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Resumen: M-016
Preparación anatómica de encéfalo bovinocon fines
didácticos.
Refojos, Manuel - Morley, Gabriela - Trindade de Veglia, H.
M.
Cátedra de Anatomía - Licenciatura en Enfermería - Facultad de
Medicina - UNNE.Sargento Cabral 2001 - (3400) Corrientes -
Argentina.Tel./Fax: +54 (03783) 423478
E-mail: [email protected]
ANTECEDENTES
El propósito de éste trabajo es proporcionar preparaciones
anatómicas de encéfalo para el aprendizaje de las estructuras
nerviosas, que son difíciles de comprender para el alumno sino
cuenta con piezas anatómicas que posibiliten visualizarlo explicado
en forma teórica.Ante la escasez de material humano, se recurrió a
material bovino.
MATERIAL Y METODO
Encéfalos bovinos frescos obtenidos en el matadero municipal
inmediatamente posterior al sacrificio del animal.
Soluciones químicas empleadas:
Solución de Mul li gan .40gr de fenol en cristales; 5 g. de
sulfato de cobre; 1,25 ml. de ácido clorhídrico; 1000 ml. de agua
destilada
Solución de Clorur o férrico.10 g. de cloruro férrico en 1000
ml. de agua destilada
Solución de Ferrocianuro de Potasio al 1%10 g. de ferrocianuro
de potasio en 1000 ml. de agua destilada
Materiales de laboratorio:
Estufa con temperatura controlada . Vaso precipitado de 1lt.
Guantes de látex. Pinzas de disección. Estiletes.
Recipientes amplios tipo cubetas de plástico una para cada
solución Rejilla para montaje de cortes: construida con unmarco de
caño rectangular, de aluminio forrado en plástico, y tela
mosquitera de plástico montada en el marco..Larejilla se hará del
mismo tamaño que la cubeta.1 cuchillo de hoja ancha y borde
filoso.
Tabla de corte: Construida con una tabla de madera de 20 x 20 cm
y 2 cm de espesor. Dos caños de aluminio de 8 mm.de diámetro
fijados a ésta en dos de sus lados y en forma paralela . Los caños
se usan para deslizar el cuchillo en forma pareja en el
momento de hacer los cortes, y obtener cortes de dimensiones y
superficies uniformes.
METODOLOGIA
Este proceso se debe seguir rigurosamente.
Obtención del material anatómico: se aconseja recurrir a un
frigorífico o matadero para la obtención de los encéfalosfrescos,
que no hayan sido congelados ni lesionados durante la matanza.
La extracción del encéfalo desde la cavidad craneal debe ser
cuidadosa y realizarse inmediatamente después de lamuerte del
animal para minimizar los procesos de autólisis frecuentes en el
sistema nervioso central.Fijación: Se utiliza solución
de formol al 10% , el encéfalo debe permanecer inmerso en ella de 2
a 3 semanas, seaconseja colocar la solución en una bolsa de
plástico para luego introducir el material para evitar que el
material se
deforme, transcurrido el tiempo mencionado, el encéfalo deberá
mostrar una consistencia firme que permita su
fácilmanipulación.Para verificar la correcta fijación el encéfalo
deberá haber perdido el color rojizo de los vasos sanguíneos
contenidos en
la cubierta meníngea.Lavado: Luego de la fijación
lavar el encéfalo durante seis horas dejando correr libremente el
agua por la superficie delórgano, eliminando de esa manera los
restos del fijador o material desprendido en el proceso.
Limpieza y disección: Consiste en retirar los restos de meninges
y vasos sanguíneos que permanecen en el encéfalo trassu extracción.
La disección se realiza con un estilete abriendo con éste las
meninges a nivel de los surcos y cisuras. Selavan los cortes
obtenidos con agua corriente durante 5 minutos. Los restos de
meninges se retiran con mucho cuidado
usando pinzas de disección, para no dañar el tejido nervioso en
el proceso. Se debe lavar frecuentemente para evitar ladesecación
de la pieza y para lograr la limpieza de la misma.Una vez
finalizada la limpieza del encéfalo se realiza una inspección
minuciosa desde una vista ventral , lateral y dorsal.
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Cortes: una vez finalizada la limpieza se procede a
realizar los cortes usando a tal fin la tabla preparada, y usando
uncuchillo de filo liso para evitar dejar huellas del corte.
Sujetar con firmeza la pieza para lograr cortes parejos yuniformes
evitando desgarrar las estructuras nerviosas.
Los cortes se pueden realizar en un plano frontal o coronal,
sagital y horizontal.Estos cortes se realizan teniendo en cuenta
que estructuras se van a estudiar.
Lavado. Se lavan los cortes con agua corriente durante 5 minutos
para extraer todo el formol y material sobrante.Técni ca de Mul l
igan: La importancia de esta técnica para el estudio del sistema
nervioso central radica en la posibilidad de diferenciar las
estructuras encefálicas en forma macroscópica, de manera que
permita apreciar suanatomía en toda su dimensión. La afinidad de la
solución de Mulligan por las proteínas de la sustancia gris
permite, junto con la de otras soluciones, teñir de azul
intenso (Prusian Blue) dicha sustancia y así diferenciarla de la
sustancia blanca.
Fundamentos del método de coloración:
Esta basado en una serie de reacciones químicas que producen los
elementos que constituyen la solución de Mulligan.El primer paso
consiste en sumergir la preparación en una solución de Mulligan
calentada a 70° . En esta solución elfenol, actuando como
mordiente, en un medio ácido ( por el HCl ) reducirá el Cu de
cúprico a cuproso, permitiendo la
unión del cobre cuproso a los grupos aminos de las proteínas. La
especificidad de la tinción por la sustancia gris estaríadada por
la mayor concentración proteica de la sustancia gris con respecto
de la blanca ( Norton, W.T; 1981). Estareacción requiere para
producirse de condiciones precisas de temperatura y pH. En este
paso es donde se produce la
tinción en sí, permitiendo los pasos sucesivos hacerla
visible.
Los cortes impregnados con la solución de Mulligan se llevan a
una solución de cloruro férrico, la cual oxida el cobrecuproso
depositado a cobre cúprico a la vez que reduce el hierro de férrico
a ferroso. El cobre y el hierro seintercambian entre sí, quedando
depositado el hierro en lugar del cobre. ( reacción de
sustitución)El siguiente paso, es llevar los cortes a una solución
de ferrocianuro de potasio que es una sal del ácido
cianhídricodonde el cianuro ha sido parcialmente saturado por el
hierro. El ferrocianuro de potasio se transforma entonces en
ferrocianuro férrico al reaccionar con el hierro depositado en
la preparación y queda fijado en la misma. Esta sustanciada un
color azul intenso en los sitios en que se ha depositado (sustancia
gris).
Técnica del Método de coloración: Consiste en una serie de pasos
en los que el material anatómico será sumergido endistintas
soluciones contenidas en diferentes recipientes, respetando una
secuencia que se detalla a continuación1° los cortes colocados en
la rejilla se sumergen en la solución de Mulligan durante 4
minutos. Deben estar totalmentesumergidos en la solución y no tomar
contacto unos con otros, con el fin de lograr una mejor perfusión
de la solución en
el material anatómico. Esta solución debe estar a 70° y puede
ser usada varias veces mientras conserve dichatemperatura.
2° retirar la rejilla del recipiente y dejar escurrir la
solución. Lavar los cortes con agua corriente durante 2 minutos,
demanera de retirar la solución en la que estuvieron sumergidas
previamente.3° Colocar los cortes en la solución de cloruro férrico
durante 2 minutos.4° Dejar escurrir la solución y lavar los cortes
con agua corriente durante 2 minutos.
5° Colocar en la solución de ferrocianuro de potasio durante 2
minutos. En este paso los cortes comienzan a tomar unacoloración
azul que se va intensificando con el tiempo.6° Retirar la rejilla,
dejar escurrir la solución de los cortes y lavarlos durante 5
minutos.
Nota: La cantidad de solución que se describe en este
trabajo es apta para teñir 60 cortes aproximadamente. Esto es
asímientras las soluciones no se contaminen demasiado con el
traslado de los cortes de un recipiente a otro. Para ello sesugiere
escurrir y lavar los cortes con abundante agua corriente antes de
transferirlos de una solución a otra.
Conservación: Una vez finalizada la tinción de las
piezas, se conservan en alcohol etílico. Se deben envolver las
piezasen telas y luego embeber las mismas con el conservante,
evitando de esta manera la deformación del material.
RESULTADOS
Una vez concluidos todos los pasos explicados en la técnica
se obtienen los cortes con la sustancia gris de color azul yla
sustancia blanca de color blanco, lo que nos permite estudiar las
estructuras encefálicas y reconocerlas fácilmenteEs necesario
destacar que la tinción se realiza superficialmente, de manera que
se deben realizar cortes numerosos paraapreciar la tinción ya que
si se intentara disecar después de teñidas las estructuras se
obtendría un tejido sin teñir pordebajo de la superficie.
DISCUSION
La técnica empleada es algo complicada, los pasos a seguir
tienen que ser rigurosamente respetados para obtener elresultado
deseado, de otra manera no se lo obtiene.
También los materiales a utilizar en las soluciones deben ser
puros y no estar contaminados porque de o sino losresultados
obtenidos varían, logrando otra cosaLa ventaja de contar con cortes
seriados de piezas teñidas radica en la posibilidad de seguir las
relaciones de cada una
de las estructuras con facilidad, y comprender así mejor su
forma y ubicación dentro del encéfalo.
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CONCLUSIONES
• El material obtenido es util para la enseñanza dado que
facilita el reconocimiento de las estructuras encefálicas
• La sustancia gris es reconocida por su color
azulado.
• El encéfalo bovino utilizado es de fácil obtención
• Los elementos químicos necesarios para desarrollar esta
técnica son accesibles y no son peligrosos.
BIBLIOGRAFIA
• Oackley Bruce, Schafer Rollei “Experimental
neurobiology: a Laboratory Manual “ The University of MichiganPress
1978
• Skinner James Neurociencia : Manual de Laboratorio
Editorial Trillas México 1983.
• Norton WT, Formation, Struture and biochemistry of
myelin en George Siegel et al Basic Neurochemistry.American Society
for Neurochemistry 1981.
• Kappers Ariën , Huber GC, Crosby EC “The comparative
Anatomy of the nervous System of Vertebrates ,
including man New York Hafner Publishing Co. 1960
• Cátedra de Anatomía Humana Facultad de Medicina
U.N.T.
