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Nutlin-1 增强 全反式维甲酸( ATRA ) 诱导的白血病细胞分化的作用及其机制研究. 汇报人:张 蕾 导 师:何俏军 教授 杨 波 教授. 浙江大学 药学院 药理毒理与生化药学研究所. 研究背景 —— ATRA. 肿瘤的 诱导分化疗法 是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化 ( induction of differentiation ) 是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下,向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。 全反式维甲酸 ( ATRA ) 诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞白血病的首选手段。 - PowerPoint PPT Presentation
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汇报人:张 蕾 导 师:何俏军 教授 杨 波 教授
浙江大学 药学院浙江大学 药学院药理毒理与生化药学研究所药理毒理与生化药学研究所
研究背景研究背景———— ATRAATRA
肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化(induction of differentiation) 是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下,向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。
全反式维甲酸 (ATRA) 诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞白血病的首选手段。
维甲酸耐药的机制可能与维甲酸分解代谢作用增强、与胞浆维甲酸结合蛋白的结合增强等作用相关。
MDM2
p53
Apoptosis
Cell cycle arrest
DNA repair
…
Degradation Nuclear export
2 3
1
研究背景研究背景———— NutlinsNutlins
MDM2
p53
Stratege1
Stratege2
Stratege3( Nutlins)
研究结果及结论研究结果及结论 11
MTT 法 PI 单染结合流式细胞术* Nutlin-1 仅对 p53野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋
亡诱导作用,对 p53突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。
? Nutlin-1 是否与 ATRA 具有协同诱导白血病细胞分化的作用?若
有,则其分子机制是否与 p53相关?
研究结果及结论研究结果及结论 22
CD11b%
Co
un
ts
CD11b 表面抗原检测 NBT 还原实验
CD11b 表面抗原检测
台盼蓝染色结合细胞计数
* Nutlin-1 仅对 HL60 或 NB4 细胞株( p53突变或缺失)具有一
定的增强 ATRA 分化诱导能力的作用,而对 U937 ( p53野生型)无增强作用。
? Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用是否必须在 p53无功能
的细胞株中才能体现?
研究结果及结论研究结果及结论 33
Western Blotting 法 CD11b 表面抗原检测
* Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用与 p53无关。
? Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用机制是什么?
研究结果及结论研究结果及结论 44
Real Time PCR 法
JC1 、 Rhodamine123 外排实验
MTT 法
Western Blotting 法
* ATRA 能够在 HL60 及 NB4 细胞中诱导 p-gp 的高表达,但不能
在 p53野生型或 p53缺失的 U937 细胞中诱导 p-gp 的高表达。
? ATRA 诱导 p-gp 高表达的现象是否与 Nutlin-1 增强 ATRA 分化
诱导能力的作用相关?
研究结果及结论研究结果及结论 55
p-gp ATPase 活性检测
Nutlin-1a Nutlin-1b
Western Blotting 法
Real Time PCR 法
* Nutlin-1 与 ATRA 均为 p-gp 的底物, Nutlin-1 与 ATRA 共同作
用时能够抑制 ATRA 的外排,增强 ATRA 的分化诱导作用。
研究结论研究结论
ATRA
ATRA
ATRA
Nutlin-1
HL60/NB4 cells
p-gp ATRA
Nutlin-1 增强分化能力的作用仅在经 ATRA 诱导高表达 p-gp 的细胞株中发挥,而与 p53 通路无关。
Thank you!