DIPLOMADO EN ASISTENTE DE LABORATORIOFUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA

Muestras y estabilidad. Diferentes tipos de Anticoagulantes.

Dra. Viviana Méndez

En el laboratorio de hematología:• Debemos tener en control las variables

desde la toma de datos e indicaciones para el paciente, la correcta recolección de la muestra sanguínea, el almacenamiento y transporte de la muestra. Así como el análisis y reporte de la misma. (etapa pre-analítica, analítica y post analítica).

Factores que afectan la estabilidad de las muestras:

• Entre otros, somos responsable de la integridad de la muestra y de asegurar que está exenta de coágulos, hemólisis y proporciones inadecuadas de anticoagulante-muestra.

• La muestra debe fluir de la manera más fácil posible. Muestras obtenidas con dificultad pueden hemolizarse (los glóbulos rojos se rompen).

• Otro factor que induce a hemólisis es centrifugar las muestras (cuando corresponde separar el suero) sin haber dejado un tiempo suficiente para que coagulen. Aproximadamente 10-15 min.

Suero hemolizado

Muestra sin hemolizar

Factores que afectan las muestras

• Los tubos por lo general traen una marca que nos indica la cantidad de sangre óptima que se debe recolectar. Esto por la relación anticoagulante-muestra que debe existir.

• Cantidades muy pequeñas de muestra pueden ocasionar muestras diluidas y cantidades muy grandes pueden promover la formación de coágulos.

• Se recomienda agitar suavemente las muestras después de obtenidas para una correcta mezcla y homogenización con el anticoagulante.

En la estabilidad de la muestra también influyen factores como:

– Separar el suero o plasma lo más pronto posible*– Plasma: se recomienda centrifugación inmediata

*LA TEMPERATURA Y TIEMPO A LOS QUE ES ESTABLE UNA MUESTRA DEPENDE DE LA PRUEBA Y EL MÉTODO

En la estabilidad de la muestra también influyen factores como:

– Movimientos bruscos al agitar o transportar que produzcan deterioro (hemólisis, coagulación parcial y desintegración celular)

– Condiciones especiales que debe cumplir el paciente para la recolección de algunas muestras.

– Exposición a la luz en pruebas fotosensibles.– Pérdida de muestra.– Temperatura a la que se debe conservar la muestra, dependiendo

de la prueba y el método a realizar: congeladas (<-18ºC), refrigeradas (4-8ºC) o a temperatura ambiente (18-25ºC).

– Transporte rápido y en las mejores condiciones que se requieren. Sin olvidar las normas de bioseguridad.

Ejemplos de condiciones especiales que debe cumplir el paciente para la recolección de algunas muestras.

Amonio

Plasma con EDTA

Se prefiere que el paciente venga en ayunas para evitar la lipemia. No debe fumar ni ejercitarse antes de la toma de muestra.

Sin torniquete (si no es posible ponerlo poco apretado y el menor tiempo posible) y sin apretar el puño. En un tubo pre enfriado. Centrifugar inmediatamente. Separar el plasma ponerlo en un tubo hermético y no abrir más. Congelar inmediatamente. Centrifugar en centrifuga refrigerada

Congelado:7 díasRefrigerado:2 horas

ACTH Plasma con EDTA

El stress afecta los niveles. Si es posible, deje de tomar medicamentos que pueden afectar los resultados del examen. Estos medicamentos incluyen glucocorticoides como hidrocortisona, prednisona o dexametasona. Si no tomarlo 8 horas después de la última dosis

Se toma la muestra entre las 7am y 10:00 am.Tomar en tubo que este pre enfriado y mantener cadena de frio. Centrifugar inmediatamente y separar.Centrifugar en centrifuga refrigeradaNo se aceptan muestras con franca hemólisis.Congelar

Congelado: 14 días

Prueba Anticoagulante Condiciones del paciente Condiciones para recolectar la muestra Conservación

Diferentes tipos de anticoagulantes

• Para cuando requerimos plasma para las pruebas a realizar.Existen diferentes tipos de anticoagulantes y los identificamos por el color de la tapa del tubo.

• También tenemos los tubos sin anticoagulantes para cuando se requiere suero.

• Algunos tubos sin anticoagulantes vienen con gel que facilita la coagulación y la separación posterior de las células y el suero.

ANTICOAGULANTE

CARACTERÍSTICAS

HEPARINA Acción In Vitro e In Vivo. Obtenido de la mucosa pulmonar del ganadoActúa como cofactor de Antitrombina III, Inhibe Factores Xa, IXa, XIa y XIIa. In Vivo afecta todas las pruebas de Coagulación.Antídoto Protamina básica

OXICUMARÍNICOS

Vía In Vivo, actúan vía oral y 24h post ingestión, efectos de mayor duración.Antídoto: Vitamina KAltera la síntesis de Factores dependientes de Vitamina K (II, VII, IX, X)

CITRATO DE SODIO

Relación 1:9 con Sangre. Fija Calcio con lo que su forma iónica no se encuentra libre. Se utiliza para determinar pruebas de coagulación y VES (Westergren, 3,8%), Mezclado con otras sustancias se utiliza para preservar sangre por largos períodos.

ACD Ácido Cítrico, Citrato trisódico, Dextrosa anhidra. 63ml : 500mL sangreCPD Citrato Fosfato Dextrosa, menos citrato y más alto pH que ACD. Mantiene

electrolitos y preserva los eritrocitos.EDTA-K2 Verseno. Muy utilizado en Hematología, quela Calcio, con lo que se evita la

coagulación.

Ejemplos de acción de algunos anticoagulantes:

Algunas pruebas y los anticoagulantes requeridos

• Hemograma y VES: tubo morado (EDTA)• Hierro sérico: tubo rojo• Vitamina B12: tubo rojo• TP,TPT : Plasma citratado (Tubo Celeste), llenar hasta la

marca, la relación muestra-anticoagulante debe mantenerse. La muestra debe ser adecuada: Los Factores y las plaquetas se activan o desnaturalizan fácilmente.

• Glucosa, colesteroles y la mayoría de pruebas de química clínica y serología: tubo rojo (sin anticoagulante)

Observaciones: Estabilidad de la muestra

• Muchas veces las muestras se deben almacenar para procesarse posteriormente. Las condiciones y tiempos que es posible hacerlo están establecidas por la prueba y el método a realizar.

• Por ejemplo:– las Pruebas de coagulación en plasma y otras pruebas que requieren suero, lo ideal

es conservarlas:• 2 h a 22-24 °C• 4 h a 4 °C• 2 semanas a –20 °C • 6 meses a –70 °C2• Post Refrigeración, dejar que la muestra llegue a temperatura ambiente y mezclar unas 10

veces antes de meter en el equipo.

– Los Frotis sanguíneos:• Lo ideal es procesarlos tan pronto como sea posible • Aceptable 3 h

Observaciones: Estabilidad de la muestra• En Sangre Total (EDTA)

– Los recuentos de GRs, leucocitos y de plaquetas y los índices eritrocitarios permanecen habitualmente estables durante 8h.

– Aún así con el tiempo aumenta el Hto y disminuye la VES. – A 4 °C, los efectos en el recuento sanguíneo son insignificantes hasta las

24 h.– Nunca Congelar, ni someter a altas temperaturas muestras con EDTA

(Sangre total)– Ideal 2h máximo– Recuentos de Reticulocitos , disminuye posterior a 6h a TºC Ambiente, 24h

a 4ºC.– Hb sin cambios durante días.