Upload
others
View
5
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU
106
Paprastojo putino Viburnum opulus vaisių sulčių antibakterinių savybių tyrimai
1Laima Česonienė,
1Remigijus Daubaras,
2Antanas Šarkinas
1Vytauto Didžiojo universiteto Kauno botanikos sodas,
2Kauno technologijos universiteto Maisto institutas
Paprastojo putino Viburnum opulus L. vaisiai sukaupia didelius kiekius biologiškai aktyvių junginių, kurie yra labai vertinami maisto ir farmacijos
pramonėje. Šio darbo tikslas buvo nustatyti paprastojo putino vaisių sulčių poveikį įvairioms pavojingas ligas sukeliančioms bakterijoms, kurios daţnai
aptinkamos maisto produktuose. Įvertinus agrobiologines savybes, VDU Kauno botanikos sodo pomologinėje kolekcijoje buvo atrinktos paprastojo putino veislės, klonai ir varietetai. Antibakteriniai tyrimai patvirtino, kad paprastojo putino vaisių sultys stipriai slopina tiek gram-teigiamų, tiek gram-
neigiamų patogeninių bakterijų augimą. Ypač stiprus šių vaisių sulčių poveikis nustatytas bakterijoms Salmonella typhimurium, S. aguona,
Staphylococcus aureus, Lysteria monocytogenes ir Enterococcus faecalis. Antibakterinės savybės, patogeninės bakterijos, vaisiai
Įvadas
Paprastasis putinas V. opulus L. yra priskiriamas
Caprifoliaceae šeimai. Ši rūšis yra plačiai paplitusi Rytų,
Vakarų ir Pietų Europoje bei Vakarų ir Rytų Sibire
(Osipova, 2001). Atlikti biocheminės vaisių sudėties
tyrimai patvirtino, kad juose yra dideli kiekiai fenolinių
rūgščių, antocianinų ir proantocianinų (Van et al., 2009;
Burns Kraft et al., 2008). Kai kurie autoriai nurodo V.
opulus vaisių gydomąsias savybes, kurias lemia juose
sukaupti fenoliniai junginiai ir askorbo rūgštis (Rop et al.,
2010), flavonoidai ir antocianinai (Velioglu et al., 2006;
Deineka et al., 2005).
V. opulus vaisiai nuo seno naudojami liaudies
medicinoje. Jie teigiamai veikia sergančiųjų širdies
ligomis ligonių savijautą, taip pat juos vartoja peršalus,
esant virškinimo sistemos sutrikimams, sergant
neurozėmis (Van, 2009; Zayjachkivska et al., 2006).
Tačiau V. opulus vaisių panaudojimo galimybės
farmacijoje ir maisto pramonėje nėra išsamiai tyrinėtos,
moksliniuose ţurnaluose kol kas yra paskelbta nedaug
tyrimų rezultatų. Rusijoje, taip pat ir Sibiro tautose putino
vaisiai yra įprastas gėrimų, padaţų, kepinių komponentas
(Osipova, 2001; Velioglu et ai., 2006). Paprastasis putinas
Viburnum opulus - pripaţintas vaistinis augalas ir
mokslinėje medicinoje. Putino ţievėje yra rasta 11
fenolinių rūgščių, todėl ţievės vaistinės ţaliavos
preparatais yra gydomi skrandţio veiklos sutrikimai
(Deineka, 2005).
Mikrobiologinis maisto produktų uţterštumas sukelia
daug sveikatos ir ekonominių problemų. Todėl antriniai
augalų metabolitai yra ypač intensyviai tyrinėjami
pastaraisiais metais. Didelis dėmesys yra skiriamas
tiems augalams, kurie sukaupia daug įvairių fenolinių
junginių, pasiţyminčių antimikrobinėmis savybėmis
(Cavanagh, et al., 2003; Rauha et al., 2000; Magarinos et
al., 2008).
Šių tyrimų tikslas buvo nustatyti skirtingų V.
opulus genotipų vaisių sulčių poveikį įvairioms
patogeninėms bakterijoms, kurios sukelia pavojingas ligas
ir yra aptinkamos įvairiuose maisto produktuose.
Tyrimų metodika
VDU Kauno botanikos sode, vykdant Valstybinę
augalų genetinių išteklių mokslinių tyrimų programą buvo
sukaupta paprastojo putino V. opulus veislių ir klonų
kolekcija. Atlikus išsamius agrobiologinius tyrimus,
atrinktos trys perspektyvios veislės 'Kijevskaja Sadovaja',
'Krasnaja Grozd', 'Šukšinskaja', paprastojo putino
varietetai V. opulus var. americanum ir V. opulus var.
sargentii bei vietinės kilmės klonas P3 (Cesonienė et al.,
2010).
Visi vaisių pavyzdţiai buvo surinkti nuo krūmų
masinio nokimo stadijos metu. Pirmiausia buvo pašalintos
sėklos, po to vaisiai homogenizuoti. Vaisiai buvo lengvai
sutraiškyti ir rankiniu presu išspaustos sultys. Kiekvienam
vaisių pavyzdţiui paruošta po 3 pakartojimus.
Paprastojo putino vaisių sulčių antimikrobinis
aktyvumas nustatytas, naudojant dešimt gram-teigiamų ir
gram-neigiamų testavimo kultūrų : Listeria monocytogenes
ATCC 19117, Staphylococcus aureus (ATCC 25923),
Enterococcus faecalis, Staphylococcus epidermidis,
Micrococcus luteus (ATCC 9341), Escherichia coli
(ATCC 25922), Bacillus subtilis (ATCC),
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853), Salmonella
typhimurium (ATCC 14028) ir Salmonella agona PT 43.
Antibakterinį aktyvumą vertinant difuzijos j agarą
metodu, bakterijų kultūros 18 valandų augintos 37 °C
temperatūroje ant nuoţulnaus agaro. Nuplauta bakterijų
suspensija praskiesta pagal Mc Farland standartą Nr. 0.5,
gerai permaišyta mini purtykle, ir atitinkamas ląstelių
skaičius supiltas į ištirpintą bei atvėsintą iki 47 °C
temperatūros agarizuotą terpę bendram bakterijų skaičiui
nustatyti, dar kartą gerai permaišyta, kad ląstelės tolygiai
pasiskirstytų. Tokiu būdu paruoštas bakterijų ląstelių
suspensijos mišinys su terpe išpilstytas po 10 ml į 90
mm skersmens stiklines Petri lėkšteles. Terpei sustingus,
joje padarytos 6 įdubos (8 mm skersmens), į kurias įpilta
50 µl tiriamų sulčių. Antimikrobinis poveikis bakterijų
kultūroms įvertintas po 24 val. kultivavimo, matuojant
skaidrių zonų, susidariusių aplink įdubas, skersmenį,
išreiškiant milimetrais. Jei aplink įdubas skaidrios zonos
nesusidaro, daroma išvada, kad tirta medţiaga ar jos
koncentracija neturi baktericidinio poveikio tiriamai
kultūrai. Antibiotikas Ceftazidime/clavulanic acid 30/10
µg (Becton, Dickinson and Co., Franklin Lakes, N.J.,
U.S.A.) buvo panaudotas kaip teigiama kontrolė.
Atlikta duomenų statistinė analizė, naudojant
ANOVA, statistiškai patikimi skirtumai apskaičiuoti,
naudojant Duncan kriterijų, esant P≤0,01.
ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU
107
Rezultatai
Nustatyta, kad įvairių paprastojo putino veislių, klonų
ir varietetų vaisių sulčių antimikrobinis aktyvumas
statistiškai patikimai skyrėsi. Tačiau bakterijų kultūros taip
pat buvo nevienodai jautrios sulčių poveikiui. Didţiausia
gram-neigiamos bakterijos S. typhimurium augimo
slopinimo zona siekė nuo 25,3±0,40 iki 30,3±0,47mm (l
lentelė). Bakterijos S. agona augimas taip pat buvo stipriai
slopinamas, o slopinimo zona siekė nuo 23,3±0,47 iki
27,7±0,41 mm. E. coli kultūra pasiţymėjo didesniu
atsparumu paprastojo putino vaisių sulčių poveikiui.
Testuojama P. aeruginosa bakterijų kultūra buvo pati
atspariausia putino sulčių poveikiui, o jos augimo
slopinimo zona siekė nuo 17,8±0,40 iki 20,3±0,46 mm.
Lyginant paprastojo putino genotipų poveikį, nustatyta,
kad maţiausios gram-neigiamų bakterijų augimo zonos
susidarė, testuojamąsias kultūras veikiant veislės 'Krasnaja
Grozd' vaisių sultimis.
1 lentelė. Paprastojo putino V. opulus vaisių sulčių antibakterinis poveikis gram-neigiamų bakterijų kultūroms
Table 1. The antibacterial activity of V. opulus fruits juices on Gram-negative bacteria test cultures
Pavyzdys
Accession
Slopinimo zona, mm
Inhibition zone, mm
P. aeruginosa E. coli S. typhimurium S. agona
'Kijevskaja Sadovaja' 18,0+0,10ab
24,0±0,81d 27,0±0,00
b 26,0±0,00
b
V. opulus var. sargentii 18,0±0,10ab
23,0±0,12b 28,0±0,00
C 27,6±0,37
C
'Krasnaja Grozd' 17,8±0,40a 18,6±0,47
a 25,3±0,42
a 27,7±0,41
C
P3 20,3±0,46C 22,3±0,32
b 27,5±0,17
b 23,3±0,47
a
V. opulus var. americanum 18,0±0,10ab
23,7±2,49C 29,0±0,23
d 27,0±0,10
bc
'Šukšinskaja' 18,3±0,50b 23,0±0,81
b 30,3±0,47
e 25,3±0,26
b
Antibiotikas Ceftazidime nenustatyta 38,0±0,00 34,0±0,06 35,0±0,06 Pastaba. Vidurkiai, kurie stulpeliuose yra paţymėti ta pačia raide, statistiškai patikimai nesiskiria (Duncan kriterijus), esant P≤0,01
Note.The means in a column followed by the šame letter sho\vedno significant difference (Duncan 's multiple range tęst), significant at P≤0.01
Paprastojo putino vaisių sultys pasiţymėjo slopinančiu
poveikiu ir gram-teigiamų bakterijų L. monocytogenes, E.
faecalis ir S. aureus atţvilgiu, o vidutinės slopinimo zonos
siekė, atitinkamai 26,5±0,35 mm, 25,7±0,28 mm ir
24,1±0,34 mm. Didţiausiu atsparumu sulčių poveikiui
pasiţymėjo bakterijų M. luteus ir S. epidermidis kultūros,
kurių augimo slopinimo zonos siekė atitinkamai, nuo
15,0±0,00 iki 18,0±0,13 mm ir nuo 15,0±0,19 iki
18,2±0,21mm (2 lentelė).
2 lentelė. Paprastojo putino V. opulus vaisių sulčių antibakterinis poveikis gram-teigiamų bakterijų kultūroms
Table 2. The antibacterial activity of V. opulus fruit juices on Gram-positive bacteria test cultures
Pavyzdys
Accession
Slopinimo zona, mm
Inhibition zone, mm
S. aureus B. subtilis L. monocytogenes E. faecalis S. epidermidis M. luteus
'Kijevskaja
Sadovaja' 23,7±l,88
b 17,0±0,00
b 26,0±0,00
b 25,3±0,47
a 15,0±0.00
a 16,0±0,00
b
V. opulus var.
sargentii 26,0±0,00 20,3±0,47
d 24,6+1, 69
a 28,0±0,00
C 17,00±0,00
bc 18,0±0,13
d
'Krasnaja Grozd' 22,0±l,41a 21,7±0,47
e 26,3+0,47
c 24,6+0,47
a 16,6±0,47
b 17,6±0,47
C
P3 25,7±0,47d 16,3±0,47
a 27,6±0,47
d 25,0±0,47
a 15,7±0,47
a 15,4±0,07
ab
V. opulus var.
americanum 24,0±0,00
C 18,0±0,00
C 29,0±0,00
e 25,0±0,00
a 18,2±0,21
d 15,0±0,00
a
'Šukšinskaja' 23,3±0,47b 17,3±0,47
b 25,3±0,47
ab 26,3±0,47
b 17,3±0,47
C 15,2±0,47
ab
Antibiotikas
Ceftazidime 27,0±0,00 31,0±0,00 32,0+0,00 30,6+0,00 nenustatyta 40,1+0,21
Pastaba. Vidurkiai, kurie stulpeliuose yra paţymėti ta pačia raide, statistiškai patikimai nesiskiria (Duncan kriterijus), esant P≤0,01
Note. The means in a column followed by the same letter showed no significant difference (Duncan 's multiple range test), significant at P≤0.01
Lyginant paprastojo putino genotipus, nustatyta, kad
V. opulus var. americanum vaisių sultys pasiţymėjo stipriu
antibakteriniu poveikiu gram-teigiamai bakterijai 5.
epidermidis. V. opulus var. sargentii sultys stipriausiai
slopino E. faecalis ir S. aureus bakterijų kultūrų augimą.
Visos tirtos gram-teigiamos ir gram-neigiamos
bakterijos jautriausios buvo pusiau sintetinio antibiotiko
Ceftazidime, kuris buvo naudojamas kaip kontrolė,
poveikiui. Tačiau galima teigti, kad paprastojo putino
vaisių sultys taip pat pasiţymėjo efektyviu bakterijų
augimo slopinimu. Ypač svarbu paţymėti stiprų slopinantį
sulčių poveikį patogeninės bakterijos S. aureus augimui.
Aktyviausiai testuojamos S. aureus kultūros augimą
slopino V. opulus var. sargentii (26,0 mm) ir vietinės
kilmės klono P3 (25,7 mm) vaisių sultys. Antibiotiko
Ceftazidime poveikyje šios bakterijos augimo slopinimo
zona siekė 27,0 mm.
ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU
108
Aptarimas
Pastaraisiais metais ypač domimasi augalų
natūralių junginių funkcionaliosiomis savybėmis, nes jie
gali pakeisti iki šiol plačiai maisto pramonėje naudotas
įvairias sintetines chemines medţiagas. Vaisių vartojimas
yra labai svarbus saugant ţmonių sveikatą. Kadangi
paprastojo putino vaisiai sukaupia didelius kiekius
fenolinių junginių ir antocianinų, jie gali būti naudojami
įvairių ligų prevencijai bei gydymui (Česonienė et al.,
2010).
Ankstesnių tyrimų, atliktų VDU Kauno botanikos sode
metu buvo nustatyta, kad V. opulus pavyzdţiai labai
skiriasi bendru fenolinių junginių ir antocianinų kiekiu
(Česonienė et al., 2008; Česonienė et al., 2010; Cam et al.,
2007; Jordheim et al., 2007). Literatūroje yra duomenų
apie fenolinių junginių kiekius putino vaisių minkštime
tyrimus, kurie patvirtina mūsų duomenis (Deineka et al.,
2005; Sagdic et al., 2006; Rop et al., 2010). Kitų autorių
duomenimis, putinų vaisiai taip pat yra biologiškai
aktyvių medţiagų chlorogeninės rūgšties ir flavonoidų
(Velioglu et al., 2006), lipidų ir lipofilinių componentų
(Paredes-Lό pez et al., 2010) šaltinis. Šiame darbe pristatyti tyrimai patvirtina, kad kai kurie
liaudies medicinoje nuo seno vartojami augalai yra
vertingų antimikrobinėmis savybėmis pasiţyminčių
fitocheminių junginių šaltinis. Šie augalai galėtų būti
naudojami maisto produktų kokybės gerinimui, apsaugant
juos nuo uţteršimo patogeninėmis bakterijomis (Rauha et
al., 2000).
Mokslinėje literatūroje yra paskelbta nedaug tyrimų
rezultatų apie antimikrobines paprastojo putino vaisių
savybes. Sagdic ir kt. (2006) įrodė, kad bakterija
Aeromonas hydrophila yra labai jautri putino vaisių
ekstraktui, o Yersinia enterocolitica išskyrė kaip
atspariausią.
Šiame darbe palygintas skirtingų paprastojo putino
veislių, klonų ir varietetų vaisių sulčių poveikis tiek gram-
neigiamų, tiek gram-teigiamų patogeninių bakterijų
dauginimuisi. Nustatyta, kad visos testuojamos bakterijų
kultūros buvo jautrios paprastojo putino vaisių sulčių
poveikiui, tačiau skyrėsi slopinimo zonų dydţiu. Kaip
atspariausias paprastojo putino vaisių sulčių poveikiui
reikia išskirti bakterijas M. luteus ir S. epidermidis.
Tyrimų rezultatai patvirtina, kad sultys ypač efektyviai
slopina patogeninių -S. typhimurium, L. monocytogenes, S.
agona, E. faecalis ir S. aureus bakterijų augimą.
Šie tyrimų rezultatai taip pat tampa pagrindu
atrinkti tolimesniems biocheminiams ir
mikrobiologiniams tyrimams vertingiausias paprastojo
putino veisles ar klonus, kurių vaisių sultys sukaupia
didesnius kiekius biologiškai aktyvių medţiagų ir
efektyviausiai slopina patogeninių bakterijų augimą.
Siekiant išsamiai įvertinti paprastojo putino vaisių
antimikrobines savybes, būtina nustatyti atskirų vaisiuose
esančių biologiškai aktyvių medţiagų kiekius ir jų poveikį
įvairiems patogeniniams mikroorganizmams. Tuomet bus
galima išsamiau pagrįsti paprastojo putino vaisių
panaudojimą tiek farmacijos, tiek maisto pramonėje.
Išvados
1. Paprastojo putino vaisių sultys stipriausiai
slopino patogeninių bakterijų S. typhimurium, S. agona, L
monocytogenes, E. faecalis ir S. aureus augimą.
2. Testuojamosios P. aeruginosa, M. luteus ir S.
epidermidis bakterijų kultūros pasiţymėjo didţiausiu
atsparumu paprastojo putino vaisių sulčių poveikiui.
3. Išskirti du varietetai V. opulus var. sargentii ir V.
opulus var. americanum, kurių vaisių sultys buvo
efektyviausios, vertinant jų poveikį gram-neigiamų ir
gram-teigiamų bakterijų kultūrų augimui.
Literatūra
1. Burns Kraft, TF., Dey, M., Rogers, RB., Ribnicky, DM., Gipp, DM., Cefalu, WT. Phytochemical composition and metabolic performance-enhancing activity of dietary berries traditionally used by native North American. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2008, Vol. 56, Iss. 3, p. 654-660. 2. Cam, M., Hisl, Y, Kuscu, A. Organic acid, phenolic content, and antioxidant capacity of fruit flesh and seed of Viburnum opulus. Chemistry of Natural Compounds, 2007, Vol. 43, Iss. 4, p. 460- 461. 3. Cavanagh, HMA., Hipwell, M., Wilkinson, JM. Antibacterial activity of berry fruits used for culinary purposes. Journal of Medicinai Food, 2003,Vol. 6. Iss. l, p. 57-61. 4. Česonienė, L.; Daubaras, R.; Viškelis, P. Evaluation of productivity and biochemical components in fruit of different Viburnum accessions. Biologija, Vol. 54, No. 2, p. 93-96. 5. Česonienė, L, Daubaras, R., Venclovienė, J., Viškelis, P. Biochemical and agro-biological diversity of Viburnum opulus genotypes. Central European Journal of Biology, 2010, Vol. 5, Iss. 6, p. 864-871. 6. Deineka, VI., Sorokopudov, VN., Deineka, LA., Shaposhnik, EI., Kol’tsov, SV. Anthocyans from fruit of some plants of the Caprifoliaceae family. Chemistry of Natūrai Compunds, 2005, Vol 41, Iss. 2, p. 162-164. 7. Jordheim, M., Giske, NH., Andersen, 0M. Anthocyanins in Caprifoliaceae. Biochemical Systematics and Ecology, 2007, Vol. 35, Iss. 3, p. 153-159. 8. Magariňos, HLE., Sahr C., Selaive, SDC., Costa, ME., Figuerola,
FE., Pizarro, OA. In vitro Inhibitory Effect of Cranberry
(Vaccinium macrocarpum Ait.) Juice on Pathogenic Microorganisms. Applied Biochemistry and Microbiology, 2008,
Vol. 44, Iss. 3, p. 300-304.
9. Osipova, I. Allelopathic properties of European cranberry bush (Viburnum opulus L.) - valuable decorative, medicinal and fruit
plant, In: P. Salaš (Ed), Proceedings of 9th International
Conference of Horticulture, Lednice, Czech Republic, 2001,
September 3-6, p. 146-152.
10. Paredes-Lό pez, O., Cervantes-Ceja, ML., Vigna-Pėrez, M., Hernández-Pérez, T. Berries: Improving human health and healthy aging, and promoting quality life - a review. Plant Foods for
Human Nutrition, 2010, No. 65, p. 299-308.
11. Rauha, JP., Remes, S., Heinonen, M., Hopia, A., Kähkönen, M., Kujala, T., Pihlaja, K.., Vuorela, H., Vuorela, P. Antimicrobial
effect of Finnish plant extracts containing flavonoids and other phenolic compounds. International Journal of Food Microbiology,
2000, No. 56, p. 3-12.
12. Rop, O., Reznicek, V., Valsikova, M., Jurikova, T., Mlcek, J., Kramarova, D. Antioxidant Properties of European Cranberrybush
Fruit (Viburnum opulus var. edule). Molecules, 2010, Vol. 15, Iss.
6, p. 4467^477.
13. Sagdic, O., Aksoy, A., Ozkan, G. Evaluation of the antibacterial
and antioxidant potentials of cranberry (gilaburu, Viburnum opulus
L.) fruit extract. Acta Alimentaria, 2006, Vol 35, iss. 4, p. 487- 492.
14. Van, Q., Nay, BN., Reimer, M., Jone,s PJH., Fulcher, RG.,
Rempel, CB. Anti-inflamatory effect of Inonotus obliquus. Polygala senega, and Viburnum trilobum in a cell screening assay.
Journal of Ethncpharmacology, 2009, No. 125, p. 487-493.
15. Velioglu, YS., Ekici, L., Poyrazoglu, ES. Phenolic composition of
ISSN 1822-1823 Žmogaus ir gamtos sauga 2013, ASU
109
European cranberrybush (Viburnum opulus L.) berries and astringency removal of its commercial juice. InternationalJournal of Food Science
and Technologies, 2006, No.41, p. 1011-1015 16. Zayachkivska, OS., Gzegotsky, MR., Terletska, OI., Lutsyk, DA., Yaschenko, AM., Dzhura, OR. Influence of Viburnum opulus
proanthocyanins on stress induced gastrointestinal mucosal damage.
Journal of Physiology and Pharmacology, 2006, Vol. 57, Iss. 5, p. 155-
167.
Laima Česonienė, Remigijus Daubaras, Antanas Šarkinas
Investigations of antibacterial properties of Viburnum opulus fruit juice
Summary
Viburnum opulus L. s a plant with fruits that are rich in biologically active substances, making it valuable to the food and pharmaceutical
industries. Here, we present our investigations of antibacterial activity in the fruit juice of six V. opulus accessions. The results of this study confirmed
that the juice of V. opulus fruits strongly inhibited the growth of a wide range of human pathogenic bacter ia, both Gram-negative (Salmonella typhimurium and S. agond) and Gram-positive (Staphylococcus aureus, Lysteria monocytogenes, and Enterococcus faecalis) organisms.
Antibacterial properties, pathogenic bacteria, fruits
Gauta 2013 m. kovo mėn., atiduota spaudai 2013 m. balandžio mėn.
Laima ČESONIENĖ. Vytauto Didţiojo universiteto Kauno botanikos sodo biomedicinos mokslų daktarė. Adresas: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-46324, Kaunas,
tel.(8 37) 298272, el. paštas; [email protected]. Remigijus DAUBARAS. Vytauto Didţiojo universiteto Kauno botanikos sodo biomedicinos mokslų daktaras. Adresas: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-46324,
Kaunas, tel. (8 37) 298272, el. paštas; [email protected]. Antanas ŠARKINAS. Kauno technologijos universiteto Maisto instituto technologijos mokslų daktaras. Adresas: Taikos pr. 92, LT-51180, Kaunas, tel. (837) 312393, el. paštas: [email protected]. Laima ČESONIENĖ.Kaunas Botanical Garden of Vytautas Magnus University, doctor of biomedical sciences. Address: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-46324,
Kaunas, phone: (8 37) 298272, e-mail: [email protected]. Remigijus DAUBARAS. Kaunas Botanical Garden of Vytautas Magnus University, doctor of biomedical sciences. Address: Ţ.E. Ţilibero 6, LT-
46324, Kaunas, phone: (8 37) 298272, e-mail; [email protected]. Antanas ŠARKINAS. Food Institute of Kaunas University of Technology, doctor of technological sciences. Address: Taikos pr. 92, LT-51180, Kaunas, phone:(8 37) 312393, e-mail: [email protected]