NTC4092 requisitos y directrices de laboratorio.pdf

8/10/2019 NTC4092 requisitos y directrices de laboratorio.pdf

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NORMA TCNICA NTCCOLOMBIANA 4092

2009-12-16

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS Y PRODUCTOSPARA ALIMENTACIN ANIMAL.REQUISITOS GENERALES Y DIRECTRICES PARAANLISIS MICROBIOLGICOS

E: MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDINGSTUFFS. GENERAL REQUIREMENTS AND GUIDANCEFOR MICROBIOLOGICAL. EXAMINATIONS

CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopcin idntica(IDT) respecto a su documento dereferencia, ISO 7218:2007.

DESCRIPTORES: microbiologa de alimentos; anlisismicrobiolgicos; productos lcteos;buenas practicas.

I.C.S.: 07.100.01

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproduccin Primera actualizacinEditada 2009-12-24


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PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismonacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamentalpara brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con elsector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas enlos mercados interno y externo.

La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnicaest garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo

caracterizado por la participacin del pblico en general.

La NTC 4092 (Primera actualizacin) fue ratificada por el Consejo Directivo de 2009-12-16.

Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda entodo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma atravs de su participacin en el Comit Tcnico 25 Microbiologa.

3M COLOMBIA S.A. -DIVISINMICROBIOLOGA-ALCALDA MAYOR DE BOGOT -SECRETARA GENERAL -DEPENDENCIA: ARCHIVO BOGOTALMACENES XITO S.A.ALPINA -PRODUCTOS ALIMENTICIOSALPINA S.A.-AMFAC LABORATORIOANNAR DIAGNSTICA IMPORT LTDA.ASBIOQUIM LTDA.ASINALBIOCONTROL

BIOQUILAB LTDABIOSOLUTIONS LTDACARULLA VIVERO S.A.CONGELADOS AGRCOLAS S.A. -CONGELAGRO-COOLECHERACORPOLAC -CORPOICA-ENZIPAN DE COLOMBIA LTDA.GASEOSAS POSADA TOBN S.A. -POSTOBN-INSPECTORATE COLOMBIA LTDA.

IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.KOYOMAD S.A.LABFARVE -LABORATORIO DEFARMACOLOGA VEGETAL-LABORATORIO EMICAL LTDA.LABORATORIO MICROBIOLOGICOBARRANQUILLA LTDA.LABORATORIO MICROBIOLGICOORTZ MARTNEZ LTDA.LABORATORIOS SFC LTDA.MEALS DE COLOMBIAMICROBILOGOS ASOCIADOS LTDA.MOLINOS DEL ATLNTICO S.A.

NULAB LTDA.PRODUCTOS LCTEOS EL RECREOPURIFICACIN Y ANLISIS DE FLUIDOSLTDA.QUALA S.A.TRIPLE A. S.A. E.S.P.UNIVERSIDAD DE LOS ANDESUNIVERSIDAD LIBRE- SECCIONALBARRANQUILLAUNIVERSIDAD SIMN BOLVAR


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Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de lassiguientes empresas:

ACONDESA S.A.

CORPORACIN PARA EL AVANCE DE LAMICROBIOLOGA Y LA MICROSCOPIAMICROSDUPONT QUALICONEMPRESA DE ACUEDUCTO YALCANTARILLADO DE BOGOT E.S.P.FABRICA DE ESPECIAS YCONDIMENTOS EL REY S.A.INDALPE LTDAJOHNSON DIVERSEY

KLIK S.A

LABORATORIO A.B.B.A.LABORATORIOS DECNO S.A.LABORATORIOS ERMA S.A.LESNIAK E,U.POSTOBN S.AUNIVERSIDAD DEL TOLIMAUNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIAUPTCVITROFARMA S.A.

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados

normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIN DE NORMALIZACIN


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NORMA TCNICA COLOMBIANA NTC 4092 (Primera actualizacin)

CONTENIDO

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PRLOGO

INTRODUCCIN

1. ALCANCE......................................................................................................................1

2. REFERENCIAS NORMATIVAS...................................................................................2

3. INSTALACIONES.........................................................................................................2

3.1 GENERALIDADES.......................................................................................................2

3.2 CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD ......................................................................2

3.3 DISEO DEL LABORATORIO ....................................................................................3

3.4 REAS DEL LABORATORIO .....................................................................................3

3.5 DISTRIBUCIN Y ACCESORIOS DE LAS INSTALACIONES...................................4

3.6 LIMPIEZA Y DESINFECCIN......................................................................................6

4. PERSONAL..................................................................................................................7

4.1 GENERALIDADES.......................................................................................................7

4.2 COMPETENCIA ...........................................................................................................7

4.3 VERIFICACIN DE LA COMPETENCIA CONTINUA DEL PERSONAL....................7

4.4 HIGIENE .......................................................................................................................7

5. APARATOS Y EQUIPOS.............................................................................................8

5.1 GENERALIDADES.......................................................................................................8

5.2 GABINETES PROTECTORES.....................................................................................9


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5.3 BALANZAS Y DILUTORES GRAVIMTRICOS........................................................10

5.4 HOMOGENIZADORES, MEZCLADORAS Y LICUADORAS ....................................11

5.5 MEDIDORES DE pH ..................................................................................................12

5.6 AUTOCLAVES ...........................................................................................................13

5.7 PREPARADORES DE MEDIOS ................................................................................15

5.8 INCUBADORAS.........................................................................................................15

5.9 REFRIGERADORES, CUARTOS PARA ALMACENAMIENTO EN FRO................17

5.10 CONGELADORES Y CONGELADORES DE TEMPERATURA ULTRA BAJA........17

5.11 BAOS CONTROLADOS TERMOSTTICAMENTE................................................18

5.12 VAPORIZADORES, INCLUYENDO BAOS DE AGUA EN EBULLICIN ..............20

5.13 HORNOS DE ESTERILIZACIN ...............................................................................20

5.14 HORNOS DE MICROONDAS ....................................................................................21

5.15 LAVADORAS PARA CRISTAL .................................................................................22

5.16 MICROSCOPIOS PTICOS ......................................................................................23

5.17 QUEMADORES DE GAS O INCINERADORES TIPO ALAMBRE............................23

5.18 DISPENSADORES PARA MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS ..........................24

5.19 MEZCLADORES DE VRTICE .................................................................................255.20 DISPOSITIVOS PARA RECUENTO DE COLONIAS ................................................25

5.21 EQUIPOS PARA CULTIVO EN UNA ATMSFERA MODIFICADA .........................26

5.22 CENTRFUGAS..........................................................................................................27

5.23 PLACA TRMICA Y MANTILLA DE CALEFACCIN ..............................................27

5.24 DISPENSADORES EN ESPIRAL ..............................................................................28

5.25 DESTILADORES, DESIONIZADORES Y UNIDADES DE SMOSIS INVERSA......29


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5.26 CRONMETROS Y DISPOSITIVOS DE TIEMPO.....................................................29

5.27 PIPETAS Y PIPETEADORES....................................................................................30

5.28 TERMMETROS Y DISPOSITIVOS PARA MONITOREO DETEMPERATURA, INCLUYENDO REGISTRADORES AUTOMTICOS...................31

5.29 SEPARADOR INMUNOMAGNTICO .......................................................................32

5.30 SISTEMA DE FILTRACIN .......................................................................................33

5.31 OTRO EQUIPO Y SOFTWARE..................................................................................33

6. PREPARACIN DE LA VIDRIERIA Y DE OTROS MATERIALESDE LABORATORIO ...................................................................................................33

6.1 PREPARACIN .........................................................................................................33

6.2 ESTERILIZACIN/DESCONTAMINACIN...............................................................34

6.3 EQUIPO Y MATERIALES DESECHABLES..............................................................34

6.4 ALMACENAMIENTO DE LA VIDRIERIA Y LOS MATERIALES LIMPIOS...............34

6.5 MANEJO DE VIDRIERIA Y MATERIALES ESTRILES...........................................34

6.6 USO DE LA DESCONTAMINACIN Y LA DESINFECCIN....................................35

6.7 MANEJO DE RESIDUOS...........................................................................................35

6.8 LAVADO.....................................................................................................................36

7. PREPARACIN Y ESTERILIZACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO...................36

8. MUESTRAS DE LABORATORIO ..............................................................................36

8.1 MUESTREO................................................................................................................36

8.2 TRANSPORTE ...........................................................................................................37

8.3 RECIBO......................................................................................................................37

8.4 ALMACENAMIENTO .................................................................................................38


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8.5 PORCIN DE ENSAYO.............................................................................................39

9. ANLISIS ...................................................................................................................39

9.1 PRECAUCIONES HIGINICAS DURANTE EL ANLISIS .......................................39

9.2 PREPARACIN DE LA SUSPENSIN INICIAL Y LAS DILUCIONES ....................41

10. ENUMERACIN.........................................................................................................42

10.1 GENERALIDADES.....................................................................................................42

10.2 ENUMERACIN USANDO UN MEDIO SLIDO ......................................................42

10.3 CLCULO Y EXPRESIN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS CONEL MEDIO SLIDO....................................................................................................45

10.4 ENUMERACIN DE LEVADURAS Y MOHOS .........................................................52

10.5 ENUMERACIN UTILIZANDO UN MEDIO LQUIDO ...............................................52

11. MTODO DE DETECCIN (MTODO CUALITATIVO)............................................59

11.1 GENERALIDADES.....................................................................................................59

11.2 PRINCIPIO..................................................................................................................59

11.3 MEDICIN DE LA INCERTIDUMBRE.......................................................................59

12. MTODOS DE CONFIRMACIN ..............................................................................60

12.1 GENERALIDADES.....................................................................................................60

12.2 PREPARACIN DE UN CULTIVO PURO .................................................................60

12.3 TINCIN DE GRAM (TCNICA DE HUCKER MODIFICADA)..................................60

12.4 USO DE GALERAS BIOQUMICAS PARA LA IDENTIFICACIN ..........................62

12.5 USO DE SONDAS DE CIDOS NUCLEICOS PARA LA IDENTIFICACIN............62

12.6 MTODOS SEROLGICOS......................................................................................63


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13. INFORME DE ENSAYO .............................................................................................64

14. VALIDACIN DE LOS MTODOS MICROBIOLGICOS ........................................64

14.1 VALIDACIN DE LOS MTODOS DE REFERENCIA..............................................64

14.2 VALIDACIN DE LOS MTODOS ALTERNATIVOS ...............................................64

14.3 VALIDACIN DE LOS MTODOS INTERNOS ........................................................64

15. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DE LOS RESULTADOS/CONTROLDE CALIDAD DEL DESEMPEO..............................................................................65

15.1 CONTROL INTERNO DE LA CALIDAD ....................................................................65

15.2 CEPAS DE REFERENCIA .........................................................................................65

15.3 EVALUACIN EXTERNA DE LA CALIDAD (ENSAYO DE SUFICIENCIA).............65

BIBLIOGRAFA...........................................................................................................................73

DOCUMENTO DE REFERENCIA..........................................................................................76

ANEXOS

ANEXO A (Informativo)PROPIEDADES DE ALGUNOS DESINFECTANTES...............................................................66

ANEXO B (Normativo)DETERMINACIN DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)...............................................67

TABLA

Tabla 1. Ejemplo de la seleccin de resultados positivos para el clculo del NMP .........58


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INTRODUCCIN

Al realizar anlisis microbiolgicos, es especialmente importante que:

- nicamente se aslen y enumeren aquellos microorganismos que estn presentes en lasmuestras;

- los microorganismos no contaminen el ambiente;

Con el fin de lograr esto, es necesario poner atencin a la higiene personal y usar tcnicas detrabajo que garantice, en la medida de lo posible, la exclusin de contaminacin externa.

Dado que, en esta norma, es posible brindar nicamente unos pocos ejemplos de lasprecauciones que se deben tomar durante los anlisis microbiolgicos, el conocimientocompleto de las tcnicas microbiolgicas y de los microorganismos involucrados es esencial.Es importante que los anlisis se realicen de una manera lo ms precisa que sea posible,incluyendo el monitoreo del registro de los aspectos que pueden afectar los resultados y losclculos de los nmeros de microorganismos y de la incertidumbre de los resultados.

En ltima instancia, es responsabilidad del jefe del laboratorio juzgar si las manipulaciones sonseguras y se pueden considerar buena prctica de laboratorio.

Un gran nmero de manipulaciones pueden, por ejemplo, ocasionar involuntariamente lacontaminacin cruzada y el analista siempre debera verificar la precisin de los resultadosobtenidos mediante su tcnica.

Con el fin de realizar los anlisis de manera correcta, es necesario tomar algunas precaucionesal construir y equipar y laboratorio.

Se deben tomar algunas precauciones, no solamente por razones de higiene sino tambin paragarantizar una buena reproducibilidad de los resultados. No es posible especificar todas lasprecauciones que se deben tomar en todas las circunstancias, pero esta norma por lo menos

suministra las medidas principales que se deben tomar al preparar, esterilizar, almacenar losmedios y utilizar el equipo.

Si se cumplen las directrices suministradas en esta norma, esto contribuir tambin a mantenerla salud y la seguridad del personal. La informacin adicional sobre este tema se encuentra enla literatura que se enumera en la seccin de bibliografa.


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MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS Y PRODUCTOS PARA ALIMENTACIN ANIMAL.REQUISITOS GENERALES Y DIRECTRICES PARA ANLISIS MICROBIOLGICOS

1. ALCANCE

Esta norma proporciona los requisitos generales y las directrices/opciones destinadas a tresusos principales:

- implementacin de las normas sobre microbiologa de alimentos, lcteos y productoslcteos para la deteccin o enumeracin de microorganismos, denominadas en adelante"normas especficas":

- buenas prcticas de laboratorio para laboratorios microbiolgicos de alimentos (elpropsito no es detallarlas en esta norma, existen manuales para tal fin);

- directrices para la acreditacin de laboratorios microbiolgicos para alimentos(esta norma describe los requisitos tcnicos de acuerdo con el Anexo B deNTC/ISO 17025:2005 para la acreditacin de laboratorios microbiolgicos por parte deorganizaciones nacionales).

Los requisitos de sta norma reemplazan a los correspondientes de las normas especficasexistentes.

Las instrucciones adicionales en el campo de los anlisis de biologa molecular se especificanen las norma ISO 22174.

Esta norma comprende el anlisis para determinar bacterias, levaduras y mohos y se puedeutilizar si se complementa con las directrices especficas para priones, parsitos y virus. Estanorma no tratar del anlisis para toxinas u otros metabolitos (por ejemplo aminas)provenientes de los microorganismos.

Esta norma se aplica a microbiologa de alimentos, a productos para alimentacin animal, alambiente de la produccin de alimentos y al ambiente de produccin primaria.

El propsito de esta norma es ayudar a garantizar la validez de los anlisis microbiolgicospara alimentos, ayudar a garantizar que las tcnicas generales utilizadas para realizar estosanlisis sean las mismas en todos los laboratorios, facilitar el logro de resultados homogneosen diferentes laboratorios y contribuir a la seguridad del personal del laboratorio al evitar los

riesgos de infeccin.


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2. REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicacin deeste documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica nicamente la edicin citada.Para referencias no fechadas, se aplica la ltima edicin del documento normativo referenciado

(incluida cualquier correccin).

NTC 4491 (todas sus partes), Microbiologa de alimentos y alimentos para animales.preparacin de muestras para ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para anlisismicrobiolgico.

NTC 5014, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Protocolo para la validacinde mtodos alternos.

NTC 5158, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Reaccin en cadena de lapolimerasa -PCR- para la deteccin de patgenos de alimentos. Requerimientos especficospara el mtodo general.

GTC 78, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Gua para la preparacin yproduccin de medios de cultivo. Gua general para el aseguramiento de la calidad para lapreparacin de los medios de cultivo en el laboratorio.

DE 061-08, Calidad del agua. Gua general sobre la enumeracin de microorganismos porcultivo.

ISO 835 (todas sus partes), Laboratory Glassware. Graduated Pipettes.

ISO 8655-1, Piston-Operated Volumetric Apparatus. Part 1: Terminology, GeneralRequirements and User Recommendations.

ISO/TS 19036, Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Guidelines for the Estimationof Measurement Uncertainty for Quantitative Determinations.

3. INSTALACIONES

3.1 GENERALIDADES

Esta seccin suministra los requisitos generales, por ejemplo los principios de diseo yorganizacin, para la distribucin de un laboratorio microbiolgico.

El anlisis de las muestras de la etapa de la produccin primaria (especialmente para larecepcin y la preparacin de las muestras) debe ser independiente del anlisis de otrasmuestras con el fin reducir el riesgo de contaminacin cruzada.

3.2 CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD

El diseo del laboratorio debe cumplir con los requisitos de seguridad, los cuales dependerndel tipo de microorganismo. Para este fin, los microorganismos se clasifican en cuatrocategoras de riesgo:

- Categora de riesgo 1 (riesgo muy bajo o no existente para el individuo y para la

comunidad).


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Un microorganismo que no es probable que cause enfermedad a los humanos ni losanimales.

- Categora de riesgo 2 (riesgo moderado para el individuo, riesgo bajo para lacomunidad).

Un patgeno que puede causar enfermedad a los humanos o los animales pero que noes probable que sea un peligro grave para los trabajadores del laboratorio, la comunidadni el ambiente. Las exposiciones en el laboratorio pueden causar infeccin humanagrave, pero estn disponibles el tratamiento eficaz y las medidas preventivas, y el riesgode dispersin de la infeccin es limitado.

- Categora de riesgo 3(riesgo alto para el individuo, riesgo bajo para la comunidad).

Un patgeno que usualmente causa enfermedad grave a los humanos o los animalespero que comnmente no se propaga de un individuo infectado a otro. Estn disponiblesel tratamiento eficaz y las medidas preventivas.

- Categora de riesgo 4(riesgo alto para el individuo y para la comunidad).

Un patgeno que usualmente causa enfermedad grave para los humanos o los animalesy que se puede trasmitir fcilmente de un individuo a otro, de manera directa o indirecta.Usualmente no estn disponibles el tratamiento eficaz ni las medidas preventivas.

ADVERTENCIA Consulte los reglamentos nacionales que definen, en particular, la categora de riesgo de losmicroorganismos que se encuentran dentro de las fronteras del pas en cuestin.

3.3 DISEO DEL LABORATORIO

Las directrices para la distribucin del laboratorio que se describen a continuacin, comprendenlos anlisis para la deteccin de microorganismos pertenecientes a las categoras de riesgo 1,2 y 3 para microbiologa de alimentos.

Cabe anotar que pueden ser necesarias medidas de seguridad adicionales dependiendo de lalegislacin local.

3.4 REAS DEL LABORATORIO

3.4.1 Generalidades

El laboratorio comprende reas asociadas con las muestras y los ensayos (vase el numeral 3.4.2)y reas generales (vase el numeral 3.4.3). Estas reas deben ser independientes.

3.4.2 reas asociadas con las muestras y los ensayos

Se considera una buena prctica tener lugares independientes o reas claramente designadaspara las siguientes actividades:

- recibir y almacenar las muestras;

- preparacin de muestras, en particular en el caso de materias primas (por ejemploproductos en polvo que contienen una alta cantidad de microorganismos);

- anlisis de las muestras (desde la suspensin inicial), incluyendo la incubacin de losmicroorganismos;


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- manipulacin de los patgenos esperados;

- almacenamiento de cepas de referencia y otras;

- preparacin y esterilizacin de medios de cultivo y equipo;

- almacenamiento de medios de cultivo y reactivos;

- anlisis de productos alimenticios para determinar la esterilidad;

- descontaminacin;

- limpieza de vidriara y otros equipos;

- almacenamiento de sustancias qumicas peligrosas, que se conservan preferiblementeen gabinetes, alacenas, recintos o edificaciones de diseo especial.

3.4.3 reas generales

Se deben considerar reas independientes para los siguientes usos:

- entradas, corredores, escaleras, ascensores;

- reas administrativas (por ejemplo secretaras, oficinas, recintos para documentos,etc.);

- guardarropas y baos;

- cuartos de archivo;

- almacenes;

3.5 DISTRIBUCIN Y ACCESORIOS DE LAS INSTALACIONES

3.5.1 Objetivos

El objetivo es garantizar que el ambiente dentro del cual se lleven a cabo los anlisismicrobiolgicos no afecte la confiabilidad de los resultados de ensayo.

Organice las instalaciones de modo que se evite el riesgo de contaminacin cruzada. Algunas

formas para lograr este objetivo son, por ejemplo:a) construir el laboratorio de acuerdo con el principio de distribucin "sin retorno";

b) realizar los procedimientos de manera secuencial utilizando las precaucionescorrespondientes para garantizar la integridad de la muestra y del ensayo (por ejemploutilizar recipientes sellados);

c) separar las actividades en el tiempo y el espacio.

Evite condiciones extremas tales como exceso de temperatura, polvo, humedad, vapor, ruido,vibracin, etc.


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El espacio debera ser suficiente para permitir que las reas de trabajo se conserven limpias yordenadas. El espacio requerido debera estar acorde con el volumen de los anlisis que semanejan y la organizacin interna global del laboratorio. El espacio debera ser como el exigidopor los reglamentos nacionales, cuando ellos existen.

3.5.2 Accesorios

Las instalaciones para los ensayos se deberan construir y equipar de la siguiente manera conel fin de reducir el riesgo de contaminacin por polvo y, por ende, por microorganismos (paramicroorganismos en la categora de riesgo 3, consulte los reglamentos nacionales einternacionales).

a) Las paredes, cielos rasos y pisos debera ser lisos, fciles de limpiar y resistentes a losdetergentes y los desinfectantes utilizados en los laboratorios.

b) Los pisos debera ser antideslizantes.

c) Las tuberas areas que transportan fluidos no deberan cruzar las instalaciones, amenos que estn encerradas hermticamente. Cualquier otra estructura area deberaestar cubierta o tener un acceso fcil para la limpieza regular.

d) Las ventanas y las puertas se deberan poder cerrar cuando se realizan los ensayoscon el fin de minimizar las corrientes de aire. Adems, se deberan disear para evitar laformacin de trampas del polvo y facilitar su limpieza. La temperatura ambiente (18 C a27 C) y la calidad del aire (contenido de microorganismos, tasa de dispersin del polvo,etc.) deberan ser compatibles con la realizacin de los ensayos. Para este fin serecomienda un sistema de ventilacin por filtro para el aire de entrada y el aire desalida.

e) Se recomienda instalar un sistema de extraccin adecuado para evitar la exposicin alpolvo que se origina por la manipulacin de medios de cultivo deshidratados, ymuestras en polvo o cubiertas del polvo.

f) Cuando los ensayos se van a realizar en una atmsfera con contaminacin baja, lahabitacin debera estar equipada especialmente con un gabinete de flujo de airelaminar limpio o un gabinete de seguridad, o ambos.

g) Si es necesario, el ambiente del laboratorio debera estar protegido contra los efectospeligrosos de la radiacin solar mediante el uso de contraventanas o paneles de vidriotratados adecuadamente. Las persianas instaladas en el interior no son adecuadas ya

que dificultan la limpieza y pueden ser una fuente de polvo.3.5.3 Otros puntos

Se recomienda considerar los siguientes puntos:

- disponibilidad del suministro de agua, con una calidad adecuada para el uso previsto;

- disponibilidad de electricidad;

- disponibilidad de gas (por tuberas o en cilindros);

- iluminacin adecuada en cada seccin del laboratorio;


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- mesones de los bancos del laboratorio y muebles elaborados en material liso eimpermeable que sea fcil de limpiar y desinfectar;

- muebles del laboratorio diseados de manera tal que se facilite la limpieza de los pisos(por ejemplo, muebles mviles);

- en las reas de ensayo no debe haber muebles, documentos ni otros elementosdiferentes de aquellos que sean estrictamente necesarios para las actividades deensayo;

- disponibilidad de medios de almacenamiento para los documentos utilizados cuando semanipulan muestras, medios de cultivo, reactivos, etc.;

- disposicin de lavamanos en cada cuarto de ensayo y, si es necesario, en las reasgenerales, de preferencia cerca de la puerta;

- disposicin de una autoclave para la destruccin de materiales de desecho

contaminados y medios de cultivo, a menos que se tenga en el lugar un sistemaadecuado para la remocin de los desechos contaminados para incineracin;

- disposicin de sistemas de seguridad que cubran incendios, emergencias y duchas deemergencias e instalaciones para lavado ocular;

- disposicin de instalaciones de primeros auxilios.

3.6 LIMPIEZA Y DESINFECCIN

Se recomienda verificar los siguientes puntos:

a) Pisos, paredes, cielos rasos, mesones de los bancos del laboratorio, muebles y unionesentre ellos deberan estar sometidos a mantenimiento y reparacin regulares con el finde evitar grietas que puedan actuar como fuente de contaminacin.

b) Se recomienda realizar limpieza y desinfeccin regulares con el fin de mantener lasinstalaciones en una condicin adecuada para realizar los ensayos. Las superficiescontaminadas o potencialmente contaminadas se deberan descontaminar utilizando undesinfectante que sea bactericida y fungicida.

NOTA 1 Las habitaciones y equipos se pueden descontaminar utilizando fumigacin con vapor deformaldehdo, si as lo permiten los reglamentos nacionales.

c) Los sistemas de ventilacin y sus filtros se deberan someter a mantenimiento regular ylos filtros se deberan cambiar cuando sea necesario.

d) La calidad microbiolgica de las superficies de trabajo del laboratorio, las superficies decontacto con el personal y el aire se deberan monitorear con regularidad (la frecuenciadepende de los resultados de ensayos previos).

e) La contaminacin superficial se puede estimar aplicando directamente a la superficieuna placa de contacto que contenga agentes de neutralizacin adecuados contra losdesinfectantes (por ejemplo, lecitina, tiosulfato de sodio). La calidad del aire se puedeexaminar mediante exposicin durante 15 min. de una caja de Petri abierta que

contenga un medio de agar no selectivo (por ejemplo agar para recuento de placa PCA)o un agar selectivo adecuado para el microorganismoobjeto que se est buscando (porejemplo, moho).


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NOTA 2 Tambin se pueden utilizar otros mtodos con el fin de estimar la contaminacin de lassuperficies y del aire. Vase la norma ISO 18593.

4. PERSONAL

4.1 GENERALIDADES

Los requisitos generales de la competencia del personal se pueden encontrar en NTC-ISO17025.

4.2 COMPETENCIA

Para cada mtodo o tcnica, se deben definir criterios objetivos para la evaluacin de lacompetencia adecuada, tanto inicial como continuamente.

La competencia se puede establecer dentro del laboratorio mediante el control de calidadinterna (vase el numeral 15.1.2).

NOTA Uno de los medios de investigar la causa de un desempeo deficiente (pipeteo, homogeneidad deficientede la suspensin inicial, recuento, etc.) en el caso de la enumeracin mediante el recuento de las colonias se indicaen las normas ISO 14461-1.

4.3 VERIFICACIN DE LA COMPETENCIA CONTINUA DEL PERSONAL

La verificacin de la competencia continua del personal se debera evaluar con regularidadfrente a los parmetros objeto. Esto incluye la participacin en programas de aseguramiento dela calidad interna, pruebas de competencia (vase la GTC 55-1), el uso de materiales dereferencia o mediante pruebas de autoevaluacin para la enumeracin de microorganismos, talcomo se describe en la norma ISO 14461-2.

4.4 HIGIENE

Se deben tomar las siguientes precauciones de higiene personal con el fin de evitar lacontaminacin de las muestras y los medios de cultivo, y evitar el riesgo de infeccin delpersonal.

a) Utilizar vestimenta de laboratorio ajustada correctamente que est limpia y en buenascondiciones, elaborada a partir de telas que limiten los riesgos de inflamabilidad. Estavestimenta no se debe usar fuera de las reas de trabajo ni, en lo posible, en losguardarropas.

b) Utilizar proteccin para el cabello y la barba, si es necesario para la integridad de lamuestra.

c) Mantener las uas limpias y preferiblemente cortas.

d) Lavar las manos exhaustivamente con agua tibia, preferiblemente suministrada por ungrifo que no sea de operacin manual, antes y despus de los anlisis microbiolgicos einmediatamente despus de utilizar los baos. Use jabn lquido o en polvo o,posiblemente, un desinfectante suministrado de preferencia por un dispensador que semantenga limpio. Para el secado de las manos, utilice toallas de papel desechables otoallas de tela desechables. Estas precauciones se aplican tanto al personal dellaboratorio como a los visitantes.


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e) Cuando se trabaje con muestras, cultivos y medios expuestos y cuando se realice lainoculacin, se debe evitar hablar, toser, etc.

f) Las personas que tengan infecciones o enfermedades de la piel deben tomarprecauciones cuando existe la probabilidad de que los microorganismos provenientes

de ellas contaminen las muestras y puedan invalidar los resultados.

g) No comer ni beber en el laboratorio y no poner alimentos para consumo personal en losrefrigeradores o los congeladores del laboratorio.

h) Se prohbe utilizar las pipetas con la boca.

5. APARATOS Y EQUIPOS

5.1 GENERALIDADES

Segn las buenas prcticas de laboratorio, todos los aparatos y equipos se deberan mantenerlimpios y en buenas condiciones de funcionamiento. Antes del uso, se debera verificar que elequipo sea idneo para los propsitos previstos y su desempeo se debera monitoreardurante el uso, cuando corresponda.

Cuando sea necesario, el equipo y los dispositivos de monitoreo deberan calibrarse y tenertrazabilidad hasta normas nacionales, as como llevar a cabo las verificaciones intermediasnecesarias y la recalibracin, y documentar los procedimientos y los resultados.

Se recomienda verificar y mantener el equipo con regularidad con el fin de garantizar laseguridad y adaptacin para el uso. Los equipos se deberan monitorear de acuerdo con lascondiciones de trabajo y la precisin exigida para los resultados.

La frecuencia de calibracin y de revisiones de verificacin de cada elemento del equipo, en lamayora de los casos, no se especifica en esta norma dado que debe ser determinada por cadalaboratorio dependiendo del tipo de equipo y de su nivel de actividad, y debe estar enconcordancia con las instrucciones del fabricante. En una cantidad limitada de casos, se haespecificado una frecuencia dado que se consider esencial.

Los aparatos y equipos se deben construir e instalar para facilitar el funcionamiento y permitir lafacilidad de mantenimiento, limpieza, descontaminacin y calibracin.

Las incertidumbres de la medicin que se indican en esta seccin se relacionan con el aparato

y el equipo en cuestin y no con el mtodo de anlisis en su totalidad.En toda esta seccin, se proporcionan los requisitos para la precisin en la medicin de losequipos de medicin. stos se basan en la tolerancia prctica que se requiere para demostrarun control adecuado del equipo en el uso rutinario. La precisin establecida se relaciona con laincertidumbre metrolgica del dispositivo (vase la norma ISO Gua 99).

Para el equipo de control de la temperatura, verifique la estabilidad y homogeneidad de latemperatura antes del uso inicial y despus de toda reparacin o modificacin que pueda tenerun efecto en el control de la temperatura.


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5.2 CABINAS PROTECTORAS

5.2.1 Descripcin

Una cabina protectora es una estacin de trabajo con flujo de aire laminar horizontal o vertical

para eliminar del aire el polvo y otras partculas tales como microorganismo.

La cantidad mxima tolerable de partculas por metro cbico, con un tamao superior o igual a0,5 m, representa la clasificacin de dispersin de polvo de un gabinete de seguridad. Paralas cabinas utilizados en microbiologa, la cantidad de partculas no debe exceder 4 000 pormetro cbico.

Las cabinas para uso en laboratorios microbiolgicos son de cuatro tipos:

a) Las cabinas de seguridad de clase I son cabinas protectores de escape con frenteabierto destinados a la proteccin del operario y del ambiente, pero no proteger alproducto de la contaminacin externa. Los aerosoles potencialmente infectados sern

contenidos dentro de las cabinas y atrapados mediante impacto en el filtro. El airefiltrado normalmente se descarga hacia la atmsfera; si esto no se hace, el aire debepasar a travs de dos filtros HEPA montados en serie. Ellos no se recomiendan paratrabajo con patgenos de categora de riesgo 3 debido a las dificultades para mantenery garantizar una proteccin adecuada del operario.

b) Las cabinas de seguridad de clase II protegen el producto, el operario y el ambiente.Ellos recirculan parte del aire filtrado, expulsando parte hacia la atmsfera y tomandoaire de reemplazo a travs de la abertura de trabajo, suministrando as la proteccinpara el operario. Son adecuados para el trabajo con patgenos de la categora deriesgo 3.

c) Las cabinas con flujo de aire laminar horizontal protegen el trabajo contra lacontaminacin, pero expulsan los aerosoles generados hacia la cara del operario. Por lotanto no son adecuados para manipular cultivos inoculados ni para la preparacin decultivos de tejidos.

d) Las cabinas con flujo de aire laminar vertical protegen al producto mediante el uso delflujo laminar vertical del aire filtrado a travs de los HEPA. Tambin protegen al operarioa travs del uso de aire recirculado internamente. Son particularmente convenientespara brindar un ambiente asptico para la manipulacin de productos estriles y paraproteger al operario cuando manipula productos en polvo.

Utilice cabinas protectoras para todo el trabajo que implique la manipulacin de patgenos ypolvos contaminados, si as lo exigen los reglamentos nacionales.

No se recomienda la utilizacin de quemadores de gas ni incineradores tipo alambre dentro delas cabinas. Si ello es necesario, el quemador de gas debera tener una llama pequea demanera que no se perturbe el flujo del aire. Una alternativa conveniente es la utilizacin deequipo desechable (asas, pipetas, etc.)

5.2.2 Uso

Las cabinas se deberan mantener libres de equipo, en la medida de lo posible.

Cuando sea factible, ponga todo lo necesario dentro de la cabina antes de empezar el trabajocon el fin de minimizar la cantidad de movimientos del brazo hacia dentro y fuera de la abertura


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de trabajo. Coloque el equipo y los materiales de manera tal que se reduzca al mnimo laperturbacin del flujo del aire en la abertura de trabajo.

Los operarios deberan estar adecuadamente entrenados en el uso correcto de las cabinas conel fin de garantizar su seguridad y la integridad del producto o el cultivo.

5.2.3 Limpieza y desinfeccin

Limpie y desinfecte el rea de trabajo despus de la utilizacin con un desinfectante adecuadoy no corrosivo, segn las instrucciones del fabricante. Examine con regularidad las rejillas dealambre que protegen los prefiltros y limpie con un pao empapado de desinfectante.

Para las cabinas con flujo laminar, la superficie del filtro se debera limpiar al vaco conregularidad, teniendo cuidado para no daar el medio de filtro.

Los gabinetes de seguridad se deberan fumigar antes del cambio o el mantenimiento del filtro.

Despus de la limpieza de los gabinetes, se pueden utilizar lmparas UV para la desinfeccin.Estas lmparas se deberan limpiar con regularidad y reemplazar de acuerdo con lasinstrucciones del fabricante.

5.2.4 Mantenimiento e inspeccin

Utilice gabinetes protectores que sean adecuados para la aplicacin y las condicionesambientales previstas del laboratorio.

La eficiencia de un gabinete protector debe ser verificada por una persona calificada en elmomento del recibo y en adelante a intervalos regulares, segn las recomendaciones delfabricante, y tambin despus de toda reparacin o modificacin.

Se recomienda realizar la verificacin peridica para determinar la ausencia de contaminacinmicrobiana mediante la revisin de la superficie de trabajo y las paredes del gabinete.

Se aconseja realizar una verificacin peridica de la cantidad de microorganismostransportados por el aire que estn presentes durante la operacin de los filtros utilizando elequipo usual. Por ejemplo, exponga varias cajas de Petri abiertas que contengan un medio decultivo de agar no selectivo (por ejemplo PCA) en cada cabina durante 30 min. Se puedenutilizar otros mtodos.

5.3 BALANZAS Y DILUTORES GRAVIMTRICOS

5.3.1 Uso e incertidumbre de la medicin

Las balanzas se utilizan principalmente para pesar la porcin de ensayo de la muestra que seva a examinar y los componentes del medio de cultivo y los reactivos. Adems, se puedenutilizar para realizar mediciones de volmenes del fluido de la dilucin por masa

Los dilutores gravimtricos son instrumentos electrnicos que constan de una balanza y undispensador de lquido programable que se utilizan durante la preparacin de las suspensionesiniciales de la muestra; funcionan mediante la adicin de diluyente a una submuestra en unarelacin establecida. La submuestra se pesa despus segn la tolerancia especificada en laaplicacin y el dilutor se ajusta para dispensar una cantidad suficiente de diluyente para la

relacin exigida (por ejemplo, 9 a 1 para diluciones decimales).


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Un laboratorio microbiolgico para alimentos debe estar equipado con balanzas con rango eincertidumbre de medicin exigidos para los diferentes productos que se van a pesar.

A menos que se indique algo diferente, los errores mximos permisibles deberan ser de 1 % omejor al pesar las muestras de ensayo.

Ponga el equipo sobre una superficie horizontal y estable, ajustado segn necesidad paragarantizar que est a nivel y protegido contra la vibracin y las corrientes de aire.


El equipo se debera limpiar y desinfectar despus de la utilizacin o inmediatamente despusdel derrame durante el pesaje, con un desinfecte adecuado y no corrosivo.

5.3.3 Verificacin de desempeo y calibracin

Una persona entrenada debe verificar regularmente el desempeo del sistema de balanzas

durante el uso y despus de la limpieza con pesas de verificacin. La calibracin debe serrevisada para todo el rango por una persona calificada, a una frecuencia que depende del uso.

Las pesas de verificacin tambin se pueden revisar inmediatamente despus de la calibracinde la balanza.

5.4 HOMOGENIZADORES, MEZCLADORAS Y LICUADORAS

5.4.1 Descripcin

Este equipo se utiliza para preparar la suspensin inicial a partir de la muestra de ensayo deproductos no lquidos.

Se pueden utilizar los siguientes aparatos:

- mezclador peristltico (homogenizador peristltico) con bolsas estriles, posiblementecon un dispositivo para ajustar la velocidad y el tiempo,

- un homogenizador rotatorio (licuadora), cuya velocidad terica est entre 8 000 r/min y45 000 r/min inclusive, con recipientes de vidrio o metlicos que se puedan esterilizar yequipados con tapas,

- un mezclador vibratorio (sistema de pulsificacin) con bolsas estriles, o

- algn otro sistema de homogenizacin con eficiencia equivalente.

En algunos casos, la mezcla manual se puede realizar utilizando esferas de cristal estriles conun dimetro adecuado (aproximadamente 6 mm; vanse las normas NTC 4491-2 hasta laNTC 4491-4 y la ISO 6887-5).

5.4.2 Uso

El tiempo usual de funcionamiento de un homogenizador peristltico es de 1 min a 3 min.(vanse las normas NTC 4491-2 hasta la NTC 4491-4 y ISO 6887-5con respecto a losalimentos especficos).

No use este tipo de aparatos para algunos productos alimenticios tales como:


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- productos con riesgo de perforacin de la bolsa (presencia de partculas filosas, duras osecas);

- productos que son difciles de homogenizar debido a su textura (por ejemplo, lassalchichas tipo salami).

El homogenizador rotatorio debe operar durante un tiempo que permita que la cantidad total derevoluciones est entre 15 000 r/min y 20 000 r/min. Incluso en el homogeneizador ms lento,este tiempo no debe exceder 2,5 min.

El mezclador vibratorio se puede usar para la mayora de productos alimenticios, incluyendo losproductos duros y secos. El tiempo usual de funcionamiento es de 0,5 min a 1 min. S esprobable que se encuentren microorganismos en la profundidad de estructuras cohesivas, lamuestra se debera cortar en trozos pequeos antes del procesamiento.

Las esferas del cristal se pueden utilizar para la preparacin, mediante agitacin, de lassuspensiones iniciales de algunos productos viscosos o espesos, en particular algunos

productos lcteos (vase las normas especficas).


Limpie y desinfecte los homogenizadores peristlticos y los mezcladores vibratorios conregularidad y despus del vertido o derrame de las bolsas.

Para homogenizadores rotatorios, limpie y esterilice el recipiente metlico o de vidrio despusde cada uso.

5.4.4 Mantenimiento

Inspeccione y mantenga el equipo de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

5.5 MEDIDORES DE pH

5.5.1 Descripcin

El medidor de pH se utiliza para medir la diferencia potencial, a una temperatura determinada,entre un electrodo de medicin y uno de referencia, ambos electrodos estn introducidos en elproducto. El medidor debe tener la capacidad para medir con una precisin de 0,05 unidadesde pH y su resolucin debe ser de 0,01 unidades de pH. El medidor de pH debe estar equipadocon compensacin de temperatura ya sea manual o automtica.

NOTA El electrodo de medicin y el de referencia usualmente estn juntos en un sistema de electrodo combinado.

5.5.2 Uso

El medidor de pH se usa para medir el valor de pH del medio de cultivo y de los reactivos paraverificar si se necesitan ajustes durante la preparacin y como verificacin de la calidaddespus de la esterilizacin.

Tambin se pueden utilizar para medir el valor de pH de las muestras y de las suspensiones dela muestra. El uso de un medidor de pH se discute en la norma especfica para el producto quese va a analizar, en la cual se especifican las condiciones para la determinacin del valor de pH

y para el ajuste de dicho valor.


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Ajuste el medidor de pH segn indicaciones del manual del fabricante y mida el valor de pH auna temperatura normalizada, por ejemplo 25 C. Tome el valor de pH despus de alcanzar laestabilizacin. Registre el valor con dos cifras decimales.

NOTA La lectura se puede considerar estable cuando el valor de pH medido en un perodo de 5 s vara no ms

de 0,02 unidades de pH. Utilizando electrodos en buena condicin, normalmente el equilibrio se alcanza en un lapsode 30 s.

5.5.3 Verificacin y ajuste

Verifique el medidor de pH de acuerdo con las instrucciones del fabricante, utilizando por lomenos dos y, preferiblemente, tres soluciones amortiguadas estndar, por lo menosdiariamente antes de la utilizacin. Defina los errores mximos permisible para estaverificacin, dependiendo del uso.

La soluciones estndar deben tener valores de pH especficos con dos cifras decimales a latemperatura de medicin (en general, pH 7,00 y pH 4,00 o pH 9,00 a 25 C, o ambos, segn las

instrucciones del fabricante). Estos estndares utilizados deben cubrir el valor que pH que seva a medir.

Despus de la verificacin del medidor de pH con las dos soluciones amortiguadas estndartrazables, el pH se debera verificar utilizando un tercer amortiguador, llamado amortiguador decontrol, por ejemplo de pH 5 u 8.

Ajuste el medidor de pH cuando las verificaciones den un resultado que est por fuera de loserrores mximos permisibles y segn las instrucciones del fabricante.

Este ajuste puede ir seguido de una calibracin la cual permitira estimar la incertidumbre demedicin del medidor de pH.

5.5.4 Mantenimiento

Revise y mantenga los electrodos segn las instrucciones del fabricante. Es necesario, enparticular, monitorear con regularidad las siguientes condiciones:

- la condicin de los electrodos con respecto al envejecimiento y la acumulacin desuciedad, y

- el tiempo de respuesta y la estabilidad.

Enjuague los electrodos con agua destilada o desionizada despus de cada uso. Con el fin de

considerar la acumulacin de suciedad y el envejecimiento de los electrodos, lmpielosregularmente de forma ms exhaustiva de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Almacene los electrodos segn las instrucciones del fabricante.

5.6 AUTOCLAVES

5.6.1 Descripcin

Una autoclave permite alcanzar una temperatura de vapor saturado en la cmara y se utilizapara la destruccin de microorganismos.

La autoclave debera estar equipada con:


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- por lo menos una vlvula de seguridad,

- un grifo de drenaje,

- un dispositivo de regulacin que permita que la temperatura dentro de la cmara se

mantenga en un rango de 3 C con respecto a la temperatura objeto (para tener encuenta la incertidumbre de medicin asociada con el termopar de medicin), y

- una sonda de temperatura o un termopar de registro.

Tambin debera tener un cronmetro y un registrador de temperatura.

5.6.2 Uso

Con la esterilizacin a vapor, todo el aire se expulsa antes de que se incremente la presin. Sila autoclave no est ajustada con un dispositivo automtico de evacuacin, es necesarioeliminar el aire hasta que se emita un chorro continuo de vapor.

Para la destruccin de los microorganismos, el vapor saturado en la cmara debe estar a unatemperatura mnima de 121 C.

Durante el mismo ciclo de esterilizacin, no utilice la autoclave para esterilizar equipo limpio (omedios de cultivo) ni al mismo tiempo para descontaminar equipo utilizado (o medios de cultivousados).

Es preferible utilizar autoclaves independientes para estos dos procesos. Despus de estar enla autoclave, todos los materiales y el equipo se deberan dejar enfriar dentro de sta antes deretirarlos.

Por razones de seguridad, no retire el contenido hasta que la temperatura haya cado pordebajo de 80 C aproximadamente.

5.6.3 Mantenimiento

Limpie la cmara, drene el filtro y los sellos de la puerta con regularidad. Verifique la integridadde los sellos de la puerta. Realice las operaciones de drenaje y el descamado, si es necesario,a intervalos regulares segn las recomendaciones del fabricante.

5.6.4 Verificacin y calibracin

El autoclave se debe conservar en buenas condiciones de funcionamiento y personalcompetente y calificado la deben inspeccionar con regularidad de acuerdo con las instruccionesdel fabricante.

Conserve los instrumentos de monitoreo en buen funcionamiento y verifquelos conregularidad.

La validacin inicial debera incluir estudios de desempeo para cada ciclo de operacin y cadaconfiguracin de carga utilizados en la prctica. Es recomendable repetir este proceso despusde reparaciones o modificaciones importantes. Dentro de la carga se deberan ubicarsuficientes sensores de temperatura para demostrar la penetracin adecuada del calor entodos los lugares. En la validacin y la revalidacin se debera considerar la idoneidad de los

tiempos de incremento de calor y de descenso de la temperatura as como la temperatura deesterilizacin.


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Para cada carga, como mnimo, se debera incluir un indicador del proceso en el centro de lacarga con el fin de verificar el proceso de calentamiento cuando no se dispone de un registrotrazable de la eficiencia del proceso.

5.7 PREPARADORES DE MEDIOS

5.7.1 Descripcin

Un preparador de medios est diseado principalmente para la esterilizacin de volmenesgrandes de medios (>1 L). Consiste en un dispositivo con un recipiente de calentamiento, conchaqueta de agua y agitacin constante. El equipo tambin debe tener calibre de temperatura,calibre de presin, cronmetro y vlvula de seguridad.

Adems, la unidad debera tener un bloqueo de seguridad para evitar la abertura hasta que sehaya alcanzado una temperatura de


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5.8.2 Uso

Las incubadoras deben estar equipadas con un sistema de regulacin que permita que latemperatura u otros parmetros se mantengan uniformes y estables en todo el volumen detrabajo. Defina el volumen de trabajo para garantizar que esto se logre.

Si la temperatura ambiente es prxima o superior a la de la incubadora, es necesario ajustar unsistema de enfriamiento en la cmara.

Las paredes de las incubadoras deberan estar protegidas de la luz solar.

Si es posible, las incubadoras no se deberan llenar totalmente en una sola operacin porque elmedio de cultivo tardar ms en alcanzar la temperatura de equilibrio, cualquiera sea el tipo deincubadora que se utilice (conveccin de aire forzado u otro). Abstngase de dejar abierta lapuerta de la incubadora por periodos largos.

Al cargar las incubadoras, se recomienda poner especial atencin a la circulacin del aire

(vase el numeral 10.2.4).


Limpie y desinfectan con regularidad las paredes internas y externas de la incubadora y, si serequiere, retire el polvo del sistema de ventilacin.

5.8.4 Verificacin

Revise la estabilidad de la temperatura y la homogeneidad de su distribucin a latemperatura(s) de trabajo en la totalidad del volumen de trabajo de la incubadora mediante lautilizacin simultnea de un nmero de termmetros o termopares con precisin conocida y conun rango de temperatura adecuado.

Utilice la informacin para definir el rango aceptable de funcionamiento de la incubadora y laposicin ptima del termmetro utilizado para monitorear las temperaturas de trabajo.

Por ejemplo, para lograr una temperatura objeto de de 37 C 1 C cuando los datos del perfilmuestran un rango de 36,8 C a 37,3 C en toda la incubadora, entonces el rango funcional sedebera reducir a 36,2 C hasta 37,7 C con el fin de garantizar que todas las partes de laincubadora alcanzan la temperatura objeto de 37 C.

Este proceso se debera repetir despus de toda reparacin o modificacin importante.

La temperatura de funcionamiento se debera verificar, por ejemplo, con uno o mstermmetros mximos y mnimos o termopares de registro.

El termmetro o el termopar de registro utilizado para el monitoreo rutinario de la incubadora sedebe fijar en una posicin definida a partir de los datos del perfil para alcanzar la temperaturaobjeto.

Revise la temperatura de la incubadora por lo menos cada da laboral. Para este fin, cadaincubadora debe incorporar por lo menos un dispositivo de medicin funcional, cuyo bulbo sepueda sumergir en glicerol (u otro disipador de calor adecuado) contenido en un frasco sellado.

Se pueden utilizar otros sistemas de verificacin con desempeo equivalente.


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5.9 REFRIGERADORES, CUARTOS PARA ALMACENAMIENTO EN FRO

5.9.1 Descripcin

Estos son cmaras que permiten mantener el almacenamiento en fro. Para la conservacin de

muestras de alimentos para el anlisis, la temperatura debe ser de 3 C 2 C (erroresmximos permisibles), excepto para aplicaciones particulares. Para otros usos, a menos que seespecifique algo diferente, la temperatura debe ser de 5 C 3 C.

5.9.2 Uso

Con el fin de evitar la contaminacin cruzada, utilice cmaras diferentes o por lo menosrecipientes diferentes, para lograr el aislamiento fsico para el almacenamiento de:

- medios de cultivo no inoculados y reactivos,

- muestras de ensayo, y

- cultivo de microorganismos y medios incubados.

Cargue los refrigeradores, enfriadores o cuartos de almacenamiento en fro de forma tal que seconserve una circulacin de aire correcta y se reduzca al mnimo el potencial de contaminacincruzada.

5.9.3 Verificacin

Revise la temperatura de cada cmara cada da laboral usando un termmetro o una sondainstalada permanentemente. La precisin requerida para el dispositivo de monitoreo de latemperatura depende del propsito para el cual se utilice la unidad.

5.9.4 Mantenimiento y limpieza

Realice las siguientes operaciones de mantenimiento a intervalos regulares para garantizar elfuncionamiento adecuado:

- eliminacin del polvo de las aspas del motor o de las placas externas de intercambiotrmico;

- descongelacin;

- limpieza y desinfeccin del interior de las cmaras.5.10 CONGELADORES Y CONGELADORES DE TEMPERATURA ULTRA BAJA

5.10.1 Descripcin

Un congelador es una cmara que permite garantizar el almacenamiento en congelacin. Amenos que se especifique algo diferente, la temperatura debe ser inferior a -15 C,preferiblemente por debajo de -18 C para muestras de alimentos.

Un congelador de temperatura ultra baja es una cmara que permite garantizar elalmacenamiento en congelacin a temperatura ultra baja. A menos que se especifique algo

diferente, la temperatura debe ser inferior a -70 C.


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5.10.2 Uso

5.10.2.1 Congelador

Se debe disponer de cmaras diferentes o, por lo menos, de recipientes diferentes para lograr

el aislamiento fsico para almacenamiento de:

- reactivos no inoculados,

- muestras para anlisis, y

- cultivos de microorganismos.

Cargue el congelador de forma tal que se mantenga la temperatura suficientemente baja, enparticular cuando se introducen productos no congelados.

5.10.2.2 Congelador de temperatura ultra baja

El uso principal es para almacenamiento de microorganismos, cultivos de referencia y/o detrabajo y reactivos.

Cargue el refrigerador de forma tal que se conserve una temperatura suficientemente baja y seevite la contaminacin cruzada entre microorganismos y reactivos.

5.10.3 Verificacin

Revise la temperatura de cada cmara con regularidad utilizando un dispositivo adecuado parael monitoreo de la temperatura.

5.10.4 Mantenimiento

Realice regularmente las siguientes operaciones de mantenimiento:

- eliminacin del polvo de las aspas del motor y de las placas externas de intercambiotrmico (si son accesibles);

- descongelacin;

- limpieza y desinfeccin del interior de las cmaras.

5.11 BAOS CONTROLADOS TERMOSTTICAMENTE5.11.1 Descripcin

Se requiere de un bao controlado termostticamente, lleno con un lquido (agua, glicol etileno,etc.), con o sin una etapa ajustada u otro dispositivo para limitar la evaporacin, con el fin demantener la temperatura especificada. El control de la temperatura es a menudo ms precisoque una incubadora de aire, permitiendo alcanzar errores mximos permisibles de 0,5 C omejores. Las temperaturas de trabajo y los errores mximos permisibles que se requieren seestipulan en cada aplicacin o mtodo individual. Es necesario un sistema de refrigeracin paramantener una temperatura cercana o inferior a la temperatura ambiente.


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5.11.2 Uso

Los usos principales son los siguientes:

- incubacin a una temperatura constante de un medio de cultivo inoculado;

- mantenimiento de medios de agar fundido estriles durante la preparacin de losmedios;

- templado de medios de agar fundido estriles para uso en mtodos especficos;

- preparacin de las suspensiones o soluciones iniciales de la muestra a una temperaturacontrolada;

- tratamiento trmico de las suspensiones iniciales de la muestra a una temperaturacontrolada (por ejemplo, pasteurizacin).

Cuando se requiere del control preciso de la temperatura, el bao debe estar equipado con unabomba de circulacin de agua y un sistema automtico de regulacin de la temperatura. Laagitacin del lquido no debe causar dispersin de las gotas.

Se prefieren los baos con tapa para uso preciso o a temperatura alta. Se recomienda utilizartapas en declive que permiten drenar el condensado.

Para la incubacin de medios inoculados, mantenga el nivel del lquido de manera tal que laparte superior del medio de ensayo est por lo menos 2 cm por debajo del nivel del lquido enel bao durante toda la incubacin.

Se recomienda colocar otros recipientes dentro de los baos de manera que el nivel de sucontenido est por debajo del nivel del lquido.

La profundidad de inmersin debe evitar la entrada de agua a travs del cierre.

Se puede requerir de dispositivos para mantener la estabilidad de los recipientes, por ejemplorejillas.

Todos los recipientes se deberan secar despus de retirarlos del bao y antes del usoposterior.

5.11.3 Verificacin

Revise la estabilidad y homogeneidad de la temperatura en todo el bao antes del uso inicial ydespus de toda reparacin o modificacin que tenga un efecto en el control de la temperatura.

Monitoree cada bao con un termmetro, un termopar o un dispositivo de registro de latemperatura con incertidumbre de medicin mnima adecuada (vase el numeral 5.28.2), quesea independiente del sistema automtico de regulacin de la temperatura.

Tambin se puede utilizar una pantalla digital, siempre que se verifiquen su precisin yresolucin.

Monitoree la temperatura del bao durante cada uso y por lo menos diariamente durante

periodos de incubacin extensa.


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Se recomienda llenar los baos con el lquido segn las instrucciones del fabricante. Para laincubacin de los cultivos, de preferencia se debera utilizar agua destilada o desionizada.

Verifique regularmente el nivel del lquido para garantizar el funcionamiento correcto del bao yla inmersin satisfactoria de los elementos en el bao. El nivel del lquido siempre debe cubrirlos elementos de calefaccin.

Se recomienda vaciar, limpiar, desinfectar y volver a llenar regularmente los baos a unafrecuencia que depende de la utilizacin, o despus de que se produzca un derrame.

5.12 VAPORIZADORES, INCLUYENDO BAOS DE AGUA EN EBULLICIN

5.12.1 Descripcin

Los vaporizadores y los baos de agua en ebullicin constan de un elemento de calefaccin

rodeado por agua en un recipiente con una tapa hermtica. En un vaporizador, esto crea vapora la presin atmosfrica; en un bao de agua en ebullicin este elemento calienta el agua hastala temperatura de ebullicin o cerca del punto de ebullicin, con o sin produccin de vapor.

5.12.2 Uso

Los principales usos son los siguientes:

- fusin de los medios de agar;

- preparacin de medios inestables al calor;

- reduccin de la contaminacin de los elementos pequeos del equipo entre cada uso.

En el recipiente debe haber un nivel seguro y adecuado de agua para garantizar que loselementos de calefaccin estn cubiertos en todo momento.

Tambin se puede utilizar una autoclave con un medio de vapor libre.


Mantenga limpios los vaporizadores y los baos de agua en ebullicin.

Si es necesario, el descamado regular se debera realizar con una frecuencia que depende dela dureza del agua local.

5.13 HORNOS DE ESTERILIZACIN

5.13.1 Descripcin

Un horno de esterilizacin es una cmara que tiene la capacidad de mantener una temperaturade 160 C hasta 180 C para la destruccin de los microorganismos mediante calor seco.

5.13.2 Uso

Solamente se debe esterilizar el equipo robusto como por ejemplo elementos de vidrio y demetal en el horno de esterilizacin; no lo utilice para elementos plsticos o de caucho.


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Antes de la esterilizacin, limpie los elementos de vidrio o de metal que se van a esterilizar enel horno.

Si en el horno de esterilizacin se esteriliza el equipo de vidrio volumtrico, verifiqueregularmente la precisin de los volmenes marcados.

La temperatura debe ser uniforme en toda la cmara. El horno debe estar equipado con untermostato y un termmetro o un dispositivo de registro de la temperatura con exactitudadecuada.

Debera tener un indicador de duracin, un programador o un cronmetro.

Una vez se ha alcanzado la temperatura de funcionamiento, el procedimiento de esterilizacindebe durar por lo menos 1 h a 170 C o una combinacin equivalente del tiempo/temperatura.

Despus de la esterilizacin, para evitar el agrietamiento, se debe permitir que los elementosde vidrio se enfren en el horno antes de retirarlos.

5.13.3 Verificacin

Revise la estabilidad y homogeneidad de la temperatura en todo el horno antes del uso inicial ydespus de toda reparacin o modificacin que pueda tener un efecto en el control de la temperatura.

El horno debe tener un termmetro calibrado, un termopar o un dispositivo de registro detemperatura con precisin adecuada, que sea independiente del sistema automtico deregulacin de la temperatura. El dispositivo de monitoreo debe tener una resolucin de 1 C omejor a la temperatura utilizada en el horno.

La temperatura del horno se debera monitorear y registrar durante cada uso.


Limpie las superficies internas cuando as se requiera.

5.14 HORNOS DE MICROONDAS

5.14.1 Descripcin

Un horno de microondas es un dispositivo que permite el calentamiento de los elementosmediante energa de microondas a presin atmosfrica

5.14.2 Uso

Use el equipo disponible actualmente nicamente para calentar lquidos o fundir medios decultivo de agar.

ADVERTENCIA No caliente medios que contengan componentes sensibles al calor en un horno de microondas amenos que se haya verificado que esta forma de calentamiento no afecta el desempeo del medio. An no se hallevado a cabo una evaluacin de la eficiencia de las microondas para esterilizar medios de cultivo y los hornos demicroondas no se deben utilizar para este propsito.

El horno debe tener capacidad para calentar lquidos y medios de cultivo de manera controladaa travs de un ciclo de emisin de microondas. La distribucin de las microondas debe ser

homognea para evitar zonas de sobrecalentamiento. Los hornos equipados con tornamesa ocon agitador para las microondas proporcionan una mejor distribucin del calor.


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No utilice equipo metlico, incluyendo cierres de metal. Afloje las tapas o los tapones de losfrascos antes del calentamiento.

El calentamiento durante perodos ms largos con tasas de potencia inferiores puede dar unamejor distribucin del calor.

ADVERTENCIA Manipule los elementos calientes con cuidado. El contenido puede estar muy caliente y bullirhacia el exterior, o los frascos pueden explotar.

Cuando se funde un medio de agar, se recomiendan un ajuste en potencia baja (por ejemploen ciclo de descongelacin) y un disipador de calor de agua (por ejemplo de 50 ml a 100 ml deagua en un vaso que se pueda llevar al microondas) para ayudar al control del proceso decalentamiento.

Se recomienda un tiempo de reposo mnimo de cinco min. despus del proceso decalentamiento antes de retirar el recipiente del horno de microondas.

5.14.3 Verificacin

Se deben establecer tiempos de calentamiento y ajustes de potencia adecuados en la puestaen marcha inicial para los diferentes volmenes de lquidos y medios de cultivo que se manejanrutinariamente, con el fin de garantizar el desempeo ptimo y evitar el sobrecalentamiento deproductos sensibles.


Limpie el horno inmediatamente despus de que se produzca cualquier derrame, as como aintervalos regulares dependiendo del uso.

Se deberan inspeccionar los sellos de las puertas de los hornos para determinar su integridady se debera verificar el horno a intervalos regulares para determinar fugas de radiacin.

5.15 LAVADORAS PARA CRISTAL

5.15.1 Descripcin

Las lavadoras de cristal para laboratorio son mquinas controladas electrnicamente para ellavado de vidriera general del laboratorio, las cuales se pueden programar para diferentesciclos de lavado y enjuague (por ejemplo agua destilada o desionizada o cido).

Los dispositivos para el lavado de pipetas de vidrio son lavadoras especiales diseadas paralimpiar los orificios angostos de las pipetas.

5.15.2 Uso

Estn disponibles muchos tipos de lavadoras de cristal y stas, en general, se deben instalar yutilizar siguiendo las instrucciones del fabricante.

5.15.3 Verificacin

Revise la eficacia de la limpieza mediante inspeccin visual y, en aplicaciones crticas, realiceensayos para garantizar que la vidriera est libre de sustancias inhibitorias.

Los residuos cidos o alcalinos se pueden verificar utilizando una solucin indicadora de pH, sedebera obtener un pH en el rango entre 6,5 y 7,3.


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Programe el mantenimiento regular segn lo especifique el fabricante, con una frecuenciaadecuada.

Se puede requerir de mantenimiento ms frecuente para el equipo muy utilizado o en reas conagua dura.

5.16 MICROSCOPIOS PTICOS

5.16.1 Descripcin

Existen varios tipos diferentes de microscopio: monocular, binocular, con VDU, una cmara oequipo de fluorescencia, etc., y con una fuente de luz interna o externa. Para anlisismicrobiolgicos, se utilizan objetivos con aumento desde 10 x (lentes secos) hastaaproximadamente 100 (inmersin en aceite con torre con carga de resorte) para obtener unaamplificacin total de 100 hasta 1 000. El microscopio de contraste de fase tambin es

importante para el anlisis de "preparaciones hmedas".

5.16.2 Uso

Ajuste la ptica del microscopio de acuerdo con las instrucciones del fabricante. El eje pticode la luz proveniente de la bombilla de luz de alta intensidad debe pasar a travs del centro delcondensador bajo la platina, la platina y los lentes objeto hasta el ocular de manera que no sepresenten aberraciones esfricas ni cromticas.


Siga las instrucciones del fabricante con respecto al almacenamiento, la limpieza y elmantenimiento. Evite la presencia de condensacin cuando la humedad es alta ya que estopuede llevar al deterioro de la calidad de los lentes.

Cada da o despus del uso, retire el aceite de los lentes de inmersin y las partesrelacionadas utilizando papel para lentes. Utilice un solvente recomendado por el fabricante.Retire regularmente la grasa producida por las pestaas en los lentes del ocular.

El sistema ptico se puede daar fcilmente, por lo tanto, es preferible el mantenimiento porparte del fabricante.

5.17 QUEMADORES DE GAS O INCINERADORES TIPO ALAMBRE

5.17.1 Descripcin

Los quemadores de gas (Bunsen) producen una llama descubierta angosta, bien sea desde elsuministro central o desde un cilindro de gas. La variacin en la cantidad de aire mezclado conel gas controla el grado de calor producido.

Los incineradores tipo alambre usan gas o electricidad para obtener un calor rojo sin llama paraesterilizar lazos y alambres rectos usados para manipular cultivos.

5.17.2 Uso

El quemador de gas se usa principalmente para esterilizar lazos metlicos y alambres rectoshaciendo que alcancen un calor rojo y para esterilizar con llama otros elementos pequeos ydurables del equipo.


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Los incineradores tipo alambre se usan para esterilizar lazos metlicos y alambres rectos y seprefieren cuando se manipulan bacterias patgenas ya que previenen salpicaduras y evitan elriesgo de contaminacin cruzada.

Los quemadores de gas pueden producir mucho calor y turbulencia de aire en el laboratorio.

Se pueden lograr tcnicas aspticas sin un quemador de gas utilizando materialesdesechables.

En cabinas proactivos, se debera evitar la utilizacin de quemadores de gas dado que puedeninterferir de manera inaceptable con el flujo de aire laminar. En este caso, se recomiendautilizar equipo estril desechable.


Limpie y desinfecte regularmente los quemadores y las tapas de los incineradores tipo alambre,en particular si algn cultivo microbiano se ha derramado sobre los dispositivos.

5.18 DISPENSADORES PARA MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

5.18.1 Descripcin

Un dispensador es un instrumento o dispositivo utilizado para distribuir los medios de cultivo ylos reactivos en tubos, frascos o cajas de Petri. Tales dispositivos van desde cilindros sencillosde medicin, pipetas o jeringas manuales pasando por jeringas automticas y bombasperistlticas, hasta dispositivos programables controlados electrnicamente con entregavariable automatizada.

5.18.2 Uso

El equipo limpio utilizado para dispensar medios de cultivo y reactivos debe estar libre desustancias inhibitorias. Utilice tubera independiente para medios selectivos con el fin deminimizar la percolacin/transporte de dichas sustancias.

Si se requiere de la distribucin asptica de los medios de cultivo estriles y de los reactivos,todas las partes del equipo dispensador en contacto con el producto deben estar estriles.

5.18.3 Verificacin

La incertidumbre de la medicin del instrumento o el aparato debe ser la correcta para el error

mximo permisible en el volumen que se va a dispensar, el cual, rutinariamente, no debeexceder 5 %. El error mximo permisible en la medicin de volmenes de fluidos de dilucinutilizados para preparar diluciones decimales es 2 %.

Revise los volmenes dispensados antes del uso inicial, despus regularmente segn unprograma documentado y siempre despus de los ajustes que afecten el volumen dispensado.

5.18.4 Limpieza y mantenimiento

Limpie la superficie exterior del dispensador despus de cada uso. Lave y enjuagueexhaustivamente todas las partes del dispensador que estn en contacto con el producto yesterilcelas, si se requiere, para uso en la dispensacin de lquidos estriles. No utilice

desinfectantes en las superficies que estn en contacto con el producto que se va a dispensarya que ellas pueden impartir propiedades inhibitorias.


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automticos tambin requieren de programacin independiente cuando se utilizan condiferentes tipos de agar y de matrices, y para recuentos superficiales y de placas vertidas conel fin de garantizar la discriminacin adecuada de las colonias objeto.

5.20.3 Verificacin

Las revisiones se deberan hacer manualmente y con regularidad para garantizar que seobtienen recuentos precisos utilizando un contador de colonias.

Adems, los contadores de colonias automticos se deberan verificar cada da de uso con unaplaca de calibracin que contenga una cantidad conocida de partculas o colonias contables.


Mantenga el equipo limpio y libre de polvo; evite rayar las superficies que son elementoesencial del proceso de conteo. Programe el mantenimiento regular de los contadoreselectrnicos que incorporan analizadores de imagen segn lo especifique el fabricante, con una

frecuencia conveniente.

5.21 EQUIPOS PARA CULTIVO EN UNA ATMSFERA MODIFICADA

5.21.1 Descripcin

stos pueden ser un frasco que se pueda sellar hermticamente o cualquier otro equipoadecuado que permita mantener las condiciones de la atmsfera modificada (por ejemplo paraanaerobiosis) durante el tiempo total de incubacin del medio de cultivo. Se pueden utilizarotros sistemas con desempeo equivalente, tales como los gabinetes anaerbicos.

Siga las instrucciones del fabricante para la instalacin y el mantenimiento.

5.21.2 Uso

La composicin de la atmsfera que se requiere se puede lograr por medio de la adicin deuna mezcla de gas (proveniente, por ejemplo, de un cilindro de gas) despus de la evacuacinde aire del recipiente, mediante el desplazamiento de la atmsfera en un gabinete o mediantecualquier otro medio adecuado (como los paquetes de gas disponibles en el comercio).

En general, la incubacin anaerbica exige una atmsfera de menos de 1 % de oxgeno y de 9 %a 13 % de dixido de carbono; la incubacin y microaerbica (capnaerbica) exige unaatmsfera de 5 % a 7 % de oxgeno y aproximadamente 10 % del dixido de carbono.

Puede ser necesario modificar las condiciones dependiendo de los requisitos para losmicroorganismos especficos.

5.21.3 Verificacin

Ponga un indicador qumico o biolgico para monitorear la naturaleza de la atmsfera en cadacmara durante cada uso. El crecimiento de la cepa de control o un cambio en el color delindicador qumico verifica que las condiciones de incubacin adecuada se han alcanzado.


Si se cuenta con un catalizador, regenrelo con regularidad de acuerdo con las instruccionesdel fabricante. Si existen vlvulas, lmpielas y lubrquelas para garantizar el funcionamientocorrecto, y reemplcelas cuando sea necesario.


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Limpie y esterilice regularmente el equipo.

5.22 CENTRFUGAS

5.22.1 Descripcin

Las centrfugas son dispositivos operados mecnica o electrnicamente que utilizan la fuerzacentrfuga para separar las partculas suspendidas, inclusive los microorganismos, de losfluidos.

5.22.2 Uso

En algunas aplicaciones, la concentracin de los microorganismos objeto se logra mediante lacentrifugacin de las muestras lquidas hasta obtener un depsito, las cuales se pueden volvera suspender en el lquido y someter a anlisis adicional.

Tome las precauciones necesarias para evitar la generacin de aerosoles y la contaminacin

cruzada, mediante el funcionamiento correcto del equipo y el uso de tubos o recipientes paracentrfuga estriles y sellados.

5.22.3 Verificacin

Cuando la velocidad de centrifugado es crtica o especfica para la aplicacin, el indicador develocidad, o los ajustes frente a un tacmetro calibrado independiente, se debera verificarregularmente y despus de reparaciones o modificaciones significativas.


Limpie y desinfecte regularmente las centrfugas y despus de todo derrame que involucrecultivos microbianos o muestras potencialmente contaminadas.

Las centrfugas se deberan someter a mantenimiento con regularidad.

5.23 PLACA DE CALENTAMIENTO

5.23.1 Descripcin

Las placas trmicas y las mantillas de calefaccin son dispositivos de calefaccin controladostermostticamente. Algunos de estos dispositivos incorporan sistemas de agitacin magntica.

5.23.2 UsoLas placas trmicas y las mantillas de calentamiento equipadas con sistemas de agitacinmagntica se utilizan para calentar volmenes relativamente grandes de lquidos, como porejemplo los medios.

No utilice placas trmicas ni mantillas de calefaccin sin sistema de agitacin para lapreparacin de los medios.


Limpie todo derrame tan pronto la unidad est fra.


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5.24 DISPENSADORES EN ESPIRAL

5.24.1 Descripcin

Un dispensador en espiral es un dispensador que distribuye un volumen predeterminado del

lquido sobre la superficie de una placa de agar que est rotando. El brazo dispensador semueve desde el centro de la placa hacia el borde exterior en una espiral Arquimediana. Elvolumen dispensado disminuye a medida que el dispositivo dispensador se mueve desde elcentro hasta el borde de la placa, de modo que existe una relacin inversa entre el volumendepositado y el radio de la espiral. El volumen de muestra dispensado en cualquier segmentoparticular es conocido y constante. Se requiere de una fuente de vaco para la carga ydispensacin de los lquidos.

5.24.2 Uso

El equipo se utiliza para dispensar una muestra lquida, una muestra homogeneizada o unadilucin sobre una placa de agar con el fin de determinar un recuento de colonias. Despus de

la incubacin, las colonias se desarrollan a lo largo de las lneas en donde se deposit ellquido. El nmero de colonias en un rea conocida se cuenta utilizando una rejilla de recuentosuministrada con el equipo, y se calcula el recuento.

La superficie de las placas de agar que se van a utilizar con el dispensador en espiral debenestar niveladas y libres de burbujas de aire.

Las placas se deberan secar previamente antes de su utilizacin para garantizar que estnlibres de exceso de humedad.

El sistema para dispensar se debera desinfectar y enjuagar con agua estril antes de cadamuestra y despus del uso.

5.24.3 Verificacin

Revise el ngulo de la punta del estilete diariamente utilizando vaco para sostener uncubreobjetos contra la superficie del estilete. El cubreobjetos debera estar paralelo y a 1 mmdesde la superficie del agar.

El patrn de dispensacin se debera verificar a travs de la dispensacin de tinta lavable. Elpatrn del dispensador en espiral debera ser ms denso cerca del centro de la placa en dondeempieza la deposicin y hacerse uniformemente menos denso hasta el punto de elevacin delestilete. La porcin transparente de la placa debera estar en el centro y tener

aproximadamente 2,0 cm de dimetro.Se recomienda realizar una verificacin diaria para garantizar que la punta del estilete est enel ngulo correcto con la superficie del agar utilizando el portaobjetos y el calibre de nivelsuministrados con el instrumento.

Es conveniente verificar la esterilidad del dispensador en espiral vertiendo agua estril en unaplaca para cada serie de muestras examinadas.

Se debera realizar una verificacin gravimtrica regular del volumen dispensado utilizandoagua destilada. La masa obtenida debera estar en el rango de error mximo permisible de 5 %de la masa esperada para el volumen dispensado.


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Someta a ensayo los pipeteadores nuevos antes del uso y a intervalos regulares dependiendode la frecuencia y la naturaleza del uso, para confirmar que respetan los errores mximospermisibles que se definen en ISO 8655-1. Realice verificaciones gravimtricas intermediasutilizando agua destilada o desionizada para garantizar que los volmenes dispensadospermanecen en los rangos de los errores mximos permisibles.

Verifique los lotes nuevos de pipetas graduadas.


Descontamine y limpie/esterilice las pipetas no desechables y los pipeteadores automticossegn corresponda despus de cada uso.

Si los cilindros o los pistones de los pipeteadores automticos se contaminan durante el uso,desrmelos para su descontaminacin y limpieza. Despus vulvalos a armar y repita lacalibracin. Cuando no es posible realizar esto en el laboratorio, devuelva los pipeteadores alfabricante para que los arme y calibre nuevamente.

5.28 TERMMETROS Y DISPOSITIVOS PARA MONITOREO DE TEMPERATURA,INCLUYENDO REGISTRADORES AUTOMTICOS

5.28.1 Descripcin

Los termmetros son dispositivos del tipo de mercurio en vidrio o de alcohol en vidrio que seutilizan para monitorear temperaturas en todo el rango de actividades del laboratorio.

Otros dispositivos de monitoreo de la temperatura incluyen los termmetros de resistencia deplatino e instrumentos que utilizan termopares para medir temperatura y brindan un registrovisual, impreso o electrnico de la variacin de la temperatura en el tiempo.

Los termmetros y otros dispositivos de monitoreo de temperatura de referencia deben estarcalibrados segn normas nacionales e internacionales y tener certificados de tal calibracin. Sedeben utilizar con propsitos de referencia nicamente y no se deben utilizar para el monitoreorutinario.

Los termmetros y otros dispositivos de registro de temperatura utilizados en el trabajo sedeben calibrar de manera tal que permitan la trazabilidad hasta normas nacionales einternacionales.

Documents

NTC4092 requisitos y directrices de laboratorio.pdf