches en sucres

33


Moisissures

Morphologie et structure Reproduction

34

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbesMoisissures

Morphologie et structure - Micro-organismes filamenteux

35

Filaments cloisonns filaments non cloisonns

Moisissure sur lpiderme dune plante

Structure filamenteuse des moisissures

36

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbes Moisissures

Reproduction Reproduction par spores (pas spcialement rsistantes)

37

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbes Moisissures

Moisissures mieux adaptes aux milieux acides

et/ou relativement secs que les bactries

38

Aspects des culturesen milieu solide

Colonies deBactries

Levures

Thalles demoisissures

http://images.google.fr/imgres?imgurl=http://artic.ac-besancon.fr/svt/act_ped/svt_lyc/second/mutalevures/levure_Bl_IR3.jpg&imgrefurl=http://artic.ac-besancon.fr/svt/act_ped/svt_lyc/second/mutalevures/Mutations%2520Levures.htm&h=420&w=423&sz=14&hl=fr&start=8&tbnid=cxomuYYzV46FHM:&tbnh=125&tbnw=126&prev=/images%3Fq%3Dcolonies%2Bde%2Blevures%26gbv%3D2%26hl%3Dfr

39

Microbiologie (partie thorique)1- Nature biologique des microbes Protozoaires

Animaux unicellulaires Cellules eucaryotes Nombreuses espces pathognes

(parasites) pour lHomme

40

Paramcie Amibe

Protozoaires

http://www.futura-sciences.com/uploads/tx_oxcsfutura/img/amoeba_proteus.jpg

41

Acanthaire (diamtre: 100-300

m)

Favella sp. (longeur: 210

m

Protozoaires (suite)

http://www.diatomloir.eu/Siteplancton/Protozo.htmlhttp://www.diatomloir.eu/Siteplancton/Protozo.html

42


Les virus

- Invisibles au microscope optique- Structure simple, non cellulaire- Un seul acide nuclique: ADN ou ARN- Une capside protique- Une enveloppe pour les virus dits

envelopps (pas pour les virus nus)- Parasites intracellulaires obligatoires

43

Structure schmatique des virus

Acide nuclique

Capside protiqueEnveloppe

Virus nu Virus envelopp

44

Virus du SIDA

http://images.google.fr/imgres?imgurl=http://www.gsk.fr/gsk/votresante/vih/images/virus_grd.jpg&imgrefurl=http://www.gsk.fr/gsk/votresante/vih/comprendre.html&h=276&w=267&sz=64&hl=fr&start=65&tbnid=iHvGVzAvhBr7GM:&tbnh=114&tbnw=110&prev=/images%3Fq%3Dvirus%26start%3D60%26gbv%3D2%26ndsp%3D20%26hl%3Dfr%26sa%3DN

45

Virus de la grippe

http://images.google.fr/imgres?imgurl=http://www.hi.is/pub/tungumala/Forum/articlesenfrancais06/Eva/grippe1.jpg&imgrefurl=http://www.hi.is/pub/tungumala/Forum/articlesenfrancais06/Eva/lagrippeaviaire.htm&h=325&w=348&sz=21&hl=fr&start=4&tbnid=t9oEu2QC94wh7M:&tbnh=112&tbnw=120&prev=/images%3Fq%3Dvirus%26gbv%3D2%26hl%3Dfr

46

Plan gnral

o 1- Nature biologique des microbeso 2- Contamination des produits 2- Contamination des produits

par les microbespar les microbeso 3- Croissance des microorganismeso 4- Lutte contre les microorganismes

indsirableso 5- Principes gnraux des techniques

de recherche et de numration

47

Microbiologie (partie thorique)2- Contamination des produits par les microbes

2.1- Les microbes sont partout 2.2- Sources de contamination

des produits 2.3- LHomme: source de

contamination majeure

48

Le sol Leau Lair Les plantes, les animaux domestiques Les insectes et autres nuisibles LHomme Lenvironnement en gnral

Microbiologie (partie thorique)2- Contamination par les microbes

2.1- Les microbes sont partout

49

Microbiologie (partie thorique)2- Contamination par les microbes2.1- Les microbes sont partout

Le sol: plusieurs milliards par gramme (sol cultiv)

Leau: ocans, mers, lacs, cours deau, marcages, eaux uses, etc.

Lair: poussires et autres particules

50


Les plantes, les animaux domestiques et les produits qui en drivent

Les nuisibles (vermine): insectes, rongeurs, oiseaux, etc. ;

LHomme

51


Lenvironnement en gnral: parterre, murs, plafonds, vtements, ustensiles, matriel, etc.

52

Matires premires Milieu Main-duvre Matriel Manipulations ou Modes opratoires

Microbiologie (partie thorique)2- Contamination par les microbes2.2- Sources de contamination des produits

Les 5 M

53

Microbiologie (partie thorique) 2- Contamination par les microbes2.2- Sources de contamination des produits

Matires premires

La contamination varie selon:- la nature des intrants (matires

premires, additifs, emballages, etc.)- les traitements appliqus

(histoire de chaque intrant depuis son origine)

- les conditions de stockage et de transport

54


Milieu

- Btiment- Sol- Air (poussires)- Eau- etc.

55


MatrielLa flore apporte par le matriel

varie notamment avec:- La nature des produits traits

laide de ce matriel- Lusage du matriel en question- Le nettoyage et la dsinfection

adopts

56


Manipulations- Tout traitement appliqu depuis

lobtention des matires premires jusqu lutilisation des produits finis

- Chaque traitement peut avoir un effet sur la qualit hyginique dun produit

57

Matriel Manipulations

Matires premires

Milieu Main-doeuvre

Microbiologie (partie thorique)

2- Contamination par les microbes2.2- Sources de contamination des produitsDiagramme de cause effet dIshikawa

58

Microbiologie (partie thorique)2- Contamination par les microbes2.3- Lhomme: source de contamination

Lindividu sain: flore commensale

Lindividu malade: flore pathogne et/ou toxinogne

Le porteur sain

59

Microbiologie (partie thorique) 2- Contamination par les microbes2.3- LHomme source de contamination

Lindividu sain- Peau (surtout la main)- Cheveux et cuir chevelu- Sous les ongles- Dans les cavits ouvertes: bouche,

narines, oreilles, etc.- Dans lintestin: plusieurs milliards

de cellules microbiennes par gramme.

60

Cuir chevelu:102 103 bactries /cm2

Aisselles:106 107 bactries /cm2

Mains:106 bactries/cm2

Front: 104 105 Bactries/cm2

Scrtions nasales:107 bactries /g

Salive:108 bactries /g

Matires fcales:109 bactries /g

61 Nombre de particules de plus de 0,5 m mises par minute selon lactivit de lindividu

62 une toux faible:

4 500

mission de GouttelettesDe Pflgge

Un ternuement:20 000 40 000

63

Microbiologie (partie thorique) 2- Contamination par les microbes 2.3- LHomme source de contamination

Lindividu maladeFlore pathogne et/ou toxinogne- Sur la peau (plaies ouvertes,

furoncles) et dans le cuir chevelu- Dans la gorge et les voies

respiratoires: tuberculose, grippe, angine, pharyngite, bronchite, etc.

- Dans lintestin: maladies parfois trs graves (cholra, typhode), gastro-entrites, etc.

- Dans les yeux: conjonctivites

64


Le porteur sain

- Individu hbergeant un microbe pathogne sans montrer de signes de maladie

- Constitue une source de contagion pour son entourage

- Contamine les produits quil manipule

65


Conclusion- Toute personne libre dans

lenvironnement des microbes varis- Toute personne peut contaminer les

personnes de son entourage avec des microbes dangereux

- Toute personne peut contaminer les produits manipuls avec des microbes indsirables

66

Plan gnral


microbeso 3- Croissance des microorganismes3- Croissance des microorganismeso 4- Lutte contre les microorganismes

indsirableso 5- Principes gnraux des techniques de


67


3- Croissance des microorganismes

3.1- Allure de la croissance microbienne

3.2- Vitesse de la croissance et du mtabolisme

3.3- Paramtres de la croissance et le mtabolisme

68

Microbiologie (partie thorique)3- Croissance des microorganismes3.1- Allure de la croissance microbienne

Modle dtude: microorganisme unicellulaire (bactrie ou levure) en culture pure sur milieu liquide simple

Courbe de croissance: trac du Log N (nombre de cellules microbiennes) en fonction du temps

Temps de gnration et Taux de croissance horaire

69

III

III

IV V VI

VII

Log N

Temps

I: phase de latenceII: phase dacclrationIII: phase exponentielle

IV: phase de dclrationV: phase stationnaire

VI: phase de dbut de dclinVII: phase de dclin acclr

Trac de la courbe de croissance (micro-organisme unicellulaire

en culture pure enmilieu liquide simple)

70


Temps de gnration Tg: dure ncessaire pour que leffectif de la population soit doubl (cart entre 2 divisions cellulaires successives)

Log N

Temps

Log N2

Log N1

T1 T2

Tg

Exemples de valeurs de Tg(conditions optimales)

Escherichia coli: 20 minStaphylococcus aureus: 20 minMycobacterium tuberculosis:

800 900 min (15 h)

N2 = 2 N1

71


Taux de croissance horaire Tc: nombre de divisions cellulaires lheure

Tc

Tg: temps de gnration (en h)

=1

Tg Exemples de taux de croissance

horaire:

Escherichia coli: 3 h-1Staphylococcus aureus: 3 h-1

Saccharomyces cerevisiae: 0,6h-1Mycobacterium tuberculosis: 0,066h-1

72

Microbiologie (partie thorique)3- Croissance des microorganismes3.2- Vitesse de la croissance et du mtabolisme

VR bactries > VR levures > VR moisissures

Exemples:Escherichia coli (bactrie) se divise toutes les 20 min dans les conditions optimales (temps de gnration Tg); chaque heure: 3 divisions cellulaires, soit multiplication de leffectif de population par 8Saccharomyces cerevisiae (levure) a besoin de 100 min pour se diviser; multiplication leffectif de population par 1,6 en une heure

73


0 h1 h2 h3 h4 h5 h6 h7 h8 h9 h

10 h

18

64512

4 09632 768

262 1442 097 152

16 631 216133 049 728

1 064 397 824

Evolution de leffectif dEscherichia coli en fonction du temps

74


Consommation trs rapide des nutriments

Libration trs rapide de substances de dchets pouvant tre:

o responsables dodeurs, de couleurs, de gots anormaux, etc.

o toxiques

75

LHommeConsomme

lquivalent de

son poids en

10 jours

La sauterelleConsomme

lquivalent de

son poids en 24h

La bactrieConsomme

lquivalent de 10000 fois son poids

de sucre en 1 heure

76

Microbiologie (partie thorique)3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme

- Composition du milieu- Temprature- pH- Oxygnation- Humidit relative de lair

77

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu

Leau Source de Carbone (souvent aussi

source dnergie) Source dAzote Elments minraux: P, S, lments

majeurs et lments mineurs (oligo-lments)

Facteurs de croissance

78

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu

Leauo Gnralits, notion dactivit de

leauo changes entre micro-organisme et

milieuo aw minimale et aw optimale de

croissanceo Micro-organismes osmophileso Micro-organismes halophiles

79

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu/ Leau

Gnralits, notion dactivit de leau

- Leau: 80 90% du poids des micro-organismes

- Seule leau libre du milieu est utilisable- La proportion deau libre sexprime par lactivit de leau ou aw (activity of

water) ERH= Humidit relative dquilibre

Pression de vapeur du milieu

Pression de vapeur de leau pure =aw

ERH=

100

80


changes entre micro-organisme et milieu- Expression en pression osmotique . Milieu isotonique: quilibre . Milieu hypotonique: turgescence; le

micro-organisme absorbe de leau; son aw augmente (clatement en cas dcart important: lyse)

. Milieu hypertonique: le micro-organisme perd de leau, son aw interne diminue

81


Valeurs cardinales de law pour les micro-organismes:

- aw optimale de croissance- aw minimale de croissance

Remarque: pour un mtabolisme donn (ex.: production dune toxine), ces valeurs peuvent diffrer de celles de la croissance

82


- Aw optimale de croissance (souvent 0,9 1)

En gnral, bactries plus hygrophiles que levures et moisissures

Exemples: Bactries: Clostridium, Salmonella,

Staphylococcus: 0,990-0,995Moisissures: Aspergillus glaucus: 0,93;

Xeromyces bisporus: 0,90

83


Bactries Gram ngatif, quelques levures 0,95- 1

Majorit des cocci, lactobacilles, qq moisissures 0,91-0,95

Majorit des levures 0,87-0,91

Majorit des moisissures, Staphylococcus aureusMoisissures xrophiles

Levures osmophiles

0,80-0,870,67-0,75

0,60-0,65

Valeurs moyennes des aw minimales des diffrents groupes microbiens

84


Minimum absolu daw pour les

micro-organismes connus: 0,6

85


Micro-organismes adapts aux faibles activits de leau (fortes pressions osmotiques):

osmophiles: supportent ou mme exigent de fortes concentrations en sucres (sirops, miel, etc.)

Ex.: Saccharomyces rouxii, Aspergillus glaucus

halophiles: exigent de fortes concentrations en sel (les halotolrants les supportent)

86


Exemples de micro-organismes adapts aux milieux sals

- Halotolrants: Staphylococcus aureus, streptocoques fcaux

- Faiblement halophiles: microflore marine

- Extrmement halophiles: microflore des saumures (Halobacterium, Halococcus, etc.)

87

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu/ Source de C

La source de Carbone

- Pour les Autotrophes: CO2- Pour les Htrotrophes- Mtabolisme des glucides

88


CO2o Utilisable comme seule source de

C par certaines bactries dites autotrophes, surtout les Photosynthtiques (dans les tendues deau)

89


Pour les Htrotrophes:o Glucides simples: pentoses, hexoses

(glucose, fructose, mannose, etc.)o Diholosides: saccharose, lactose,

maltose (ncessit denzymes spcifiques)

o Glucides complexes: amidon, cellulose, etc. (ncessit dun systme enzymatique); micro-organismes cellulolytiques, amylolytiques, etc.

90


Pour les Htrotrophes (suite)o Hydrocarbures: hexadcane C16H34

notamment dans les sous-produits ptroliers

o Acides amins: si pas de source de C plus simple

o Acides gras et lipides: idem

91


Mtabolisme des glucides- Mtabolisme arobie: respiration

(production de CO2, H2O et beaucoup dnergie)

- Mtabolisme anarobie: fermentation alcoolique, lactique, etc.(produit principal + produits secondaires de fermentation; peu dnergie)

92


Exemple dapplication:- Coliformes totaux: fermentation

du lactose avec production de gaz 32C

- Coliformes fcaux: fermentation du lactose avec production de gaz 44,5C

93

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu/ Source dAzote

La source dAzote- Gnralits- Formes inorganiques- Formes organiques- Consquences

94


Gnralits:

Azote ncessaire pour:o Protines (dont enzymes)o Acides nucliqueso Autres molcules vitales: DPN,

TPN, ATP, ADP, etc.

95


Formes inorganiques dAzote: N2 gazeux: par micro-organismes

fixateurs dazote Bactries symbiotiques avec

Lgumineuses (nodosits sur les racines): genre Rhizobium

Micro-organismes libres (sol, eaux): genre Azotobacter

96

Nodosits de Rhizobium sur des racines de Lgumineuses

http://demicervo.free.fr/licence/ecologievegetale/symbiosevegetale/d147.JPGhttp://www.mapaq.gouv.qc.ca/NR/rdonlyres/6A3E8883-C325-4A56-B45F-7C0E0A5D22DB/8907/FerlandChantale_InoculationLegumineuses.jpg

97


Formes inorganiques dAzote (suite)

NO2-: genre Nitrobacter NO3-: Enterobacteriaceae + autres

bactries, des levures et moisissures

NH4+: genre Nitrosomonas + toutes levures et moisissures

98


Formes organiques: groupement amine R-NH2, par dsamination ou par transamination:

R-NH2 + R R+R-NH2 o simples: acides amins libres,

amines, ureo complexes: protines (par les

microorganismes protolytiques)

99


Consquences:

o Rle essentiel des micro-organismes dans laltration des produits contenant des protines

o Rle trs important des micro-organismes dans le cycle biogochimique de lAzote

100NO3-

R-NH2

NH4+

NO2-

N2

NO

N2O

NO2-

c

a

a

a

i

g

h

bb d e

f

Anarobie Arobie Cycle biogochimique de lAzote:R-NH2: groupes amins des protines

a: dnitrification

b: ammonification du nitrite

c: rduction dissimilatoire du nitrate

d: ammonification

e: assimilation de lammonium

f: rduction assimilatoire du nitrate

g: oxydation de lammonium

h: oxydation du nitrite

i: fixation de lAzote

101

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu/ lments minraux

lments minraux

o P et So Autres lments majeurso lments mineurs

(oligolments)

102

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu/ lments minraux

P et So Phosphore: pour les acides nucliques et dautres molcules

vitales: ATP, ADP, TPN, DPN, etc. forme: phosphate H2PO4-

o Soufre Pour les protines (dont enzymes) Forme: sulfate SO4-

103


Autres lments majeurs (plastiques)

- Participent la construction des constituants cellulaires: Ca,

- Assurent les quilibres osmotiques et ioniques de la cellule avec le milieu: K, Na, etc.

104


lments mineurs (oligolments)

- Font partie de la constitution de co-enzymes (Mg de la chlorophylle, Fe des cytochromes)/ ou

- Jouent le rle de co-facteurs enzymatiques: Cu et Fe pour les enzymes respiratoires

105

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Composition du milieu/ Facteurs de croissance

Facteurs de croissance- Substances organiques

indispensables la croissance et que le microorganisme ne peut pas synthtiser lui-mme: apport ncessaire dans le milieu

- Nature: acides amins, vitamines, bases puriques ou pyrimidiques

106

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme

Temprature Tempratures cardinales Vitesse de croissance en fonction de

la temprature Classification des microorganismes en

fonction de leur temprature optimale Applications

107

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Temprature

Tempratures cardinales

Pour chaque espce microbienne:

. Temprature minimale . Temprature maximale de croissance . Temprature optimale

108

V

TT min T opt T max

Z. dysgnsique Z. eugnsique Z. ltale

Vitesse de croissance dun micro-organisme en fonction de la temprature

Vitesse de croissance V dun microorganisme en fonction de la temprature T

109


Classification des micro-organismes en fonction de leur temprature optimale de croissance:

Micro-organismes msophiles Micro-organismes thermophiles Micro-organismes psychrophiles

110


Applications: Respect de la temprature optimale pour la

culture des microorganismes Rfrigration (tempratures positives) ou

conglation (tempratures ngatives) des produits ou des souches pour les conserver

Attention! - Le froid ne tue pas les microbes- Le froid namliore pas la qualit hyginique

des produits

111

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme pH

Valeurs cardinales de pH Vitesse de croissance en fonction du

pH Classification des microorganismes en

fonction du pH optimal

112


Valeurs cardinales de pH pour la croissance:

o pH minimumo pH optimum de croissanceo pH maximum

113

V

pHpH min pH opt pH max

Vitesse de

croissance V en

fonction du pH


114


Diffrentes classes dfinies:

Micro-organismes acidophiles (pH optimum acide: infrieur ou gal 6-6,5)

Micro-organismes basophiles (pH optimum basique: suprieur ou gal 8)

Micro-organismes neutrophiles (pH optimum neutre: 6,5-7,5)

115

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme

Oxygnation Oxygnation- Micro-organismes arobies stricts- Micro-organismes anarobies stricts- Micro-organismes aro-anarobies

facultatifs (ex.: levures)

On dfinit aussi :- Les micro-arophiles- Les mso-anarobies

116

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Oxygnation

Arobie strict

Micro-arophile

Mso-anarobie

Anarobie strict

Aro-anarobie facultatif

Diffrents types respiratoires des micro-organismes

117

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismes3.3- Paramtres de la croissance et du mtabolisme Oxygnation

Rpartition des diffrents groupes microbiens:

- Bactries: toutes catgories possibles

- Levures: aro-anarobies facultatives (mtabolisme dominant oxydatif ou fermentatif)

- Moisissures: arobies strictes ou micro-arophiles

118

Microbiologie (partie thorique) 3- Croissance des microorganismesParamtres de la croissance et du mtabolisme Humidit relative de lair

aw > HR airH2O

H2O

aw < HR air

Law du produit diminue

Law du produit augmente

http://recit.csdm.qc.ca/local/panier/aliments/produits_cerealiers/images/g_pain_croute.gifhttp://recit.csdm.qc.ca/local/panier/aliments/produits_cerealiers/images/g_pain_croute.gif

119

Plan gnral


microbeso 3- Croissance des microorganismeso 4- Lutte contre les 4- Lutte contre les

microorganismes indsirablesmicroorganismes indsirableso 5- Principes gnraux des techniques

de recherche et de numration

120

4.1- Les empcher de se multiplier (se dvelopper)

4.2- Protger les produits de la contamination

4.3- Les tuer


4- Lutte contre les microorganismes

121

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.1- Les empcher de se dvelopper

Froid: rfrigration ou conglation

Schage (vaporation de leau, ou sublimation sous vide: lyophilisation)

Salage (aliments) Sucrage (sirops) Ajout dadditifs antimicrobiens

(conservateurs chimiques)

122

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.2- Protger les produits de la contamination

Emballage Couverture des produits Atmosphre confine avec air filtr Comportement responsable vis--

vis des produits (Bonnes Pratiques dHygine)

123

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuer

laide de la chaleur laide des radiations laide de produits chimiques

124

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuer A laide de la chaleur

Effets de la chaleur Courbe de destruction thermique dun

microorganisme Applications Paramtres influents (temprature,

dure, humidit, densit de population, etc.)

125

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuerA laide de la chaleur

Effets de la chaleur Agent de destruction universel

des microbes Dtruit aussi les enzymes Agit surtout par dnaturation des

protines (enzymes), mais aussi sur lipides (membranaires), vitamines, etc.

126


N0

T

Log N

Temps

Courbe de destruction thermique dun microorganisme:

Temprature constante

Paramtres fixs (pH, milieu, etc.)

127


Applications Strilisation: vise la destruction de

lensemble des microbes prsents (milieux de culture, ustensiles de laboratoire, aliments, produits pharmaceutiques, etc.)

Pasteurisation: vise les microbes pathognes et ceux responsables daltration (aliments)

128


Paramtres influents: La temprature de traitement La dure du traitement Chaleur humide plus efficace que chaleur sche

Espces sporules plus rsistantes que non sporules

Spores plus rsistantes que formes vgtatives

Autoclave (chaleur humide): 120C, 15-20 minFour Pasteur (chaleur sche): 180C, 1h ou 160C, 2h

Temps

Log N

t1 t1

T2

T1

T1 > T2t1 < t2

129


Densit de population

Log N

Temps

N2

N1

T1 T2

Un produit plus contamin quun autre exigera une temprature plus leve et/ou un temps plus long

pour un traitement de

mme efficacit

130

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuerA laide de radiations

Dfinition Spectre des radiations

microbicides Applications Paramtres defficacit

131

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuer A laide de radiations

Dfinition o Radiation: mission et propagation

dnergie travers lespace ou travers un matriau

o Les les plus courtes sont les plus actives contre les microbes: micro-ondes, ultraviolets, rayons X, rayons

132

Rayons X

Ray.

Rayons cosmiques

Ultra violet

InfrarougeOndes hertziennes

Pour radio communication

Rayons solaires

atteignant la Terre

Ultra violet Visible

Violet

Rouge

Vert

Bleu

Jaune

Orange

Infr

a ro

ugeBactricide

Bronzage

Ant

irach

itiqu

e

0,001 0,01 0,06 1,4 136 1000 4000 8000 1x106 4x106 1x1011 2x1012 5,5x1012 3x10

136 1000 2000 2800 3300 4000 8000

En Angstrom

En Angstrom

Spectre des radiations montrant les principales zones microbicides

133


Applications Strilisation des blocs

opratoires dans les hpitaux Strilisation de matriel mdical Irradiation des aliments (rayons

gamma par exemple) Strilisation des emballages

134


Paramtres defficacito Nature des microorganismes- Bactries Gram + plus rsistantes que Gram -

-Sporules plus rsistantes que non sporules

- Gnralement, radiorsistance et thermorsistance parallles

- Exceptions : rsistance sans spores (Micrococcus radiodurans)

Les plus sensibles: Pseudomonadales et Flavobactries

135


o Nature des micro-organismes (suite)- Gnralement, micro-organismes

fongiques moins sensibles que bactries Gram

- Levures plus rsistantes que moisissures

- Virus beaucoup plus rsistants que Bactries

136


o Autres paramtres Plus N est grand, moins le traitement

est efficace Protines: effet protecteur Cellules sches (ou congeles) plus

rsistantes que cellules normales (radiolyse de leau)

Bactries plus rsistantes dans la phase de latence que dans la phase exponentielle

137

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuerA laide de substances chimiques

Gnralits Effets des agents antimicrobiens sur

les cultures microbiennes Mesure de lactivit antimicrobienne Paramtres defficacit des agents

antimicrobiens chimiques Diffrents usages des agents

antimicrobiens chimiques

138

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuerA laide de substances chimiques Gnralits

o Agent peut tre antibactrien, antifongique, antiviralo Un mme agent peut agir sur plusieurs groupes: agent

antimicrobieno Effet ltal: agent bactricide, fongicide, virucide;

germicide ou microbicide si action plus gnrale; leffet ltal peut tre suivi de lyse cellulaire

o Effet inhibiteur: agent bactriostatique ou fongistatiqueo Une substance peut avoir action ltale ou inhibitrice sur

un microbe selon la concentration

139


o Slectivit de laction antimicrobienne dune substance:

Entre diffrentes espces microbiennes: notion de spectre dactivit

- large spectre: substance peu slective- spectre troit: substance trs slective

Entre cellules microbiennes (sensibles) et cellules humaines ou animales (rsistantes): substances chimiothrapiques

140

Log N Log N Log N

TempsTemps Temps

Cellules totales Cellules vivantes

Ajout de la substance antimicrobienne

BACTERIOSTASE BACTERICIDIE BACTERIOLYSE

Effets des agents antimicrobiens sur les cultures microbiennes (ex.: bactries)

141


Mesure de lactivit antimicrobienne

o Technique de dilution en tube (milieu liquide)

o Technique de diffusion en glose (milieu solide)

Antibiogramme Recherche de leffet conjugu de 2

substances

142

C0 C1 C2 C3 C4 C5

Incubation Ensemencement

143

Technique de diffusion en milieu glos pour ltude du pouvoir

antimicrobien des substances chimiques

Auroles dinhibition

Disques de cellulose imprgns de

substance inhibitrice

C1 C2 C3

144 Antibiogramme

Aurole dinhibition

145

Exemples dantibiogrammes

http://images.google.fr/imgres?imgurl=http://www.geniebio.ac-aix-marseille.fr/biospip/IMG/jpg_antibiogramme_sans_fluoresceine.jpg&imgrefurl=http://www.geniebio.ac-aix-marseille.fr/biospip/spip.php%3Farticle253&h=572&w=670&sz=183&hl=fr&start=19&tbnid=-g5bVSOxQAnD4M:&tbnh=118&tbnw=138&prev=/images%3Fq%3Dantibiogramme%26gbv%3D2%26hl%3Dfr

146

Antibiotique A seul

AntagonismeSynergie

Addition Indiffrence

Antibiotique B seul

Associations de 2 substances antimicrobiennes (antibiotiques)

147


Paramtres defficacit des agents antimicrobiens chimiques

o Nature de la substanceo Concentration de la substanceo Dure de contact avec le micro-organismeo Nature du micro-organismeo Effectif de la population microbienneo tat physiologique des celluleso Composition et caractristiques du milieu

148


o Nature de la substance Structure chimique Ractivit Solubilit Etc.

149

Log N

Temps

N0

C2

C1

o Effet de la concentration sur lefficacit des

substancesantimicrobiennes

(C1>C2)

150

N0

N1

N2

T1 T2 T Temps

Log No Effet de la dure de contact

sur lefficacit des substances chimiques

antimicrobiennes

151


o Nature du micro-organisme

Bactries, levures, moisissures et virus ne sont pas forcment sensibles aux mmes agents

Bactries Gram positif et bactries Gram ngatif diffrent dans leur sensibilit

Bactries sporulantes plus difficiles liminer que les non sporulantes (substances sporicides)

152


o tat physiologique des cellules

ge de la culture (ex.: pnicilline) Conditions nutritionnelles Stress physiologique

153

N0

N0

Log N

Temps

o Effet de la densit de la populationmicrobienne initiale sur

lefficacit des substances chimiques

antimicrobiennes

t1 t2

154


o Composition du milieu Protines et autres substances organiques

rduisent lefficacit dsinfectante du Chlore

Les ions Ca++ et Mg++ rduisent celle de lIode

Prsence dautres substances antimicrobiennes: cas de synergie, daddition ou dantagonisme

155


Diffrents usages des agents antimicrobiens chimiques

o Dsinfectants o Antiseptiqueso Agents chimiothrapiques

156


Dsinfectants: pour les objets ou les surfaces inertes

Antiseptiques: en usage externe pour lHomme et les animaux

Agents chimiothrapiques: par voie gnrale pour lHomme et les animaux

157


Dsinfectants En mdecine: strilisation du matriel et

produits sensibles la chaleur En industrie pharmaceutique et

alimentaire : sols, murs, surfaces de travail, machines, tuyauteries, etc.

Traitements des eaux: eaux de boisson, eaux de process dans lindustrie, eaux uses avant rejet dans lenvironnement

158

Dsignation Utilisation Mode dactionDichlorure mercuriqueSulfate de cuivreIode (solution)Chlore (gaz)Composs chlors

Composs phnoliquesDtergents cationiques (ammoniums quaternairesOxyde dthylne (gaz)

Ozone

Tables, solsPiscines (algicide), eauxInstruments mdicauxEauxquipements en industries alimentairesSurfacesInstruments mdicaux, quipements industries alimentairesMatriel de laboratoire en plastiqueEau potable

Se combine avec SHPrcipite les protinesIodation de la tyrosineAgent oxydantAgents oxydants

Dnaturent les protinesInteragissent avec les phospholipides

Agent alkylant

Agent oxydant

Exemples de dsinfectants, avec leurs usages et leur mode daction

159


Antiseptiques

- Beaucoup utiliss sur la peau directement

- Aussi dans les yeux, la bouche, le pharynx

160

Dsignation Utilisation Mode daction

Organo-mercuriquesNitrate dargentIode (solution)thanol (70%)

Bis-phnols (hexachlorophne)Dtergents cationiques (ammoniums quaternairesPeroxyde dHydrogne

PeauYeux (nourrissons)PeauPeau

Savons, lotions, dodorantsSavons, lotions

Peau

Se combine avec gr. SHPrcipite les protinesIodation de la tyrosineDnature prot., solub. lip. Dtruit membrane cellulaireInteragissent avec phospholipides

Agent oxydant

Exemples dantiseptiques, avec leurs usages et leur mode daction

161


Agents chimiothrapiques Antimtabolites Antibiotiques- Dfinition- Facteurs de sensibilit des bactries- Modes daction- Rsistance des bactries aux antibiotiques

162

Microbiologie (partie thorique)4- Lutte contre les microorganismes 4.3- Les tuerA laide de substances chimiques Antimtabolites- Analogues de structure avec mtabolites essentiels ou

facteurs de croissance- Exemple :PAS (sulfamides) avec PAB; agissent en comptition avec PAB- Nombreux autres antimtabolites connus

FC: facteur de croissanceME: mtabolite essentiel

FC ou ME AnaloguePhnylalani

nep-fluoro-

phnylalanineUracile 5-fluoro-uracilethymine 5-bromo-uracile

163

Mcanisme de laction antibactrienne du PAS (analogue de structure du PAB)

164


o Antibiotiques

- DfinitionSubstances chimiques produites par des micro-

organismes et actives contre dautres micro-organismes (essentiellement bactries)

Peuvent tre plus efficaces aprs transformation chimique: antibiotiques semi-synthtiques

Certains peuvent tre obtenus par voie chimique

165


o Antibiotiques (suite)- Paramtres de sensibilit des

bactries

. Gram + gnralement plus sensibles que Gram

. Certains nagissent que sur Gram+, dautres que sur Gram-

. ge des cultures (pnicilline agit seulement sur cellules en division)

. Densit cellulaire

166


o Antibiotiques (suite)- Modes daction

. Inhibition de synthse de la paroi (pnicilline, cphalosporine)

. Dsorganisation de la membrane cytoplasmique: Polymixine B

. Inhibition de la transcription (rifamycines)

. Inhibition de la traduction (chloramphnicol, streptomycine, ttracycline)

167


o Antibiotiques- Rsistance des bactries:

dterminisme gntique

. Gne de structure: rsistance la pnicilline de Staphylococcus aureus; peut tre perdue par mutation gntique

. Plasmide: frquente chez Gram -; plasmide transfrable dune cellule une autre parfois despce diffrente (RTf: plasmide de polyrsistance)

168


Antibiotiques- Rsistance des bactries:

physiologie

Plusieurs mcanismes possibles; exemples:. Production dune enzyme qui dtruit lantibiotique

(pnicillinase ou -lactamase, enzyme inductible chez S. aureus)

. Modification de structure de la cible sensible lantibiotique (par mutation)

169

Cible cellulaire Type dagent ExemplesParoi bactrienne

Membrane cellulaire-Procaryotes-EucaryotesSynthse de protines-Procaryotes

-EucaryotesSynthse de lARNAnalogues de fact. crois.Inconnu

PnicillinesCphalosporines

PolymixinesPolynes

NitroaromatiqueAminoglycosidesTtracyclinesMacrolidesLincomycinesGlutarimideRifamycinesSulfonamidesPyridineBenzofurane

Pnicilline G, AmpicillineMthicilline, Cephalotine, cephamycinePolymixine BNystatine, Amphotericine

ChloramphnicolStreptomy.; tobramycineTtracycline, chloretetrac.ErythromycineLincomycine, Clindamyc.CycloheximideRifampineSulfanilamideIsoniazideGrisofulvine

Exemples dantibiotiques, avec leurs cibles dans les cellules sensibles

170

Plan gnral



indsirableso 5- Principes des techniques de 5- Principes des techniques de

recherche et de numrationrecherche et de numration

171


5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux 5.2- Numration par culture en Botes

de Petri 5.3- Numration en Botes de Petri

dans les liquides faiblement contamins

5.4- Numration par culture en glose profonde (Anarobies)

5.5- Dtermination du Nombre le Plus Probable (NPP)

172

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration

5.1- Principes gnraux

Prlvement et prparation de lchantillon

Dilution Ensemencement Incubation Lecture des rsultats

173

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Prlv.t et prpar.t de lchantillon

Prlvement aseptique (flacons ou sachets striles)

Transport et entreposage (en cas de besoin) au froid

Broyage (produits solides) aseptique Homognisation (produits liquides ou

pulvrulents): au moment du prlvement, puis avant de procder aux tapes suivantes

174

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Dilution

chantillon ou suspension mre

Dilution 100 10-1 10-2 10-3 10-n

1ml 1ml 1ml 1ml

Solution de

dilution: tubes de 9ml

Dilutions dcimales des chantillons en vue de lanalyse microbiologique

175

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Ensemencement: choix des milieux Satisfaire aux exigences:- nutritionnelles des espces vises- de comptitivit: milieu plus

slectif pour un groupe donn car dfavorable aux autres groupes

- physico-chimiques des espces cultives: pH, aw, potentiel Redox, etc.

176

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Ensemencement: choix des milieux

Permettre de mettre en vidence les proprits spcifiques. Exemples:

- Acidification par fermentation dun sucre;

- Production de gaz;- Production de H2S- Prcipitation des sels biliaires

(Coliformes)

177

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Incubation: paramtres respecter Temprature; on choisit:- La temprature optimale de

croissance;- Une temprature slective (ex.:

Psychrotrophes)- Une temprature favorisant une

activit donne pour diffrencier entre groupes microbiens (ex.: fermentation du lactose avec production de gaz chez les Coliformes)

178

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Incubation: paramtres respecter

Dure dincubation; on choisit la dure ncessaire :

- Un dveloppement visible des colonies (taille des colonies: critre didentification)

- Lapparition des effets dun mtabolisme donn

Dure ne pas dpasser: dans certains cas, linterprtation peut changer

179

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Incubation: paramtres respecter

Conditions doxygnation:- Anarobies stricts: culture labri

de loxygne (divers procds)- Arobies: rapport surface/volume

le plus lev; agitation (milieu liquide)

- Microarophiles: culture en double couche

180

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Lecture des rsultats

Comptage du nombre de colonies et calcul du nombre dunits formant colonie (UFC)/g ou /ml de produit

- Ensemble des colonies (ex.: FMAT), ou

- Colonies caractristiques seulement (coliformes, staphylocoques, etc.)

- Technique: bote de Petri ou tube de glose profonde (anarobies)

181

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.1- Principes gnraux Lecture des rsultats

Dtermination du NPP- NPP: nombre le plus probable- Aprs culture en milieu liquide,

(chaque dilution en 3 ou 5 exemplaires) utilisation de table de Mac Crady donnant le nombre le plus probable en fonction des rsultats nots dans les tubes

182

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration

5.2- Numration par culture en bote de Petri Technique densemencement

Dilutions 100 10-1 10-2 10-n

. . . .. . . .

..

.

. . .

. .... .. .

. .

n0 n1 n2 nn

Ensemencement (en

double) sur milieu glosincubation

Lecture et interprtatio

n

. ... .

.. . .. . .. . . . . .

.

. . .

. . . . .

. . .

. . . . . . .

. . .. .

.

. . .. . .

.... . .

. . . . .. . .

... ..

. . ..

.. ..

Technique der numration par culture en bote de Petri (ensemencement)

183

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.2- Numration par culture en bote de Petri

Lecture et interprtation- Slectionner les botes avec un

nombre de colonies n tel que m

184


Calcul du nombre dUFC/g ou /ml

N = C(n1 + 0,1n2)d

C: somme des colonies comptes dans toutes les botes retenues (avec nombre de colonies entre 10 et 300)

n1: nombre de botes retenues la 1re dilution

n2: nombre de botes retenues la 2me dilution

n3: nombre de botes retenues la 3me dilution

d: facteur de dilution correspondant la 1re dilution

N = (n1 + 0,1n2 + 0,01n3 )d

C

2 dilutions successives retenues

3 dilutions successives retenues

185


Expression des rsultats:- Le chiffre trouv est arrondi 2

chiffres significatifs (ex.: 28500 28000; 11500 12000)

- le nombre dUFC/g ou/ml trouv est converti en un nombre compris entre 1,0 et 9,9 multipli par 10x,(ex. 28000 converti en 2,8.104

186


Exemple de calcul- 1re dilution retenue (10-2): 168 & 215

colonies- 2me dilution retenue (10-3): 14 & 25

colonies C

(n1 + 0,1n2)dN = = (168+215+14+25)/

(2+0,1.2)10-2 = 422/0,022= 19182

Le rsultat arrondi donne 19000, soit 1,9.104

187

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.3- Numration en bote de Petri pour liquides faiblement contamins Principe: - Filtrer un volume connu de liquide

analyser sur une membrane de porosit adquate (0,45 m)

- Transfrer la membrane la surface dun milieu glos en bote de Petri

- Incuber, puis compter le nombre de colonies et reporter lunit de volume

188

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.3- Numration en bote de Petri pour liquides faiblement contamins

Membrane filtrante Millipore

Systme de filtration

Millipore

189

Membranes Millipore sur milieux gloss en botes de Petri aprs incubation

Colonies bleues de Coliformes Fcaux

sur milieu M-FC de Millipore

Flore totale (ci-dessus) et Coliformes (ci-dessous) retenus par filtration

Millipore deau avant et aprs dsinfection

190

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.4- Numration par culture en glose profonde (anarobies) Principes de la culture des anarobies:- Milieu riche en matires organiques

(Viande - foie; cur - cervelle, etc.)- Milieu rgnr avant usage (100C,

10 min), refroidi rapidement et ensemenc

- Incubation labri de lOxygne (ex.: glose profonde)

191

Colonies incluses danarobies en glose profonde

192

Microbiologie (partie thorique)5- Principes des techniques de recherche et de numration 5.5- Dtermination du NPP

Principe- Prparer dilutions dcimales successives- A partir de chaque dilution, ensemencer

1ml dans 3 (ou 5) tubes de milieu liquide- Aprs incubation, compter le nombre de

tubes prsentant une croissance pour chaque dilution et dterminer le nombre caractristique

- Lire sur la table de Mac Crady le NPP correspondant

Diapo 1Diapo 2Diapo 3Diapo 4Diapo 5Diapo 6Diapo 7Diapo 8Diapo 9Diapo 10Diapo 11Diapo 12Diapo 13Diapo 14Diapo 15Diapo 16Diapo 17Diapo 18Diapo 19Diapo 20Diapo 21Diapo 22Diapo 23Diapo 24Diapo 25Diapo 26Diapo 27Diapo 28Diapo 29Diapo 30Diapo 31Diapo 32Diapo 33Diapo 34Diapo 35Diapo 36Diapo 37Diapo 38Diapo 39Diapo 40Diapo 41Diapo 42Diapo 43Diapo 44Diapo 45Diapo 46Diapo 47Diapo 48Diapo 49Diapo 50Diapo 51Diapo 52Diapo 53Diapo 54Diapo 55Diapo 56Diapo 57Diapo 58Diapo 59Diapo 60Diapo 61Diapo 62Diapo 63Diapo 64Diapo 65Diapo 66Diapo 67Diapo 68Diapo 69Diapo 70Diapo 71Diapo 72Diapo 73Diapo 74Diapo 75Diapo 76Diapo 77Diapo 78Diapo 79Diapo 80Diapo 81Diapo 82Diapo 83Diapo 84Diapo 85Diapo 86Diapo 87Diapo 88Diapo 89Diapo 90Diapo 91Diapo 92Diapo 93Diapo 94Diapo 95Diapo 96Diapo 97Diapo 98Diapo 99Diapo 100Diapo 101Diapo 102Diapo 103Diapo 104Diapo 105Diapo 106Diapo 107Diapo 108Diapo 109Diapo 110Diapo 111Diapo 112Diapo 113Diapo 114Diapo 115Diapo 116Diapo 117Diapo 118Diapo 119Diapo 120Diapo 121Diapo 122Diapo 123Diapo 124Diapo 125Diapo 126Diapo 127Diapo 128Diapo 129Diapo 130Diapo 131Diapo 132Diapo 133Diapo 134Diapo 135Diapo 136Diapo 137Diapo 138Diapo 139Diapo 140Diapo 141Diapo 142Diapo 143Diapo 144Diapo 145Diapo 146Diapo 147Diapo 148Diapo 149Diapo 150Diapo 151Diapo 152Diapo 153Diapo 154Diapo 155Diapo 156Diapo 157Diapo 158Diapo 159Diapo 160Diapo 161Diapo 162Diapo 163Diapo 164Diapo 165Diapo 166Diapo 167Diapo 168Diapo 169Diapo 170Diapo 171Diapo 172Diapo 173Diapo 174Diapo 175Diapo 176Diapo 177Diapo 178Diapo 179Diapo 180Diapo 181Diapo 182Diapo 183Diapo 184Diapo 185Diapo 186Diapo 187Diapo 188Diapo 189Diapo 190Diapo 191Diapo 192

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MICROBIOLOGIE (partie théorique) · Spécialité: Microbiologie et Hygiène Alimentaires et Biotechnologie Fonctions: Professeur de l’Enseignement Supérieur (ex. IAV Hassan II;