「最近話題の細菌 TOP12 プラスα」2011/09/03 · Helicobacter cinaedi Campylobacter fetus 4 Campylobacter lari バクテアラート3D嫌気ボトル 2日目に陽転 *もう1例でも嫌気ボトルのみ

1

岐阜大学大学院岐阜大学大学院医学医学系系研究科研究科病原体制御学分野病原体制御学分野

大楠大楠清文清文EE--mailmail:: ohkusuohkusu@@gifugifu--uu..acac..jpjp

「最近話題の細菌「最近話題の細菌TOP12 TOP12 プラスプラスαα」」

20201111年年99月月33日日

千葉県微生物検査研究班研修会千葉県微生物検査研究班研修会臨床微生物検査臨床微生物検査ｂｙｂｙＫｉｙｏＫｉｙｏ

１．菌は１．菌は生き物生き物である。である。２．菌は２．菌は嘘つかない嘘つかない。。３．３．臨床情報臨床情報から菌名を想定する訓練が大切。から菌名を想定する訓練が大切。４．我々は時々自分の目標を見失う。４．我々は時々自分の目標を見失う。５．そんなとき、その検体が自分の５．そんなとき、その検体が自分の最も大切な人最も大切な人からから

採取されたものだったら・・・。採取されたものだったら・・・。６．６．前向きな前向きな失敗は、次の挑戦への勇気と失敗は、次の挑戦への勇気と

バネを与えてくれる「バネを与えてくれる「何事も経験！何事も経験！」。」。７．臨床微生物検査でしか得られない７．臨床微生物検査でしか得られない喜びと喜びと

やりがいがやりがいがある。ある。８．患者診療に８．患者診療に貢献貢献するべく知識、経験、するべく知識、経験、

そして“匠”の技を融合「そして“匠”の技を融合「実践臨床微生物学実践臨床微生物学」。」。

Helicobacter Helicobacter cinaedicinaediＮｏＮｏ..１１

グラム陰性らせん菌グラム陰性らせん菌血液培養（発育に血液培養（発育に44～～1010日間日間), ), 糞便糞便

フイルム状の発育あるいは発育不能フイルム状の発育あるいは発育不能敗血症敗血症((悪性腫瘍の化学療法中ほか悪性腫瘍の化学療法中ほか))蜂蜂窩窩織炎が特徴織炎が特徴, , 院内感染の事例あり院内感染の事例あり

各種抗菌薬に対する感受性は良好各種抗菌薬に対する感受性は良好

1,500 1,500 --

1,000 1,000 --

700 700 --600 600 --500 500 --400 400 --300 300 --

200 200 --

100 100 --

(bp)(bp)

PCRPCR法による法によるHelicobacter Helicobacter cinaedicinaediの同定の同定

M 1 2 P N 1 2 P NM 1 2 P N 1 2 P NH. H. cinaedicinaedi HelicobacterHelicobacter 属菌属菌

650650--bpbp（＋）（＋）

195195--bpbp（＋）（＋）

Lane 1: Lane 1: 血液培養分離株血液培養分離株No.1No.1

2: 2: 血液培養分離株血液培養分離株No.2No.2

P: P: 陽性コントロール陽性コントロール

N: N: 陰性コントロール陰性コントロール

M: M: 分子量マーカー分子量マーカー

Helicobacter cinaediの集落

Helicobacter cinaediのグラム染色像

2

血液培養検査血液培養検査 (BACTEC9120(BACTEC9120システム：システム：BDBD））

・・培養期間：培養期間：1010日間培養へ延長日間培養へ延長好気ボトル（好気ボトル（9292Ｆ）・嫌気ボトル（Ｆ）・嫌気ボトル（9393Ｆ）Ｆ）

・結果：陽性患者数・結果：陽性患者数 99名、陽性検体数名、陽性検体数 2121件（全て好気ボトル）件（全て好気ボトル）

アウトブレイク認知後の検査対応と結果アウトブレイク認知後の検査対応と結果

11111133774444件数（件数（n=21)n=21)

99日目日目88日目日目77日目日目66日目日目55日目日目44日目日目33日目日目陽性時期陽性時期

便培養検査（変法スキロー寒天培地便培養検査（変法スキロー寒天培地EXEX：：日水日水））

・・3535℃℃微好気培養微好気培養 77日間へ変更日間へ変更（従来：（従来：4242℃℃ 22日間）日間）

・結果：陽性患者数・結果：陽性患者数 99名名（便塗抹グラム染色陽性（便塗抹グラム染色陽性 55件）件）

6・116・11 2・122・124・84・8

1010 99 11

551313 3・73・7

共用トイレ共用トイレ

症例症例NoNo

■■女性女性 ■■男性男性

個室個室専用トイレ専用トイレ

H. H. cinaedicinaedi症例患者症例患者病棟配置図病棟配置図

個室患者からの個室患者からの検出例は検出例は無し無し

方法と結果：

H. cinaedi 16株について23S ｒRNAの遺伝子の一部をPCRで増幅、

塩基配列を決定（約1,700塩基）して株間で比較した。

14971497番目番目

647647番目番目

145145番目番目

4444番目番目

GCCG22、、44、、66、、88、、99、、1010、、1111、、1212、、1414、、1515、、1616

ATTA77

GTTG11、、33、、55、、1313

塩基塩基症例（菌株）症例（菌株）NoNo

■■女性女性 ■■男性男性

H. H. cinaedicinaedi菌株の塩基配列による相同性菌株の塩基配列による相同性

Campylobacter fetus Campylobacter fetus subspsubsp.. fetusfetusＮｏＮｏ..２２

グラム陰性らせん菌グラム陰性らせん菌血液血液,,髄液髄液,,膿汁膿汁((腹腔内腹腔内,,卵巣卵巣,,肺など肺など))4242℃℃で発育する株で発育する株が多いが多いCET(S),NA(R)CET(S),NA(R)の例外ありの例外あり敗血症敗血症,,髄膜炎髄膜炎,,大動脈瘤大動脈瘤,,蜂蜂窩窩織炎織炎妊婦妊婦がが生レバー生レバー摂食の数日後に早産摂食の数日後に早産,,新生児髄膜炎発症。ステロイド服用中新生児髄膜炎発症。ステロイド服用中ににユッケユッケ摂食で髄膜炎発症の例あり。摂食で髄膜炎発症の例あり。

3

••主訴主訴発熱発熱哺乳力低下哺乳力低下

••妊娠分娩歴妊娠分娩歴在胎在胎3636週週55日日正常経膣分娩正常経膣分娩妊娠・分娩経過は特に問題なし妊娠・分娩経過は特に問題なし出生体重出生体重2315g2315g

••家族歴家族歴特記事項なし特記事項なし••現病歴現病歴

産院退院後の日齢産院退院後の日齢1212にに3939度台の発熱，哺乳力低下を度台の発熱，哺乳力低下を

認め前医を紹介受診．認め前医を紹介受診．細菌性髄膜炎細菌性髄膜炎(WBC31,300/(WBC31,300/μμll，，CRP4.74mg/mlCRP4.74mg/ml，髄液細胞数，髄液細胞数18,816/mm18,816/mm33，蛋白数，蛋白数685mg/dl685mg/dl，糖，糖3mg/dl)3mg/dl)と診断され，抗菌薬（と診断され，抗菌薬（ABPCABPC・・CTXCTX・・MEPMMEPM），デキサメタゾン，免疫グロブリン製剤），デキサメタゾン，免疫グロブリン製剤による治療を開始された．日齢による治療を開始された．日齢1313より解熱し全身状より解熱し全身状態・検査所見ともに改善傾向認めた．態・検査所見ともに改善傾向認めた．

しかし，日齢しかし，日齢1717に施行された頭部に施行された頭部MRIMRIでで左前頭葉に膿左前頭葉に膿瘍形成瘍形成を認めた．内科的治療を継続されるも膿瘍拡大を認めた．内科的治療を継続されるも膿瘍拡大傾向であったため，日齢傾向であったため，日齢2424に外科的治療も含めた加療に外科的治療も含めた加療目的で当院へ転院となった目的で当院へ転院となった．．

症例症例（（日齢日齢12 12 男男児）児）

スライド提供；聖マリアンナ医科大学病院小児科スライド提供；聖マリアンナ医科大学病院小児科

日齢日齢2323前医頭部前医頭部

MRIMRI T1 senseT1 senseGdGd造影造影

C. fetus C. fetus subspsubsp.. fetusfetus のグラム染色像のグラム染色像

1,500 1,500 --

1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --200 200 --

100 100 --

(bp)(bp)

PCRPCR法による法によるCampylobacterCampylobacter属の菌種同定属の菌種同定

M 1 2 N 1 2 NM 1 2 N 1 2 N 1 2 N M 1 2 N 1 2 N1 2 N M 1 2 N 1 2 NLane 1: 12/11 Lane 1: 12/11 血液培養分離菌株血液培養分離菌株

2: 12/17 2: 12/17 血液培養分離菌株血液培養分離菌株

N: Negative controlN: Negative control

M: Molecular size markerM: Molecular size marker

35 Cycles, Sample DNA;535 Cycles, Sample DNA;5μμl,l,Reaction mix; 50Reaction mix; 50μμll

251251--bpbp（－）（－）

CC. . larilariCC. fetus. fetus CC. . jejunijejuni CC. coli. coli CC. . upsaliensisupsaliensis

435435--bpbp（＋）（＋）

323323--bpbp（－）（－）

126126--bpbp（－）（－）

204204--bpbp（－）（－）

「血液培養から分離されたらせん菌」「血液培養から分離されたらせん菌」ーーグラム染色像と患者情報から推察する細菌グラム染色像と患者情報から推察する細菌ーー

Helicobacter Helicobacter cinaedicinaediCampylobacter fetusCampylobacter fetusCampylobacter Campylobacter larilariHelicobacter Helicobacter bilisbilisAnaerobiospirillumAnaerobiospirillum succiniciproducenssucciniciproducensDesulfovibrioDesulfovibrio desulfuricansdesulfuricansBrachyspiraBrachyspira pilosicolipilosicoli

Helicobacter cinaedi Campylobacter fetus

4

Campylobacter lari

バクテアラート3D嫌気ボトル2日目に陽転*もう1例でも嫌気ボトルのみ4日目に陽転（BACTEC)

Campylobacter lari

平板培地上の集落

Helicobacter bilis

BACTEC 好気ボトルのみ陽転培養開始7日目（147時間後）

42℃ 4日間培養後の血液寒天培地

平板培地上の集落

Helicobacter bilis

Anaerobiospirillum succiniciproducens Anaerobiospirillum succiniciproducens

5

鞭毛染色（レイフソン法）

Anaerobiospirillum succiniciproducens Desulfovibrio desulfuricans MB

Desulfovibrio desulfuricans MB Desulfovibrio desulfuricans MB

血液培養4日目に嫌気ボトルが陽性

Brachyspira pilosicoli

MycoplasmaMycoplasma hominishominisＮｏＮｏ..３３

グラム染色にグラム染色に染ま染まらないらない((細胞壁なし細胞壁なし))血液寒天培地に微小集落形成血液寒天培地に微小集落形成(2(2～～44日日))膿汁膿汁((子宮子宮,,卵巣卵巣,,帝王切開創部ほか帝王切開創部ほか),),関節液関節液,,髄液髄液,,羊水など羊水など初代は嫌気培養が発育良好初代は嫌気培養が発育良好術後感染症；腹部術後感染症；腹部,,胸部胸部((縦隔炎縦隔炎),PID,),PID,関節炎関節炎,,髄膜炎のケースもあり髄膜炎のケースもありEM(R)EM(R),CLDM(S),CLDM(S)

6

(x 1,000)(x 1,000)

PCR 法によるM. hominisの同定

(bp)

M S P N

Lane S: 分離菌株の DNAP: 陽性コントロール(M. hominis DNA) N: 陰性コントロールM: Molecular size marker

334-bp

1,500 -

1,000 -

500 -400 -300 -

200 -

100 -

1,500 1,500 --1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --200 200 --100 100 --

((bpbp))

M S1 S2 I N S1 S2 P N S1 S2 P N S1 S2M S1 S2 I N S1 S2 P N S1 S2 P N S1 S2 P NP NLaneLane

S1:S1: 膿汁膿汁DNADNA原液原液

S2:S2: 膿汁膿汁DNA 20DNA 20倍希釈液倍希釈液P:P: 陽性コントロール陽性コントロール

I:I: 分離菌株分離菌株((M. M. hominishominis))N:N: 陰性コントロール陰性コントロールM: Molecular size markerM: Molecular size marker


334334--bpbp（＋）（＋）

検索病原体検索病原体:: M.hominisM.hominis UreaplasmaUreaplasma sp.sp.

205205--bpbp（（－－））

477477--bpbp（（－－））

C.trachomatisC.trachomatisN.gonorrhoeaeN.gonorrhoeae

140140--bpbp（（－－））

症例症例 (33(33歳歳女性女性))；；帝王切開部の皮下膿瘍帝王切開部の皮下膿瘍

症例症例(54(54歳歳, , 男性男性))【【主訴主訴】】胸背部痛胸背部痛

【【既往歴既往歴】】 #1.#1.高血圧症高血圧症

#2.#2.前立腺肥大症；近医泌尿器科にて通院治療、自己導尿歴あり前立腺肥大症；近医泌尿器科にて通院治療、自己導尿歴あり

【【現病歴現病歴】】 20092009年年33月月88日起床時に突然の胸背部痛を自覚し近医を受診日起床時に突然の胸背部痛を自覚し近医を受診

した。した。CTCTにて急性大動脈解離にて急性大動脈解離(Stanford A)(Stanford A)と診断され、手術と診断され、手術目的で当科へ紹介となった。目的で当科へ紹介となった。

【【入院時現症入院時現症】】身長身長 117575cmcm、体重、体重 8888gg、血圧、血圧 179179//111111、脈拍、脈拍 6767//分分意識清明、四肢麻痺なし。意識清明、四肢麻痺なし。貧血・黄疸なし。貧血・黄疸なし。心雑音なし・肺野ラ音なし。心雑音なし・肺野ラ音なし。

WBCWBC CRPCRP

10,000

20,000

5,000

30,000

1010

55

2020

3/10 3/163/8

再開胸再開胸

ABPC/SBTCTRX

PCR

BT(BT(℃℃))

3737

3535

3939

手術

3535

喀痰GPC(+)

喀痰ドレーン排液・CVカテ先

Entero. aerogenes

3/9 3/11 3/12 3/13 3/14 3/15

CEZ

再開胸・再開胸・VACVAC療法療法

症例症例(54(54歳歳, , 男性男性))BroadBroad--range PCRrange PCR法とシークエンス解析による法とシークエンス解析による

起炎菌の検出と同定起炎菌の検出と同定

Lane S1: Lane S1: 皮下膿汁皮下膿汁 DNA DNA 原液原液S2: S2: 皮下膿汁皮下膿汁 DNA 10DNA 10倍希釈液倍希釈液S3: S3: 縦隔組織縦隔組織 DNA DNA 原液原液S4: S4: 縦隔組織縦隔組織 DNA 20DNA 20倍希釈液倍希釈液M: Molecular size markerM: Molecular size marker

M S1 S2 S3 S4 M S1 S2 S3 S4

1,500 1,500 --

1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --200 200 --

100 100 --

(bp)(bp)

～～1,500 bp1,500 bp（＋）（＋）

5454歳歳男性男性, , 大動脈瘤術後の縦隔炎大動脈瘤術後の縦隔炎

UreaplasmaUreaplasma urealyticumurealyticum serovarserovar8 16S ribosomal RNA gene, Identities = 8 16S ribosomal RNA gene, Identities = 1402/1405 (99.8%), 1402/1405 (99.8%), TGCAATCGAACGAAGCCTTTTAGGCTTAGTGGTGAACGGGTGAGTAACACGTTGCAATCGAACGAAGCCTTTTAGGCTTAGTGGTGAACGGGTGAGTAACACGTATCCAACCTACCCTTAAGTTGGGGATAACTAGTCGAAAGATTAGCTAATACCATCCAACCTACCCTTAAGTTGGGGATAACTAGTCGAAAGATTAGCTAATACCGAATAATAACATCAATATCGCATGAGAAGGATGTAGAAAGTCGCGTTTGCGAGAATAATAACATCAATATCGCATGAGAAGGATGTAGAAAGTCGCGTTTGCGACGCTTTTGGATGGGGGTGCGACGTATCAGATAGTTGGTGAGGTAATGGCTCCGCTTTTGGATGGGGGTGCGACGTATCAGATAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGTCAATGACGCGTAGCTGTACTGAGAGGTAGAACAGCCACAATGGGACCAAGTCAATGACGCGTAGCTGTACTGAGAGGTAGAACAGCCACAATGGGACTGAGACACGGCCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATTTTTCACACTGAGACACGGCCCATACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATTTTTCACAATGGGCGAAAGCCTTATGAAGCAATGCCGCGTGAACGATGAAGGTCTTATAAATGGGCGAAAGCCTTATGAAGCAATGCCGCGTGAACGATGAAGGTCTTATAGATTGTAAAGTTCTTTTATATGGGAAGAAACGCTAAGATAGGAAATGATTTTGATTGTAAAGTTCTTTTATATGGGAAGAAACGCTAAGATAGGAAATGATTTTAGTTTGACTGTACCATTTGAATAAGTATCGGCTAACTATGTGCCAGCAGCCGAGTTTGACTGTACCATTTGAATAAGTATCGGCTAACTATGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACATAGGATGCAAGCGTTATCCGGATTTACTGGGCGTAAAACGAGCGGTAATACATAGGATGCAAGCGTTATCCGGATTTACTGGGCGTAAAACGAGCGCAGGCGGGTTTGTAAGTTTGGTATTAAATCTAGATGCTTAACGTCTAGCTCGCAGGCGGGTTTGTAAGTTTGGTATTAAATCTAGATGCTTAACGTCTAGCTGTATCAAAAACTGTAAACCTAGAGTGNAGTAGGGAGTTGGGGAACTCCATGTGTATCAAAAACTGTAAACCTAGAGTGNAGTAGGGAGTTGGGGAACTCCATGTGGAGCGGTAAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGCCGGAGCGGTAAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCGGTGGCGAAGGCGCCAACTTGGACTATCACTGACGCTTAGGCTCGAAAGTGTGGGGAGCAAATAGGAAACTTGGACTATCACTGACGCTTAGGCTCGAAAGTGTGGGGAGCAAATAGGATTAGATACCCTAGTAGTCCACACCGTAAACGATCATCATTAAATGTCGGCTCTTAGATACCCTAGTAGTCCACACCGTAAACGATCATCATTAAATGTCGGCTCGAACGAGTCGGTGTTGTAGCTAACGCATTAAATGATGTGCCTGGGTAGTACAGAACGAGTCGGTGTTGTAGCTAACGCATTAAATGATGTGCCTGGGTAGTACATTCGCAAGAATGAAACTCAAACGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGTGGTGTTCGCAAGAATGAAACTCAAACGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGTGGTGGAGCATGTTGCTTAATTTGACAATACACGTAGAACCTTACCTAGGTTTGACAGAGCATGTTGCTTAATTTGACAATACACGTAGAACCTTACCTAGGTTTGACATCTATTGCGACGCTATAGAAATATAGTTGAGGTTAACAATATGACAGGTGGTTCTATTGCGACGCTATAGAAATATAGTTGAGGTTAACAATATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCCTTTCGTTAGTTGCTTTTCTAGCGATACTGCTACCGCAAGGTAGCGCAACCCCTTTCGTTAGTTGCTTTTCTAGCGATACTGCTACCGCAAGGTAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATATCTAGGGCTGAGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATATCTAGGGCTGCAAACGTGCTACAATGGCTAATACAAACTGCTGCAAAATCGTAAGATGAAGCCAAACGTGCTACAATGGCTAATACAAACTGCTGCAAAATCGTAAGATGAAGCGAAACAGAAAAAGTTAGTCTCAGTTCGGATAGAGGGCTGCAATTCGCCCTCTGAAACAGAAAAAGTTAGTCTCAGTTCGGATAGAGGGCTGCAATTCGCCCTCTTGAAGTTGGAATCACTAGTAATCGCGAATCAGACATGTCGCGGTGAATACGTTGAAGTTGGAATCACTAGTAATCGCGAATCAGACATGTCGCGGTGAATACGTTCTCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCAAACTATGGGAGCTGGTAATATCTATCTCGGGTCTTGTACACACCGCCCGTCAAACTATGGGAGCTGGTAATATCTAAAACCGCAAAGCTAACCTTTTGGAGGCATGCGTCTAGGGTAGGATCGGTGACAAACCGCAAAGCTAACCTTTTGGAGGCATGCGTCTAGGGTAGGATCGGTGACTGGAGTTAAGTCGTATGGAGTTAAGTCGTA

7

臨床経過②臨床経過②

WBC

CRP

10,000

20,000

5,000

30,000

10

5

20

3/16 3/183/8

再開胸大網充填

ABPC/SBT

CTRX

CPFX + EM

MINO

3/26 5/15

Broad-range PCRU. U. urealyticumurealyticum

BT(℃)

37

35

39

手術

ニューキノロン耐性

退院

>>gi|6492428|gb|AF055366.2|gi|6492428|gb|AF055366.2| UreaplasmaUreaplasma urealyticumurealyticumserovarserovar 2, 5, 8, 92, 5, 8, 9multiple banded antigen gene, partial multiple banded antigen gene, partial cdscds

Identities = 448/449 (99%)Identities = 448/449 (99%)TATATGTTTTCGTTAAAATTAAAATTCCTATTAAAATATATGTTTTCGTTAAAATTAAAATTCCTATTAAAAACAACATGAGATTAAACAAAATCTTAATGTTGTTAACAACATGAGATTAAACAAAATCTTAATGTTGTTATTATCTATACATTCTAAAGAAAAATATATTTGCAATTATCTATACATTCTAAAGAAAAATATATTTGCAAAACTATAAATAGACACAAAAAACAATAGAATAATAAACTATAAATAGACACAAAAAACAATAGAATAATAAAACTAAATTTCATATTTAGTTTATTAGGAGATCGAAACTAAATTTCATATTTAGTTTATTAGGAGATCGTTATAAATGAAATTATTAAAAAATAAGAAATTTTGTTATAAATGAAATTATTAAAAAATAAGAAATTTTGAGCAATTACACTAGGGGTAACTTTAGTGGGAGCAAGCAATTACACTAGGGGTAACTTTAGTGGGAGCAGGGGTAGTTGCTGTGGCAGCTTCATGTTCTAGCTCGGGGTAGTTGCTGTGGCAGCTTCATGTTCTAGCTCAAATGTTAAATCTAAATTAAGTAGTCAACTTGTTAAAATGTTAAATCTAAATTAAGTAGTCAACTTGTTAAATCAAAAGACGAAAAGAGCTTTTACGCTGTTTACAATCAAAAGACGAAAAGAGCTTTTACGCTGTTTACGACATTGAAAATTTCGATGATTTAACTGAAAATGAGACATTGAAAATTTCGATGATTTAACTGAAAATGATAAAAAAGCATTAAACGAAGCTGAATTCAATGTTGTAAAAAAGCATTAAACGAAGCTGAATTCAATGTTGCAATTACATCAGCTGAAAATAAAACAGAACAATTACATCAGCTGAAAATAAAACAGAA

2) Subtype2) Subtypeの決定の決定(Subtype 1)(Subtype 1) 3) 3) キノロン耐性遺伝子キノロン耐性遺伝子

>>gi|161598226|gb|EU279400.1gi|161598226|gb|EU279400.1|| UreaplasmaUreaplasma urealyticumurealyticumisolate CM239/2004(ciprofloxacin;MIC, >2)isolate CM239/2004(ciprofloxacin;MIC, >2)gyrasegyrase subunit A (subunit A (gyrAgyrA) gene, ) gene,

Identities = 298/299 (99%) Identities = 298/299 (99%) AACGGAATGACACACGATAAACCCTATAAAAAATCTGCGCGTTGAACGGAATGACACACGATAAACCCTATAAAAAATCTGCGCGTTGAGTAGGGGATGTAATTGGAAAGTACCACCCTCATGGGGATCAAGAGTAGGGGATGTAATTGGAAAGTACCACCCTCATGGGGATCAAGCCGTTTATCAAACGATTGTAAGAATGGCGCAAGAATTTTCAATGCCGTTTATCAAACGATTGTAAGAATGGCGCAAGAATTTTCAATGCTGTTATTTACTAGTTGATGGTCATGGTAACTTTGGGTCAATTGACTGTTATTTACTAGTTGATGGTCATGGTAACTTTGGGTCAATTGATGGTGATAGTGCAGCTGCGATGCGTTATACAGAAGCGCGATTGTTGGTGATAGTGCAGCTGCGATGCGTTATACAGAAGCGCGATTGTCAAAAATTTCTTATGAGTTATTAAAATACATTGATAAAGAAACAGCAAAAATTTCTTATGAGTTATTAAAATACATTGATAAAGAAACAGTTGATTTTGTACCTAACTATGATGCGTCAGAACAAGAACCAATTGATTTTGTACCTAACTATGATGCGTCAGAACAAGAACCAA

>>gi|161598230|gb|EU279402.1|gi|161598230|gb|EU279402.1| UreaplasmaUreaplasma urealyticumurealyticumisolate CM239/2004 isolate CM239/2004 topoisomerasetopoisomerase IV (IV (parCparC) gene) geneIdentities = 269/269 (100%) Identities = 269/269 (100%) TTAGGAATTTTTCATGACAAACCTTACAAAAAATCAGCACGTACATTAGGAATTTTTCATGACAAACCTTACAAAAAATCAGCACGTACAGTTGGGGAAGTAATTGGTAAATACCACCCTCATGGTGATTCATCGTTGGGGAAGTAATTGGTAAATACCACCCTCATGGTGATTCATCAATTTATGAAGCTATGGTAAGAATGAGTCAAGATTGAAAAAATAAATTTATGAAGCTATGGTAAGAATGAGTCAAGATTGAAAAAATAATTTATGCTTATTAGATATGCATGGTAATAAAGGTTCGATTGATGATTTATGCTTATTAGATATGCATGGTAATAAAGGTTCGATTGATGGTGATAACGCTGCTGCGATGCGTTATACAGAAACACGTTTATCAGTGATAACGCTGCTGCGATGCGTTATACAGAAACACGTTTATCAAAAATTGCTAGTGTAATGCTAACTAATTTAAAAAAAGATGTAGTTAAAATTGCTAGTGTAATGCTAACTAATTTAAAAAAAGATGTAGTTAAATTTAGTCCAAAAATTTAGTCCAA

5454歳歳男性男性, , 大動脈瘤術後の縦隔炎大動脈瘤術後の縦隔炎

①①

②②

③③

④④

U. U. urealyticumurealyticum,,M. M. hominishominis

OutcomeOutcome

ResolvedResolved

ResolvedResolved

DiedDied

ResolvedResolved

CaseCase Age/SexAge/Sex PHPH

63/M63/M

43/M43/M

77/F77/F

66/M66/M

PreviousPreviousSurgerySurgery

CABGCABG

CABGCABG

CABGCABG

Review of published cases of postReview of published cases of post--operative operative mediastinitismediastinitis due to due to UreaplasmaUreaplasma infectioninfection

OrganismsOrganisms

CultureCulture

CultureCulture

CultureCulture

CultureCulture

HT, DMHT, DM

HT, DMHT, DM

HT, COPDHT, COPD

HT, HL, DMHT, HL, DM

DiagnosticDiagnostictooltool

19951995

19991999

20082008

20092009

U. U. urealyticumurealyticum

U. U. parvumparvum

AVRAVR+ hemi+ hemi--archarch

Present casePresent case 54/M54/M HTHT TotalTotal--archarch PCRPCR ResolvedResolved

U. U. urealyticumurealyticum,,M. M. hominishominis

U. U. urealyticumurealyticum

CorynebacteriumCorynebacterium kroppenstedtiikroppenstedtiiＮｏＮｏ..４４

グラム陽性桿菌グラム陽性桿菌(1998(1998年年にに記載記載))血液寒天培地で血液寒天培地で22～～44日培養日培養膿汁膿汁((乳腺炎乳腺炎))キット・自動機器では同定できないキット・自動機器では同定できない脂質好性脂質好性(1%(1% Tween20Tween20添加添加))肉芽腫性肉芽腫性乳腺炎乳腺炎((乳癌疑いの症例あり乳癌疑いの症例あり))各種薬剤感受性は良好各種薬剤感受性は良好

8

CorynebacteriumCorynebacterium kroppenstedtiikroppenstedtii；；肉芽腫性乳腺炎の起炎菌肉芽腫性乳腺炎の起炎菌

【【羊血液寒天培地羊血液寒天培地 3535℃℃ 7272h h COCO22培養培養】】【【乳腺穿刺液（膿瘍）乳腺穿刺液（膿瘍）】】

スライド提供；聖マリアンナ医科大学病院スライド提供；聖マリアンナ医科大学病院臨床検査部臨床検査部

API API CoryneCoryne V3.0V3.0 のコードはのコードは,, 20401042040104((C. C. argentoratenseargentoratense, % ID 87.1, T, % ID 87.1, T 0.49)0.49)

【【グラム染色像グラム染色像】】 NeisseriaNeisseria meningitidismeningitidisＮｏＮｏ..５５

グラム陰性球菌グラム陰性球菌血液寒天培地にも発育良好血液寒天培地にも発育良好血液血液,,髄液髄液,,尿道分泌物尿道分泌物,,関節液関節液本邦では本邦では血清型Ｙ血清型Ｙが大半が大半((近年は近年はY >> BY >> B))

敗血症敗血症,,髄膜炎髄膜炎,,尿道炎尿道炎,,関節炎関節炎薬剤感受性良好薬剤感受性良好;;海外では海外ではPCGPCG耐性株出現耐性株出現MLSTMLST解析解析((感染研の高橋英之先生へ依頼感染研の高橋英之先生へ依頼))患者との濃厚接触者には予防内服患者との濃厚接触者には予防内服

尿沈渣の培養尿沈渣の培養 ((髄膜炎菌髄膜炎菌))

チョコレート寒天培地チョコレート寒天培地血液寒天培地血液寒天培地

髄膜炎菌の同定と血清型髄膜炎菌の同定と血清型YYの決定の決定;;ctrActrA, , siaDsiaD ((serogroupserogroup Y)Y)遺伝子検索遺伝子検索

Lane A: Lane A: 分離株（分離株（2626歳歳, , 男性）男性）

Lane B: Lane B: 分離株（分離株（3232歳歳, , 男性）男性）Lane C: Lane C: 陰性コントロール陰性コントロール

M: Molecular size markerM: Molecular size marker

M A B C M A B CM A B C M A B C

1,500 1,500 --

1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --200 200 --

100 100 --

(bp)(bp)

111 bp111 bp((＋＋))

120 bp120 bp((＋＋))

検索遺伝子検索遺伝子:: ctrActrA siaDsiaD (Y) (Y) 尿道分泌物尿道分泌物

MLSTMLST解析解析(Multi Locus Sequence Typing)(Multi Locus Sequence Typing)

•• 77つの必須遺伝子つの必須遺伝子((househouse--keepingkeeping遺伝子遺伝子))の塩基配列の塩基配列

を解析し，その塩基配列のを解析し，その塩基配列の

相違をデータベースで照合す相違をデータベースで照合することにより分類する方法でることにより分類する方法である。ある。

•• このデータベースはインターこのデータベースはインター

ネットを介し、世界とオンライネットを介し、世界とオンラインで結ばれているため，分離ンで結ばれているため，分離株を国内はもちろんのこと、株を国内はもちろんのこと、

海外分離株と照合・比較す海外分離株と照合・比較することが可能である。ることが可能である。

ParkhillParkhill J. J. et. al.et. al. 2001. Nature. 4044:5022001. Nature. 4044:502--506.506.

abcZabcZ

adkadk

aroEaroE

famCfamCgdhgdh

pdhCpdhC

pgmpgm髄膜炎菌の全ゲノムと必須遺伝子髄膜炎菌の全ゲノムと必須遺伝子

househouse--keepingkeeping遺伝子遺伝子

の塩基配列を解析の塩基配列を解析

各菌種で指定された各菌種で指定されたhousehouse--keepingkeeping遺伝子遺伝子ををPCRPCRで増幅で増幅

((通常通常55～～77領域領域))

AlleleAllele解析解析1122

33

1122

3344

55

1122

3344

5566

77

1122

3344

5566

1122

33

1122

3344

1122

3344

AA株株 3 5 7 6 3 4 4 3 5 7 6 3 4 4

①① ②② ③③ ④④ ⑤⑤ ⑥⑥ ⑦⑦

abcZabcZ adkadk aroEaroE famCfamC gdhgdh pdhCpdhC pgmpgm

MLSTMLST解析の解析の手順手順

AA株株 3 5 7 6 3 4 43 5 7 6 3 4 4

BB株株 3 5 7 1 2 5 33 5 7 1 2 5 3

CC株株 3 5 7 2 3 4 4 3 5 7 2 3 4 4

AA株株

CC株株

BB株株

解析した解析した遺伝子の塩基配列をパターン化遺伝子の塩基配列をパターン化

MLSTMLSTデータベースデータベース検索・登録検索・登録 http://http://www.eburst.mlst.netwww.eburst.mlst.net//

9

海外渡航先での感染海外渡航先での感染//保菌が保菌が示唆された髄膜炎菌感染症の示唆された髄膜炎菌感染症の11例例

1)1)藤田保健衛生大学病院藤田保健衛生大学病院臨床検査部臨床検査部

2)2)岐阜大学大学院医学系研究科岐阜大学大学院医学系研究科病原体制御学分野病原体制御学分野

3)3)国立感染症研究所国立感染症研究所細菌第一部細菌第一部

○中山○中山麻美麻美1)1) ，早川，早川敏敏1) 1) ，濱岸，濱岸真奈美真奈美1) 1) ，，

池田池田貴和子貴和子1) 1) ，新谷，新谷知世知世1) 1) ，大楠，大楠清文清文2)2)，，

高橋高橋英之英之3) 3) ，渡邉，渡邉治雄治雄3) 3)

スライド提供；藤田保健衛生大学病院スライド提供；藤田保健衛生大学病院臨床検査部臨床検査部

MLSTMLST解析の結果解析の結果

•• ST(ST(遺伝子型遺伝子型)) 48934893

•• clonalclonal complex complex ST41/44complex/Lineage 3ST41/44complex/Lineage 3

•• allelic allelic abcZabcZ adkadk aroEaroE fumCfumC gdhgdh pdhCpdhC pgmpgmprofile profile 3 6 9 350 9 6 93 6 9 350 9 6 9

•• 分離国分離国 FranceFrance

•• 地域地域 38 38

•• 登録日登録日 20052005--0606--2727

•• 年齢年齢 1515歳歳

•• 性別性別女性女性

•• 疾患疾患髄膜炎髄膜炎

•• 分離検体分離検体髄液髄液

•• 菌種菌種 NeisseriaNeisseria meningitidismeningitidis•• 血清群血清群 BB

分離株はST-4893と同定。ST-4893は過去にフランスで分離されていた。

また，日本で分離されたST-41/44complexとは7つの遺伝子の中で3つしか同一でないことが判明。

フランスからの輸入例フランスからの輸入例である可能性が高い！である可能性が高い！

スライド提供；藤田保健衛生大学病院スライド提供；藤田保健衛生大学病院臨床検査部臨床検査部

髄液からの髄膜炎菌髄液からの髄膜炎菌DNADNAの検出の検出

Lane C1:Lane C1: 髄液髄液(6/09/2009) DNA(6/09/2009) DNA 原液原液

C2:C2: 髄液髄液(6/09/2009) DNA 10(6/09/2009) DNA 10倍希釈液倍希釈液

C3:C3: 髄液髄液(6/19/2009) DNA(6/19/2009) DNA 原液原液N: Negative controlN: Negative controlM: Molecular size markerM: Molecular size markerM C1 C2 C3 N M C1 C2 C3 NM C1 C2 C3 N M C1 C2 C3 N

1,500 1,500 --1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --200 200 --100 100 --

((bpbp))

111 111 bpbp（＋）（＋）

457 457 bpbp（＋）（＋）

Target geneTarget gene: : ctrActrA siaDsiaD (B) (B)

N. N. meningitidismeningitidis全般全般

N. N. meningitidismeningitidis血清群血清群BB


>>gi|29569692|gb|AY234193.1|gi|29569692|gb|AY234193.1|

NeisseriaNeisseria meningitidismeningitidis strain strain M5177M5177

serogroupserogroup: B,: B, sialyltransferasesialyltransferase ((siaDsiaD) gene, ) gene, Identities = 381/381 (100%)Identities = 381/381 (100%)CCAATGTCTTTCTATTGGAGAGTTAATTATTAACTTAATTCCCAATGTCTTTCTATTGGAGAGTTAATTATTAACTTAATTCAAAAATATTCAATGGTGGAAAACACTGAAATGATCCAAGAAAAAATATTCAATGGTGGAAAACACTGAAATGATCCAAGAACACTTAGAGATTATTAAGAAATTTAATTTTATTAATATACACACTTAGAGATTATTAAGAAATTTAATTTTATTAATATACTAAATGATTTAAATGGGGTAATAAGTAACCCTCTCTTTAAATAAATGATTTAAATGGGGTAATAAGTAACCCTCTCTTTAAAACAGAAGAAACATTTGAAACACTTCTTAAATCTGCAGAATTACAGAAGAAACATTTGAAACACTTCTTAAATCTGCAGAATTCGCATATAAATCTAAAAACTACTTTCAGGCTATTTTTTACTCGCATATAAATCTAAAAACTACTTTCAGGCTATTTTTTACTGGCAACTTGCCAGCAAAAACAATATTACCTTATTAGGGCAGGCAACTTGCCAGCAAAAACAATATTACCTTATTAGGGCATAAAGCATTATGGTACTACAATGCACTTTATAATGTAAAACTAAAGCATTATGGTACTACAATGCACTTTATAATGTAAAACAAATTTATAAGATGGAATATTCAGATATTTTTTATATCGATAAATTTATAAGATGGAATATTCAGATATTTTTTATATCGATAATATCTCCGTAGACTTTCATAGTAAAGATAAATTGACATGAATATCTCCGTAGACTTTCATAGTAAAGATAAATTGACATGGGAAAAAATTAAACATTATTACGGAAAAAATTAAACATTATTAC

AggregatibacterAggregatibacter aphrophilusaphrophilusＮｏＮｏ..６６

グラム陰性グラム陰性小桿菌小桿菌HaemophilusHaemophilus属から移籍属から移籍(2006(2006年年))

血液寒天培地にも発育血液寒天培地にも発育(CO(CO22環境が良好環境が良好))血液血液,,膿瘍膿瘍((脳脳,,脊椎脊椎,,肺）肺）感染性心内膜炎感染性心内膜炎(IE)(IE),,脊椎炎脊椎炎,,脳膿瘍脳膿瘍,,膿胸膿胸薬剤感受性良好薬剤感受性良好液体培養で凝集塊液体培養で凝集塊(ST(ST実施実施;;超音波破砕超音波破砕))

HACEKHACEKグループグループＨＨ；；HaemophilusHaemophilus属菌属菌

ＡＡ；；ActinobacillusActinobacillus属菌属菌A. A. actinomycetemcomitansactinomycetemcomitansＡＡ；；AggregatibacterAggregatibacter属菌属菌

CC；；CardiobacteriumCardiobacterium 属菌属菌

ＥＥ；；EikenellaEikenella corrodenscorrodensC. C. hominishominis, C. , C. valvarumvalvarum (2005(2005年年))

H. H. aphrophilusaphrophilus, H. , H. parainfluenzaeparainfluenzae

A. A. aphrophilusaphrophilus, A. , A. actinomycetemcomitansactinomycetemcomitans

ＫＫ；；KingellaKingella kingaekingae

10

「血液培養から分離された「血液培養から分離された特徴的な形態の細菌」特徴的な形態の細菌」

ーーグラム染色像と患者情報から推察する細菌グラム染色像と患者情報から推察する細菌ーー

LeptotrichiaLeptotrichia trevisaniitrevisaniiNVS / NDSNVS / NDSClostridiumClostridium tertiumtertiumNeisseriaNeisseria elongataelongataStreptobacillusStreptobacillus moniliformismoniliformis

Leptotrichia trevisanii

BacT/Alert SNボトル（嫌気）38h陽性

平板培地状の集落


血液培養液


平板上の集落

Leptotrichia trevisanii Leptotrichia sp. 新菌種

血液培養液

11

NVS / NDSNVS / NDS

GranulicatellaGranulicatella eleganselegans ((名古屋大学病院の症例）名古屋大学病院の症例）

NVS / NDS NVS / NDS (continued)(continued)

GranulicatellaGranulicatella eleganselegans ((名古屋大学病院の症例）名古屋大学病院の症例）

Gram stain of the blood cultures shows gram-positive cocci.

After subculture of the blood broth, the surface of the agar can be cross-streaked with a strain Staphylococcus aureus. NVS form satellite colonies around the colonies S. aureus.

NVS / NDS NVS / NDS (continued)(continued) NVS / NDSNVS / NDSNNutritionally utritionally VVariant ariant SStreptococci /treptococci /NNutritionally utritionally DDeficient eficient SStreptococcitreptococci

グラム陽性球菌；グラム陽性球菌；集落はグラム多型・多染色性集落はグラム多型・多染色性AbiotrophiaAbiotrophia defectivadefectiva, , GranulicatellaGranulicatella sppspp..LL--システインやビタミンシステインやビタミンB6B6要求性（衛星現象）要求性（衛星現象）

チョコレート寒天培地チョコレート寒天培地//ブルセラ培地に発育ブルセラ培地に発育血液血液,,膿瘍膿瘍((脳脳,,耳）耳）感染性心内膜炎感染性心内膜炎(IE(IE；連鎖球菌の約；連鎖球菌の約5%)5%),,脳膿瘍脳膿瘍薬剤感受性良好（薬剤感受性良好（PCGPCGののMICMIC値がやや高い株あり値がやや高い株あり

；；GMGMを併用）を併用）

AbiotrophiaAbiotrophia Kawamura Kawamura etet alal. 1995, gen. . 1995, gen. novnov. . Type speciesType species: : AbiotrophiaAbiotrophia defectivadefectiva ((BouvetBouvet etet alal. 1989) . 1989) Kawamura Kawamura etet alal. 1995. . 1995. Reference: KAWAMURA (Y.), HOU (X.G.), SULTANA (F.), LIU (S.), YAReference: KAWAMURA (Y.), HOU (X.G.), SULTANA (F.), LIU (S.), YAMAMOTO MAMOTO (H.) and EZAKI (T.): Transfer of (H.) and EZAKI (T.): Transfer of StreptococcusStreptococcus adjacensadjacens and and StreptococcusStreptococcusdefectivusdefectivus to to AbiotrophiaAbiotrophia gen. gen. novnov. as . as AbiotrophiaAbiotrophia adiacensadiacens comb. comb. novnov. and . and AbiotrophiaAbiotrophia defectivadefectiva comb. comb. novnov., respectively. ., respectively. IntInt. . JJ. . SystSyst. . BacteriolBacteriol., 1995, 45, ., 1995, 45, 798798--803.803.

AbiotrophiaAbiotrophia defectivadefectiva ((BouvetBouvet etet alal. 1989) Kawamura . 1989) Kawamura etetalal. 1995, comb. . 1995, comb. novnov. (Type species of the genus). . (Type species of the genus). Type strainType strain: strain SC10 = ATCC 49176 = CIP 103242 = CCUG 27639 = : strain SC10 = ATCC 49176 = CIP 103242 = CCUG 27639 = CCUG 27804 = DSM 9849 = LMG 14740. CCUG 27804 = DSM 9849 = LMG 14740. BasonymBasonym: : StreptococcusStreptococcus defectivusdefectivus BouvetBouvet etet alal. 1989. . 1989. Reference: KAWAMURA (Y.), HOU (X.G.), SULTANA (F.), LIU (S.), YAReference: KAWAMURA (Y.), HOU (X.G.), SULTANA (F.), LIU (S.), YAMAMOTO MAMOTO (H.) and EZAKI (T.): Transfer of (H.) and EZAKI (T.): Transfer of StreptococcusStreptococcus adjacensadjacens and and StreptococcusStreptococcusdefectivusdefectivus to to AbiotrophiaAbiotrophia gen. gen. novnov. as . as AbiotrophiaAbiotrophia adiacensadiacens comb. comb. novnov. and . and AbiotrophiaAbiotrophia defectivadefectiva comb. comb. novnov., respectively. ., respectively. IntInt. . JJ. . SystSyst. . BacteriolBacteriol., 1995, 45, ., 1995, 45, 798798--803.803.

旧名称旧名称

GranulicatellaGranulicatella Collins and Lawson 2000, gen. Collins and Lawson 2000, gen. novnov. . Type speciesType species: : GranulicatellaGranulicatella adiacensadiacens ((BouvetBouvet etet alal. 1989) Collins and Lawson 2000. . 1989) Collins and Lawson 2000.

GranulicatellaGranulicatella adiacensadiacens ((BouvetBouvet etet alal. 1989) Collins and . 1989) Collins and Lawson 2000, comb. Lawson 2000, comb. novnov. (Type species of the genus). . (Type species of the genus). Type strain : Type strain : strain strain GaDGaD = ATCC 49175 = CCUG 27637 A = CCUG 27809 = CIP 103243 = = ATCC 49175 = CCUG 27637 A = CCUG 27809 = CIP 103243 = DSM 9848 = LMG 14496 = NCTC 13000. DSM 9848 = LMG 14496 = NCTC 13000. BasonymBasonym: : StreptococcusStreptococcus adjacensadjacens BouvetBouvet etet alal. 1989. . 1989. Other synonym: Other synonym: AbiotrophiaAbiotrophia adiacensadiacens ((BouvetBouvet etet alal. 1989) Kawamura . 1989) Kawamura etet alal. 1995. . 1995.

GranulicatellaGranulicatella balaenopteraebalaenopterae (Lawson (Lawson etet alal. 1999) Collins . 1999) Collins and Lawson 2000, comb. and Lawson 2000, comb. novnov. . Type strain: strain M1975/96/1 = ATCC 700813 = CCUG 37380 = CIP Type strain: strain M1975/96/1 = ATCC 700813 = CCUG 37380 = CIP 105938. 105938. BasonymBasonym: : AbiotrophiaAbiotrophia balaenopteraebalaenopterae Lawson Lawson etet alal. 1999. . 1999.

GranulicatellaGranulicatella eleganselegans ((RoggenkampRoggenkamp etet alal. 1999) Collins . 1999) Collins and Lawson 2000, comb. and Lawson 2000, comb. novnov. . Type strain: Type strain: strain B1333 = ATCC 700633 = CCUG 38949 = CIP 105513 = DSM 11693strain B1333 = ATCC 700633 = CCUG 38949 = CIP 105513 = DSM 11693. . BasonymBasonym: : AbiotrophiaAbiotrophia eleganselegans RoggenkampRoggenkamp etet alal. 1999. . 1999.

旧名称旧名称別名別名

12

血液培養陽性時の静脈血培養液

Neisseria elongata

血液寒天培地で継代後の集落

Neisseria elongata

Streptobacillus moniliformis

６９歳、男性。６９歳、男性。路上生活歴路上生活歴2020年、妻と別れてから初めは日比谷年、妻と別れてから初めは日比谷公園で火をおこし生活。公園で火をおこし生活。コンビニの賞味期限切れの品がごみ箱コンビニの賞味期限切れの品がごみ箱

に捨てられたのを拾って食べていた。に捨てられたのを拾って食べていた。当初、収入は一日当初、収入は一日30003000円円ほどあり。数年前より新橋駅近く居酒屋（養老の滝）裏、ガードほどあり。数年前より新橋駅近く居酒屋（養老の滝）裏、ガード下で生活、今日に至る。雨は防げる場所。個人個人、毛布は持参。下で生活、今日に至る。雨は防げる場所。個人個人、毛布は持参。

日中は干す。身体に痒みを感じたことはないとの事。水はペット日中は干す。身体に痒みを感じたことはないとの事。水はペットボトルに汲んで飲む。この場所は火はおこせない。コンビニのゴボトルに汲んで飲む。この場所は火はおこせない。コンビニのゴミ箱は鍵がかけられ手が出ず、食糧調達は銀座へと足を運ぶ。場ミ箱は鍵がかけられ手が出ず、食糧調達は銀座へと足を運ぶ。場

所は博品館の所は博品館の11本裏通りを縄張りとし、仲間本裏通りを縄張りとし、仲間33人で人で2222時から時から2323時バ時バケツに捨てられた食べ物を拾って来る。拾い方はビニール手袋をケツに捨てられた食べ物を拾って来る。拾い方はビニール手袋をはめ、食べ物をくるむようにする。店はとんかつや、やきとり、はめ、食べ物をくるむようにする。店はとんかつや、やきとり、中華料理店など。余談ですが、中華料理店でのごみ箱で肉中華料理店など。余談ですが、中華料理店でのごみ箱で肉まんまんなな

ど、しっかりした物があったらニコニコだそうです。この患者様、ど、しっかりした物があったらニコニコだそうです。この患者様、もと神田のすし職人、拾ったもので残ったのももと神田のすし職人、拾ったもので残ったのもはは次の朝ゴミ箱に次の朝ゴミ箱に捨てるのが鉄則と言ってました。収入は雑誌拾いと自動販売機の捨てるのが鉄則と言ってました。収入は雑誌拾いと自動販売機の

釣銭の小銭探し。一日釣銭の小銭探し。一日400400円程度。円程度。

今回入院となったきっかけは、テリトリーの今回入院となったきっかけは、テリトリーの自動販売機によそ者が手を突っ込んでいるのを自動販売機によそ者が手を突っ込んでいるのをみて、すぐさま怒鳴り、追っかけた途中、乳母みて、すぐさま怒鳴り、追っかけた途中、乳母車に足を引っ掛けて転倒。本人さほどの痛みを車に足を引っ掛けて転倒。本人さほどの痛みを感じなかったものの、仲間が手、肩の動作が変感じなかったものの、仲間が手、肩の動作が変なので救急車を呼び当院へ搬送。なので救急車を呼び当院へ搬送。

ネズミに対するエピソードは、寝泊まりしてネズミに対するエピソードは、寝泊まりしていた養老の滝そばで大きいねずみが子猫を襲っいた養老の滝そばで大きいねずみが子猫を襲っていたのを見たことが一度。仲間もこのあたりていたのを見たことが一度。仲間もこのあたりはネズミが出ると言っていたが、噛まれた気配、はネズミが出ると言っていたが、噛まれた気配、傷口は分からず。（医師確認）傷口は分からず。（医師確認）

13

Streptobacillus moniliformis

Capnocytophaga canimorsusCapnocytophaga canimorsusＮｏＮｏ..７７

グラム陰性グラム陰性桿菌桿菌(CO(CO22要求性要求性))鞭毛は持たないが平板で滑走能あり鞭毛は持たないが平板で滑走能あり血液寒天培地に発育血液寒天培地に発育,,ときにときにSCSC不能不能イヌ・ネコイヌ・ネコの口腔内常在菌の口腔内常在菌咬傷咬傷//掻傷後の敗血症掻傷後の敗血症((致死率約致死率約30%)30%)糖尿病糖尿病,,アルコール依存症アルコール依存症,,摘脾摘脾,,高齢者高齢者各種抗菌薬の感受性は良好各種抗菌薬の感受性は良好分離菌株は感染研の鈴木道雄先生へ分離菌株は感染研の鈴木道雄先生へ

国立感染症研究所獣医科学部第一室（03-5285-1111 内線2622）

炭酸ガス培養炭酸ガス培養微好気培養微好気培養

Capnocytophaga canimorsusCapnocytophaga canimorsus

Capnocytophaga canimorsus

患者様は患者様は6464歳の男性歳の男性です。通院歴はありませんが、数十年前に胃潰瘍を指摘さです。通院歴はありませんが、数十年前に胃潰瘍を指摘さ

れたことがあります。またれたことがあります。また大酒家（毎日大酒家（毎日33合ほど日本酒を飲まれる）合ほど日本酒を飲まれる）であり、数年前であり、数年前にアルコール離脱症状にて入院されたことがあるとのことです。にアルコール離脱症状にて入院されたことがあるとのことです。

2009/11/132009/11/13から全身倦怠感があり、から全身倦怠感があり、11/1411/14にに3939℃℃の発熱と下痢がはじまり、の発熱と下痢がはじまり、近医を受診されました。抗生剤と解熱剤を処方され、一旦帰宅されました。近医を受診されました。抗生剤と解熱剤を処方され、一旦帰宅されました。11/1511/15

に自転車で転倒して顔面・両膝を打撲されました。に自転車で転倒して顔面・両膝を打撲されました。11/1711/17頃から打撲部を中心と頃から打撲部を中心とした紫斑が目立つようになり、した紫斑が目立つようになり、11/1811/18の夜からは無尿となりました。この間、倦怠の夜からは無尿となりました。この間、倦怠

感・発熱・下痢も改善なく、感・発熱・下痢も改善なく、11/1911/19にこれまでと違う病院を受診され、血液検査ににこれまでと違う病院を受診され、血液検査にててCKCK、、BUNBUN、、CrCrの異常高値、血小板の減少を認めました。緊急血液浄化を含めたの異常高値、血小板の減少を認めました。緊急血液浄化を含めた加療が必要と判断されたため当センター転院となりました。転送前に頭部加療が必要と判断されたため当センター転院となりました。転送前に頭部CTCTを施を施

行されましたが、明らかな異常はありませんでした。行されましたが、明らかな異常はありませんでした。

大阪府三島救命救急センター大阪府三島救命救急センター症例症例

顔面・左前胸部・両上下肢に顔面・左前胸部・両上下肢に紫斑を認め、特に両下肢先端紫斑を認め、特に両下肢先端

は冷たく、疼痛を訴えておられは冷たく、疼痛を訴えておられました。ました。

当初は当初はfocusfocus不明ながら不明ながらSepsisSepsisから多臓器不全から多臓器不全に陥っに陥っ

たと考え、たと考え、MEPMMEPMととγγ--glbglbの投の投与を開始し与を開始した。た。

当初は当初はfocusfocus不明ながら不明ながらSepsisSepsisから多臓器不全から多臓器不全に陥っに陥っ

たと考え、たと考え、MEPMMEPMととγγ--glbglbの投与を開始し、の投与を開始し、CHFCHFにて血液浄にて血液浄化を開始しました。その後は化を開始しました。その後は3838℃℃程度の発熱はあるものの程度の発熱はあるものの比較的全身状態良好に経過しました比較的全身状態良好に経過しました

起因菌の検索を行ったところ、入院時の血液培養より起因菌の検索を行ったところ、入院時の血液培養よりCapnocytophaga Capnocytophaga sp.sp.が検出されました。が検出されました。改めて問診します改めて問診しますと、と、今年の今年の99月から月から1111月初旬までの間、歯肉に膿が貯留し月初旬までの間、歯肉に膿が貯留し

て歯科医に通院されていたとのことでした。またて歯科医に通院されていたとのことでした。また11/14 11/14 頃頃に飼い犬に左手を噛まれたに飼い犬に左手を噛まれたとの事ですが、家庭でイソジンとの事ですが、家庭でイソジン消毒・バンドエイド貼付をされただけでした。四肢の症状消毒・バンドエイド貼付をされただけでした。四肢の症状

とエピソードよりとエピソードよりCapnocytophagaCapnocytophaga感染症から電撃性紫斑病感染症から電撃性紫斑病を発症したと考えられました。を発症したと考えられました。現時点では現時点ではCapnocytophagaCapnocytophaga感染症の可能性が高いものの、感染症の可能性が高いものの、感染源が歯肉か犬咬傷によるものかが判然としません感染源が歯肉か犬咬傷によるものかが判然としません。診。診

断には細菌の遺伝子検査による同定が必要と考えました。断には細菌の遺伝子検査による同定が必要と考えました。ご多忙の中とは思いますが、細菌の遺伝子検査につき、宜ご多忙の中とは思いますが、細菌の遺伝子検査につき、宜しくお願い申し上げます。しくお願い申し上げます。

14

右指示指咬傷部所見右指示指咬傷部右指示指咬傷部XX線画像線画像

患者：患者：4444歳歳, , 男性男性

主訴：敗血症性ショック主訴：敗血症性ショック

現病歴：現病歴：20082008年年1111月月33日日, , 飼いイヌに右示指を飼いイヌに右示指を

咬まれ当院受診した。右示指末節開放骨折を咬まれ当院受診した。右示指末節開放骨折を

認めたため認めたため, , 手術目的で入院となる。手術目的で入院となる。

佐世保共済病院の症例佐世保共済病院の症例 Case ReportCase ReportCapnocytophaga canimorsusCapnocytophaga canimorsus: infection, : infection, septicaemiasepticaemia, recovery and reconstruction, recovery and reconstructionStephanie ChiangStephanie Chiang--MeiMei Low and John Edward Greenwood Low and John Edward Greenwood

Burns Unit, Royal Adelaide Hospital, Adelaide, South Australia 5Burns Unit, Royal Adelaide Hospital, Adelaide, South Australia 5000, Australia000, AustraliaShe omitted (as unimportant) the history of a She omitted (as unimportant) the history of a hot water scald some 3hot water scald some 3––4 weeks prior to 4 weeks prior to presentation resulting in a superficial dermal presentation resulting in a superficial dermal burn on the dorsum of her left foot burn on the dorsum of her left foot (approximately 33 mm in diameter (approximately 33 mm in diameter –– much much less than 1 % of her body surface area). Nor less than 1 % of her body surface area). Nor did she realize the significance of her did she realize the significance of her fox fox terrier puppy subsequently licking the burn terrier puppy subsequently licking the burn areaarea. The burn wound was not cleaned . The burn wound was not cleaned appropriately, nor antibiotic therapy sought. appropriately, nor antibiotic therapy sought. This was a significant piece of the history, This was a significant piece of the history, since it reveals the source and cause of all since it reveals the source and cause of all the symptoms and signs. the symptoms and signs.

J Med J Med MicrobiolMicrobiol 57 (2008), 90157 (2008), 901--903 903

20072007年年66月下旬にオーストラリアのビク月下旬にオーストラリアのビク

トリア州で報告されたトリア州で報告されたC. canimorsusC. canimorsus感染感染

症患者（４８歳女性）は、敗血症性ショック症患者（４８歳女性）は、敗血症性ショック

で緊急入院する３～４週間ほど前に左脚で緊急入院する３～４週間ほど前に左脚

に熱湯で直径３３に熱湯で直径３３mmmm程の火傷を負ってい程の火傷を負ってい

た。適切な清潔を保てずに、抗菌薬の投た。適切な清潔を保てずに、抗菌薬の投

与も受けていなかった。与も受けていなかった。

この火傷の部位を飼い犬のフォッこの火傷の部位を飼い犬のフォッ

クステリアの子犬になめられていて、クステリアの子犬になめられていて、

C. canimorsusC. canimorsusに感染した。に感染した。

C. canimorsusC. canimorsusC. C. cynodegmicynodegmiC. C. ochraceaochraceaC. C. sputigenasputigenaC. C. gingivalisgingivalisC. C. granulosagranulosaC. C. haemolyticahaemolyticaC. C. leadbetterileadbetteri

イヌ・ネコイヌ・ネコのの

口腔内常在菌口腔内常在菌

ヒトヒトのの

口腔内常在菌口腔内常在菌

オキシダーゼオキシダーゼ＆カタラーゼ＆カタラーゼ

陽性陽性

陰性陰性

CapnocytophagaCapnocytophaga 属の８菌種属の８菌種 Capnocytophaga Capnocytophaga sputigenasputigena

スライド提供；藤田保健衛生大学病院スライド提供；藤田保健衛生大学病院

15

イヌ・ネコ咬傷後にイヌ・ネコ咬傷後に感染症を惹起する微生物感染症を惹起する微生物

Capnocytophaga canimorsusCapnocytophaga canimorsusPasturellaPasturella multocidamultocidaBartonellaBartonella henselaehenselaeStapylococcusStapylococcus aureusaureusStreptococcus Streptococcus sppspp..EikenellaEikenella corrodenscorrodensNeisseriaNeisseria sppspp..Clostridium Clostridium tetanitetani （破傷風）（破傷風）Rabies virus Rabies virus （狂犬病）；恐水発作（狂犬病）；恐水発作

BrachyspiraBrachyspira pilosicolipilosicoliＮｏＮｏ..８８

嫌気性のスピロヘータ嫌気性のスピロヘータブタの結腸炎や慢性下痢症の原因菌ブタの結腸炎や慢性下痢症の原因菌キット・自動機器による同定不能キット・自動機器による同定不能フィルム状発育フィルム状発育,,ββ溶血溶血,,馬尿酸水解馬尿酸水解(+)(+)糞便糞便,,血液血液((本邦で千田らが本邦で千田らが初初症例報告症例報告))嫌気ボトルで約嫌気ボトルで約66～～1515日を要する日を要する東南アジアへの旅行東南アジアへの旅行,,動物との接触動物との接触ペニシリン系抗菌薬に耐性の株ありペニシリン系抗菌薬に耐性の株あり

Brachyspira pilosicoli 千葉市立海浜病院千葉市立海浜病院症例症例4141歳歳, , 男性男性糞便糞便

1,500 1,500 --1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --200 200 --100 100 --

((bpbp))

PCRPCR法による糞便からの法による糞便からのBrachyspiraBrachyspira 属菌属菌DNADNAの検の検出と菌種の同定出と菌種の同定

M F1 F2 N F1 F2 N M F1 F2 N F1 F2 NM F1 F2 N F1 F2 N M F1 F2 N F1 F2 NF1: F1: 糞便糞便DNADNA 22倍希釈液倍希釈液F2: F2: 糞便糞便DNA 50DNA 50倍希釈液倍希釈液

N: N: 陰性コントロール陰性コントロールM: Molecular size markerM: Molecular size marker


千葉市立海浜病院千葉市立海浜病院症例症例4141歳歳, , 男性男性糞便糞便

検出対象：検出対象：

823823--bpbp((＋＋))

198198--bpbp((＋＋))

354354--bpbp((－－))

655655--bpbp((－－))

BrachyspiraBrachyspira sp.sp. B. B. hyodysenteriaehyodysenteriae B. B. pilosicolipilosicoli LawsoniaLawsonia intracellularisintracellularis

Mycobacterium Mycobacterium shinjukuenseshinjukuenseＮｏＮｏ..９９

遅発育性の抗酸菌遅発育性の抗酸菌((発育が遅い発育が遅い))20042004年に社会保険中央病院年に社会保険中央病院((新宿新宿))で分離で分離先月先月, , 正式に新種記載正式に新種記載喀痰喀痰, BAL(, BAL(非定型抗酸菌症非定型抗酸菌症))空洞を伴う結節性病変空洞を伴う結節性病変((空洞形成に空洞形成に22～～1010年年))

系統学的に結核菌と類縁系統学的に結核菌と類縁MTD&TRCMTD&TRC陽性陽性（偽陽性；結核菌とのクロス反応（偽陽性；結核菌とのクロス反応))

アンプリコアは陰性アンプリコアは陰性, DDH, DDHも陰性も陰性

肺に空洞を伴う結節を形成する肺に空洞を伴う結節を形成する新種“新種“M. M. shinjukuenseshinjukuense””

2007.2.6 2008.11.20 2009.1.132009.1.13

16

16S 16S rRNArRNA遺伝子配列による系統解析遺伝子配列による系統解析

“M. shinjukuense”GTC2738T

Mycobacterium Mycobacterium ulceransulceransＮｏＮｏ..1010

遅発育性の抗酸菌遅発育性の抗酸菌((発育に発育に66～～10W)10W)発育至適温度；発育至適温度；2525～～3030℃℃皮膚潰瘍皮膚潰瘍((BuruliBuruli潰瘍潰瘍))日本では日本では””M. M. shinshuenseshinshuense””あるいはあるいは””M. M. ulceransulcerans subspsubsp.. shinshuenseshinshuense””

無痛性結節から深部潰瘍へ進行；無痛性結節から深部潰瘍へ進行；組織破壊：マイコラクトン（毒素組織破壊：マイコラクトン（毒素))が関与が関与

治療は外科処置と治療は外科処置とCAM+REP+LVFX?CAM+REP+LVFX?

初診初診：：20072007年年55月月99日日

主訴主訴：右耳介の結節：右耳介の結節

家族歴家族歴：特記すべきことなし：特記すべきことなし

既往歴既往歴：：20032003年より塵肺年より塵肺, , 混合性混合性

換気障害で換気障害で当院呼吸器科当院呼吸器科

に通院に通院

熱帯魚飼育経験熱帯魚飼育経験, , 海外渡航歴なし海外渡航歴なし

現病歴現病歴：：20072007年年55月初めより右耳月初めより右耳

介と耳介後部介と耳介後部にに強い疼痛を伴う強い疼痛を伴う

結節が出現。結節が出現。結節が増加し結節が増加し, , 中央中央

が潰瘍化した。が潰瘍化した。

症例症例 (73(73歳歳男性男性))

Mycobacterium Mycobacterium ulceransulceransが保有する遺伝子の検索が保有する遺伝子の検索(IS(IS2404, 2404, ISIS2606, uhp2606, uhp--1, uhp1, uhp--2, 2, uhpuhp--memmem, , esxAesxA 遺伝子遺伝子))

M S N S N M S N S N S N M S N S N M S N S N S N M S N M S N

1,500 1,500 --

1,000 1,000 --

500 500 --400 400 --300 300 --

200 200 --

100 100 --

(bp)(bp)Lane S: Lane S: 膿汁膿汁DNADNALane N: Lane N: 陰性コントロール陰性コントロールM: Molecular size markerM: Molecular size marker


ISIS24042404Primer:Primer: ISIS26062606 uhpuhp--11 uhpuhp--22 uhpuhp--memmem esxAesxA

492492--bpbp((＋＋))

332332--bpbp((＋＋))

((−−)) ((−−)) 494494--bpbp((＋＋))

169169--bpbp((＋＋))

→→ ““Mycobacterium Mycobacterium ulceransulcerans subspsubsp.. shinshuenseshinshuense””

小川培地 8週間目

25℃ 35℃

17

鳥取大学病院症例；46歳男性 2008年12月

鳥取大学病院症例；46歳男性 2009年6月

岡崎市民病院症例；31歳女性 2008年2月

岡崎市民病院症例；31歳女性 2008年3月

京都大学病院症例；11歳男児 2010年4月

千葉県こども病院症例；13歳男児2010年3月

岡山医療センター症例；50歳代女性2010年3月

症例症例 (8(8歳歳女児女児))

大垣市民病院症例大垣市民病院症例 20112011年年11月月

ArchanobacteriumArchanobacterium haemolyticumhaemolyticumグラム陽性桿菌（グラム陽性桿菌（CoryneformCoryneform; ; 不規則）不規則）カタラーゼ陰性カタラーゼ陰性((CorynebacteriumCorynebacterium属菌と鑑別）属菌と鑑別）逆逆CAMPCAMP試験陽性試験陽性, , キシロース陰性キシロース陰性本属には本属には99菌種が記載されている。本菌種の他菌種が記載されている。本菌種の他A. A. pyogenespyogenes, , A. A. bernardiaebernardiae が重要であるが重要である系統学的には系統学的にはActinomycesActinomyces属菌に類縁属菌に類縁ββ溶血；溶血；22日間以上培養（炭酸ガス）日間以上培養（炭酸ガス）咽頭炎咽頭炎, , 扁桃周囲膿瘍扁桃周囲膿瘍, , 創部感染症創部感染症, , 皮膚潰瘍皮膚潰瘍各種抗菌薬に対する感受性は良好各種抗菌薬に対する感受性は良好

ＮｏＮｏ..1111

症例症例 7979歳歳女性女性

主主訴：訴：微熱微熱, , 呼吸困難呼吸困難

既往歴既往歴：：19761976年右乳癌・右卵巣膿瘍で摘出手術施年右乳癌・右卵巣膿瘍で摘出手術施行。その際、輸血を実施され、後日、輸血後Ｃ型肝行。その際、輸血を実施され、後日、輸血後Ｃ型肝炎を指摘されたが未治療。炎を指摘されたが未治療。

19871987年縦隔リンパ節転移のため、放射線療法施行。年縦隔リンパ節転移のため、放射線療法施行。

20042004年肝硬変と診断され、現在治療中。年肝硬変と診断され、現在治療中。

現病歴：現病歴：20062006年１月より、微熱、呼吸困難が出現。年１月より、微熱、呼吸困難が出現。

22月月2525日肺炎、貧血、低アルブミン血症と診断され日肺炎、貧血、低アルブミン血症と診断され入院。入院。CTCTにて右肺に胸水貯留を確認。にて右肺に胸水貯留を確認。

検体の外観とグラム染色所見検体の外観とグラム染色所見（（Bartholomew&MittwerBartholomew&Mittwer変法）変法）

胸水の外観胸水（×1000）

スライド提供；福岡大学病院スライド提供；福岡大学病院臨床検査部臨床検査部

18

細菌学的な検査所見①細菌学的な検査所見①

S.aureus

A.haemolyticum

炭酸ガス培養炭酸ガス培養 11日目日目((保存株）保存株）

炭酸ガス培養炭酸ガス培養 44日目日目((保存株）保存株）Reverse CAMP testReverse CAMP test

Rap ANA; Rap ANA; ActinomycesActinomyces meyerimeyeri(97.8%)(97.8%)


細菌学的な検査所見②細菌学的な検査所見②

コリネバクテリウム同定キットＲａｐＩＤＣＢＰｌｕｓ

* * 追加試験追加試験A.haemolyticumA.haemolyticum

Gelatin 0%Gelatin 0%

XyloseXylose 0%0%

A.pyogenesA.pyogenes

Gelatin 98%Gelatin 98%

XyloseXylose 98%98%


血液寒天培地（日水EX）CO2培養

GAM半流動寒天培地

ブルセラ寒天培地（嫌気培養）

抗酸菌染色（脱色：0.5%硫酸水）胸水ボトル培養

Arcanobacterium haemolyticum


Clostridium Clostridium tertiumtertiumグラム陽性桿菌グラム陽性桿菌（陰性に染まりやすい）（陰性に染まりやすい）酸素耐性酸素耐性（好気培養で発育；血液培養で好気ボトルに発育）（好気培養で発育；血液培養で好気ボトルに発育）

腸内細菌腸内細菌, , BacillusBacillus属菌属菌, , LactobacillusLactobacillus属菌属菌として検査を進める可能性があるとして検査を進める可能性がある嫌気培養では芽胞（卵円形端在性）を形成嫌気培養では芽胞（卵円形端在性）を形成ガス産生性ガス産生性敗血症敗血症, , 壊死性筋膜炎壊死性筋膜炎, , 外傷後の膿膿瘍外傷後の膿膿瘍, , 内因性感染症内因性感染症CLDM, CLDM, 第第33世代セフェム系薬に耐性株あり世代セフェム系薬に耐性株あり

ＮｏＮｏ..1212

ClostridiumClostridium tertiumtertium；；グラム陰性に染まりグラム陰性に染まり, , 好気発育好気発育

【血液培養好気ボトル ×1000】

【羊血液寒天培地 35℃ 72h CO2培養】嫌気培養からのコロニーを染色

↓有芽胞桿菌

•• 患者：患者：8800歳代歳代, , 女女性性

•• 主訴：主訴：下下腹腹部部痛痛

•• 既往歴：脳動脈瘤既往歴：脳動脈瘤, , 甲状腺腫瘍甲状腺腫瘍

•• 現病歴：現病歴：20020099年年22月月99日日下下腹腹部部痛痛持続持続

により当院受診。腹水貯留を認め消化管により当院受診。腹水貯留を認め消化管穿孔が疑われたため消化器外科で緊急穿孔が疑われたため消化器外科で緊急手術となる。小腸穿孔による急性汎発性手術となる。小腸穿孔による急性汎発性

腹膜炎と腹膜炎と診断。診断。

スライド提供；聖マリアンナ医科大学病院スライド提供；聖マリアンナ医科大学病院

症例症例 6565歳歳女性女性主訴主訴：吐気，頚部痛：吐気，頚部痛既往歴既往歴：特記なし：特記なし現病歴現病歴：：20082008年年66月月2626日交通事故による多発外傷にて，当院日交通事故による多発外傷にて，当院に救急搬送された。顔面多発骨折，頸椎損傷，右上下肢骨折。に救急搬送された。顔面多発骨折，頸椎損傷，右上下肢骨折。77月月88日日尺骨，大腿骨整復術施行。尺骨，大腿骨整復術施行。1717日日頚椎頚椎C1C1--33固定術施固定術施行。帰室後より吐気，頚部痛を訴えた。行。帰室後より吐気，頚部痛を訴えた。1919日より発熱及び頭痛日より発熱及び頭痛があり，髄膜炎が疑われた。髄液よりグラム陽性桿菌が分離されがあり，髄膜炎が疑われた。髄液よりグラム陽性桿菌が分離されたがたが, , 当初は汚染の可能性もあると疑い，当初は汚染の可能性もあると疑い，BacillusBacillus sp. sp. として報として報告した。その後も髄液および術創部より断続的に同じ菌が分離告した。その後も髄液および術創部より断続的に同じ菌が分離されたため，起因菌と判断し，精査を行った。頚椎創部に感染巣されたため，起因菌と判断し，精査を行った。頚椎創部に感染巣のある可能性があるのある可能性がある, , 難治性髄膜炎として，難治性髄膜炎として，11月月55日に再度開創日に再度開創し，頚椎硬膜を切開しし，頚椎硬膜を切開し, , くもくも膜癒着を剥離した。その後，頭痛吐膜癒着を剥離した。その後，頭痛吐気は軽減し，培養も陰性化した気は軽減し，培養も陰性化した

19

• 経過2

WBC 45 91 33 82 62 50 89 74 116 110 183 ×102/μL

CRP 0.7 1.3 0.5 0.7 2.9 1.4 0.3 1.4 1.3 4.9 6.3 mg/dL

細胞数 21 150 468 364 3 30 /3/μL

培養 --- -+- - - ---- + - ++ + +++ ++ +-- - ---

頭痛

10/21髄液より有芽胞GPR分離

12/24ｼｬﾝﾄ抜去

髄液検査

血液検査

11/17髄液および11/25以降の髄液より継続して有芽胞GPR分離

1/5頚椎硬膜切開術

CTRX2g(10/21-11/12)

GM髄注10mg(11/20-11/26) LZD(1/5-1/25)

CAZ4g(12/12-12/18

CTRX4g(12/28-1/4)

起炎菌と考え、詳細な検査を

実施する

抗菌剤

11/6脳室腹腔短絡術

スライド提供；石川県立中央病院スライド提供；石川県立中央病院110

35℃24時間培養半透明のR型コロニー形成

卵円形端在性芽胞を有するやや大型のグラム陽性桿菌

ガム半流動培地の上層部発育せず

ガス発生あり

コロニーが大きい

好気培養⇒CO2培養⇒嫌気培養

☆同定キットAPI20A(sysmex) でC. tertium と同定(コード4774612-3)

☆遺伝子検査16S rRNA遺伝子の塩基配列はC.tertiumの基準株と100％一

致した

スライド提供；石川県立中央病院スライド提供；石川県立中央病院

細菌学的な検査所見細菌学的な検査所見

菌株菌株同定キット選択・使用時の同定キット選択・使用時のピットホールピットホール

•• グラム陽性球菌をグラム陽性球菌を桿菌桿菌と判定と判定；；S. S. mutansmutans, S. , S. mitismitis ほかほか•• グラム陽性桿菌をグラム陽性桿菌を陰性陰性桿菌と判定桿菌と判定；；Clostridium Clostridium tertiumtertium•• 好気培養で発育するが好気培養で発育するが, , 実は嫌気性菌実は嫌気性菌；；

C. C. tertiumtertium, , C. C. histolyticumhistolyticum, , C. C. caniscanis, , P. P. avidumavidum（酸素耐性嫌気性菌）（酸素耐性嫌気性菌）

•• 嫌気性菌ではないが初代分離は嫌気から嫌気性菌ではないが初代分離は嫌気から；；S. S. constellatusconstellatus, , NVSNVS ほかほか

•• NeisseriaNeisseria属なのに桿菌属なのに桿菌；；N. N. elongataelongata, , N. N. bacilliformisbacilliformis, , N. N. weaveriweaveri

•• らせん菌にも嫌気性菌がいるらせん菌にも嫌気性菌がいる；； Anaerobiospirillum succiniciproducensCampylobacter sputorum

• 発育環境によって形態が様々； Arcanobacterium haemolyticum

臨床検査における「見える化」の技術①臨床検査における「見える化」の技術①

生化学検査生化学検査((AST, ALTAST, ALT etc.)etc.)；；吸光度吸光度((ランベルト・ベールの法則ランベルト・ベールの法則))

生理機能検査生理機能検査((心電図心電図, , 脳波脳波 etc.)etc.)；；微弱な電気微弱な電気((電位変動電位変動))を増幅を増幅, , 波形として記録波形として記録

超音波検査；超音波検査；超音波を当ててその反響を画像化超音波を当ててその反響を画像化

臨床検査における「見える化」の技術②臨床検査における「見える化」の技術②

免疫学的検査；免疫学的検査；

抗原・抗体反応；凝集抗原・抗体反応；凝集, , 比濁法・比比濁法・比ろうろう法法, , 化学発光化学発光(CLIA), (CLIA), イムノクロマト法ほかイムノクロマト法ほか

病理・組織学的検査；病理・組織学的検査；

染色染色((色分け色分け), ), 顕微鏡顕微鏡((拡大拡大))

遺伝子検査；遺伝子検査；増やす増やす((増幅増幅), ), 産物の検出産物の検出

２２nm (10nm (10--99m)m) 101099倍倍DNADNAの大きさの大きさ見える！見える！

H-E染色

病原体検出・同定のストラテジー（戦略）病原体検出・同定のストラテジー（戦略）

菌種特異的；菌種特異的；lytAlytA((肺炎球菌肺炎球菌), ), coacoa ((S. aureusS. aureus))病原因子・毒素；病原因子・毒素；eaeeae, VT1/2, LT, TSST, VT1/2, LT, TSST--1, etc.1, etc.薬剤耐性関連；薬剤耐性関連；mecAmecA, , vanAvanA, 23S , 23S rRNA(SNPrRNA(SNP))属レベル；属レベル；Mycobacterium Mycobacterium sp., sp., AspergillusAspergillus sp.sp.目レベル；目レベル；ActinomycetalesActinomycetales細菌全般細菌全般, , 真菌全般真菌全般＊ウイルス全般はできない（個々のウイルスをねらう）＊ウイルス全般はできない（個々のウイルスをねらう）

20

Multiplex PCRMultiplex PCRによる呼吸器病原体の検出キットによる呼吸器病原体の検出キット

商品名商品名

販売元販売元

病病原原体体名名

検出数検出数

xTAGxTAGTMTM respiratory Viral panelrespiratory Viral panel

LuminexLuminexTaKaRaTaKaRa

２０２０RSV Type ARSV Type ARSV Type BRSV Type BInfluenza AInfluenza AInfluenza A(H1)Influenza A(H1)Influenza A(H3)Influenza A(H3)Influenza BInfluenza BParainfluenzaParainfluenza 11ParainfluenzaParainfluenza 22ParainfluenzaParainfluenza 33MatapneumovirusMatapneumovirus

RinovirusRinovirusAdenovirusAdenovirusInfluenza A(H5)Influenza A(H5)ParainfluenzaParainfluenza 44EnterovirusEnterovirusSARS SARS CoVCoVCoVCoV NL63NL63CoVCoV 229E229ECoVCoV OC43OC43CoVCoV HKU1HKU1

RSV Type ARSV Type ARSV Type BRSV Type BInfluenza AInfluenza AInfluenza BInfluenza BParainfluenzaParainfluenza 11ParainfluenzaParainfluenza 22ParainfluenzaParainfluenza 33MatapneumovirusMatapneumovirusBocavirusBocavirusAdenovirusAdenovirusRinovirusRinovirus

検出原理検出原理

CycleavePCRCycleavePCRTMTM

呼吸器系感染症呼吸器系感染症起因ウイルス起因ウイルス

15151111

サイクリングサイクリング

プローブ法プローブ法螢光マイクロビーズアレイ法螢光マイクロビーズアレイ法

SeegeneSeegene((島津製作所島津製作所))

RSV Type ARSV Type ARSV Type BRSV Type BInfluenza AInfluenza AInfluenza BInfluenza BParainfluenzaParainfluenza 11ParainfluenzaParainfluenza 22ParainfluenzaParainfluenza 33ParainfluenzaeParainfluenzae 44EnterovirusEnterovirusMatapneumovirusMatapneumovirusBocavirusBocavirus 1/2/3/41/2/3/4AdenovirusAdenovirusRinovirusARinovirusA/B/C/B/CCoVCoV OC43/HKU1OC43/HKU1CoVCoV 229E/NL63229E/NL63

マイクロチップ法マイクロチップ法

SeeplexSeeplex®®RV15 RV15 OneStepOneStep

ACE DetectionACE Detection

((MultiNAMultiNA))

Specimen collection

(Nasal swab)

Nucleic acid isolation

(Magtration® system)

Multiplex RT-PCR or multiplex PCR

(Seeplex® RV12, Flu-A/B typing , PB kits)

Automated electrophoresis of PCR samples

(MultiNA®)

A procedure for molecular detection in nasal swab (1)

Seeplex® Sepsis Kits (Seegene Inc. )

Thermal cycler(ABI 9700)

Magtration® 6GC system

(Precision System Science co. ltd)

Microchip electrophoresis

MCE-202 MultiNA®(SHIMADZU Corp.)

Nasal swab were taken from patients for rapid diagnostic influenza test

呼吸器感染症の起因病原体遺伝子同時検出

A procedure for molecular detection in nasal swab (2)

<DPO technology>

<Magtration system>

Sample Loading

HV － HV －

HV －

HV ＋

Electrophoresis

HV －

HV ＋

HV ＋

HV ＋

<Microchip electrophoresis>

Sample

Fill & Apply

Specimen collection

(Nasal swab)

Nucleic acid isolation

(Magtration® system)

Automated electrophoresis of PCR samples

(MultiNA®)

呼吸器感染症の起因病原体遺伝子同時検出

Multiplex RT-PCR or multiplex PCR

(Seeplex® PB , RV12, Flu-typing kits)

BD MAX™ Systemの外観とワークフロー

BD MAX™ SystemのReagent Strips

21

Verigene® System(Nanosphere社)の装置と原理

Verigene® CBS OverviewTargets Viruses

•Influenza A•Influenza B•RSV A•RSV B

Influenza A Subtypes•2009 H1N1•H1•H3

OlsetamivirResistance•2009‐H1 H275Y•H1 H275Y

Sample Type Nasopharyngeal Swab SpecimenAutomation Sample‐to‐ResultWorkflow Random AccessOn‐Demand Testing

Yes

Pipetting Steps 1Hands‐On Time ~5 minutesRun Time <2.5 hoursRegulatory Status

FDA Cleared – 510(k); CE‐IVD (expected 02‐2011)

（フィンガルリンク社の許可を得て転載）

Verigene® Respiratory Virus Plus Nucleic Acid Test(RV+)

GenXpertTM(Cepheid社）のカートリッジと装置

MRSAMRSA/SA NasalMRSA/SA BCMRSA/SA SSTIC. difficilevanA/vanB

MTB Positive Low, Rif Resistance DETECTED

MTB/RIFFluEVGBSBCR-ABL MonitorHemosIL® FII & FV

FilmArray® (Idaho Technology社)

（Idaho Technology社の許可を得て転載）

Reagent Reagent StorageStorage

Chemical Chemical Circuit Circuit BoardBoard

Sample Sample extraction & extraction & purificationpurification

11stst stage stage multiplex multiplex

PCRPCR

22ndnd stage stage PCRPCR

FilmArray® パウチの構造

Nested MultiPlex PCR ＆ Detection

FilmArray® の遺伝子増幅系と検出システム

22

Respiratory Pathogen Luminex xTAG® FilmArray® RPInfluenza A 10 10Influenza B 11 11

Respiratory syncytial virus 11 15Human Metapneumovirus 12 13

Parainfluenza 1 10 10

Parainfluenza 2 7 5Parainfluenza 3 11 13Parainfluenza 4* Not reportable 1

Adenovirus 10 11Rhinovirus/Enterovirus 24 30

Bocavirus Not on Panel 6Corona Virus NL63* Not reportable 4Corona Virus 229E* Not reportable 1Corona Virus OC43* Not reportable 0Corona Virus HKU1* Not reportable 1

Chlamydiophila pneumoniae Not on Panel 0Mycoplasma penumoniae Not on Panel 1

Total 106 132

Comparison: FilmArray vs. Luminex xTAG RVP, beta study Children’s Mercy Hospital. Selvarangan et. al

LAMP法（栄研化学）

MatrixとSampleの

混合結晶

H+

脱離およびイオン化（プロトン化）

LASER

LASERによるMatrixの励起

ソフトなイオン化多価イオンを生成しづらい

MALDI：Matrix Assisted Laser Desorption / Ionization

マトリックス支援レーザー脱離イオン化

ブルカー・ダルトニクス社の許可を得て転載

マトリックス支援レーザー脱離イオン化

質量分析計(MALDI-TOF MS)による微生物同定法

ﾚｰｻﾞｰ脱離/ｲｵﾝ化

検出器飛行時間

飛行加速

電極

+ + ++ + +

4364

.06

5380

.64

6254

.64

6315

.49

5096

.01

7157

.65

7273

.87

6410

.90

7870

.62

8368

.99

0

1000

2000

3000

4000

5000

Inte

ns. [

a.u.

]

4000 4500 5000 5500 6000 6500 7000 7500 8000m/z

ribosomal Protein m/zRL36 4364,33RS32 5095,82RL34 5380,39RL33meth. 6255,39RL32 6315,19RL30 6410,60RL35 7157,74RL29 7273,45RL31 7871,06RS21 8368,76

E.coli

Po wer Ion ising V acuum N egat ivePo wer Ion ising V acuum N egat ivePo wer Ion ising V acuum N egat ive

MALDI-TOF MS 質量分析計シスメックス・ビオメリュー社

ブルカー・ダルトニクス社

TOF = Time Of Flight

乾燥後、装置に装填ふたを閉めて・・・真空引き（3分以内）

0

200

400

600Inte

ns. [

a.u.

]

2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 18000 20000m/z

マススペクトルを取得ライブラリーとパターンマッチングし、同定

コロニーをピックアップターゲットプレートに薄く塗布マトリックスを添加

36mm

54mm

MALDI-TOF MS 質量分析計を用いた菌株同定の手順

ブルカー・ダルトニクス社の許可を得て転載

臨床微生物検査の学際領域の拡大臨床微生物検査の学際領域の拡大

細菌学細菌学

ウイルス学ウイルス学

真菌学真菌学

原虫・寄生虫学原虫・寄生虫学

臨床感染症学臨床感染症学

分子生物学分子生物学

分子系統学分子系統学（分類学）（分類学）

分子疫学分子疫学（臨床疫学）（臨床疫学）

バイオインフォマティクスバイオインフォマティクス

ゲノム解析学ゲノム解析学

分析化学分析化学

Documents

「最近話題の細菌 TOP12 プラスα」2011/09/03 · Helicobacter cinaedi Campylobacter fetus 4 Campylobacter lari バクテアラート3D嫌気ボトル 2日目に陽転 *もう1例でも嫌気ボトルのみ