Obesitas translatercom

7/23/2019 Obesitas translatercom

1/7

Obesitas pada anak usia

sekolah dan para korelasi

dengan E.coli usus dan

Bifidobacteria: sebuah studi kasus-

kontrolAbstrak

Latar belakang: Untuk menentukan korelasi antara obesitas pada anak-anak usia

sekolah dan ketidakseimbangan usus mikroba dengan memeriksa perubahan

rasio Bifidobacteria usus dan E.coli obesitas anak dibandingkan dengan kontrol

bebas-obesitas.R

Metode: Studi kasus-kontrol 1:1 berbasis rumah sakit ini dilakukan. Sampelkotoran dari mata pelajaran yang dikumpulkan untuk ekstraksi DNA dan dianalisa

dengan PCR kuantitatif real-time (qPCR) untuk menentukan jumlah salinan

Bifidobacteria dan E.coli. Rasio dua mikroba (B/E) kemudian dihitung dan

statistik dianalisis.

Hasil: Subyek obesitas dan kelompok kontrol yang menunjukkan tidak ada

perbedaan yang signifikan dalam usia, jenis kelamin atau tinggi (P > 0,05);

sedangkan mereka memiliki perbedaan yang signifikan dalam berat badan danBMI. Nomor salinan Bifidobacteria dan E.coli per gram sampel kotoran basah

pertama ditentukan menggunakan qPCR dalam kelompok-kelompok yang gemuk

dan normal, yang selanjutnya digunakan untuk perhitungan rasio B/E. Kami

menemukan bahwa B/E ransum dalam dua kelompok menunjukkan perbedaan

yang signifikan (P < 0,05). 2 dikoreksi tes dilakukan untuk dua kelompok

terhadap B/E < 1, dan itu adalah menemukan bahwa ada korelasi positif (atau =

719.2, atau 95% CI = 81.57-6341.18) antara B/E rasio penurunan dengan

obesitas.


2/7

Kesimpulan: Anak-anak obesitas memiliki jumlah yang lebih rendah

Bifidobacteria dan lebih tinggi jumlah E.coli (lebih kecil B/E rasio) dibandingkan

anak bebas-gemuk yang normal. Disarankan bahwa obesitas pada anak-anak

dapat dikaitkan dengan ketidakseimbangan usus mikroba.

Kata kunci: Obesitas, anak-anak, usus mikroba, E.coli, dan Bifidobacteria

Latar belakang obesitas adalah akumulasi berlebihan lemak seluruh tubuh

karena berbagai faktor. Dampak obesitas pada metabolisme, fungsi endokrin,

sistem kardiovaskular, pernafasan dan pencernaan serta pada pertumbuhan dan

perkembangan tubuh telah diteliti dengan baik [1]. Obesitas erat berkorelasi

dengan dewasa obesitas, diabetes, penyakit sipilis, hipertensi dan penyakit

jantung koroner. Dalam beberapa tahun terakhir, dengan peningkatan kondisi

hidup rakyat dan perubahan dalam diet dan faktor lainnya, obesitas semakin

lazim dan terjadi pada anak-anak muda [2,3]. Di antara faktor-faktor risiko

genetik bebas obesitas, peran usus mikroba telah diakui. Korelasi antara

obesitas dan perubahan dalam usus mikroba telah dibuktikan dalam beberapa

studi menggunakan model binatang obesitas, diabetes, dan penyakit lainnya [4-

6]. Selain itu, telah terbukti bahwa E. coli nomor yang lebih tinggi pada wanita

dengan kenaikan berat badan berlebihan dari pada wanita dengan berat badan

normal keuntungan selama kehamilan. Sebaliknya, Bifidobacterium dan

Akkermansia muciniphila menunjukkan tren yang berlawanan [7]. Sejauh ini,

korelasi antara obesitas pada anak-anak dan usus mikroba telah hampir tidak

baik dipelajari, dan pentingnya rasio usus Bifidobacteria dan E.coli (B/E rasio)

tetap untuk didefinisikan. Saat ini berbasis rumah sakit 1:1 studi kasus kontrol

meneliti perubahan rasio Bifidobacteria usus dan E.coli obesitas dan bebas-

obesitas anak usia sekolah menggunakan kuantitatif realtime PCR. Data kami

menunjukkan bahwa ada korelasi positif antara obesitas dan ketidakseimbangan

usus mikroba.

Metode

Subyek dan kelompok-kelompok studi

penelitian ini telah dilakukan dengan persetujuan tertulis dari Komite etika

Barat Cina kedua University Hospital dan persetujuan tertulis dari subjek dan

orangtua/wali mereka.subjek


3/7

Studi ini adalah berbasis rumah sakit 1:1 kasus-kontrol dengan sampling

acak. Kriteria inklusi termasuk: obesitas kelompok mata pelajaran direkrut dari

anak-anak mengunjungi anak kesehatan klinik dari barat Cina kedua rumah sakit

Universitas Februari 2012 hingga Juni 2012 dan didiagnosis dengan obesitas

menurut WHO / NCHS standar [8,9]; dan subyek kontrol bebas-obesitas direkrut

dari ini dengan catatan pemeriksaan kesehatan tahunan selama periode yang

sama dan rumah sakit yang sama tanpa diagnosis obesitas. Anak-anak obesitas

dan kontrol yang dipasangkan menurut umur dan jenis kelamin. Kriteria

pengecualian termasuk antibiotik atau menerima probiotik, atau sejarah diare

atau penyakit pencernaan lainnya dalam 4 minggu terakhir; jantung, paru-paru,

hati, ginjal, endokrin, genetik dan metabolik penyakit; atau keengganan untuk

berpartisipasi dalam penelitian ini.

Usia, jenis kelamin dan informasi umum lainnya subyek tercatat; tinggi (m)

dan berat (kg) mata pelajaran dari dua kelompok diukur; sampel kotoran dari

semua mata pelajaran yang dikumpulkan dengan kotak steril dan disegel dalam

waktu dua jam setelah buang air besar, dan segera disimpan di 70 C untuk

preparasi berikutnya.

Metode eksperimental

prosedur eksperimental termasuk: penyusunan standar noda

(kebangkitan, budaya, Bagian, Penyimpanan dan isolasi DNA), ekstraksi DNA

dari sampel kotoran, penentuan konsentrasi DNA dan kemurnian, primer desain

untuk deteksi strain tertentu mikroba, pembentukan standar kurva dengan

standar strain DNA, dan kuantitatif real-time PCR (qPCR) analisis sampel, yang

dilakukan mengikuti petunjuk produsen.

Yang primers yang disintesis oleh TaKaRa. Urutan primer maju (F) dan

membalikkan (R) digunakan dalam kajian ini adalah sebagai berikut. F: 5 '-

TTGGGCGTAAAGGGCTCGTA-3 ', dan R: 5 '-TTCGCCATCGGTGTTCTTCC-3 '

untuk Bifidobacteria, yang menghasilkan PCR produk dengan panjang 166 bp. F:

5 '-GTTAATACCTTTGCTCATTGA-3 ' dan 5 '-ACCAGGGTATCTTAATCCTGTT-3for

R: E.coli dengan 144 bp PCR produk.

Analisis PCR kuantitatif fluoresensi sampel: sampel DNA diambil, dan

jumlah Bifidobacteria dan E.coli 16 s rRNA ditentukan oleh analisis PCR

kuantitatif fluoresensi menggunakan sistem reaksi yang sama dan kondisi

sebagai pembentukan kurva standar. Ten-fold serial pengenceran sampel DNA


4/7

standar dan kotoran bakteri co-sedang diuji. Standar dan kosong kontrol

dimasukkan dalam setiap percobaan, dan setiap sampel diuji dalam rangkap

tiga.Kekhususan reaksi PCR dikonfirmasi oleh kurva mencair, dan jumlahsalinan gen bakteri dihitung dengan menggunakan nilai Ct dan kurva standar.Data disajikan sebagai algoritma dari salinanangka (_x lgx slgx) danrasio

bifdobacterua dengan E. Coli (B/E) telah di jumlahkan.

Analisis Statistik

Data dianalisis menggunakan paket perangkat lunak SPSS. Data kuantitatif yang

disajikan sebagai deviasi standar berarti (_x sd).Perbandingan ini dilakukan

dengan menggunakan twotailed t-test. Kategoris data dibandingkan

menggunakan 2 2-tabel 2 tes (Yates' 2 tes atau Fisher tes tepat digunakan

ketika kriteria tidak bertemu). Aneh jatah (atau) nilai dan 95% CI dihitung. P 0,05), sedangkan

mereka memiliki perbedaan yang signifikan dalam berat badan dan BMI (P 0,05).Real-time PCR kuantitatif hasil sampel kotoran (Fig. 1, data yang disajikan

sebagai logaritma jumlah salinan(_x lgx slgx).

Berdasarkan nilai rasio B/E Apakah lebih rendah daripada 1, distribusi

subyek dari dua kelompok yang penuh ke dalam tabel 2 2 (Tabel 2). Karena n >

40 dan 1 T < 5, 2 Yates' menguji digunakan. Hasil penelitian menunjukkan 2

= 99,96, = 1, P < 0,0001, menunjukkan perbedaan yang signifikan antara

obesitas dan kelompok kontrol; Perhitungan lebih lanjut kami diindikasikan atau =


5/7

719.2 dengan 95%C.I dari 81.57 ~ 6341.18. Disarankan bahwa ada korelasi

positif antara obesitas dan B/E < 1.

embahasan

Diskusi sebagai dilaporkan oleh yang di masa lalu tahun, obesitas adalah

meningkat pesat secara global dan insiden obesitas telah dua kali lipat sejak

tahun 1980, dan lebih dari 40 juta anak-anak saat ini tinggal dengan obesitas [9].

Sementara patogenesis obesitas tidak didefinisikan secara jelas, peran usus

mikroba telah diusulkan [1,10]. Dalam model tikus, ini telah menunjukkan bahwa

obesitas dapat ditransfer oleh usus mikroba: tikus menerima usus mikroba dari

obesitas donor menunjukkan obesitas tetapi tidak langsing donor [11].

Mengumpulkan data dalam sastra mendukung gagasan bahwa usus mikroba,

yang terbesar dan sistem mikro-ekologi yang paling penting dalam tubuh

manusia, memainkan peran penting dalam kesehatan. Dalam keadaan normal,

bakteri dalam usus mempertahankan proporsi tertentu spesies dan jumlah untuk

mempertahankan stabilitas mikro-ekologi usus. Namun, seperti stabilitas bisa

terganggu oleh berbagai faktor, termasuk metabolisme, sistem kekebalan tubuh

serta reaksi inflamasi host, dan kemudian menghasilkan obesitas dan penyakit

lainnya [12-14]. Dalam waktu yang berarti, mikrobiota usus berada di bawah

pengaruh kondisi psikologis, diet dan obat. Sebagai contoh, antibiotik [15],


6/7

kehamilan [16] atau oleh probiotik [17,18] penyebab berat badan melalui

modulasi flora usus. Namun, data yang sangat terbatas tersedia dalam literatur

mengenai usus mikroba dan obesitas. Menjadi sangat penting untuk mempelajari

hubungan antara usus mikroba dan obesitas karena peningkatan pesat dari

obesitas. Metode tradisional untuk identifikasi dan kuantifikasi kotoran bakteri

adalah lingkungat pendekatan, yang merupakan kalinyadan memakan tenaga

kerja, dan hasil dapat bervariasi karena operasi yang berbeda. Dengan

kemajuan teknik biologi molekuler, metode budaya-bebas telah muncul. Saat ini,

16 s berbasis rRNA qPCR secara luas digunakan dalam mikro-flora studi karena

dengan akurasi tinggi dan sensitivitas serta rendah kemungkinan kontaminasi

[19,20].

Di saat ini berbasis rumah sakit 1:1 studi kasus kontrol, tinja DNA

disiapkan dari subyek kontrol obesitas dan normal dan diteliti dengan DNA

standar noda. A260/A280 DNA ini bertekad untuk menjadi 1.6-1.8, menunjukkan

kualitas baik DNA diekstrak. Standar DNA siap menggunakan standar strain dan

diuji dengan konvensional PCR kuantitatif neon real-time PCR untuk membentuk

kurva standar. Primers memiliki kekhasan baik untuk memeriksa noda, seperti

yang ditunjukkan oleh hasil PCR konvensional dan mencair kurva. PCR

kuantitatif real-time neon selanjutnya digunakan untuk mengukur Bifidobacteria

usus dan konten E.coli, dan hasil penelitian menunjukkan bahwa anak-anak

obesitas telah secara signifikan lebih rendah kandungan Bifidobacteria dan

kandungan tinggi E.coli, dibandingkan dengan kontrol normal. Disarankan bahwa

ketidakseimbangan usus mikroba hadir di anak-anak obesitas ini. Rasio usus

Bifidobacteria dan E.coli (B/E) pertama kali diperkenalkan oleh sarjana Belanda

Van Der Waaij et al. [21] untuk mewakili kolonisasi perlawanan usus mikroba.

Bifidobacteria adalah bakteri bermanfaat khas dari usus, sedangkan E.coli,

perwakilan bakteri patogen. Penurunan B/E dianggap sebagai indikator penting

bagi pergeseran dari mikroba normal usus untuk kondisi yang merugikan

kesehatan. Karena kedua jenis bakteri juga bagian dari flora usus mikroba

normal, rasio B/E mewakili keseluruhan kondisi mikro-flora usus [22]. Dalam

studi ini, rasio B/E secara signifikan lebih rendah pada anak-anak obesitas

daripada di kontrol normal, dan ada korelasi kuat antara obesitas dan B/E < 1,

yang konsisten dengan studi yang dilakukan oleh juta [18] dan Santacruz [7]

dalam hewan model dan populasi lainnya. Diambil bersama-sama, lebih rendah


7/7

Bifidobacteria kolonisasi dan ketidakseimbangan usus mikroba mungkin

memainkan peran penting dalam pengembangan obesitas.

Kesimpulan

dalam ringkasan, korelasi antara obesitas dan usus mikroba telah menjadi salah

satu topik penelitian terpanas. Studi pada usus mikroba telah mencapai

kemajuan besar yang menggunakan model binatang. Penyelidikan lain

diperlukan untuk jelas perannya dalam manusia obesitas. Rasio B/E adalah

sebuah parameter yang digunakan untuk memperkirakan keseluruhan kondisi

flora usus. Namun, usus mikroba terdiri dari sistem besar dan kompleks. Studi

lebih lanjut untuk seluruh spektrum fungsi dan mekanisme dalam kondisi sehat

dan patologis dapat memberikan target terAapi pengobatan obesitas.

Documents

Obesitas translatercom