Patologia Molecular dos TiposHistológicos Especiais de Câncer

de Mama

Dr. Felipe Geyer

Sumário• Heterogeneidade do câncer de mama

• Tipos especiais de carcinomas de mama– vs subtipos moleculares– vs subtipos moleculares– entidades distintas

• Tipos especiais como modelo paraidentificação de alvos terapêuticos

Heterogeneidade de câncer de mama

RE+RE-

Classificação molecular

Hu et al. BMC Genomics 2006;7:96

Taxonomia de microarrays foi baseada em…

Ductal Lobular

Tubular

Mucinoso

Medular

Rico em lipídeos

Micropapilífero

Metaplásico

Lobular pleomórfico

Secretor

Tipos especiais de câncer de mama

• 17 tipos especiais morfológicos

• 25-30% de todos carcinomas

• Implicações clínicas e prognósticas importantes

• Características biológicas distintas

Questionamentos

• Têm os tipos histológicos especiais subtipos molecularesdistintos?

• São os tipos histológicos especiais entidades molecularesdistintas?

Têm os tipos especiais subtiposmoleculares distintos?

• 113 tumores incluindo 11 tipos especiais– Operon arrays – 24,650 genes– TMAs – 22 marcadores imuno-histoquímicos

Tipos especiais são mais homogêneos ao nível transcriptômico

Luminal Basal-like Mol apócrino

Micropapilífero

Mucinoso A

CLI clássico/ Tubular

Mucinoso BNeuroendócrino

Adenóide císticoMedular

Metaplásico

CLI pleomórficoApócrino

Weigelt et al. J Pathol 2008

Tipos especiais vs subtipos molecularesNeuroendócrino

Mucinoso

Tubular

Micropapilífero

CLI clássico

Luminal

HER2

Apócrino

Adenóide cístico

Medular

Metaplásico

CLI pleomórfico

Basal-like

Molecular apócrino

Weigelt, Geyer & Reis-Filho Mol Oncol 2010

Secretor

CLI vs CDIpareados por grau e subtipo molecular

Weigelt et al. J Pathol 2010

CDI CLI

CA mucinoso vs CA neuroendócrino vs CDIpareados por grau e subtipo molecular

CDI mucinoso/neuroendócrino

Weigelt et al. Mod Pathol 2009

IPA Network: Desenvolvimento e função de tecido conjuntivo, desenvolvimento e

função de sistema muscular esquelético, desenvolvimento de tecidos

CA metaplásico vs CDIs de subtipo basal

Carcinomas metaplásicos apresentam menor expressão de PTEN e TOP2A:Possível causa para baixa resposta a antracíclicos?

Weigelt et al. BCRT 2009

CA tubular vs CDI G1pareados por subtipo molecular

CA tubularVia do RE hiperexpressa

Lopez-Garcia et al. J Pathol 2010

Via do RE hiperexpressa

INPP4B: gene supressortumoral com atividade inibitória

na via PI3K

Hipótese: melhor prognóstico de CAs tubulares poderia estar associadoà maior ativação da via do RE e ativação menos robusta da via PI3K?

São os tipos histológicosespeciais entidades moleculares

distintas?distintas?

Carcinoma secretor t(12;15) (p13;q25)

ETV6 split apart

ETV6-NTRK3 fusão

Reis-Filho et al. Histopathology 2008

Carcinomas adenóide císticost(6;9) (q22-23;p23-24)

t(6;9)(q22–23;p23–24)

MYB-NFIB

Persson et al. PNAS November 2009

Carcinoma micropapilífero

• 11--3%3% de todos carcinomas mamários, 77%% em carcinomas mistos

• padrão de crescimento“inside-out”

• associação frequente com invasão angiolinfática

• alta incidência de metástase linfonodal

• estágio avançado na apresentação

• pior prognóstico mesmo em casos com histologia mista

Carcinoma micropapilífero puro

Subtipo Luminal BMarchio et al. J Pathol 2008

Carcinoma micropapilífero vs CDI

Marchio et al. J Pathol 2008

Carcinoma micropapilífero misto

Componentes micropap e ñ-micropap de carcinomas micropapilíferos mistos

Componentes micropapilíferos e não-micropapilíferos são praticamente idênticos ao nível genético

Marchio et al. J Pathol 2009

Carcinoma micropapilífero vs CDI

Pure and mixed MPC cluster

Carcinomas micropapilíferos puros e mistos são distintos deCDIs pareados para RE e grau histológico

Marchio et al. J Pathol 2009

Tipos especiais como modelopara identificação de alvos

terapêuticosterapêuticos

Subgrupo estudado

• Tipos especiais de câncer de mama• perfil molecular mais homogêneo• menos hits genéticos• meio para identificação de alvos

terapêuticos

• Carcinoma lobular invasivo– 10-15% de todos carcinomas– RE+/ RP+/ HER2-– RE+/ RP+/ HER2-

• Perfil molecular– luminal A– ganho de 1q– perda de 16q

• Inativação de CDH1 (E-caderina)

• Opções terapêuticas limitadas– tamoxifeno / inibidores de aromatase– pouca resposta à quimioterapia

Carcinoma lobular invasivo clássico

• N=13• Análise do número de cópias

• aCGH– 5.8K array

– Chromosome 8 Tiling Path Arrays

8p11

MDA-MB-134 tem um fenótipo luminal, 16q-, deleção de E-caderina

FGFR1

Gene Expression data SPFH domain protein 2 precursor -0.8361 PROSC 0.776691 G protein-coupled receptor 124 -0.83295 RNA polymerase III transcription initiation factor BRF2 NA Rab11-FIP1 0.815596 Eukaryotic translation initiation factor 4E-binding protein 1 (4E-BP1) NA Set1/Ash2 histone methyltransferase complex subunit ASH2 2.425071 Steroidogenic acute regulatory protein, mitochondrial precursor NA Small nuclear ribonuclear CaSm NA BAG-4 NA DDHD domain containing 2 1.370019 HTPAP 1.577745 WHSC1L1 2.016795

Integração de CGH e expressão gênica

WHSC1L1 2.016795 leucine zipper-EF-hand containing transmembrane protein 2 NA FGFR-1 3.03378 Transforming, acidic coiled-coil containing protein 1 2.420038 Pleckstrin homology domain containing 2 -0.03859 BBP-like protein 1 (BLP1) 0.736262 ADAM 9 0.390474 ADAM5 -0.05962 ADAM 18 -0.00801 ADAM 3A -0.85178 Indoleamine-pyrrole 2,3-dioxygenase -0.15382 C8orf4 (Thyroid cancer protein 1) 0.283563 zinc finger, matrin type 4 NA Secreted frizzled-related protein 1 NA golgi autoantigen, golgin subfamily a, 7 -0.66328 SLD5 0.567344 1-AGP acyltransferase 6 -0.2739

Inibição de FGFR1 diminui sobrevida de células MDA-MB-134

cal51ZR75.1mcf7mda134

Reis-Filho et al. Clin Cancer Res 2006

*: p<0.05

Tumores RE+ - DFS

Amplificação/ hiperexpressão de FGFR1 estáassociada à tumores RE+, RP-, Ki67 alto, pior

sobrevida e resistência à terapia endócrina

Elbauomy Elsheikh et al. Breast Cancer Res 2007 Turner et al. Cancer Res 2010

Amplificação de FGFR1 está associada àresistência à terapia endócrina

Turner et al. Cancer Res 2010

Ensaio clínico fase II de inibidor de FGFR1 sugereação anti-tumoral em pctes com tumor RE+/FGFR1+

• Dovitinib (TKI258) em ca de mama metastático HER2-• 77 pacientes

A multicenter, open-label phase II trial of dovitinib, a fibroblast growth factor receptor 1 (FGFR1) inhibitor, in FGFR1-amplified and nonamplified metastatic breast cancer (BC ).

• 77 pacientes– Grupo 1 FGFR1+/ HR+ - 21 pctes– Grupo 3 FGFR1-/ HR+ - 34 pctes– Grupo 4 FGFR1-/ HR- - 22 pctes

• Resultados– 13% de resposta parcial no grupo 1– 44%, 29% e 11% de doença estável em grupos 1, 3 e 4,

respectivamente

Andre F et al JCO 2011/ ASCO abstract

Conclusões• Tipos especiais de câncer de mama

– Boa correlação com subtipos moleculares

– Entidades morfológicas e moleculares distintas• Carcinoma secretório – translocação específica• Carcinoma secretório – translocação específica• Carcinoma adenóide cístico – translocação específica• Carcinoma micropapilífero – perfil fenotípico e genético de luminal B

– Meio para identificação de alvos terapêuticos• FGFR1 é um potencial alvo terapêutico em carcinomas RE+

Agradecimentos

ICRJorge S Reis-FilhoMaryou LambrosRachael NatrajanRadost VatchevaCaterina MarchioKonstantin Dedes

HIAEAngela Vergara de OliveiraAlanna M. P. S. BezerraChristina ShiangDenise da C. PasqualinEbe Christie de OliveiraJosé Norberto Stavale

ICESPFernando AguiarEvandro SobrozaIbere C. SoaresJuliana RavaniniLeika MiyaharaMarcelo Gianotti Konstantin Dedes

Daniel WetterskogMagali Lacroix-TrikiM. Angeles Lopez-GarciaKay Savage

José Norberto StavaleLeandro A. L. MartinsLidiane V. MarinsMarcos Takeo ObaraMarcus V. N. CorpaRenee Zon FilippiRicardo S. MacarencoVanderlei Segatelli

Marcelo GianottiRaphael MedeirosRomulo Loss Mattedi

Take home messages

• Cada tipo especial de câncer de mama é maishomogêneo ao nível molecular

• Luminal:– Tubular, CLI clássico, neuroendócrino e mucinoso– Tubular, CLI clássico, neuroendócrino e mucinoso

• Basal-like:– Medular, metaplásico, secretório e adenóide cístico

• Molecular apócrino e HER2:– Apócrino e CLI pleomórfico

Take home messages

• Carcinoma secretório– translocação cromossômica recorrente específica

• Carcinoma micropapilífero• Carcinoma micropapilífero– entidade morfológica e molecular distinta– características fenotípicas e genéticas de luminal B– presença de um componente micropapilífero em carcinoma

misto• características fenotípicas e genéticas micropapilares-símile

Take home messages

• Carcinoma adenóide cístico– entidade morfológica e molecular distinta– triplo negativo por imuno-histoquímica– basal-like por microarrays– basal-like por microarrays– fusão gênica MYB-NFIB recorrente– poucas alterações de número de cópias de DNA– ausência de disfunção de BRCA1

Take home messages

• Cerca de 50% dos CLIs apresentamamplificação de FGFR1.

• Cerca de 10% dos carcinomas RE+ apresentamamplificação de FGFR1.amplificação de FGFR1.– PR-– KI67 alto– pior sobrevida– resistência à terapia endócrina

• FGFR1 é um potencial alvo terapêutico emcarcinomas RE+.

FGFR1 é hiperexpresso quando amplificado

Tipos especiais: entidadesdistintas ou apenas figuras

bonitas?bonitas?

Carcinoma adenóide cístico

• 0,1 – 1% de todos carcinomas mamários• morfologia semelhante à glândula salivar• maioria de baixo grau histológico• comportamento clínico excelente

Carcinomas adenóide císticos apresentamperfil triplo negativo

TrendellSmith et al., 1999 (N=6)

Arpino et al., 2002(N=28)

Mastropasqua et al., 2005

(N=20)

Crisi et al., 2005(N=6)

Azoulay et al., 2005

(N=18)

Weigelt et al, 2008(N=4)

Kahnfir et al, 2011(n=61)

Marchio et al. JCP 2010 (atualizado em agosto 2011)

RE + 0% 46% 15% 0% 0% 0% 4%

RP + 0% 36% 10% 0% 0% 0% 7%

HER2 + 0% NA 0% 0% 0% 0% 0%

p63 + NA NA 85% NA 100% 50% NA

Citoqueratina 5/6 + NA NA NA NA 100% 75% NA

c-KIT (CD117) + NA NA 95% 100% 100% 100% NA

Carcinomas adenóide císticos são do subtipo basal-like por microarrays

Basal-like

Adenóide cístico

Weigelt et al. J Pathol 2008

A translocação t(6;9) resulta em hiperexpressãodo mRNA e proteína de MYB

Persson et al. PNAS 2009

Nem todos carcinomas adenóidecísticos de cabeça e pescoço

apresentam fusão gênica MYB-NFIB

Study Cases MYB-NIFB + MYB-NFIB-

Persson et al. PNAS 2010

7 (Frozen) 7 (100%) 0 (0%)

Mitani et al. ClinCancer Res 2010

72 (Frozen) 20 (28%) 52 (72%)

West et al. Am J Surg Pathol 2011

37 (FFPE) 18 (49%) 19 (51%)*(6 casos c/

rearranjo de MYB)

Brill et al. Mod Pathol 2011

29 (Frozen)28 (FFPE)

25 (86%)12 (43%)

4 (14%)16 (57%)

Carcinomas adenóide císticos de mama apresentam fusão gênica MYB-NFIB

• 13 casos revistos por 3 patologistas– 12 mostraram a fusão gênica MYB-NFIB

Wetterskog et al. J Pathol 2011

Ca Ad Cístico vs CDI pareado por GH

Carcinomas adenóide císticos mostram perfil genômicodistinto de CDIs pareados por grau histológico

CDI GH1

Wetterskog et al. J Pathol 2011

Carcinomas adenóide císticos

Carcinomas adenóide císticos mostram perfil genômicodistinto de CDIs triplo negativo e basal-like

Ca Ad Císticos vs CDIs triplo negativo

CDI triplo negativo

Wetterskog et al. J Pathol 2011

Carcinoma adenóide cístico

Carcinomas adenóide císticos nãoapresentam disfunção de BRCA1

Turner et al. Oncogene 2007 Wetterskog et al. J Pathol 2011

Non-TNBC TNBC

cal51ZR75.1mcf7mda134

MDA-MB-134 é sensivel ao inibidor de FGFR1 SU5402

*: p<0.05

Reis-Filho et al. Clin Cancer Res 2006

Tipos especiais vs imunofenótipoNeuroendócrino MicropapilíferoMucinoso Papilífero

Metaplásico SecretorMedular Adenóide cístico

CLI pleomórfico Células acinaresApócrino

Reis-Filho et al., Histopathology 2006; Rakha E, Reis-Filho JS, Ellis IO. JCO, 2008; Lae et al. Mod Pathol 2008; Weiget et al., J Pathol 2008; Weigelt et al., Breast Cancer Res Treat 2008