HALAMAN JUDUL TUGAS AKHIR – SB 091358

PENGARUH Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske YANG DIINOKULASIKAN PADA VETIVER (Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty) DALAM MENURUNKAN TOTAL PETROLEUM HYDROCARBON INDRAWAN TAUCHID NRP. 1507100004 DOSEN PEMBIMBING Tutik Nurhidayati, S.Si., M.Si. Dr. Ir. Budhi Priyanto, M.Sc. JURUSAN BIOLOGI Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya 2012

HALAMAN JUDUL FINAL PROJECT - SB 091358

EFFECT OF Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske INOCULATED TO VETIVER (Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty) FOR DEGRADING TOTAL PETROLEUM HYDROCARBON INDRAWAN TAUCHID NRP. 1507100004 ADVISOR LECTURERS Tutik Nurhidayati, S.Si., M.Si. Dr. Ir. Budhi Priyanto, M.Sc. DEPARTMENT OF BIOLOGY Faculty of Mathematics and Natural Sciences

Institut Teknologi Sepuluh Nopember Surabaya 2012

v

DAFTAR ISI Halaman LEMBAR PENGESAHAN ...........................................................i KATA PENGANTAR................................................................. ii ABSTRAK ..................................................................................iv ABSTRACT ................................................................................. v DAFTAR ISI ..............................................................................vi DAFTAR TABEL ........................................................................ x DAFTAR GAMBAR ..................................................................xi DAFTAR LAMPIRAN ............................................................ xiii BAB I PENDAHULUAN ............................................................ 1

1.1. Latar Belakang................................................................. 1 1.2. Permasalahan ................................................................... 2 1.3. Batasan Masalah .............................................................. 3 1.4. Tujuan ............................................................................. 3 1.5. Manfaat............................................................................ 3

BAB II TINJAUAN PUSTAKA .................................................. 5 2.1. Petroleum Hydrocarbon (PHC) ....................................... 5

2.2.1. Alifatik ..................................................................... 7 2.2.2. Aromatik .................................................................. 7 2.2.3. Komponen Hidrokarbon yang Lain .......................... 8

2.2. Sifat Dari PHC ................................................................. 8 2.3. Dampak Lingkungan Akibat Kontaminasi PHC .............. 9 2.4. Parameter Pengolahan Limbah PHC.............................. 11 2.5. Fitoremediasi ................................................................. 12 2.6. Respon Tanaman pada Tanah yang Tekontaminasi

PHC ............................................................................... 14 2.6.1. Daun....................................................................... 15 2.6.2. Akar ....................................................................... 15

2.7. Tanaman Vetiver (Chrysopogon Zizanioides (L.) Roberty) ......................................................................... 16

2.8. Tanah ............................................................................. 19 2.9. Mikoriza ........................................................................ 20

vi

2.10. Interaksi CMA Terhadap Kontaminasi PHC pada Tanah ............................................................................. 21

2.11. Glomus Aggregatum Schenk & Smith Emend. Koske ... 24 BAB III METODOLOGI ........................................................... 27

3.1. Waktu dan Tempat Penelitian ........................................ 27 3.2. Alat dan Bahan .............................................................. 27

3.2.1. Alat ........................................................................ 27 3.2.2. Bahan ..................................................................... 27

3.3. Cara Kerja ..................................................................... 27 3.3.1. Tahap Persiapan ..................................................... 27

A. Uji Viabilitas Mikoriza ..................................... 27 B. Penyiapan Tanaman .......................................... 28 C. Penyiapan Media Tanam ................................... 29 D. Penentuan Water-Holding Capacity .................. 29 E. Perbanyakan Bakteri Hidrokarbonoklastik ........ 30

3.3.2. Pembuatan Bioreaktor dan Perawatan Tanaman .... 30 A. Pembuatan Bioreaktor ....................................... 30 B. Pengairan dan Pemupukan ................................ 31

3.3.3. Pengukuran ............................................................ 31 A. Kelembaban Tanah ........................................... 31 B. Analisis pH ....................................................... 32 C. Suhu Tanah ....................................................... 32 D. Perhitungan Biomassa ....................................... 32 E. Perhitungan Jumlah Bakteri dengan Total

Plate Count ....................................................... 32 F. Perhitungan Infeksi Akar In Vitro ..................... 33 G. Analisis Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) . 34

3.3.4. Rancangan Penelitian ............................................. 35 BAB IV ANALISIS DATA DAN PEMBAHASAN .................. 37

4.1. Analisis Data ................................................................. 37 4.1.1. Parameter Lingkungan ........................................... 37 4.1.2. Penurunan Total Petroleum Hydrocarbon (TPH)

Setelah Fitoremediasi ............................................. 38

vii

4.1.3. Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Biomassa C. zizanioides ......................................................... 40

4.1.4. Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Jumlah Tunas C. zizanioides .............................................. 44

4.1.5. Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Panjang Tajuk C. zizanioides ............................................... 45

4.1.6. Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Panjang Akar C. zizanioides ................................................ 49

4.1.7. Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Jumlah Bakteri Bulk Soil dan Rizosfer C. zizanioides ........ 52

4.1.8. Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Persentasi Infeksi Mikoriza pada C. zizanioides ..................... 55

4.2. Pembahasan ................................................................... 56 4.2.1. Efek Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Pertumbuhan C. zizanioides .............................................................. 56

4.2.2. Efek Penambahan G. aggregatum pada C. zizanioides dalam Cekaman Crude Oil .................. 59

4.2.3. Efek Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Jumlah Bakteri Bulk Soil dan Rizosfer C. zizanioides .................................... 61

4.2.4. Efek Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Fitoremediasi PHC oleh C. zizanioides .............................................................. 63

BAB V KESIMPULAN ............................................................. 67 5.1. Kesimpulan .................................................................... 67 5.2. Saran .............................................................................. 67

DAFTAR PUSTAKA ................................................................ 69

viii

LAMPIRAN................................................................................77 BIODATA PENULIS................................................................115

x

DAFTAR TABEL

Halaman Tabel 2.1 Parameter hasil bioremediasi tanah

terkontaminasi ........................................................ 11 Tabel 3.1 Uji viabilitas mikoriza ............................................ 28 Tabel 3.2 Rancangan percobaan dua faktor ........................... 35 Tabel 4.1 Rerata pH perlakuan............................................... 37 Tabel 4.2 Rerata kelembaban tanah perlakuan (skala 0-10) ... 38 Tabel 4.3 Rerata suhu perlakuan (°C) .................................... 38 Tabel 4.4 Nilai TPH pada pekan ke-12 masa penanaman C.

zizanioides (%) ....................................................... 39 Tabel 4.5 Penurunan TPH pada pekan ke-12 setelah

penanaman C. zizanioides (%) ............................... 40 Tabel 4.6 Biomassa C. zizanioides pada pekan ke-12

setelah penanaman (gram) ...................................... 41 Tabel 4.7 Biomassa tajuk C. zizanioides pada pekan ke-12

setelah penanaman (gram) ...................................... 42 Tabel 4.8 Biomassa akar C. zizanioides pada pekan ke-12

setelah penanaman (gram) ...................................... 43 Tabel 4.9 Rasio biomassa tajuk:akar C. zizanioides pada

pekan ke-12 setelah penanaman ............................. 43 Tabel 4.10 Jumlah tunas C. zizanioides pada pekan ke-12

setelah penanaman ................................................. 45 Tabel 4.11 Panjang tajuk C. zizanioides pada pekan ke-12

setelah penanaman (cm) ......................................... 46 Tabel 4.12 Panjang akar C. zizanioides pada pekan ke-12

setelah penanaman (cm) ......................................... 49 Tabel 4.13 Jumlah bakteri bulk soil (x 106 CFU/gram tanah) ... 53 Tabel 4.14 Jumlah bakteri rizosfer C. zizanioides setelah

pekan ke-12 penanaman (x 108 CFU/gram akar) .... 53 Tabel 4.15 Infeksi mikoriza pada akar C. zizanioides pada

pekan ke-12 setelah penanaman (%) ...................... 55

xiii

DAFTAR GAMBAR

Halaman Gambar 2.1 Klasifikasi senyawa TPH....................................... 6 Gambar 2.2 Contoh jenis BTEX ............................................... 8 Gambar 2.3 Hidrokarbon jenis PAH ......................................... 8 Gambar 2.4 Berbagai mekanisme skematis penghilangan

kontaminan oleh tanaman .................................... 14 Gambar 2.5 Proses biotik dan abiotik yang mempengaruhi

degradasi kontaminan organik ............................. 14 Gambar 2.6 Tanaman vetiver (C. zizanioides). (a) tajuk, (b)

akar, dan (c) bunga berbentuk panikula ............... 17 Gambar 2.7 Kontrol rizosfer terhadap bioavailabilitas

polutan organik .................................................... 23 Gambar 2.8 Gambar hifa dan spora Glomus aggregatum ....... 24 Gambar 3.1 Ilustrasi inokulasi mikoriza dengan

menggunakan sistem lapisan ............................... 29 Gambar 3.2 Isolat bakteri hidrokarbonoklastik ....................... 30 Gambar 3.3 Bioreaktor berisi C. zizanioides ........................... 31 Gambar 3.4 Rangkaian Soxhlete apparatus ............................ 34 Gambar 4.1 Nilai TPH pada pekan ke-12 masa penanaman

C. zizanioides ...................................................... 40 Gambar 4.2 Biomassa C. zizanioides setelah 12 pekan

penanaman. .......................................................... 41 Gambar 4.3 Biomassa (a) tajuk dan (b) akar setelah 12

pekan penanaman ................................................ 44 Gambar 4.4 Rasio biomassa tajuk:akar setelah 12 pekan

penanaman ........................................................... 44 Gambar 4.5 Jumlah tunas C. zizanioides setelah 12 pekan

penanaman ........................................................... 45 Gambar 4.6 Panjang tajuk C. zizanioides setelah 12 pekan

penanaman ........................................................... 46 Gambar 4.7 Panjang tajuk C. zizanioides tanpa penambahan

G. aggregatum setelah 12 pekan penanaman ....... 47

xiv

Gambar 4.8 Panjang tajuk C. zizanioides dengan penambahan G. aggregatum setelah 12 pekan penanaman ........................................................... 48

Gambar 4.9 Panjang akar C. zizanioides setelah 12 pekan penanaman ........................................................... 49

Gambar 4.10 Akar C. zizanioides tanpa penambahan G. aggregatum setelah 12 pekan penanaman ........... 50

Gambar 4.11 Akar C. zizanioides dengan penambahan G. aggregatum setelah 12 pekan penanaman ........... 51

Gambar 4.12 Jumlah bakteri bulk soil (CFU) dalam media tanam C. zizanioides ............................................ 54

Gambar 4.13 Perbandingan jumlah bakteri a) rizosfer dan b) bulk soil (CFU) setelah 12 pekan penanaman C. zizanioides. .......................................................... 54

Gambar 4.14 Persentasi infeksi mikoriza pada C. zizanioides setelah 12 minggu masa penanaman .................... 56

Gambar 4.15 Infeksi mikoriza a) vesikel dan b) hifa pada akar C. zizanioides (perbesaran 100x) ................. 56

ii

KATA PENGANTAR

Syukur kehadirat Allah SWT atas limpahan rahmat-Nya sehingga penulis dapat menyelesaikan tugas akhir. Sholawat serta salam terlimpahkan kepada Rasulullah Muhammad SAW atas petunjuknya menuju ke jalan yang benar. dalam penulisan proposal tugas akhir ini, penulis banyak mendapatkan bimbingan dan bantuan dari berbagai pihak.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih kepada Bapak Dr. Ir. Ikbal, M. Eng, selaku kepala Balai Teknologi Lingkungan yang telah memberikan kami izin untuk melakukan penelitian di Balai Teknologi Lingkungan BPPT PUSPIPTEK Serpong, Tangerang Selatan; Bapak Dr. Ir. Budhi Priyanto, M.Sc. selaku dosen pembimbing tugas akhir yang membimbing kami dengan penuh kesabaran; Bapak Dr. Ing. Abdul Kholik, M.Sc. atas informasi dan sarannya, Ibu Nida Sopiah, M.Si. dan Bapak Ir. Dominikus H. Akhadi atas kesediaanya untuk mengizinkan kami mengerjakan tugas akhir ini di laboratorium kimia analitik dan mikrobiologi. Bapak Atang, Ibu Sati Suyati, Bang Yunus, Bang Hidayatullah, Mas Mulyono S.Si, serta Ibu Esi Lisyastuti, S.Si., M.Kes, atas bantuannya selama penelitian, serta seluruh karyawan BTL-BPPT.

Terima kasih juga kami sampaikan kepada Ibu Dr. rer. nat. Ir. Maya Shovitri, M.Si selaku ketua Jurusan Biologi FMIPA ITS; Ibu Tutik Nurhidayati, S.Si., M.Si. selaku dosen pembimbing dari Biologi ITS; Bapak Mukhammad Muryono S.Si., M.Si. selaku koordinator tugas akhir; serta Bapak Mukhammad Muryono S.Si., M.Si. Ibu Dini Ermavitalini, S.Si., M.Si., dan Ibu Dr. rer. nat. Ir. Maya Shovitri, M.Si. selaku dosen penguji proposal tugas akhir.

Ucapan terima kasih sebesar-besarnya teruntuk Ibu Endang Sulistiowati dan Ayah Syaiful Chanan atas curahan kasih sayang, perhatian, dan dukungan yang selalu diberikan selama ini serta Adik Habsari Nurani yang selalu memberi kritik dan

iii

bantuannya; serta Ibu Dra. Nurlita Abdulgani, M.Si., selaku dosen wali penulis di Jurusan Biologi FMIPA ITS.

Kepada Saudari Efi Indra Yani selaku rekan dalam penyusunan tugas akhir; Rekan-rekan mahasiswa Biologi ITS, khususnya angkatan 2007 (Israizal Faris Febrian, Bari Akbar, Syaikhul Mahmud, Dzulfikar Ali Sauwibi, Listy Anggraeni, Ni Ketut Dewi Indrayati, Liza Febby Kurnianti, Nur Ismi Fauziah, Siti Sundari, serta teman-teman yang tidak bisa disebutkan satu per satu); mahasiswa-mahasiswa PKL dan Tugas Akhir di BTL-BPPT (Andang Mulya Sari, Zaki, Aiman, Andri, dan Irwan), atas bantuan, dukungan, dan informasinya; serta pihak-pihak lainnya, kami sampaikan terima kasih.

Penulis menyadari bahwa dalam penulisan proposal tugas akhir ini terdapat banyak kekurangan, sehingga penulis mengharapkan adanya kritik dan saran membangun untuk perbaikan di masa mendatang. Semoga proposal tugas akhir ini dapat memberikan kontribusi ilmu pengetahuan, khususnya bagi para pembaca.

Surabaya, 3 Februari 2012

Penulis

xiii

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman Lampiran 1. Komposisi Media ................................................. 75 Lampiran 2. Skema Kerja ......................................................... 76 Lampiran 3. Dokumentasi ........................................................ 81 Lampiran 4. Hasil Two-Way Analysis of Variance ................... 82

iv

PENGARUH Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske YANG DIINOKULASIKAN PADA VETIVER

(Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty) DALAM MENURUNKAN TOTAL PETROLEUM HYDROCARBON

Nama Mahasiswa : Indrawan Tauchid NRP : 1507 100 004 Jurusan : Biologi Pembimbing : Tutik Nurhidayati, S.Si., M.Si. : Dr. Ir. Budhi Priyanto, M.Sc.

Abstrak Vetiver (Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty) merupakan tanaman yang berpotensi untuk menurunkan Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) dalam tanah yang tercemar crude oil. C. zizanioides mudah berasosiasi dengan mikoriza Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui pengaruh konsentrasi crude oil dan penambahan cendawan mikoriza arbuskula G. aggregatum terhadap kemampuan C. zizanioides dalam melakukan fitoremediasi tanah terkontaminasi PHC. Bioreaktor dibuat dari polybag yang diisi dengan campuran tanah dan pasir (2:3). Crude oil diambil dari industri rakyat pengeboran minyak bumi di Bojonegoro, Jawa Timur. Parameter pertumbuhan, infeksi mikoriza, jumlah bakteri bulk soil dan rizosfer, serta TPH diukur setelah 3 bulan. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsentrasi crude oil berpengaruh terhadap kemampuan C. zizanioides dalam menurunkan TPH dalam tanah. Namun, penambahan G. aggregatum tidak mempengaruhi penurunan TPH. Nilai penurunan TPH tertinggi (54,587 %) terjadi pada perlakuan penambahan crude oil 3% tanpa inokulasi G. aggregatum. Penambahan G. aggregatum memperbesar biomassa akar. Kata Kunci: Fitoremediasi, crude oil, TPH, Chrysopogon

zizanioides, Glomus aggregatum

v

EFFECT OF Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske INOCULATED TO VETIVER (Chrysopogon

zizanioides (L.) Roberty) FOR DEGRADING TOTAL PETROLEUM HYDROCARBON

Student Name : Indrawan Tauchid NRP. : 1507 100 004 Department : Biology Advisor Lecturers : Tutik Nurhidayati, S.Si., M.Si.

: Dr. Ir. Budhi Priyanto, M.Sc.

Abstract Vetiver (Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty) is a potential plant for reducing Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) in Petroleum Hydrocarbon (PHC) contaminated soil. C. zizanioides is able to associate with Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske. This research aimed to know the effect of crude oil concentration and arbuscular mycorhizal fungi G. aggregatum on C. zizanioides potency to remediate PHC contaminated soil. Bioreactor were constructed using polybags filled with a mixture of fine soil and sand (2:3). Crude oil was taken from small scale crude oil drilling industry in Bojonegoro, East Java. Plant growth parameters, mycorrhizal infection, bacterial populations in bulk soils and rhizospheres, and TPH percentages were measured after 3 months. Result shows that C. zizanioides was able to reduce TPH concentration in the soil and this was affected by crude oil concentration. The presence of G. aggregatum addition had no effect on the reduction of TPH. Highest TPH reduction (54,486%) was achieved in the 3% crude oil treatment without G. aggregatum inoculation. However, root biomass of vetiver was higher in the G. aggregatum inoculated treatment. Keywords: Phytoremediation, crude oil, TPH, Chrysopogon

zizanioides, Glomus aggregatum.

67

DAFTAR PUSTAKA

Alarcón, A. (2006). The Physiology of Mycorrhizal Lolium multiflorum in the Phytoremediation of Petroleum Hydrocarbon-Contaminated Soil. Tesis. Texas A&M University.

Alkareji. (2008). Pemanfaatan Mycorrhizal Helper Bacterias

(MHBs) dan Fungi Mikoriza Arbuskula (CMA) untuk Meningkatkan Pertumbuhan Sengon (Paraserianthes falcataria (L.) Nielsen) di Persemaian. Tugas Akhir, Institut Pertanian Bogor, Departemen Silvikultur, Bogor.

Anonim. (2010). Glomus aggregatum N.C. Schenck & G.S. Sm.

emend. Koske. Dipetik Desember 21, 2010, dari http://www.agro.ar.szczecin.pl

Bagariang, E. N. (2008). Uji Kemampuan Kembang Kuning

(Cassia surattensis) terhadap Degradasi Hidrokarbon Oil Spill Studi Kasus PT. Chevron Pacific Indonesia Riau. Tugas Akhir. Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Jurusan Teknik Lingkungan, Surabaya.

Bianciotto, V., & Bonfante, P. (2002). Arbuscular mycorrhizal

fungi: A specialised niche for rhizospheric and endocellular bacteria. Antonie van Leeuwenhoek,81, (1-4), 365–371.

Blakely, J., Neher, D., & Spongeberg, A. (2002). Soil invertebrate

and microbial communities, and decomposition as indicators of polycyclic aromatic hydrocarbon contamination. Applied Soil Ecology (21), 71–88.

68

Brandt, R. (2003). Potential of vetiver (Vetiveria zizanioides (l.) Nash) for the use in phytoremediation of petroleum hydrocarbon-contaminated soils in Venezuela. Tugas Akhir, Westfälische Wilhelms-Universität Münster, Institut für Landschaftsökologie, Münster.

Cabello, M. N. (1997). Hydrocarbon pollution: its effect on native

arbuscular mycorrhizal fungi (CMA). FEMS, Microbiol. Ecol. (22), 233-236.

Chasanah, D. (2008). Studi Awal Pemanfaatan Lumpur Lapindo

Sidoarjo sebagai Media Tanam Jarak Pagar (Jatropha curcas Linn.) yang Berasosiasi dengan Mikoriza Versikula Arbuskula (MVA) Glomus aggregatum. Tugas Akhir, Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Program Studi Biologi, Surabaya.

Davis, L., Castro-Diaz, S., Zhang, Q., & Erickson, L. (2002).

Benefits of vegetation for soils with organic contaminants. Critical Rev. Plant Sci. (21), 457-491.

Eapen, S., & D'Souza, S. F. (2004). Prospects of genetic

engineering of plants for phytoremediation of toxic metals. Biotechnology Advances (23), 97-114.

Febriandita, C. S. (2008). Degradasi Hidrokarbon Petroleum pada

Media Tumbuh Rumput Gajah (Pennisetum purpureum) dengan Mikoriza (Glomus aggregatum) Studi Kasus Lumpur Lapindo Sidoarjo. Tugas Akhir, Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Jurusan Teknik Lingkungan, Surabaya.

Gerhardt, K. E., Huang X. D., Glick, B. R., Greenberg, B. M.

(2009) Phytoremediation and rhizoremediation of organic

69

soil contaminants: Potential and challenges. Plant Science, 176, 20–30.

Hart, M. M., & Reader, R. J. (2002). Taxonomic basis for

variation in the colonization strategy of arbuscular mycorrhizal fungi. New Phytologist, 153, 335-344.

Heinonsalo, J., Jorgensen, K. S., Haahtela, K., & Sen, R. (2000).

Effects of Pinus sylvestris root growth and mycorrhizosphere development on bacterial carbon source utilization and hydrocarbon oxidation in forest and petroleum-contaminated soils. Can. J. Microbiol. , 46, 451–464.

Joner, E. J., & Leyval, C. (2001). Influence of arbuscular

mycorrhiza on clover and ryegrass grown together in a soil spiked with polycyclic aromatic hydrocarbons. Mycorrhiza (10), 155-159.

Joner, E. J., Leyval, C., & Colpaert, J. V. (2006).

Ectomycorrhizas impede phytoremediation of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) both within and beyond the rhizosphere. Environmental Pollution, 142, 34-38.

Kamath, R., Rentz, J., Schnoor, J., & Alvarez, P. 2004.

Phytoremediation of hydrocarbon-contaminated soil: principles and applications. dalam Vazquez-Duhalt, R. dan Quintero-Ramirez, R. (Penyunting). Studies in Surface Science and Catalysis 151. Elsevier B.V.

Kirk, J. L., Moutoglis, P., Klironomos, J., Lee, H., & Trevors, J. T.

(2005). Toxicity of diesel fuel to germination, growth and colonization of Glomus intraradices in soil and in vitro transformed carrot root cultures. Plant and Soil , 270, 23-30.

70

Kirk, J., Klironomos, J., Lee, H., & Trevors, J. (2002).

Phytotoxicity assay to assess plant species for phytoremediation of petroleum-contaminated soil. Bioremed. J. (6), 57-63.

Korade, D. L., dan Fulekar, M. H. (2008). Remediation of

anthracene in mycorrhizospheric soil using ryegrass. African Journal of Environmental Science and Technology, 2 (9). 249-256.

Leaungvutiviroj, C., Piriyaprin, S., Limtong, P., Sasaki, K. (2010).

Relationships between soil microorganisms and nutrient contents of Vetiveria zizanioides (L.) Nash and Chrysopogon nemoralis (A.) Camus in some problem soils from Thailand. Applied Soil Ecology, (46), 95–102.

Macinnis-Ng, C., & Ralph, P. (2003). In situ impact of

petrochemicals on the photosynthesis of the seagrass Zostera capricorni. Mar. Pollut. Bull. (46), 1395-1407.

Malallah, G., Afzal, M., Gulshan, S., Abraham, D., Kurgan, M.,

& Dhabi, M. S. (1996). Vicia faba as a bioindicator of oil pollution. Environ. Pollut. (92), 213-217.

Mangkoediharjo, S. (2005). Remediation Technologies Selection

for Oil-Polluted Marine Ecosystem. Makalah, Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Jurusan Teknik Lingkungan, Surabaya.

Martiyaningrum, D. D. (2009). Studi Penambahan Mikoriza pada

Media Tanam Lumpur Sidoarjo-Pasir terhadap Pertumbuhan Tanaman dan Aktivitas Nitrat Reduktase Daun Kedelai (Glycine max (L.) Merrill). Tugas Akhir,

71

Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Program Studi Biologi, Surabaya.

Merkl, N., Schultze-Kraft, R., & Infante, C. (2005).

Phytoremediation in the tropics – influence of heavy crude oil on root morphological characteristics of graminoids. Environ. Pollut. , 138, 86-91.

Nalwaya, V., Tangtayakom, V., Piumsomboon, P., & Fogler, S.

(1999). Studies on asphaltenes through analysis of polar fractions. Industrial & Engineering Chemistry Research , 38 (3), 964-972.

Ndimele, P. E. (2010). A review on the phytoremediation of

petroleum hydrocarbon. Pakistan Journal of Biological Science, 13, (15), 715-722.

NRC. (1993). Vetiver grass: a thin green line against erosion.

Board on Science and Technology for International Development, National Research Council. Washington D.C.: National Academy Press.

Parrish, Z., Banks, M., & Schwab, A. (2005). Assessment of

contaminant lability during phytoremediation of polycyclic aromatic hydrocarbon impacted soil. Environmental Pollution , 137, 187–197.

Pinthong, J., Impithuksa, S., Udomchoke, M., & Ramlee, A.

(1996). The capability of vetiver hedgerows on decontamination of agrochemical residues: a case study on the production of cabbage at Nong Hoi Development Center Chiang Mai, Thailand. Proceedings of the First International Conference on Vetiver (ICV-1). Chiang Rai.

72

Piriyaprin, S., Sunathapongsuk, V., Limtong, P., Leaungvutiviroj, C., & Pasda, N. (2002). Study on soil microbial biodiversity in rhizosphere of vetiver grass in degradating soil. Presentation paper on 17th WCSS. Thailand.

PPLI. (2010). IPOC and Senipah Waste Management Overview. Balikpapan.

Punamiya, P., Datta, R., Sarkar, D., Barber, S., Patel, M., & Das, P. (2010). Symbiotic role of Glomus mosseae in phytoextraction of lead in vetiver grass [Chrysopogon zizanioides (L.)]. Journal of Hazardous Materials (177), 465–474.

Robertson, S. J., McGill, W. B., Massicotte, H. B., & Rutherford, P. M. (2007). Petroleum hydrocarbon contamination in boreal forest soil: a mycorrhizal ecosystems perspective. Biological Reviews (82), 213-240.

Salisbury, F. B., & Ross, C. W. (1992). Fisiologi Tumbuhan.

Bandung: Penerbit ITB. Salzer, P., Corbiere, H., & Boller, T. (1999). Hydrogen peroxide

accumulation in Medicago truncatula roots colonized by the arbuscular mycorhizal-forming fungus Glomus intraradices. Planta (208), 319–325.

Sari, L. M. (2008). Keberadaan Mikoriza pada Areal Sistem

Silvikultur Tebang Pilih Tanam Indonesia Intensif (Studi Kasus di Areal IUPHHK PT. Sari Bumi Kusuma Unit Sungai Seruyan Kalimantan Tengah). Tugas Akhir, Institut Pertanian Bogor, Departemen Silvikultur, Bogor.

Siciliano, S., Fortin, N., Mihoc, A., Wisse, G., Labelle, S.,

Beaumier, D., et al. (2001). Selection of specific

73

endophytic bacterial genotypes by plants in response to soil contamination. Appl. Environ. Microbiol. , 67, 2469-2475.

Siciliano, S., Germida, J., Banks, K., & Greer, C. (2003).

Changes in microbial community composition and function during a polyaromatic hydrocarbon phytoremediation field trial. Applied and Environmental Microbiology ( 69), 483–489.

Suleimanov, R., Gabbasova, I., & Sitdikov, R. (2005). Changes in

the properties of oily gray forest soil during biological reclamation. Biological Bulletin (32), 109–115.

Susarla, S., Medina, V. F., & McCutcheon, S. (2002).

Phytoremediation: An ecological solution to organic chemical contamination. Ecol. Engineer. (18), 647-658.

Susilorukmi, A., & Sriwuryandari, L. (2006). Study on

application of vetiver grass and enriched culture of microorganisms for phytoremediation of oil sludge on land site. The 4th International Symposium on Sustainable Sanitation. Bandung: LIPI-JST.

Tiquia, S., Lloyd, J., Herms, D., Hoitink, H., & Michel, F. (2002).

Effects of mulching and fertilization on soil nutrients, microbial activity and rhizosphere bacterial community structure determined by analysis of TRFLPs of PCR-amplified 16S rRNA genes. Applied Soil Ecology , 21, 31–48.

Torres, M., & Dangl, J. (2005). Functions of the respiratory burst

oxidase in biotic interactions, abiotic stress and development. Curr. Opin. Plant Biol (8), 397-403.

74

Trofimov, S., & Rozanova, M. (2003). Transformation of soil properties under the impact of oil pollution. Eurasian Soil Science , 36, S82–S87.

Van Epps, A. 2006. Phytoremediation of Petroleum Hydrocarbon.

U.S. Environmental Protection Agency, Washington DC. Van Hamme, J., Singh, A., & Ward, O. (2003). Recent advances

in petroleum microbiology. Microbiol. Mol. Biol. Rev. (67), 503-549.

Wenzel, W. W. (2008). Rhizosphere processes and management

in plant-assisted bioremediation (phytoremediation) of soils. Plant Soil, 321, 385–408.

Xia, H., Liu, S., & Ao, H. (2000). A study on purification and

uptake of garbage leachate by vetiver grass. Proceedings of the Second International Vetiver Conference (IVC-2). Petchaburi.

115

115

BIODATA PENULIS

Penulis bernama lengkap Indrawan Tauchid lahir di Gresik, 5 Juli 1989 dari pasangan Syaiful Chanan dan Endang Sulistiowati. Penulis melewatkan masa kecil, seluruh pendidikan dasar, menengah di kota kelahirannya dan tercatat sebagai mahasiswa di Jurusan Biologi, Institut Teknologi Sepuluh Nopember, Surabaya sejak tahun 2007 sampai 2012 dengan nomor registrasi pokok 1507100004. Selama masa kuliah, penulis berkesempatan untuk menjadi

menjadi asisten praktikum pada beberapa mata kuliah. Kontak penulis di indrawan.tauchid@gmail.com.

1

BAB I PENDAHULUAN

1.1 Latar Belakang Pertambangan petroleum baik berupa minyak bumi

maupun gas alam merupakan salah satu usaha untuk memperoleh sumber energi dan turunannya. Pada proses pertambangan tersebut, tentunya ada hasil samping yang dapat menjadi polutan yang berbahaya bagi lingkungan, antara lain limbah hidrokarbon petroleum (petroleum hydrocarbon/PHC). Petroleum dan turunannya merupakan campuran dari hidrokarbon padat, cair, dan gas. Komponen yang secara alami terbentuk pada reservoir crude oil disebut hidrokarbon petroleum. Substansi ini bersifat toksik pada organisme tingkat tinggi (manusia, flora, fauna) dan organisme tingkat rendah seperti mikroorganisme (Atlas, 1981 dalam Ambarukmi dan Sriwuryandari, 2006).

Limbah PHC dapat ditanggulangi dengan bioremediasi. Bioremediasi adalah suatu teknik dengan menggunakan mikroorganisme atau tumbuhan untuk detoksifikasi kontaminan. Salah satu alternatif dalam proses bioremediasi adalah dengan menggunakan fitoremediasi. Fitoremediasi didefinisikan sebagai pencucian polutan yang dimediasi oleh tumbuhan, termasuk pohon, rumput-rumputan, dan tumbuhan air. Pencucian bisa berarti penghancuran, inaktivasi atau imobilisasi polutan ke bentuk yang tidak berbahaya (Alarcón, 2006; Robertson et al., 2007). Salah satu tanaman yang berpotensi sebagai tanaman untuk fitoremediasi adalah Chrysopogon zizanioides.

C. zizanioides merupakan rumput-rumputan perenial, dengan helai daun yang padat, dikarakterisasikan dengan batang yang kuat dan tegak dengan helai daun mencapai panjang 75 cm dan lebar 8 cm (World Bank, 1993 dalam Brandt, 2003). C. zizanioides memiliki kapabilitas spesifik dalam mereduksi material organik seperti COD, BOD, amonia, dan juga logam seperti Zn (90%), As (60%), Pb (30-71%), dan Hg (13-15%). C.

2

zizanioides merupakan tanaman C4, termasuk tanaman perenial yang berumur panjang (10 tahun) dan mampu tumbuh pada rentang suhu -9 sampai 45°C serta toleran terhadap pH 4,5-10,5 (Kong et al., 2000 dalam Ambarukmi dan Sriwuryandari, 2006). C. zizanioides memiliki kemampuan untuk mengurangi polutan hidrokarbon dalam tanah serta mampu bertahan hidup dan menumbuhkan tunas baru pada tanah yang telah tercemar hidrokarbon. C. zizanioides juga menetralisasi alkalinitas dari tanah dan mempertahankan air (Ambarukmi dan Sriwuryandari, 2006). Selain itu, C. zizanioides mempunyai kemampuan untuk bersimbiosis dengan mikroflora tanah, yaitu bakteri rizosfer dan cendawan mikoriza arbuskular (CMA) (Leaungvutiviroj et al., 2010).

Mikoriza (akar-cendawan) merupakan gabungan simbiotik dan mutualistik antara cendawan bukan patogen atau patogen lemah dan sel akar hidup, terutama sel korteks dan sel epidermis (Robertson et al., 2007). Mikoriza diduga mampu meningkatkan ketahanan tanaman terhadap lingkungan yang tercemar hidrokarbon dengan cara meningkatkan serapan nutrisi tanaman dan air pada tanah (Alarcón, 2006). Secara umum, fungi dianggap lebih toleran terhadap zat kimia polutan berkonsentrasi tinggi daripada bakteri, kemungkinan hal ini dikarenakan perbedaan struktur dinding selnya (Blakely et al. 2002, dalam Robertson, 2007). Salah satu contoh CMA adalah Glomus aggregatum yang memiliki adaptasi yang lebih baik daripada mikoriza lain terhadap tanah yang terkontaminasi minyak dan menunjukkan kapasitas kolonisasi yang tinggi (Cabello, 1997). Dengan penambahan G. aggregatum pada C. zizanioides diharapkan dapat meningkatkan sebaran akar sehingga diharapkan efek rizosfer bertambah. 1.2 Permasalahan

Permasalahan pada penelitian ini adalah 1. Bagaimanakah pengaruh penambahan cendawan mikoriza

arbuskula G. aggregatum terhadap kemampuan C. zizanioides

3

dalam melakukan fitoremediasi crude oil pada tanah yang terkontaminasi oleh PHC.

2. Bagaimanakah pengaruh penambahan crude oil terhadap kemampuan C. zizanioides dalam melakukan fitoremediasi crude oil pada tanah yang terkontaminasi oleh PHC.

3. Pada perlakuan manakah yang menunjukkan tingkat penurunan TPH yang paling banyak dalam masa pengamatan.

1.3 Batasan Masalah

Pengukuran efektivitas fitoremediasi dalam penelitian ini dibatasi pada pengukuran nilai penurunan TPH (Total Petroleum Hydrocarbon), parameter pertumbuhan C. zizanioides, jumlah bakteri bulk soil dan rizosfer C. zizanioides, serta persentasi infeksi mikoriza pada tanah yang terkontaminasi PHC dengan menggunakan agensia fitoremediasi C. zizanioides yang dimodifikasi dengan penambahan G. aggregatum selama 3 bulan.

1.4 Tujuan

Tujuan penelitian ini adalah 1. Mengetahui pengaruh penambahan cendawan mikoriza

arbuskula G. aggregatum terhadap kemampuan C. zizanioides dalam melakukan fitoremediasi tanah yang terkontaminasi oleh PHC.

2. Mengetahui pengaruh penambahan crude oil terhadap kemampuan C. zizanioides dalam melakukan fitoremediasi tanah yang terkontaminasi oleh PHC.

3. Mengetahui perlakuan yang menunjukkan tingkat penurunan TPH yang paling banyak dalam masa pengamatan.

1.5 Manfaat Adanya informasi mengenai kemampuan fitoremediasi yang dilakukan oleh C. zizanioides dengan penambahan cendawan G. aggregatum dan modifikasi komposisi tanah yang terkontaminasi PHC dapat digunakan sebagai salah satu informasi data untuk alternatif pengolahan limbah industri petroleum.

5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA

1.

2.1 Petroleum Hydrocarbon (PHC) Petroleum dan turunannya merupakan campuran dari

hidrokarbon padat, cair, dan gas. Komponen yang secara alami terbentuk pada reservoir minyak mentah disebut hidrokarbon petroleum. Deposit batuan sedimenter ini merupakan formasi baru yang berasal dari residu organik organisme kuno dan terbentuk di bawah panas, tekanan, dan kondisi anaerob tereduksi selama periode waktu geologis (Brandt, 2003). Petroleum merupakan senyawa kompleks, terdiri atas alkana, sikloalkana, dan hidrokarbon aromatik, juga hidrokarbon alifatik (Haramaya et al., 1998; Dutta dan Harayana, 2001 da lam Ambarukmi dan Sriwuryandari, 2006). Senyawa ini mengandung persentase rendah pada senyawa sulfur, oksigen, dan nitrogen, dengan tambahan logam dan senyawa lain. Substansi ini bersifat toksik pada organisme tingkat tinggi (manusia, flora, fauna) dan organisme tingkat rendah seperti mikroorganisme (Atlas, 1981 dalam Ambarukmi dan Sriwuryandari, 2006). Pada tanah, toksisitas PHC (Petroleum Hydrocarbon) pada organisme tanah, termasuk tanaman, terjadi bersamaan dengan perubahan fisik dan kimia pada tanah akibat kontaminasi PHC (Trofimov dan Rozanova, 2003).

Senyawa petroleum secara umum dapat diklasifikasikan menjadi dua kategori komponen utama: hidrokarbon dan non-hidrokarbon. Hidrokarbon hampir meliputi semua komponen dalam produk petroleum dan merupakan senyawa yang utama (tetapi tidak selalu) diukur sebagai Total Petroleum Hydrocarbon (TPH). Komponen non-hidrokarbon (yang mengandung heteroatom sulfur, nitrogen, dan oksigen, sebagaimana karbon dan hidrogen pada molekul) dan relatif minor pada sebagian besar bahan bakar motor dan cenderung berkonsentrasi pada fraksi distilasi berat. Petroleum crude oil bisa secara luas dibagi

6

menjadi parafinik, aspaltik, dan campuran (Todd et al., 1999 dalam Brandt, 2003). Menurut Kamath et al. (2004), TPH dibagi menjadi dua kategori. Gasoline range organics (GRO) terdiri atas alkana berantai pendek (C6-C10) dengan titik didih rendah (60-170°C) seperti isopentana, 2,3-dimetil butana, n-butana dan n-pentana, dan senyawa aromatik yang mudah menguap seperti hidrokarbon monoaromatik benzena, toluena, etilbenzena, dan xilena (BTEX). Diesel range organics (DRO) termasuk alkana berantai panjang (C10-C40) dan zat kimia hidrofobik seperti hidrokarbon aromatik polisiklik (polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH). Klasifikasi senyawa TPH dapat dilihat pada gambar berikut:

Gambar 2.1 Klasifikasi senyawa TPH (Potter dan Simmons, 1998 dalam Brandt, 2003 dengan perubahan)

TPH dianggap polutan berbahaya dan mengandung

senyawa yang bisa mengalami biokonsentrasi dan bioakumulasi dalam rantai makanan, merupakan toksik, dan beberapa fraksinya seperti benzena dan benzo[a]pirena diketahui sebagai mutagen dan karsinogen (Kamath, et al., 2004). Konstituen hidrokarbon dapat dikelompokkan menjadi hidrokarbon jenuh, hidrokarbon tak jenuh, dan senyawa aromatik.

HIDROKARBON PETROLEUM

Alifatik Aromatik

Parafin (Alkana)

Olefin (Alkena)

Asetilena (Alkuna)

Naftena (Sikloalkana)

Monoaromatik Diaromatik

Hidrokarbon poliaromatik

7

2.2.1 Alifatik Alifatik dibagi lagi menjadi 4 kelas: parafin (alkana),

olefin (alkena), asetilen (alkuna) dan naftan (sikloalkana). Parafin, olefin, dan asetilen merupakan hidrokarbon yang dibentuk dari rantai lurus atau bercabang. Parafin bersifat jenuh, sementara olefin dan asetilen merupakan hidrokarbon tidak jenuh karena masing-masing memiliki ikatan rangkap dua dan tiga. Naftan merupakan hidrokarbon jenuh dengan satu cincin atau lebih yang bisa dikombinasikan dengan satu rantai sisi parafin atau lebih. Hanya alifatik jenuh seperti parafin dan naftan yang berperan penting dalam analisis kualitas minyak mentah (Reis, 1996 dalam Brandt, 2003). Senyawa alifatik umumnya kurang toksik daripada aromatik dan toksisitasnya bervariasi tergantung pada ukuran senyawa (Edwards et al., 1998 dalam Brandt, 2003).

2.2.2 Aromatik

Komponen struktural dari molekul hidrokarbon aromatik adalah satu atau lebih cincin enam karbon (benzena) yang menunjukkan stabilitas kimiawi yang tinggi akibat adanya ikatan rangkap dua. Cincinnya terkadang dihubungkan dengan cincin naftan yang tersubstitusi atau rantai sisi parafin. Hidrokarbon aromatik dibagi menjadi hidrokarbon monoaromatik, dikromatik, dan poliaromatik. Monoaromatik memiliki satu cincin seperti benzena, toluena, etilbenzena, dan xilena, yang dikenal sebagai BTEX. Diaromatik memiliki 2 cincin benzena yang berfusi. Hidrokarbon poliaromatik (polyaromatic hydrocarbon/PAH) merupakan struktur cincin aromatik terkondensasi dengan lebih dari dua cincin benzena berfusi. Hidrokarbon aromatik merupakan konstituen penting dalam analisis kualitas minyak mentah (Reis, 1996 dalam Brandt, 2003).

8

Gambar 2.2 Contoh jenis BTEX (Kamath, et al., 2004)

Gambar 2.3 Hidrokarbon jenis PAH (Kamath, et al., 2004)

2.2.3 Komponen Hidrokarbon yang Lain

Lebih lanjut, aspal dan resin juga penting dalam analisis kualitas minyak mentah. Kedua senyawa tersebut didefinisikan sebagai fraksi polar petroleum (Diallo et al., 2000 dalam Brandt, 2003). Aspal merupakan hidrokarbon poliaromatik besar yang mengandung rantai alifatik pendek dan atom polar seperti sulfur, oksigen, nitrogen, dan berbagai macam logam (Nalwaya et al., 1999).

2.2 Sifat dari PHC Hidrokarbon alifatik tidak bersifat polar atau sedikit memiliki molekul polar, sementara senyawa aromatik menunjukkan adanya polaritas. Sehingga, senyawa aromatik lebih larut dalam air daripada alifatik, sementara alifatik lebih mudah menguap. Senyawa dengan berat molekul rendah secara umum

9

lebih larut dan mudah menguap daripada senyawa berberat molekul tinggi. PHC memiliki berbagai isomer, jumlah isomernya bertambah sesuai dengan penambahan jumlah karbon, yang menghasilkan kompleksitas kimia yang tinggi (Potter dan Simmons, 1998 dalam Brandt, 2003). Aspal disebut sebagai “bahan organik berat”, karena merupakan fraksi yang paling polar dari minyak mentah. Sehingga aspal lebih tidak larut pada n-alkana ringan tetapi larut pada pelarut aromatik. Walaupun memiliki polaritas yang tinggi, aspal bisa distabilkan pada fraksi non-polar dari minyak mentah (Nalwaya et al., 1999). Teori tradisional dari kestabilan aspal dalam minyak mentah adalah akibat adanya resin yang merupakan komponen polar netral, aspal mengabsorpsinya pada permukaan, membentuk lapisan resin yang polar netral atau sedikit polar. Partikel aspal kemudian berdispersi ke dalam minyak mentah dengan inti yang sangat polar dari aspal poliaromatik dan sedikit pora pada lapisan resinnya. Bagaimanapun, partikel aspal bisa didestabilisasi oleh berbagai faktor seperti perubahan temperatur dan tekanan atau perubahan rasio komponen pada minyak mentah yang berdampak pada agregasi, flokulasi, dan presipitasi aspal (Nalwaya et al., 1999). 2.3 Dampak Lingkungan Akibat Kontaminasi PHC

Blakely et al., (2002) menemukan bahwa kreosot berdampak pada jaring makanan pada tanah dan proses dekomposisi dengan mengubah habitat mikroinvertebrata dan mangsanya (seperti fungi dan bakteri) daripada melalui toksisitas kimiawi langsung. Kirk et al.,(2005) menyebutkan bahwa PHC mempengaruhi komunikasi antara tanaman dan fungi dengan mengubah pola eksudasi akar atau mengubah lingkungan tanah seperti pencegahan perpindahan sinyal kimia (flavonoid, auksin, dan lain-lain) secara difusi. Konstituen PHC ditemukan dalam bentuk mobile, berfiksasi dalam pori dan retakan tanah, diabsorpsi pada permukaan konstituen tanah organik dan mineral atau membentuk tutupan pada permukaan tanah. Semakin lama

10

zat kimia berada dalam tanah, semakin sulit untuk dilakukan desorpsi dan biodegradasi (Robertson, et al., 2007). Banyak dampak utama PHC terhadap biota tanah dan tanaman pada ekosistem hutan diasosiasikan dengan gangguan pada pasokan air, nutrisi, dan oksigen yang berhubungan dengan hidrofobisitas dan fluiditas produk minyak (Trofimov dan Rozanova, 2003). Toksisitas dari kontaminan organik hidrofobik diketahui lebih sedikit berpengaruh pada organisme tanah dengan kandungan humus yang tinggi (Salminen dan Haimi, 1997 dalam Robertson, 2007). Pada tanah yang terkontaminasi PHC, pasokan C (energi) meningkat sehingga memicu aktivitas metabolik pada sebagian mikroorganisme yang secara tidak langsung dihambat oleh PHC dan bersamaan dengan itu, rasio C : N meningkat. Kapasitas tampungan (Carrying capacity) tanah adalah tingkat maksimum dari aktivitas mikrobial yang bisa didukung oleh kondisi lingkungannya, yang tergantung pada ukuran populasi, ketersediaan O2 atau nutrisi, temperatur, dan ketersediaan air. Kapasitas tampungan tanah mungkin meningkat akibat masukan unsur C yang cukup banyak dari PHC (Miller dan Herman, 1997 dalam Robertson, 2007).

Pertumbuhan intensif dari mikroorganisme pengurai PHC sebagai hasil dari meningkatnya ketersediaan unsur C bersama dengan konsumsi nutrisi tanah, mengakibatkan penurunan ketersediaan nutrisi untuk tanaman (Tiquia et al., 2002). Penurunan ketersediaan unsur N bisa juga terjadi akibat inhibisi proses nitrifikasi dan amonifikasi atau akibat kehilangan nitrat (Suleimanov et al., 2005). Beberapa penelitian menunjukkan bahwa bakteri nitrifikasi tidak ditemukan pada tanah yang baru terkontaminasi, tetapi proses nitrifikasi kemudian bertambah; material organik stabil dan kandungan N total meningkat signifikan setelah kontaminasi PHC. Peningkatan N total terjadi akibat peningkatan fiksasi N2 dari atmosfer selama biodegradasi PHC. Degradasi oksidatif juga mengubah komposisi komunitas bakteri tanah, sehingga spesies selulotik dan proteolitik aerobik menurun dan spesies yang memfiksasi N secara anaerob

11

meningkat (Nicolotti dan Egli, 1998 dalam Robertson, 2007). Di bawah gangguan air dan pembatasan O2 yang ekstrim, P akan direduksi dan lepas ke atmosfer sebagai hidrogen fosfida (Suleimanov et al., 2005).

2.4 Parameter Pengolahan Limbah PHC Pengolahan limbah tanah yang terkontaminasi PHC didasarkan pada kriteria yang dikeluarkan oleh menteri negara lingkungan hidup tentang prosedur dan teknik untuk pengolahan limbah minyak dan tanah tercemar minyak secara biologis. Tabel 2.1 Parameter hasil bioremediasi tanah terkontaminasi

Parameter Nilai Satuan pH 6-9 TPH 1,0 % Benzena 1 μg/g Toluena 10 μg/g Etil benzena 10 μg/g Total PAH 10 μg/g Logam berat

Timbal, Pb 5 mg/L Arsenik, As 5 mg/L Barium, Ba 150 mg/L Kadmium, Cd 1 mg/L Kromium, Cr 5 mg/L Tembaga, Cu 10 mg/L Merkuri, Hg 0,2 mg/L Selenium, Se 1 mg/L Seng, Zn 50 mg/L

(Keputusan Menteri Lingkungan Hidup, No. 128 tahun 2003 dalam PPLI, 2010)

2.5 Fitoremediasi Fitoremediasi didefinisikan sebagai pencucian polutan yang dimediasi oleh tumbuhan, termasuk pohon, rumput-rumputan, dan tumbuhan air. Pencucian bisa berarti penghancuran,

12

inaktivasi atau imobilisasi polutan ke bentuk yang tidak berbahaya (Alarcón, 2003; Robertson et al., 2007).

Proses fitoremediasi secara umum dibedakan berdasarkan mekanisme fungsi dan struktur tumbuhan. Secara umum membuat klasifikasi proses sebagai berikut: 1) Fitostabilisasi (phytostabilization). Akar tumbuhan

melakukan imobilisasi polutan dengan cara mengakumulasi, mengadsorpsi pada permukaan akar dan mengendapkan presipitat polutan dalam zona akar. Proses ini secara tipikal digunakan untuk dekontaminasi zat-zat anorganik yang terkandung minyak yaitu sulfur, nitrogen, dan beberapa logam berat (Susarla et al., 2002).

2) Fitoekstraksi atau fitoakumulasi (phytoextraction atau phytoaccumulation). Fitoekstraksi adalah penggunaan tanaman pengakumulasi logam yang bisa memindahkan dan mengonsentrasikan logam dari tanah ke tunas yang dipanen dengan metode konvensional (Eapen dan D’Souza, 2004).

3) Rizofiltrasi (rhizofiltration). Akar tumbuhan mengadsorpsi atau presipitasi pada zona akar atau mengabsorpsi larutan polutan sekitar akar ke dalam akar. Proses ini digunakan untuk bahan larutan yang mengandung bahan organik maupun anorganik (Mangkoedihardjo, 2002).

4) Fitodegradasi atau fitotransformasi (phytodegradation atau phytotransformation). Organ tumbuhan menguraikan polutan yang diserap melalui proses metabolisme tumbuhan atau secara enzimatik (Susarla et al., 2002).

5) Rizodegradasi (rhizodegradation atau enhanced rhizosphere biodegradation atau phytostimulation atau plant-assisted bioremediation atau degradation). Polutan diuraikan oleh mikroba dalam tanah, yang diperkuat atau sinergis oleh ragi, fungi, dan zat-zat keluaran akar tumbuhan (eksudat) yaitu gula, alkohol, asam. Eksudat itu merupakan makanan mikroba yang menguraikan polutan maupun biota tanah lainnya. Proses ini adalah tepat untuk dekontaminasi zat organik (Susarla et al., 2002). Rizodegradasi kontaminan

13

organik secara signifikan dilakukan dengan eksudasi akar (efek rizosfer) yang menstimulasi aktivitas mikrobial dan keberadaan asosiasi mikroba-tanaman yang bersifat simbiotik dan fakultatif. Keberadaan tanaman menciptakan kondisi yang sesuai untuk akumulasi keberadaan nutrien dan seresah, sekresi eksudat akar, dan oksigenasi yang bertambah, yang cocok untuk aktivitas mikrobial yang bertanggung jawab untuk memulai degradasi kontaminan organik (Alarcón, 2006).

6) Fitovolatilisasi (Phytovolatilization). Penyerapan polutan oleh tumbuhan dan dikeluarkan dalam bentuk uap cair ke atmosfer. Kontaminan bisa mengalami transformasi sebelum lepas ke atmosfer. Kontaminan zat-zat organik adalah tepat menggunakan proses ini. Tanaman mengekstraksi logam mudah menguap (seperti merkuri) dari tanah dan menguapkannya lewat daun (Susarla et al., 2002).

Davis et al. (2002) menekankan pada keuntungan signifikan da ri tanaman pada fitoremediasi molekul organik kompleks yang diturunkan dari sumber yang berbeda. Tanaman menunjukkan mekanisme fisiologi untuk meningkatkan proses remediasi seperti fitoekstraksi/fitoakumulasi (phytomining), phytopumping, kontrol keseimbangan air, fitostabilisasi, fitotransformasi/fitodegradasi, fitovolatilisasi, dan rhizodegradasi (Susarla et al., 2002). Fitoremediasi tanah terkontaminasi PHC juga bisa dibantu dengan mengintroduksi spesies mikroba spesifik (bioaugmentasi) dengan karakteristik ideal untuk oksidasi atau degradasi kontaminan organik dan biostimulasi dengan menambahkan nutrisi organik dan anorganik serta optimasi perbandingan C:N:P (Alarcón, 2006).

14

Gambar 2.4 Berbagai mekanisme skematis penghilangan kontaminan oleh tanaman (Schnoor et al., 1995 dalam Kamath et al., 2004 dengan perubahan). 2.6 Respon Tanaman pada Tanah yang Tekontaminasi

PHC

Gambar 2.5 Proses biotik dan abiotik yang mempengaruhi degradasi kontaminan organik (Alarcón, 2006 dengan perubahan).

15

PHC pada tanah menimbulkan lingkungan yang mencekam tanaman. Efek negatif PHC pada tanaman terjadi di atas permukaan tanah dan di bawah permukaan tanah. Beberapa pengaruh terhadap fisiologi tanaman yang dipaparkan pada PAH berhubungan dengan modifikasi sintesis enzim spesifik seperti lakkase, dehalogenase, nitroreduktase, nitrilase, dan peroksidase) yang berkontribusi pada oksidasi inisial dan degradasi PAH pada rizosfer (Alarcón, 2006).

2.6.1 Daun

Efek di atas permukaan tanah termasuk deposisi PHC pada daun yang menyebabkan gangguan fisiologis yang memicu kematian tanaman. PHC pada permukaan daun mengurangi pertukaran gas (fotosintesis dan transpirasi) dengan menutup atau menghalangi stomata, merusak membran kloroplas, dan inhibisi terinduksi dengan mengakumulasi racun intermediet (Macinnis-Ng dan Ralph, 2003). Sebagai tambahan, respirasi meningkat akibat kerusakan mitokondria, yang secara potensial menyebabkan tekanan oksidatif (Torres dan Dangl, 2005). Tergantung pada komposisi minyak mentah seperti senyawa alkana, sikloalkana, aromatik, alkena, asam naftanik, sulfur, nitrogen dan sedikit logam seperti vanadium dan nikel, efek fitotoksik bisa diklasifikasikan dari akut sampai sangat berbahaya (Van Hamme et al., 2003). Efek PHC di bawah permukaan tanah yang berbahaya sedikit diteliti. Kebanyakan dampak negatif PHC pada tanah berhubungan dengan sifat hidrofobik dan lipofilik dari PHC (Alarcón, 2006).

2.6.2 Akar

Akar merupakan komponen penting untuk adaptasi tanaman pada tanah yang terkontaminasi PHC dan penting untuk fitoremediasi. Studi awal pada morfologi akar di bawah tanah yang terkontaminasi PHC menunjukkan pertumbuhan akar pada spesies yang sensitif secara drastis menjadi rusak. Sebaliknya, spesies yang toleran PHC memiliki morfologi akar yang

16

termodifikasi dengan ciri akar yang lebih kasar, pendek, dan tebal. Karakteristik ini berhubungan dengan degradasi PHC yang lebih tinggi (Merkl et al., 2005) dan peningkatan penyerapan air dan nutrisi untuk mendukung pertumbuhan tanaman di bawah kontaminasi tanah. Efek negatif PHC pada respon fisiologi tanaman dan morfologi akar bervariasi berdasarkan spesies tanaman, tipe dan sifat tanah, komposisi mikroba, dan tipe, komposisi, dan konsentrasi petroleum (Siciliano et al., 2001).

Spesies rumput-rumputan dianggap kurang terpengaruh oleh keberadaan PHC di tanah daripada spesies polong-polongan (Kirk et al., 2002) dan beberapa polong-polongan berpotensi sebagai indikator fitotoksisitas yang diinduksi oleh PHC dalam tanah (Malallah et al., 1996)

2.7 Tanaman Vetiver (Chrysopogon zizanioides (L.)

Roberty) Tanaman vetiver (Chrysopogon zizanioides) merupakan

rumput-rumputan perenial, dengan helai daun yang padat, dikarakterisasikan dengan batang yang kuat dan tegak dengan helai daun mencapai panjang 75 cm dan lebar 8 cm (World Bank, 1993 dalam Brandt, 2003). C. zizanioides adalah salah satu spesies pada genus Chrysopogon dengan klasifikasi berikut: Domain : Eukaryota Regnum : Plantae Divisio : Tracheophyta Classis : Liliopsida Ordo : Poales Familia : Poaceae Genus : Chrysopogon Species : Chrysopogon zizanioides (L.) Roberty

(Brandt, 2003)

17

Gambar 2.6 Tanaman vetiver (C. zizanioides). (a) tajuk, (b) akar, dan (c) bunga berbentuk panikula (NRC, 1993 dalam Brandt, 2003).

C. zizanioides dikenal juga dengan nama tanaman kuskus

atau tanaman akar wangi. Semua spesies Chrysopogon awalnya terdistribusi di wilayah tropis dunia lama. C. zizanioides dipercaya berasal dari India utara, yang umumnya ditemukan tumbuh liar atau dibudidayakan secara tradisional pada lahan basah pada dataran rendah (NRC, 1993 dalam Brandt, 2003). Struktur morfologi yang mencolok pada tanaman akar wangi adalah sistem perakaran yang masif. Pada kondisi optimal, spesies ini mampu tumbuh cepat, mencapai 4 m pada kedalaman akar di tahun pertama. Akar vetiver menunjukkan kekuatan penetrasi yang sangat baik, akar vetiver mampu menembus tanah padat, termasuk tanah aspal. Tanaman ini tidak memiliki stolon ataupun rhizoma, sehingga mudah dikontrol. Umumnya, sistem perakarannya tumbuh lurus ke bawah tanpa berkompetisi dengan vegetasi di sekitarnya. Sehingga, tanaman ini memungkinkan untuk ditanam pada wilayah pertanian (Greenfield, 2000 dalam Brandt, 2003). Menurut Nanakorn et al. (2000) dalam Brandt

(c)

(a)

(b)

18

(2003), akar vetiver saling berikatan membentuk lapisan seperti dinding, yang memungkinkan tanaman ini mempertahankan air dan kelembaban, sehingga menciptakan lingkungan yang cocok untuk diversitas mikroorganisme di tanah. Selain itu, C. zizanioides mempunyai kemampuan untuk bersimbiosis dengan mikroflora tanah, yaitu cendawan mikoriza arbuskular (CMA) (Leaungvutiviroj et al., 2010).

C. zizanioides memiliki kapabilitas spesifik dalam mereduksi material organik seperti COD, BOD, amonia, dan juga logam seperti Zn (90%), As (60%), Pb (30-71%), dan Hg (13-15%). C. zizanioides termasuk tanaman perenial yang berumur panjang (10 tahun) dan mampu tumbuh pada rentang suhu -9 sampai 45°C serta toleran terhadap pH 4,5-10,5 (Kong et al., 2000 dalam Ambarukmi dan Sriwuryandari, 2006). C. zizanioides juga mampu bertahan pada kekeringan, api, banjir, dan perendaman. Setelah berada pada kondisi cekaman, tanaman segera memulihkan metabolismenya kembali (Greenfield, 2000 dalam Brandt, 2003). Spesies ini menunjukkan toleransi pada berbagai faktor edafik tingkat ekstrim. Truong dan Baker (1997) dalam Brandt (2003), membuktikan toleransinya pada cakupan luas untuk pH tanah (3,3 sampai 9,5) dan tingkat tinggi untuk alkalinitas (33% Na), magnesisitas (20 Cmol/kg Mg), dan salinitas (47,5 mS/cm). C. zizanioides juga menunjukkan ketahanan tinggi terhadap logam berat pada tanah seperti aluminium (68%-87%), arsenik (100-250 ppm), kadmium (20 ppm Cd), tembaga (50-100 ppm Cu), kromium (200-600 ppm Cr), nikel (50-100 ppm Ni) dan mangan (Mn > 578 ppm).

C. zizanioides termasuk kelompok tanaman fotosintesis C4. Jadi, spesies ini mampu bertahan dan berkompetisi di bawah kondisi kering dengan curah hujan tahunan minimum sekitar 200 mm. C. zizanioides membutuhkan ruangan terbuka yang terkena sinar matahari untuk hidup (NRC, 1993). Terdapat 2 t ipe C. zizanioides: bentuk liar yang asli dari India Utara yang berbunga secara teratur, menghasilkan biji fertil, dan bentuk hasil kultivasi dari India selatan. Biasanya tidak berbunga, tidak menghasilkan

19

biji, dan dipercaya steril, propagasi dari tipe India Selatan terjadi secara vegetatif melalui pemisahan akar. Jadi, kultivasinya lebih mudah dikontrol dan tidak menghasilkan resiko ekologi. Hanya tipe India Selatan yang digunakan untuk praktek konservasi, termasuk fitoremediasi (NRC, 1993).

Sejumlah penelitian yang berhasil terdapat di Australia dan Afrika Selatan, C. zizanioides digunakan untuk rehabilitasi emas, platina, batubara, dan hasil pertambangan lain (Truong, 1999 dalam Brandt, 2003). Investigasi di Cina menunjukkan efek positif C. zizanioides dalam memurifikasi limbah cair sampah perkotaan pada tanah (Xia et al., 1997) dan secara efisien menghilangkan fosfor dan nitrogen dari perairan eutrofik (Zheng, 1997 dalam Brandt, 2003). Di Thailand, efek dekontaminasi vetiver pada pestisida untuk mencegah akumulasi pestisida pada tanaman pertanian dan bagian lain dari agroekosistem yang telah terbukti pada penelitian sebelumnya oleh Pinthong et al. (1996). Menurut penelitian Brandt (2003), C. zizanioides yang dipaparkan selama 6 bulan mengalami penurunan kadar TOG (total oil and grease) yang lebih banyak daripada tanah yang tidak ditumbuhi C. zizanioides. 2.8 Tanah

Tanah merupakan sistem yang hidup, terbuka, dan dinamis. Tanah mengandung matriks-matriks yang terstruktur dan homogen, secara umum menyimpan nutrisi dan energi dan mendukung diversitas dan biomassa mikroba yang tinggi (Robertson, et al., 2007). Untuk tumbuh, mikroorganisme tanah harus memobilisasi energi dan nutrisi dalam tanah. Struktur tanah menyediakan habitat bagi mikroba, dari lokasi yang kaya energi sampai miskin energi, aerob dan anaerob, hanya dalam jarak mikrometer. Struktur tanah ditentukan oleh agregasi tanah yang terjadi ketika partikel tanah dalam suatu agregat lebih kohesif satu sama lain daripada dengan agregat yang lain (Hartel, 1998, dalam Robertson, et al., 2007). Agregat terdiri atas tanah, silt, dan partikel lempung yang diikat bersama oleh materi organik,

20

mengendapkan material anorganik, mikroorganisme dan produk hasil aktivitas metaboliknya (Griffiths dan Caldwell, 1992; Hartel, 1998 dalam Robertson et al., 2007). Agregat bersifat dinamis, secara konstan terbentuk dan terdisintegrasi. Substrat organik dan residu tanaman terperangkap dan terlindungi selama pembentukan agregat dan terlepas selama disintegrasi agregat (Plante dan McGill, 2002 dalam Robertson et al., 2007). 2.9 Mikoriza

Mikoriza (akar-cendawan) merupakan gabungan simbiotik dan mutualistik antara cendawan bukan patogen atau patogen lemah dan sel akar hidup, terutama sel korteks dan sel epidermis. Umumnya hanya akar muda yang lunak saja yang terinfeksi cendawan itu. Tanaman yang bersimbiosis dengan jamur, membutuhkan nitrogen (N), fosfor (P), dan nutrisi lain dari lingkungan tanah dan melakukan pertukaran nutrisi dengan senyawa karbon yang diturunkan dari hasil fotosintesis sebagai sumber energi metabolisme fungi. Sifat struktural dari mikoriza berhubungan dengan fungsi primernya dalam pertukaran nutrisi dan hal ini mendasari klasifikasi secara luas ke dalam tujuh kelompok yang diketahui: ektomikoriza, mikoriza erikoid, ektendomikoriza, mikoriza arbuskular, mikoriza arbutoid, mikoriza monotropoid, dan mikoriza anggrek (Peterson et al. 2004 dalam Robertson et al., 2007). Namun ada dua kelompok utama mikoriza: ektomikoriza dan endomikoriza, meskipun kadang dimasukkan pula satu kelompok lagi yang jarang didapati dan yang mempunyai sifat antara, yaitu mikoriza ektendotropik. Pada ektomikoriza, hifa cendawan membentuk selimut di luar dan di dalam akar, di ruang antarsel epidermis dan korteks. Pengasukan ke dalam sel epidermis atau korteks tidak terjadi, namun jala-jala yang meluas yang dinamakan jala Hartig terbentuk di antara sel-sel ini. Endomikoriza terdiri dari tiga anak-kelompok, namun sejauh ini yang paling lazim adalah mikoriza vesikular arbuskular. Cendawan ini membuat jala-jala hifa-dalam di antara sel korteks, yang kemudian menyeruak keluar menuju

21

ke tanah untuk menyerap air dan garam mineral (Salisbury dan Ross, 1992).

Mikoriza tersebar dari arktik-tundra sampai ke daerah tropis dan dari daerah bergurun pasir sampai ke hutan hujan yang melibatkan 80% jenis tumbuhan yang ada. Cendawan mikoriza arbuskular (CMA) merupakan simbion obligat pada sistem perakaran yang hidup. CMA termasuk dalam filum Glomeromycota (Schüßler et al., 2001). Kondisi lingkungan tanah yang cocok untuk perkecambahan biji juga cocok untuk perkecambahan spora mikoriza. Demikian pula kondisi edafik yang dapat mendorong pertumbuhan akar juga sesuai untuk perkembangan hifa. Mikoriza memenetrasi epidermis akar melalui tekanan mekanis dan aktivitas enzim, yang selanjutnya tumbuh menuju korteks. Pertumbuhan hifa secara eksternal terjadi jika hifa internal tumbuh dari korteks melalui epidermis. Pertumbuhan hifa secara eksternal tersebut terus berlangsung sampai tidak memungkinkan untuk terjadi pertumbuhan lagi. Mikoriza mendapatkan karbon berfiksasi hasil fotosintesis, dan menyediakan mineral, nutrisi, air, dan meningkatkan ketahanan terhadap tekanan, termasuk patogen, pembatasan air, dan polutan lingkungan (David-Schwartz et al., 2003; Dodd, 2000; Smith dan Read, 1997 dalam Kirk et al., 2005). K ebanyakan Glomaceae melakukan kolonisasi akar sebelum Acaulosporaceae dan Gigasporaceae. Koloni tercepat terkadang juga yang paling ekstensif (Hart dan Reader, 2002).

2.10 Interaksi CMA Terhadap Kontaminasi PHC pada

Tanah Mikoriza diduga mampu meningkatkan ketahanan

tanaman terhadap lingkungan yang tercemar hidrokarbon dengan cara meningkatkan serapan nutrisi tanaman dan air pada tanah (Alarcón, 2006). Secara umum, fungi dianggap lebih toleran terhadap zat kimia polutan berkonsentrasi tinggi daripada bakteri, kemungkinan hal ini dikarenakan perbedaan struktur dinding selnya (Blakely et al. 2002, dalam Robertson, 2007). Binet et al.

22

(2000) dalam Kirk et al. (2005) mengobservasi peningkatan kesintasan tanaman yang berasosiasi dengan mikoriza Glomus mosseae yang dipaparkan pada anthracene dan campuran 8 hidrokarbon aromatik polisiklik yang dibandingkan dengan tanaman yang tidak berasosiasi dengan mikoriza.

Miselia fungi mikoriza dan tanah di sekitarnya (disebut mikorizosfer) menyediakan habitat yang cocok untuk komunitas mikroorganisme yang beraneka ragam karena peningkatan ketersediaan substrat metabolik berenergi tinggi dan permukaan untuk kolonisasi (Sarand et al., 2000; Sen, 2003; Heinonsalo, Humme dan Sen 2003 da lam Robertson et al., 2007). Hal ini meningkatkan dekomposisi bakteri terhadap material tanaman karena miselia menyediakan jalurnya, bersama dengan lapisan tipis air di sekitarnya sehingga bakteri bisa bermigrasi ke substrat di mikropori. Sinergisme metabolisme antara fungi dan anggota bakteri pada komunitas tanah memastikan bahwa sebenarnya secara keseluruhan seluruh senyawa organik merupakan subyek dari biotransformasi (jika tersedia organisme dekomposernya) dan pertukaran nutrisi dan senyawa kaya energi ini terjadi antara tanaman dan lingkungan tanah melalui jaringan fungi mikoriza (Simard et al., 1997; Read dan Perez-Moreno, 2003; Díaz, 2004; Heinonsalo et al., 2004 dalam Robertson, 2007).Tanaman dan mikorizosfer yang berasosiasi meningkatkan aktivitas organisme pendegradasi PHC, baik melalui peningkatan secara umum (seperti efek mikorizosfer) atau melalui proliferasi kelompok mikroba tertentu (seperti mengubah komponen fungsional dari komunitas mikroba) (Siciliano et al., 2003). Mikoriza juga memediasi desorpsi ikatan kontaminan terhadap konstituen tanah dengan mengubah pH dan potensial redoks, juga m engubah konsentrasi dan tipe senyawa organik di mikorizosfer. Riset menunjukkan bahwa situs yang mengandung asosiasi tanaman dan mikoriza yang diharapkan, mengalami reduksi toksisitas PHC yang lebih cepat (Parrish, Banks, dan Schwab, 2005).

23

Gambar 2.7 Kontrol rizosfer terhadap bioavailabilitas polutan organik (Wenzel, 2008)

Pada tanah yang tercemar petroleum, pertumbuhan

tanaman terbatasi oleh keberadaan nitrogen dan fosfor sebagai akibat melimpahnya kadar karbon yang berasal dari hidrokarbon petroleum. Sebagai tambahan, karena sifat hidrofobik dari kontaminan, maka air dan nutrisi yang larut air terbatasi (Joner dan Leyval, 2001). CMA mungkin menguntungkan untuk sistem fitoremediasi petroleum dengan mengurangi cekaman tanaman melalui peningkatan ketersediaan air dan memacu produksi enzim oksidatif (Salzer et al., 1999), sehingga peningkatan penyerapan nutrisi dan peningkatan volume tanah diremediasi oleh mikorizosfer (Bianciotto dan Bonfante, 2002). Hifa ekstraradikal ditemukan melebar di bawah zona akar dan meningkatkan aktivitas mikrobial pada mikorizosfer dibandingkan dengan rizosfer (Heinonsalo et al., 2000).

24

2.11 Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske Klasifikasi dari Glomus aggregatum adalah: Domain : Eukaryota Regnum : Fungi Divisio : Zygomycetes Classis : Glomeromycetes Ordo : Glomales Familia : Glomaceae Genus : Glomus Species : Glomus aggregatum Schenk & Smith emend. Koske

(Hart dan Reader, 2002) Spora G. aggregatum terbentuk tunggal di tanah,

bebatuan, dan akar. Spora berwarna kuning pastel sampai coklat kekuningan, kebanyakan berbentuk globosa sampai subglobosa dengan diameter 40-150 μm, jarang berbentuk piriformis atau tak beraturan. Biasanya terdapat satu hifa yang memanjang, jarang terdapat dua. Hifa berwarna kuning pastel sampai coklat kekuningan, berbentuk lurus atau melingkar, silindris atau berbentuk corong, jarang memendek pada dasar spora. Lebar 6,4-21,6 μm pada dasar spora. (Anonim, 2010).

Gambar 2.8 Gambar hifa dan spora Glomus aggregatum (Anonim, 2010)

25

G. aggregatum memiliki adaptasi yang lebih baik daripada mikoriza lain terhadap tanah yang terkontaminasi minyak dan menunjukkan kapasitas kolonisasi yang tinggi (Cabello, 1997) dan dari 12 i solat CMA yang diteliti oleh Hart dan Reader (2002), G. aggregatum merupakan CMA yang tercepat dalam melakukan kolonisasi inisial yaitu membutuhkan 2 pekan. Pemberian 10 gram G. aggregatum dapat meningkatkan serapan unsur hara dan tingkat pertumbuhan Graminae pada tanaman jagung (Zea mays) (Sinwin dan Dewi, 2008 dalam Febriandita, 2008) serta pemberian inokulum 15-30 gram dapat mempertahankan tingkat pertumbuhan tanaman jarak pagar pada lumpur Sidoarjo terhadap komposisi media tanam hingga 40-50% kandungan lumpur dalam reaktor uji (Chasanah, 2008).

27

BAB III METODOLOGI

3.1 Waktu dan Tempat Penelitian Penelitian ini dilakukan pada bulan Juli 2011 sampai Januari 2012. Crude oil didapatkan dari hasil eksplorasi dan produksi petroleum di Bojonegoro, Jawa Timur. Penelitian dilaksanakan di Balai Teknologi Lingkungan - Badan Pengkajian dan Penerapan Teknologi (BTL-BPPT), Pusat Penelitian Ilmu Pengetahuan dan Teknologi (PUSPIPTEK), Tangerang Selatan, Banten. 3.2 Alat dan Bahan 3.2.1 Alat Alat yang digunakan adalah polybag, ember, termometer, soil tester, pipet volumetrik dan pipet gondok, termometer, vortex, erlenmeyer, tabung reaksi, cawan petri, aerator, neraca analitik, saringan, soxhlet, inkubator, oven, tabung reaksi, rotary evaporator, still pot. 3.2.2 Bahan Bahan yang digunakan adalah tanah latosol, pasir, crude oil, spora cendawan mikoriza arbuskular (CMA) Glomus aggregatum, tanaman vetiver (Chrysopogon zizanioides), pepton, agar-agar, meat extract, NaCl, aquades, n-hexana, aseton, Natrium sulfat (Na2SO4), dan glass wool. 3.3 Cara Kerja 3.3.1 Tahap Persiapan

A. Uji Viabilitas Mikoriza Uji Viabilitas inokulum dilakukan dengan seri

pengenceran kelipatan 10. Inokulum mikoriza diambil sebanyak 100 gram dan diletakkan dalam polybag dan di atasnya ditumbuhkan biji jagung sebagai inang. Hal ini merupakan

28

inokulum murni (100). Seri pengenceran 10-1, diambil 10 gram inokulum dan dicampurkan dengan 90 gram tanah steril, di atasnya ditumbuhkan tanaman inang. Seri pengenceran 10-2, diambil 10 g ram dari inokulum pengenceran 10-1 dan dicampurkan dengan 90 gram tanah steril, di atasnya ditumbuhkan tanaman inang. Seri pengenceran dilakukan hingga 10-10. Setelah ± 1 bulan, tanaman diambil dari media tanam dan dibersihkan perakarannya dari tanah. Selanjutnya, dilakukan pengamatan infeksi akar dengan menggunakan mikroskop binokuler pada tiap pengenceran. (Budi, 1999 dalam Martiyaningrum, 2009).

Tabel 3.11Uji viabilitas mikoriza

Pengenceran Pengamatan ke- Frekuensi infeksi 1 2 3 4 5

100 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-1 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-2 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-3 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-4 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-5 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-6 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-7 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-8 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-9 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N 10-10 0/1 0/1 0/1 0/1 0/1 N

Keterangan: n = jumlah akar yang terinfeksi; 0 = akar tidak terinfeksi; 1 = akar terinfeksi

B. Penyiapan Tanaman Tunas C. zizanioides, yang didapatkan dari BALITTRO, Bogor, dipisahkan dari tanaman induk dan dipotong dengan ukuran yang sama (daun dengan panjang 20 cm dan akar dengan panjang 2 cm), kemudian ditanam dalam compound pot dengan media zeolit selama 2 bulan. Untuk perlakuan dengan

29

penambahan mikoriza, tunas C. zizanioides diinfeksi dengan spora G. aggregatum yang didapatkan dari BIOTROP, Bogor. Inokulasi mikoriza dilakukan dengan menggunakan sistem lapisan. Media tanam (zeolit) diambil dengan ketebalan 1 cm, kemudian di atasnya dilapisi inokulan mikoriza 4 gram yang telah di campur dengan pasir dan dilapisi lagi dengan media tanam. Tanaman ditumbuhkan pada rumah kaca. Penyiraman dilakukan setiap hari dan diberi pupuk Hyponex® dosis 1 gram/liter.

Gambar 3.11Ilustrasi inokulasi mikoriza dengan menggunakan sistem lapisan

C. Penyiapan Media Tanam Media yang digunakan adalah tanah dan pasir. Tanah latosol dikeringanginkan selama 3 hari kemudian digiling hingga halus dan diayak kasar. Pasir dikeringanginkan selama 3 hari dan diayak dengan saringan mesh 500 μm.

D. Penentuan Water-Holding Capacity Media tanam berkomposisi pasir:tanah (3:2) dimasukkan

ke dalam tabung yang bagian bawahnya berpori. Tabung tersebut dimasukkan ke dalam bak berisi air sehingga sebagian tabung berada di bawah permukaan air dan didiamkan selama 1 x 24 jam. Pada bagian bawah tabung ditambahkan penopang agar bagian bawah tabung tidak menempel pada permukaan bak. Setelah didiamkan 1 x 24 jam, massa ditimbang. Kemudian media tanam tersebut dikeringkan dalam oven bersuhu 100°C selama 1 x 24

Lapisan mikoriza

Media tanam

Media tanam

30

jam dan setelah kering massa kembali ditimbang. Water-Holding Capacity (WHC) dihitung dengan rumus:

WHC (%)=Sampel basah (gr) - Sampel kering (gr)

Sampel basah (gr)×100%

(Schilchting et al, 1995 dalam Brandt, 2003).

E. Perbanyakan Bakteri Hidrokarbonoklastik

Bakteri hidrokarbonoklastik koleksi dari BTL-BPPT sebanyak 3 isolat masing-masing di pindahkan ke dalam 200 ml Nutrient Broth (NB) dan diinkubasi dalam inkubator selama 1 x 24 jam. Masing-masing kultur dipindahkan ke dalam 0,75 liter NB dan diaerasi. Setiap 1 x 24 jam diperkirakan populasinya dengan menggunakan optical density (OD) pada spektrofotometer dengan panjang gelombang 680 nm. Bakteri siap ditambahkan ke media tanam setelah nilai OD di atas 1.

Gambar 3.22Isolat bakteri hidrokarbonoklastik dari BTL-BPPT

3.3.2 Pembuatan bioreaktor dan perawatan tanaman

A. Pembuatan bioreaktor Media tanam berkomposisi pasir:tanah (3:2) dengan

massa 3 kg di aduk sampai rata sambil ditambahkan air dan crude oil sesuai perlakuan (lihat tabel 3.2). Media dimasukkan ke dalam

31

polybag tanpa lubang dan dimasukkan 2 tanaman vetiver yang telah disiapkan sesuai perlakuan (lihat tabel 3.2). Konsorsium bakteri ditambahkan ke tiap polybag sebanyak 120 ml. Polybag dimasukkan ke dalam pot yang telah diisi dengan pasir basah sehingga tinggi pasir basah hampir sama dengan tinggi media tanah dalam polybag.

Gambar 3.33Bioreaktor berisi C. zizanioides dalam green house

B. Pengairan dan pemupukan

Seluruh bioreaktor disirami air sebanyak 100 ml setiap pengairan. Pemupukan dengan pupuk anorganik Hyponex® setelah 2 minggu penanaman tanaman. Pemupukan dilakukan bersamaan dengan pengairan. 3.3.3 Pengukuran

A. Kelembaban Tanah Nilai kelembaban pada penelitian ini diperoleh dari hasil pengukuran dengan alat soil tester. Soil tester ini berupa alat yang dapat mengukur nilai kelembaban tanah dengan cara menancapkan bagian ujung yang runcing dari soil tester, kemudian ditekan tombol indikatornya untuk mendapatkan nilai kelembaban. Pada saat tombol ditekan dengan jarum penunjuk pada soil tester akan bergerak sesuai dengan kandungan

32

kelembaban dalam sampel. Sehingga didapatkan nilai kelembabannya (Febriandita, 2008).

B. Analisis pH Nilai pH pada penelitian ini diperoleh dari hasil pengukuran dengan alat soil tester. Soil tester ini berupa alat yang dapat mengukur nilai pH tanah dengan membaca jarum penunjuk yang bergerak pada saat soil tester ditancapkan pada bioreaktor. Jarum akan bergerak sesuai dengan kandungan pH dalam bioreaktor (Febriandita, 2008).

C. Suhu Tanah Pengukuran suhu pada bioreaktor dilakukan dengan alat termometer. Pengukuran suhu dengan termometer ini dilakukan langsung pada bioreaktor tanaman C. zizanioides yang ada di dalam ruang kaca. Termometer ditancapkan pada bioreaktor kemudian tunggu hingga ±5 menit lalu lakukan pembacaan skala suhu yang tertera pada termometer (Bagariang, 2008).

D. Perhitungan Biomassa Pengukuran biomassa dilakukan setelah 3 bulan masa penanaman. Tajuk dipisah dari akar. Tajuk dan akar dikeringkan dalam oven pada suhu 60°C sekitar 3 hari, dan ditimbang setelah dikeluarkan dari oven (Brandt, 2003), kemudian dihitung biomassa keringnya.

E. Perhitungan Jumlah Bakteri dengan Total Plate Count Jumlah bakteri diperkirakan dengan menggunakan metode Total Plate Count (Angka Lempeng Total). Untuk perhitungan jumlah bakteri tanah, sampel diambil dari tanah yang jauh dari akar. Sedangkan untuk perhitungan jumlah bakteri rizosfer, sampel diambil dari akar dan tanah sekitarnya. Sebanyak 1 gram sampel ditambahkan ke dalam 9 ml media BH kemudian di vorteks sampai terbentuk suspensi sebagai seri pengenceran 10-1. Kemudian dilakukan seri pengenceran dengan menambahkan 1 ml

33

suspensi ke dalam 9 ml media BH sebagai seri pengenceran 10-2 dan dilakukan seri pengenceran berikutnya sampai 10-6. Aliquot yang didapatkan dari pengenceran 10-4 sampai 10-6 diambil 100 μl untuk diperkirakan Colony Forming Units (CFU) bakteri dan diratakan ke dalam cawan petri berisi media Nutrient Agar. Cawan Petri diinkubasi selama 24 jam pada suhu 28°C dalam posisi terbalik. CFU yang dihitung hanya antara 30 sampai 300 CFU (Alarcon, 2006).

F. Perhitungan Infeksi Akar In Vitro Perhitungan infeksi akar in vitro dilakukan setelah 3 bulan masa tanam. Infeksi akar dapat dihitung menggunakan metode pembersihan dan pewarnaan akar. Akar dipotong sepanjang 1 cm secara acak, kemudian akar dicuci dengan air, setelah itu dimasukkan ke dalam tabung film lalu direndam dengan KOH 2,5 % dan dimasukkan ke oven selama 10 m enit dengan suhu 90°C. Setelah 10 menit dan akar telah berwarna kuning, larutan KOH dibuang dan dicuci lagi dengan air, setelah itu direndam dengan larutan HCl 2 % selama 10 menit, tanpa di oven. Setelah 10 menit akar tidak dicuci lagi dan langsung diganti dengan larutan staining (gliserin dan aquades dengan perbandingan 70 : 30 %), ditambah dengan trypan blue 0.25 % selanjutnya di oven selama 10 menit dengan suhu 90°C. Larutan staining dibuang dan diganti dengan larutan distaining (larutan staining tanpa Trypan blue yaitu gliserin dan aquades dengan perbandingan 1 : 1) selama semalam. Potongan akar disusun pada kaca preparat sebanyak 10 potong akar. Potongan akar diamati pada kaca preparat untuk setiap bidang pandang. Bidang pandang yang terinfeksi ditunjukkan dengan adanya tanda seperti hifa, arbuskula maupun vesikula. Persentase akar terinfeksi dihitung dengan rumus:

% terinfeksi = ∑ bidang pandang yang terinfeksi∑ keseluruhan bidang pandang

×100%

(Alkareji, 2008)

34

The Institute of Mycorhizal Research and Development, USDA forest service telah membuat klasifikasi banyaknya infeksi oleh endomikoriza menjadi 5 kelas yaitu 0-5% = kelas 1, 6-25% = kelas 2, 26-50% = kelas 3, 51-75% = kelas 4 dan 76-100% = kelas 5 (Sari, 2008).

G. Analisis Total Petroleum Hydrocarbon (TPH) Sampel tanah ditimbang seberat ±5 gram dan ditambahkan Natrium sulfat, kemudian dimasukkan ke dalam Whatman® cellulose thimble dan ditutupi dengan glass wool secukupnya. 75 ml heksana dan 75 ml aseton dimasukkan ke dalam still pot dan dirangkai dalam soxhlet apparatus. Soxhlet aparatus dinyalakan selama 4 jam. Minyak yang telah terekstraksi dialirkan seluruhnya ke still pot. Berat kosong still pot ditimbang. Pelarut yang ada dalam still pot diuapkan dengan rotary evaporator selama 5 menit dengan suhu 80°C sampai pelarut menguap dan tertinggal minyak saja. Still pot ditimbang kembali setelah suhu stabil.

Gambar 3.44Rangkaian Soxhlete apparatus untuk ekstraksi TPH

Sampel tanah untuk kadar air ditimbang seberat ± 5 gram, dan dioven selama 4 j am dengan suhu 100°C. Sampel tanah kering ditimbang ulang dan dihitung kadar airnya.

35

Pengukuran kadar minyak yang dilaporkan adalah penurunan kadar minyak yang dinyatakan dalam persentase (%). Pengukuran kadar minyak tersebut menggunakan rumus:

PM = A – B

A × 100%

Keterangan: PM = penurunan kadar minyak (%) A = kadar minyak awal (mg/kg) B = kadar minyak setelah fitoremediasi (mg/kg)

(Bagariang, 2008)

3.3.4 Rancangan Penelitian Rancangan penelitian menggunakan Rancangan Acak

Kelompok Berblok 4 x 2 yang diulang sebanyak 3 kali. Tabel 3.22Rancangan percobaan dua faktor Perbandingan

konsentrasi crude oil

Penambahan Cendawan Mikoriza Arbuskular (CMA)

Tanpa penambahan CMA (G0)

Dengan penambahan CMA (G1)

M0 M0G0 M0G1 M1 M1G0 M1G1 M3 M3G0 M3G1 M10 M10G0 M10G1

Dua faktor dalam penelitian ini adalah:

1. Faktor perbandingan konsentrasi tanah terdiri dari 4 taraf M0 = tanpa penambahan crude oil M1 = dengan penambahan crude oil 1% M3 = dengan penambahan crude oil 3% M10 = dengan penambahan crude oil 10%

2. Faktor pemberian mikoriza G0 = tanpa penambahan CMA G1 = dengan penambahan CMA

36

Tiap perlakuan dilakukan pengulangan sebanyak 3 kali. Analisis statistika menggunakan Two Way Analysis of Variance dilanjutkan dengan uji Duncan dengan selang kepercayaan 95%.

37

BAB IV ANALISIS DATA DAN PEMBAHASAN

4.1 Analisis Data 4.1.1 Parameter Lingkungan

Penambahan crude oil menyebabkan penurunan pH pada tanah. Penurunan pH terjadi dari penambahan crude oil 0% sampai 10%, namun penurunan tidak beda nyata pada konsentrasi crude oil 1% dan 3%. Pada penambahan crude oil 10% penurunan pH sampai pH 5.

Tabel 4.11Rerata pH perlakuan

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 6,683az 6,767az 1 6,433bz 6,383bz 3 6,500bz 6,383bz

10 5,817cz 5,850cz Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Penambahan crude oil menyebabkan peningkatan kemampuan tanah untuk menahan kelembaban tanah. Kenaikan kelembaban terjadi secara gradual dari crude oil 0% sampai 10%. Sedangkan rerata suhu tanah pada tiap perlakuan hampir sama, yaitu 30°C.

38

Tabel 4.22Rerata kelembaban tanah perlakuan (skala 0-10) Crude oil

yang ditambahkan (%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 7,167az 6,083az 1 9,483bz 9,000bz 3 10,000bz 10,000bz

10 10,000bz 10,000bz Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Tabel 4.33Rerata suhu perlakuan (°C)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 30,000bz 30,722bz 1 29,444az 29,611az 3 29,611az 29,556az

10 29,889abz 30,389abz Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum. 4.1.2 Penurunan Total Petroleum Hydrocarbon (TPH)

Setelah Fitoremediasi Konsentrasi awal crude oil (v/w) yang ditambahkan pada

media tanah adalah 0%, 1%, 3%, dan 10%. Tidak seluruhnya merupakan komponen hidrokarbon yang dapat terekstraksi dengan metode yang digunakan, hanya 60% saja kandungan TPH yang terekstraksi dari crude oil Cepu. Nilai TPH (%) yang terekstraksi adalah 0%, 0,6%, 1,7%, dan 6%.

Fitoremediasi crude oil dengan Chrysopogon zizanioides selama 12 minggu menunjukkan tidak adanya perbedaan antara penurunan TPH pada C. zizanioides yang tidak diinfeksi Glomus

39

aggregatum dan yang diinfeksi dengan G. aggregatum. Pada perlakuan penambahan crude oil 1% TPH turun menjadi 0,432% (tanpa penambahan G. aggregatum) dan 0,376% (dengan penambahan G. aggregatum) dari TPH awal 0,6% dan pada penambahan crude oil 3% nilai TPH telah turun menjadi 0,772% (tanpa penambahan G. aggregatum) dan 1,151% (dengan penambahan G. aggregatum) dari TPH awal 1,7%. Pada perlakuan penambahan crude oil 10%, penurunan TPH sepenuhnya terjadi tanpa ada interaksi dengan tanaman, karena C. zizanioides mati pada pekan pertama. Hanya faktor penambahan crude oil yang berpengaruh terhadap nilai TPH setelah pekan ke-12, sementara penambahan G. aggregatum dan interaksi dua faktor tidak berpengaruh. Tiap perlakuan penambahan crude oil memiliki perbedaan yang nyata (P < 0,05). Tabel 4.44Nilai TPH pada pekan ke-12 masa penanaman C. zizanioides (%)

Crude oil yang ditambahkan (%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 0,100 0,031 1 0,432 0,376 3 0,772 1,151 10 4,144 4,433

Nilai penurunan TPH menunjukkan nilai tertinggi pada penambahan crude oil 3% dan tanpa penambahan G. aggregatum sebesar 54,587% dan nilai terendah pada penambahan crude oil 10% dengan penambahan G. aggregatum sebesar 26,117%. Namun, pada penambahan 10% tidak ada pengaruh dari C. zizanioides karena tanaman tersebut mati pada pekan pertama. Hanya pengaruh penambahan crude oil yang berpengaruh terhadap penurunan TPH. Penambahan G. aggregatum dan interaksi dua faktor tidak berpengaruh nyata terhadap penurunan TPH (P < 0,05).

40

Tabel 4.55Penurunan TPH pada pekan ke-12 setelah penanaman C. zizanioides (%)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 0,0000az 0,0000az 1 27,962abz 37,409abz 3 54,587bz 32,287bz

10 30,933abz 26,117abz Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Gambar 4.11 Nilai penurunan TPH pada pekan ke-12 setelah penanaman C. zizanioides

4.1.3 Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Biomassa C. zizanioides Biomassa tertinggi pada perlakuan penambahan crude oil

0% dengan penambahan G. aggregatum yaitu 17,261 gram dan biomassa terendah pada penambahan crude oil 10% karena tanaman mati pada pekan pertama. Penambahan masing-masing crude oil dalam media tanam dan G. aggregatum pada C. zizanioides menyebabkan terjadinya pengaruh perbedaan

-20

0

20

40

60

80

100

0 1 3 10

penu

runa

n T

PH (%

)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahanG. aggregatum

dengan penambahanG. aggregatum

41

biomassa secara nyata pada pekan ke-12 setelah penanaman, namun interaksi antara kedua faktor tidak nyata (P < 0,05).

Tabel 4.66Biomassa C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman (gram)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 11,784bz 17,261by 1 8,405bz 15,596by 3 9,743bz 15,751by

10 4,863az 7,283ay Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Gambar 4.22Biomassa C. zizanioides setelah 12 pekan penanaman.

C. zizanioides yang ditambahkan G. aggregatum menunjukkan kecenderungan memiliki biomassa yang lebih besar daripada perlakuan tanpa penambahan G. aggregatum. Cekaman crude oil menyebabkan adanya kemampuan C. zizanioides untuk menambah biomassa. Faktor perlakuan yang diberikan memiliki pengaruh yang berbeda terhadap biomassa tajuk dan akar. Kedua

0

4

8

12

16

20

0 1 3 10

biom

assa

(gra

m)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahanG. aggregatum

dengan penambahanG. aggregatum

42

faktor perlakuan berpengaruh nyata terhadap biomassa tajuk dan akar, tetapi tidak ada interaksi antar faktor yang berpengaruh.

Biomassa tajuk terbesar pada perlakuan penambahan crude oil 0% dengan penambahan G. aggregatum yaitu 11,948%. Pada biomassa tajuk, hanya perlakuan penambahan crude oil 1% dan 3% yang tidak berbeda nyata terhadap perlakuan lain (P < 0,05) sedangkan pada biomassa akar, hanya penambahan crude oil 10% yang berbeda dari perlakuan lain karena tanaman mati. Biomassa akar terbesar pada perlakuan penambahan crude oil 3% dengan penambahan G. aggregatum yaitu 7,134 gram. C. zizanioides yang tidak dicekam crude oil memiliki proporsi biomassa tajuk lebih tinggi daripada akar. Cekaman crude oil menyebabkan kecenderungan C. zizanioides untuk menumbuhkan lebih banyak akar sehingga semakin tinggi konsentrasi crude oil menyebabkan rasio perbandingan akar dan tajuk semakin mendekati satu. Rasio tajuk:akar tertinggi pada penambahan crude oil 0% tanpa penambahan G. aggregatum yaitu 2,353. Hanya faktor penambahan crude oil yang berpengaruh terhadap rasio tajuk:akar, sementara faktor penambahan G. aggregatum dan interaksi antar faktor tidak berpengaruh. Pada faktor penambahan crude oil, tiap perlakuan menunjukkan perbedaan yang nyata (P < 0,05).

Tabel 4.77Biomassa tajuk C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman (gram)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 8,369cy 11,948cz 1 5,183by 9,948bz 3 5,803by 8,618bz

10 2,589ay 3,889az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 % . Huruf a, b, da n c menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

43

Tabel 4.88Biomassa akar C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman (gram)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 3,515by 5,313bz 1 3,222by 5,648bz 3 3,940by 7,134bz

10 2,274ay 3,394az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 % . Huruf a, b, da n c menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum. Tabel 4.99Rasio biomassa tajuk:akar C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 2,353az 2,249az 1 1,609abz 1,761abz 3 1,473bz 1,208bz

10 1,138cz 1,146cz Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 % . Huruf a, b, da n c menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

44

Gambar 4.33Biomassa (a) tajuk dan (b) akar setelah 12 pekan penanaman

Gambar 4.44Rasio biomassa tajuk:akar setelah 12 pekan penanaman

4.1.4 Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Jumlah Tunas C. zizanioides Jumlah tunas tertinggi pada perlakuan penambahan crude

oil 0% dengan penambahan G. aggregatum yaitu rata-rata 13,333, sedangkan jumlah tunas terendah adalah pada perlakuan penambahan crude oil 1% dan tanpa penambahan G. aggregatum yaitu rata-rata 8,667. Cekaman crude oil memberikan pengaruh terhadap jumlah tunas yaitu pada penambahan crude oil 10% tunas berjumlah 0 karena tanaman mati. sedangkan penambahan

02468

101214

0 1 3 10

Bio

mas

sa ta

juk

(gra

m)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahan G. aggregatumdengan penambahan G. aggregatum

02468

101214

0 1 3 10

Bio

mas

sa a

kar

(gra

m)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahan G. aggregatumdengan penambahan G. aggregatum

1

1.4

1.8

2.2

2.6

3

0 1 3 10

rasi

o ta

juk:

alar

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahan G.aggregatum

dengan penambahan G.aggregatum

(a) (b)

45

G. aggregatum serta interaksi antara dua faktor tidak memberikan pengaruh terhadap jumlah tunas C. zizanioides (P < 0,05). Tabel 4.1010Jumlah tunas C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum (gr)

Dengan penambahan

G. aggregatum (gr)

0 13,000bz 13,333bz 1 8,667bz 12,333bz 3 13,000bz 12,333bz

10 0,000az 0,000az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 % . Huruf a, b, da n c menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Gambar 4.55Jumlah tunas C. zizanioides setelah 12 pekan penanaman

4.1.5 Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Panjang Tajuk C. zizanioides Panjang tajuk C. zizanioides yang diinfeksi G.

aggregatum lebih panjang daripada yang tidak diinfeksi G. aggregatum pada perlakuan yang ditambahkan cekaman crude oil. Cekaman crude oil menyebabkan penurunan panjang tajuk baik pada perlakuan yang ditambahkan G. aggregatum dan tanpa

0

4

8

12

16

0 1 3 10

Jum

lah

anak

an

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahan G.aggregatum

dengan penambahan G.aggregatum

46

penambahan G. aggregatum. Tajuk terpanjang pada perlakuan penambahan crude oil 0% dengan penambahan G. aggregatum yaitu 77,167 cm. Dua faktor perlakuan berpengaruh terhadap panjang tajuk C. zizanioides, tetapi interaksi antara dua faktor tidak berpengaruh. Penambahan crude oil 0% yang berbeda nyata terhadap perlakuan 1%, 3%, dan 10% (P < 0,05). Pada penambahan crude oil 10% panjang tajuk 0 cm karena tanaman mati.

Tabel 4.1111Panjang tajuk C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman (cm)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 74,333cz 77,167cy 1 58,500bz 71,500by 3 58,833bz 68,333by

10 0,000az 0,000ay Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Gambar 4.66Panjang tajuk C. zizanioides setelah 12 pekan penanaman

0

20

40

60

80

100

0 1 3 10

Panj

ang

taju

k (c

m)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahanG. aggregatumdengan penambahanG. aggregatum

47

Gam

bar

4.77

Panj

ang

taju

k C.

ziza

nioi

des t

anpa

pen

amba

han

G. a

ggre

gatu

m se

tela

h 12

pek

an p

enan

aman

48

Gam

bar

4.88

Panj

ang

taju

k C.

ziza

nioi

des d

enga

n pe

nam

baha

n G

. agg

rega

tum

sete

lah

12 p

ekan

pen

anam

an

49

4.1.6 Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Panjang Akar C. zizanioides C. zizanioides menumbuhkan akar terpanjang pada

penambahan crude oil 1% baik pada perlakuan dengan diinfeksi G. aggregatum atau tanpa diinfeksi G. aggregatum masing-masing 98,833 cm dan 92,167 cm. C. zizanioides cenderung menumbuhkan akar lebih panjang pada perlakuan yang ditambahkan crude oil 1% dan 3% daripada perlakuan dengan crude oil 0%. C. zizanioides bereaksi terhadap keberadaan crude oil dalam media tanam dengan memanjangkan akar. Penambahan crude oil yang berpengaruh nyata sedangkan penambahan G. aggregatum serta interaksi antara dua faktor tidak memberikan pengaruh terhadap panjang akar C. zizanioides (P < 0,05).

Tabel 4.1212Panjang akar C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman (cm)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 73,333bz 72,000bz 1 92,167cz 98,833cz 3 83,500bcz 80,667bcz

10 0,000az 0,000az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Gambar 4.99Panjang akar C. zizanioides setelah 12 pekan penanaman

0

50

100

150

0 1 3 10

panj

ang

akar

(c

m)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahanG. aggregatumdengan penambahanG. aggregatum

50

Gam

bar

4.10

10A

kar C

. ziza

nioi

des t

anpa

pen

amba

han

G. a

ggre

gatu

m se

tela

h 12

pek

an p

enan

aman

51

Gam

bar

4.11

11A

kar C

. ziza

nioi

des d

enga

n pe

nam

baha

n G

. agg

rega

tum

sete

lah

12 p

ekan

pen

anam

an

52

4.1.7 Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Jumlah Bakteri Bulk Soil dan Rizosfer C. zizanioides Jumlah bakteri tanah pada pekan ke-1 telah mengalami

perbedaan jumlah yang signifikan. Jumlah bakteri bulk soil terbanyak pada pekan ke-1 yaitu 20,766 x 106 CFU/gram tanah pada penambahan crude oil 0% dengan penambahan G. aggregatum dan 10,833 x 106 CFU/gram tanah pada penambahan crude oil 0% tanpa penambahan G. aggregatum. Cekaman crude oil pada tanah mempengaruhi jumlah bakteri tanah, semakin tinggi persentasi crude oil semakin rendah jumlah bakteri tanah. Penurunan jumlah bakteri terjadi pada seluruh perlakuan pada pekan ke-12. Jumlah bakteri bulk soil terbanyak pada pekan ke-12 adalah pada penambahan crude oil 1% tanpa penambahan G. aggregatum yaitu 0,697 x 106 CFU/gram tanah. Penambahan crude oil, G. aggregatum serta interaksi antara dua faktor tidak memberikan pengaruh nyata terhadap jumlah bakteri pada bulk soil C. zizanioides.

Jumlah bakteri rizosfer C. zizanioides pada pekan ke-12 lebih banyak daripada jumlah bakteri tanah pada seluruh perlakuan. Jumlah bakteri rizosfer terbanyak pada penambahan crude oil 0% tanpa penambahan G. aggregatum yaitu 152,7 x 106 CFU/gram akar sedangkan jumlah bakteri rizosfer paling rendah terjadi pada penambahan crude oil 0% dengan penambahan G. aggregatum yaitu 28,50 x 10 6 CFU/gram akar. Pemberian G. aggregatum memberikan efek negatif terhadap jumlah bakteri rizosfer pada penambahan crude oil 0%. Penambahan G. aggregatum tidak memberikan pengaruh terhadap jumlah bakteri rizosfer. Cekaman crude oil serta interaksi antara dua faktor berpengaruh terhadap jumlah bakteri rizosfer.

53

Tabel 4.1313Jumlah bakteri bulk soil (x 106 CFU/gram tanah) Crude oil

yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan G. aggregatum

Dengan penambahan G. aggregatum

Pekan ke-1

Pekan ke-12

Pekan ke-1

Pekan ke-12

0 10,833bz 0,680az 20,766bz 0,667az 1 8,000az 0,697az 7,319az 0,663az 3 2,477az 0,312az 9,670az 0,602az

10 3,067az 0,253az 2,912az 0,398az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

Tabel 4.1414Jumlah bakteri rizosfer C. zizanioides setelah pekan ke-12 penanaman (x 106 CFU/gram akar)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 152,7bz 28,50bz 1 37,00abz 53,30abz 3 38,40az 31,90az

10 0,000az 0,000az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

54

a) tanpa penambahan

G. aggregatum

b) dengan penambahan

G. aggregatum Gambar 4.1212Jumlah bakteri bulk soil (CFU/gram tanah) dalam media tanam C. zizanioides

Gambar 4.1313Perbandingan jumlah bakteri (a) rizosfer dan (b) bulk soil (CFU) setelah 12 pekan penanaman C. zizanioides.

0.1

0.5

2.5

12.5

0 2 4 6 8 10 12 14Jum

lah

bakt

eri (

x 10

6 CFU

)

pekan ke- 0% 1%3% 10%

0.1

0.5

2.5

12.5

0 2 4 6 8 10 12 14Jum

lah

bakt

eri (

x 10

6 CFU

)

pekan ke- 0% 1%3% 10%

0.1

0.5

2.5

12.5

62.5

0 1 3 10Jum

lah

bakt

eri (

x106 C

FU)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahan G. aggregatumdengan penambahan G. aggregatum

0.1

0.5

2.5

12.5

62.5

0 1 3 10

Jum

lah

bakt

eri (

x106 C

FU)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahan G. aggregatumdengan penambahan G. aggregatum

(b) (a)

55

4.1.8 Pengaruh Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G. aggregatum Terhadap Persentasi Infeksi Mikoriza pada C. zizanioides C. zizanioides yang tidak diinfeksi G. aggregatum

terinfeksi oleh mikoriza liar dalam tanah. Nilai infeksi tertinggi pada penambahan crude oil 0% dengan penambahan G. aggregatum yaitu 91,733%. Kedua faktor perlakuan berpengaruh terhadap infeksi mikoriza pada akar C. zizanioides tetapi interaksi antara dua faktor tidak berpengaruh. Crude oil berpengaruh negatif terhadap persentasi infeksi mikoriza pada C. zizanioides. Persentasi infeksi mikoriza berupa hifa, spora, dan vesikel mengalami penurunan seiring dengan semakin banyaknya crude oil yang ditambahkan. Hanya perlakuan penambahan crude oil 0% yang berbeda nyata terhadap perlakuan lain (P < 0,05).

Tabel 4.1515Infeksi mikoriza pada akar C. zizanioides pada pekan ke-12 setelah penanaman (%)

Crude oil yang ditambahkan

(%)

Tanpa penambahan

G. aggregatum

Dengan penambahan

G. aggregatum 0 72,474cy 91,733cz 1 34,845by 65,114bz 3 29,508by 56,853bz

10 0az 0az Keterangan: Huruf yang berbeda menunjukkan pengaruh berbeda nyata dalam uji lanjut Duncan pada selang kepercayaan 95 %. Huruf a, b, c, dan d menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap perlakuan penambahan crude oil; huruf y dan z menunjukkan pengaruh beda nyata terhadap penambahan G. aggregatum.

56

Gambar 4.1414Persentasi infeksi mikoriza pada C. zizanioides setelah 12 minggu masa penanaman

a)

b)

Gambar 4.1515Infeksi mikoriza a) vesikel dan b) hifa pada akar C. zizanioides (perbesaran 100x) 4.2 Pembahasan 4.2.1 Efek Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Pertumbuhan C. zizanioides Perlakuan bertujuan untuk mengetahui pengaruh tanah

yang dikontaminasi crude oil dari Bojonegoro, Jawa Timur serta pengaruh penambahan G. aggregatum terhadap pertumbuhan C. zizanioides dan penurunan TPH.

Crude oil mempengaruhi pertumbuhan C. zizanioides secara negatif yang diakibatkan oleh fitotoksisitas crude oil (Brandt, 2003). C. zizanioides tidak dapat sintas pada level cekaman crude oil 10%. Namun masih tetap bisa sintas pada

020406080

100

0 1 3 10infe

ksi m

ikor

iza

(%)

Crude oil yang ditambahkan (%)

tanpa penambahanG. aggregatumdengan penambahanG. aggregatum

57

cekaman crude oil 5% (Brandt, 2003). Beberapa spesies dari familia Poaceae seperti Brachiaria brizantha, Cyperus aggregatus, dan Eleusine indica juga sintas pada cekaman crude oil 5% (Merkl, et al, 2005), sementara Poa pratensis tidak sintas pada cekaman crude oil 0,1% (Alarcon, 2006). Vicia faba bisa menoleransi cekaman crude oil sampai 10% (Radwan, 1998, dalam Brandt, 2003). Batas konsentrasi crude oil yang umumnya dapat ditoleransi oleh tanaman dari familia Poaceae adalah 4% (Kulakow, 2006 dalam Van Epps, 2006).

Hasil menunjukkan bahwa C. zizanioides menunjukkan penurunan biomassa seiring dengan penambahan konsentrasi crude oil. Hal yang sama juga dilaporkan oleh Korade dan Fulekar (2008) terhadap Lolium multiflorum yang dipaparkan pada anthracene. Ada kemungkinan bahwa kondisi buruk tanaman pada tanah yang terkontaminasi merupakan hasil dari absorpsi komponen PHC yang bersifat toksik, fitotoksisitas dari PHC umumnya berdampak pada penurunan produksi biomassa (Chaıneau et al., 1997; Salanitro et al., 1997 dalam Merkl, 2005). Setelah berada di dalam tanaman, PHC dapat merusak membran sel. Reduksi tingkat transpirasi dan fotosintesis dan peningkatan tingkat respirasi jarang diteliti, namun efek minyak pada tanaman tergantung pada mekanisme epidermal dan seluler dari spesies (Baker, 1970 dalam Brandt, 2003).

Respon C. zizanioides terhadap cekaman crude oil adalah dengan menurunkan rasio biomassa tajuk:akar. C. zizanioides cenderung memperkecil biomassa tajuk ketika ditambahkan crude oil. Tajuk berperan dalam proses fotosintesis. Sementara biomassa akar bertambah dengan semakin tingginya konsentrasi crude oil. Biomassa akar mempengaruhi volume rizosfer. Penambahan volume rizosfer meningkatkan potensi jumlah populasi bakteri rizosfer bertambah. Dengan bertambahnya populasi bakteri rizosfer diharapkan laju penurunan TPH semakin bertambah akibat aktivitas bakteri rizosfer dalam mendegradasi PHC.

58

Jumlah tunas tidak terpengaruh oleh penambahan crude oil, hal ini merupakan tipikal respons dari C. zizanioides dengan mempertahankan kemampuannya untuk menumbuhkan tunas dalam cekaman crude oil seperti yang dilaporkan oleh Brandt (2003). Panjang tajuk mengalami penurunan akibat cekaman crude oil, namun respons yang berkebalikan tampak pada panjang akar. Akar bertambah panjang dengan penambahan crude oil 1% tetapi mengalami penurunan kembali pada penambahan crude oil 3%. Panjang akar berkorelasi dengan kemampuan tanaman untuk mendapatkan air dan nutrisi (Barber, 1995; Bouma et al. 2000 dalam Merkl, 2005). Pemanjangan akar ini dapat diakibatkan karena akar berusaha mendapatkan nutrisi yang berkurang bioavailabilitasnya akibat keberadaan PHC yang bersifat hidrofobik menghambat transfer oksigen, ketersediaan air dan nutrisi dalam tanah (Kirk, et al 2005). Kontaminan hidrofobik seperti PAH mudah teradsorbsi oleh akar (Corgie et al, 2003 dan Schwab, et al, 1998 dalam Gerhardt et al, 2009). Saat akar tumbuh, akar akan melakukan penetrasi ke dalam tanah dan terpapar pada kontaminan yang mungkin sebelumnya tidak terjangkau (Parrish, 2005). Namun konsentrasi crude oil yang bertambah dapat menurunkan panjang akar kembali mungkin akibat absorpsi crude oil semakin tinggi (Merkl, 2005). Kriteria spesies tanaman yang digunakan untuk fitoremediasi adalah tanaman dengan sistem perakaran yang baik dan bercabang banyak (Glick, 2003 da lam Merkl, 2005). Selain panjang akar, Brandt (2003) menunjukkan bahwa PHC berdampak pada negatif struktur akar, diameter akar, luas permukaan akar, dan volume rizosfer C. zizanioides, sementara Merkl (2005) menunjukkan hasil yang serupa pada Brachiaria brizantha dan Cyperus aggregatus yaitu permukaan akar menjadi lebih kasar dan diameter akar menjadi lebih kecil.

59

4.2.2 Efek Penambahan G. aggregatum pada C. Zizanioides dalam Cekaman Crude Oil

C. zizanioides yang diinfeksikan dengan G. aggregatum memiliki biomassa lebih tinggi daripada yang tidak diinfeksikan dengan G. aggregatum. Biomassa pada C. zizanioides yang diinfeksikan pada G. aggregatum lebih tinggi karena mikoriza mampu membantu menyediakan unsur hara bagi tanaman yang terbatas akibat keberadaan PHC melalui ekstensi hifa yang menembus tanah dan memungkinkan terpapar dengan mineral yang dibutuhkan dalam tanah. Keberadaan CMA dalam rizosfer meningkatkan aktivitas dehidrogenase, fosfatase, dan nitrogenase. Aktivitas enzim-enzim ini menyebabkan peningkatan ketersediaan nutrisi dalam tanah. Pada tanah yang terkontaminasi PHC, unsur C sangat berlimpah sementara unsur lain yang larut dalam air terbatas akibat PHC yang bersifat hidrofobik (Robertson, et al, 2007). CMA tidak hanya menyediakan tanaman dengan air dan senyawa mineral serta memperbaiki struktur tanah saja tetapi juga telah dilaporkan bahwa CMA mampu berfungsi sebagai filter, menghalangi senyawa toksik dengan miselium yang berdampak pada berkurangnya efek toksik bagi tanaman. Selain itu, CMA mempengaruhi fisiologi tanaman inang dengan membuat tanaman tersebut lebih tahan terhadap patogen, polusi, salinitas, kekeringan, dan faktor cekaman lingkungan lainnya (Korade dan Fulekar, 2009).

Wang et al (2005) dalam Wenzel (2009) menunjukkan bahwa peningkatan produksi biomassa Elsholtzia splendens pada tanah tercemar PHC yang diinokulasikan dengan strain tunggal CMA (G. claedonium) atau campuran dari lima spesies CMA yang berbeda. Efektivitas mikoriza tidak sama pada setiap tanaman yang diinfeksi bahkan pada tiap parameter pertumbuhan dapat mengahasilkan respon yang berbeda. Hal ini sesuai dengan pendapat Powell dan Bagyaraj (1984) dalam Alkareji (2008) yang menyatakan bahwa karakteristik pengaruh CMA dalam pengambilan dan transport nutrisi untuk pertumbuhan tanaman berbeda untuk setiap parameter, hal ini tergantung pada distribusi

60

hifa eksternal dalam tanah, kemampuan CMA untuk membentuk infeksi di luar perkembangan sistem akar, kemampuan hifa dalam mengabsorpsi dari tanah dalam jangka waktu mekanisme transpor nutrisi di sepanjang hifa ke dalam akar. Namun, beberapa bukti menunjukkan bahwa inokulasi mikoriza pada tanaman yang ditumbuhkan pada tanah tercemar tidak selalu bersifat positif. Sebagai contoh, pada penelitian tentang CMA G. mossae yang diinokulasikan ke Cannabis sativa yang ditumbuhkan pada tanah yang terkontaminasi logam menunjukkan penurunan biomassa dan penurunan ini terkait dengan tingkat infeksi mikoriza (Citterio et al; 2005 dalam Wenzel, 2009).

Tajuk C. zizanioides juga mengalami peningkatan pada perlakuan penambahan G. aggregatum. Hasil yang sama juga dilaporkan oleh Punamiya et al. (2010) dengan menambahkan G. mossae pada C. zizanioides dalam cekaman Pb. Penambahan panjang tajuk berpotensi meningkatkan laju fotosintesis. Selain itu, C. zizanioides yang diinfeksikan dengan G. mossae menunjukkan peningkatan jumlah klorofil a dan b (Punamiya et al, 2010).

Hasil menunjukkan bahwa hifa mikoriza yang berasosiasi pada akar C. zizanioides juga terpengaruh secara negatif terhadap konsentrasi crude oil. Hal yang sama juga dilaporkan oleh Cabello (1997). Kirk dan Moutoglis (2005) menunjukkan bahwa pada genus Glomus terjadi penurunan hifa ekstraradikal yang terpapar PHC akibat interferensi toksisitas PHC secara langsung dengan membran fungi, walaupun fungi dianggap lebih toleran terhadap zat kimia polutan daripada bakteri karena struktur dindingnya yang berbeda (Blakely et al, 2002 dalam Robertson et al, 2007). Beberapa organisme seperti Saccharomyces cerevisiae dapat beradaptasi terhadap keberadaan kontaminan lipofilik dengan mengubah komposisi membran selnya sehingga mampu menolak kontaminan hidrofobik (Park et al., 1988 dalam Kirk dan Moutoglis, 2005).

Pada C. zizanioides yang tidak diinfeksikan dengan G. aggregatum terdapat infeksi mikoriza lain yang berasal dari

61

media tanah atau sumber lain karena C. zizanioides merupakan tanaman yang mudah sekali untuk diinfeksi dengan mikoriza (Leaungvutiviroj, 2010). Namun, angka infeksi tidak sebesar pada C. zizanioides yang diinfeksikan dengan G. aggregatum yang dipengaruhi oleh karakter tanah, jenis tanaman inang (Leaungvutiviroj, 2010) dan lama infeksi awal (Hart dan Reader, 2002).

4.2.3 Efek Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Jumlah Bakteri Bulk Soil dan Rizosfer C. zizanioides Pada pekan ke-1 jumlah bakteri bulk soil menunjukkan

perbedaan yang signifikan pada perlakuan dengan jumlah bakteri tertinggi masing-masing pada perlakuan penambahan crude oil 0% yaitu 1,0833 x 107 CFU pada perlakuan tanpa penambahan G. aggregatum dan 2,0766 x 10 8 CFU pada perlakuan tanpa penambahan G. aggregatum. Peningkatan konsentrasi crude oil menyebabkan penurunan jumlah bakteri bulk soil. Penurunan jumlah bakteri ini akibat perubahan media tumbuh bakteri dan sifat hidrofobik dari PHC. Masuknya hidrokarbon ke dalam membran sel mengubah struktur membran dengan mengubah fluiditas dan konformasi protein dan menyebabkan gangguan pada fungsi pemindahan energi, pengubahan ikatan membran dan aktivitas enzim yang menyertainya (Van Hamme et al., 2003).

Pada pekan ke-12 perbedaan jumlah bakteri pada penambahan crude oil 0%, 1%, 3%, dan 10% tidak signifikan (P < 0,05). Hal ini dimungkinkan karena adanya adaptasi bakteri terhadap cekaman crude oil. Pada respons cekaman, bakteri mungkin membentuk biofilms, mengubah hidrofobisitas permukaan sel untuk mengatur masuknya hidrokarbon ke dalam sel, sedangkan pada bakteri gram negatif mendapatkan perlindungan lebih dari komponen lipopolisakarida yang memiliki resistensi transfer tinggi terhadap senyawa lipofilik (Van Hamme et al., 2003). Bakteri membutuhkan lebih banyak energi untuk melakukan mekanisme pemulihan akibat kehilangan

62

integritas membran yang diakibatkan dari pemisahan senyawa lipofilik. Sumber-sumber energi yang dibutuhkan oleh bakteri lebih melimpah pada rizosfer C. zizanioides akibat adanya eksudat yang dikeluarkan oleh akar C. zizanioides.

Keberadaan akar C. zizanioides mampu meningkatkan jumlah bakteri dalam tanah dengan terbentuknya wilayah rizosfer. Setelah 12 pekan penanaman, jumlah bakteri dalam bulk soil pada kisaran 105 CFU sedangkan jumlah bakteri dalam rizosfer ada pada kisaran 107 dengan nilai tertinggi pada perlakuan penambahan crude oil 0% tanpa penambahan G. aggregatum yaitu 1,527 x 108 CFU. Menurut Piriyaprin et al., (2002), bakteri dalam rizosfer C. zizanioides juga memiliki jumlah yang lebih banyak daripada bulk soil pada tanah yang bersifat salin dan asam. Akar serabut C. zizanioides menghasilkan beberapa substansi organik seperti karbohidrat larut, asam organik, asam amino dan hormon pertumbuhan yang berfungsi sebagai sumber energi dan nutrisi bagi pertumbuhan bakteri rizosfer (Russell, 1982; Lynch, 1990 dalam Piriyaprin, 2002).

Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa jumlah bakteri rizosfer lebih banyak dari pada jumlah bakteri bulk soil yang menandakan bahwa ada efek positif akar terhadap jumlah bakteri dalam tanah. Jumlah bakteri rizosfer dan bulk soil menurun dengan bertambahnya konsentrasi crude oil dalam tanah. Toksisitas PHC menekan aktivitas dan proliferasi dari mikroorganisme rizosfer. Berdasarkan penelitian Cai (2010) menunjukkan hasil yang serupa, yaitu pada bakteri rizosfer pada Impatiens balsamina L.

Ketersediaan dan isi nutrisi pada materi organik merupakan faktor kunci yang mempengaruhi biomassa mikroba dan komposisi komunitas (Tiquia et al, 2002). Faktor utama lain yang mempengaruhi distribusi dan kelimpahan komunitas mikroba tanah yaitu: sifat dari lingkungan tanah (seperti pH, suplai O2 dan ketersediaan air dan nutrisi seperti N, P, Fe); faktor yang mempengaruhi penyebaran (seperti struktur tanah, stabilitas mikro-agregat, dan jalur penyebaran); dan kontrol perubahan

63

populasi (seperti predasi nematoda dan protozoa, kontrol pada enzim litik) (Tiedje et al, 1999 dalam Robertson et al, 2003). Penambahan PHC mengubah tiga karakteristik fundamental ini. Contoh, suplai O2 kadang menurun, pergerakan air terhambat dan fauna tanah termasuk nematoda dan protozoa menjadi hilang dari ekosistem yang tercemar.

Pada perlakuan penambahan G. aggregatum, jumlah bakteri rizosfer tidak berbeda nyata dengan jumlah bakteri rizosfer pada perlakuan tanpa G. aggregatum. G. aggregatum hanya mempengaruhi pertumbuhan akar dari C. zizanioides yang menyebabkan volume rizosfer bertambah sehingga dimungkinkan bahwa jumlah bakteri rizosfer keseluruhan dalam satu pot perlakuan bertambah. Pada penambahan crude oil 0% dengan penambahan G. aggregatum terjadi penurunan jumlah bakteri rizosfer. Hal ini dapat diakibatkan karena kompetisi dari CMA yang ditambahkan dengan bakteri rizosfer untuk mendapatkan sumber nutrisi yang berasal dari eksudat akar (Van Hamme, et al., 2003).

4.2.4 Efek Konsentrasi Crude Oil dan Penambahan G.

aggregatum Terhadap Fitoremediasi PHC oleh C. zizanioides Laju penurunan TPH tertinggi pada perlakuan tanpa

penambahan G. aggregatum terjadi pada perlakuan penambahan crude oil 3% sementara pada perlakuan dengan penambahan G. aggregatum terjadi pada perlakuan 1%. Studi yang dilakukan oleh Joner (2001) serta Joner dan Leyval (2003), sebaliknya menunjukkan bahwa penambahan CMA dapat meningkatkan laju degradasi kontaminan organik. Hasil yang berbeda ini mungkin diakibatkan karena konsentrasi nutrisi mineral seperti N dan P turun pada tanah rizosfer dan non-rizosfer yang dikolonisasi oleh CMA (Bending dan Read, 1995; Joner et al., 1995; Dieffenbach dan Matzner, 2000 dalam Joney dan Leyval 2006), dan degradasi dari PAH telah beberapa kali dilaporkan terhambat sampai unsur N dan P dalam tanah tersedia (Carmichael dan Pfaender, 1997;

64

Liebeg dan Cutright, 1999; Joner et al., 2002 dalam Joner dan Leyval, 2006). Hal ini ditunjukkan dengan terjadinya perubahan warna keunguan pada tajuk C. zizanioides pada perlakuan penambahan G. aggregatum setelah dipaparkan pada crude oil yang menunjukkan adanya defisiensi fosfor. Fenomena ini juga diteliti pada mineralisasi material organik alam pada ekosistem hutan. Nitrogen merupakan hara mineral tunggal yang membatasi aktivitas mikroba dalam tanah dan degradasi polutan organik oleh mikroba dalam tanah (Joner dan Leyval, 2006). Oleh karena itu, perlu penambahan N dan P yang cukup untuk membantu mempercepat degradasi PHC dalam tanah.

C. zizanioides mampu melakukan remediasi langsung terhadap PHC dalam tanah melalui mekanisme pengeluaran enzim oleh akar yang mampu mentransformasi kontaminan organik dengan mengakatalisasi reaksi kimia dalam tanah (Frick et al, 1999 da lam Ndimele, 2010). Schnoor et al (1995) dalam Ndimele (2010) mengidentifikasi enzim tanaman yang digunakan sebagai agen pentransformasi kontaminan yaitu termasuk dehalogenase, nitroreduktase, peroksidase, lakkase, dan nitrilase. Proses remediasi langsung lain adalah melalui mekanisme fitovolatilisasi, namun mekanisme ini hanya terjadi pada senyawa karbon sederhana yang mudah menguap (Ndimele, 2010).

Selain itu, tanaman melakukan remediasi PHC secara tidak langsung dengan berasosiasi dengan organisme lain yang berasosiasi dengan akar. Akar memiliki efek positif terhadap proses remediasi tanah karena membantu membentuk energi yang disediakan oleh deposit akar, yang mendorong dan mengubah proses degradasi mikroba yaitu mempermudah pertumbuhan diauksik, ko-oksidasi, dan perubahan tidak spesifik pada komposisi mikroba. Selain itu, keberadaan akar mengubah kondisi fisik dan kimia tanah untuk mendorong degradasi oleh mikroba (seperti memperbanyak ketersediaan O2) (Joner, et al, 2006). Kelimpahan jumlah bakteri dalam rizosfer yang lebih banyak daripada dalam bulk soil berpotensi meningkatkan degradasi PHC karena mekanisme utama untuk mendegradasi

65

PHC dalam fitoremediasi adalah melalui rizodegradasi (Brandt, 2003; Robertson, et al 2007; Korade dan Fulekar, 2008). C. zizanioides memiliki kelimpahan biodiversitas bakteri pada rizosfernya (Siripin, 2000 dalam Brandt, 2003). Beberapa jenis mikroorganisme yang ditemukan dalam rizosfer C. zizanioides adalah Bacillus sp., Streptomyces sp., dan Aspergilus sp. (Piriyaprin, 2002).

Namun pada hasil menunjukkan bahwa tidak ada pengaruh bertambahnya volume rizosfer pada perlakuan yang diinokulasikan dengan G. aggregatum terhadap penurunan TPH. Hal yang sama juga dilaporkan oleh Brandt (2003) bahwa volume rizosfer tidak mempengaruhi penurunan TPH, tetapi rizosfer merupakan sistem yang penting dalam fitoremediasi crude oil karena meningkatkan populasi bakteri yang berpotensi menurunkan PHC. Degradasi PHC telah menurunkan pH dalam tanah yang tercemar PHC karena produksi asam organik sebagai intermediet dari degradasi PHC (Lawlor et al., 1997 dalam Brandt, 2003) sehingga penurunan TPH terakselerasi pada tanah yang terkontaminasi daripada yang tidak terkontaminasi. Asidifikasi meningkat karena keberadaan tanaman. Pertama-tama, tanaman mengeluarkan proton-proton dan asam organik. Kemudian, aktivitas mikroba meningkat akibat adanya efek rizosfer pada tanaman, menyebabkan peningkatan konsentrasi asam karbon dalam tanah (Gisi et al, 1997 dalam Brandt, 2003). Peningkatan kelembaban terjadi pada tanah yang tercemar PHC karena air sulit diserap oleh C. zizanioides dalam tanah dengan kandungan senyawa hidrofobik yang tinggi (Brandt, 2003).

67

BAB V KESIMPULAN

5.1 Kesimpulan Hasil dari penelitian dapat diambil kesimpulan sebagai

berikut : 1. Nilai laju penurunan TPH tertinggi setelah 3 bulan perlakuan

adalah pada penambahan crude oil 3% tanpa penambahan G. aggregatum yaitu sebesar 54,586%

2. Konsentrasi crude oil berpengaruh terhadap kemampuan C. zizanioides dalam fitoremediasi crude oil.

3. Penambahan G. aggregatum mempengaruhi volume rizosfer tetapi tidak mempengaruhi penurunan TPH dan jumlah bakteri rizosfer per gram akar pada C. zizanioides.

5.2 Saran Perlu dilakukan penelitian mengenai proses fisiologis fitoremediasi crude oil oleh C. zizanioides yang ditambahkan mikoriza G. aggregatum sehingga diketahui mekanisme fitoremediasi yang diinduksi dengan mikoriza.

77

LAMPIRAN Lampiran 1. Komposisi Media

A. Nutrient Agar (1000 ml) Agar 15,00 gram Pepton 5,00 gram Meat extract 3,00 gram NaCl 0,50 gram

B. Media Bushnell-Haas (1000 ml)

MgSO4.7H2O 0,41 gram KH2PO4 1,00 gram K2HPO4 1,00 gram FeCl3.6H2O 0,04 gram CaCl 0,02 gram NH4NO3 1,00 gram

(Atlas, 2005 dengan perubahan dari Laboratorium Mikrobiologi

BTL-BPPT)

78

Lampiran 2. Skema Kerja

A. Uji Viabilitas Mikoriza

– diambil sebanyak 100 gram – diletakkan di polybag – ditanami biji jagung sebagai inang – diambil 10 gram inokulum (pengenceran 10-1) – dicampurkan dengan 90 gram tanah steril – ditanami biji jagung sebagai inang – diambil 10 gram inokulum (pengenceran 10-2) – dicampurkan dengan 90 gram tanah steril – diteruskan seri pengencerannya sampai 10-10 – diambil tanaman inang setelah ± 1 bulan. – dibersihkan perakaran inang dari tanah – dilakukan pengamatan infeksi akar

B. Penyiapan Tanaman

– dipotong, panjang daun 20 cm dan akar 2 cm – ditanam dalam media zeolit dalam compound

pot selama 2 bulan – ditambahkan G. aggregatum 4 gram sesuai

perlakuan – dilapisi kembali dengan media tanam – diberi pupuk Hyponex® dosis 1 gram/liter dan

disiram – ditumbuhkan pada rumah kaca

Inokulum mikoriza

Chrysopogon zizanioides

Hasil

Hasil

79

C. Pengairan dan Pemupukan

– disirami air 100 ml – dipupuk dengan pupuk Hyponex – dilakukan pemupukan bersamaan dengan

pengairan

D. Pengambilan Sampel Tanah

– diaduk homogen – diambil 10 gram – disimpan dalam kulkas bersuhu 4°C sampai

penanganan selanjutnya

E. Perhitungan Biomassa

– ditimbang untuk mengetahui berat basahnya – dikeringkan dalam oven pada suhu 60°C

sekitar 3 hari – dikeluarkan dari oven – ditimbang – dihitung biomassanya

Hasil

Tajuk dan akar C. zizanoides

Hasil

Hasil

Chrysopogon zizanioides

Media tanah

80

F. Kadar Air (Kelembaban) dan Analisis pH – ditancapkan ujungnya pada tanah – ditekan tombol indikator – dicatat nilai kelembaban dan pHnya

G. Suhu Tanah – ditancapkan ujungnya pada tanah – ditunggu sekitar 5 menit – dicatat suhu yang tertera

H. Analisis TPC bulk soil

– diambil 1 gram secara acak dari bulk soil – ditambahkan 9 ml media BH – divorteks sampai terbentuk suspensi (seri

pengenceran 10-1) – ditambahkan 9 ml media BH kembali sampai

seri pengenceran 10-6 – diambil 100 μl dari pengenceran 10-4 sampai

10-6 – diratakan ke dalam cawan petri berisi media

Nutrient Agar – diinkubasi selama 24 jam pada suhu 28°C

dalam posisi terbalik – dihitung koloni yang terbentuk

Soil tester

Hasil

Termometer

Hasil

tanah

Hasil

81

I. Analisis TPC rizosfer

– diambil 0,1 gram secara acak – ditambahkan 9 ml media BH – divorteks sampai terbentuk suspensi (seri

pengenceran 10-1) – ditambahkan 9 ml media BH kembali sampai

seri pengenceran 10-6 – diambil 100 μl dari pengenceran 10-4 sampai

10-6 – diratakan ke dalam cawan petri berisi media

Nutrient Agar – diinkubasi selama 24 jam pada suhu 28°C

dalam posisi terbalik – dihitung koloni yang terbentuk

J. Perhitungan Infeksi Akar In Vitro

– dipotong sepanjang 1 cm secara acak. – dicuci dengan air – dimasukkan ke dalam tabung film – direndam dalam KOH 2,5% – dimasukkan ke oven selama 10 menit dengan

suhu 90°C – dibuang larutan KOH – dicuci kembali dengan air – ditambahkan larutan staining (gliserin :

aquades = 70% : 30%) – ditambahkan trypan blue 0,25% – dioven 10 menit dengan suhu 90°C – dibuang larutan staining

Akar C. zizanioides

Akar dan tanah yang menempel pada akar

Hasil

82

– ditambahkan larutan distaining (larutan staining tanpa trypan blue)

– dibiarkan selama semalam – diamati dalam mikroskop untuk tiap bidang

pandang – dihitung persentase akar terinfeksinya

K. Analisis hidrokarbon petroleum total (Total Petroleum

Hydrocarbon/TPH) – diambil seberat 5 gram – ditambah Natrium sulfat – dimasukkan ke dalam Whatman® cellulose

thimble – ditutupi dengan glass wool secukupnya – ditambah 75 ml heksana dan 75 ml aseton

dengan – dirangkai dalam soxhlet apparatus dan

dinyalakan selama 4 jam. – larutan dipindahkan ke still pot yang telah

ditimbang beratnya – diuapkan pelarut dengan rotary evaporator

selama 5 menit dengan suhu 80°C – ditimbang kembali still pot dengan suhu stabil. – dihitung kadar TPH dengan rumus TPH

Hasil

Hasil

Sampel tanah

83

Lampiran 3. Dokumentasi

Pengadukan media tanam

Chrysopogon zizanioides dalam

compound pot

Rotary evaporator

Crude oil yang telah terekstraksi

Analisis TPC di laminar air flow

Crude oil

84

Lampiran 4. Hasil Two-Way Analysis Of Variance

UNIANOVA penurunan_TPH BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:penurunan_TPH

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 .0000000 .00000000 3

1.00 27.9616967 27.42434174 3

3.00 54.5867500 35.66165039 3

10.00 30.9329767 20.72285491 3

Total 28.3703558 29.23774088 12

G1 .00 .0000000 .00000000 3

1.00 37.4087990 32.23398171 3

3.00 32.2866967 42.40045897 3

10.00 26.1172767 5.12908459 3

Total 23.9531931 27.32479726 12

Total .00 .0000000 .00000000 6

1.00 32.6852478 27.26213421 6

3.00 43.4367233 37.10806658 6

10.00 28.5251267 13.75699748 6

Total 26.1617745 27.76724562 24

85

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:penurunan_TPH

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 7100.617a 7 1014.374 1.526 .228 Intercept 16426.523 1 16426.523 24.718 .000 Glomus 117.068 1 117.068 .176 .680 Crude_oil 6186.021 3 2062.007 3.103 .056 Glomus * Crude_oil 797.529 3 265.843 .400 .755 Error 10632.841 16 664.553 Total 34159.981 24 Corrected Total 17733.458 23 a. R Squared = .400 (Adjusted R Squared = .138)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

penurunan_TPH

Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

.00 6 .0000000 10.00 6 28.5251267 28.5251267 1.00 6 32.6852478 32.6852478 3.00 6 43.4367233

Sig. .053 .357

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 664.553. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

86

UNIANOVA Biomassa BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Biomassa

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 5.8921167 .68679757 3

1.00 4.2027333 .52696713 3

3.00 4.8713833 1.53123376 3

10.00 2.4314833 .94812099 3

Total 4.3494292 1.56794774 12

G1 .00 8.6304500 1.60916735 3

1.00 7.7981667 1.47848607 3

3.00 7.8759167 .67026851 3

10.00 3.6414000 1.41151719 3

Total 6.9864833 2.34443933 12

Total .00 7.2612833 1.86386293 6

1.00 6.0004500 2.20535449 6

3.00 6.3736500 1.95595011 6

10.00 3.0364417 1.26320829 6

Total 5.6679563 2.37035810 24

87

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Biomassa

Source Type III Sum of

Squares Df Mean Square F Sig.

Corrected Model 106.808a 7 15.258 10.889 .000 Intercept 771.017 1 771.017 550.237 .000 Glomus 41.724 1 41.724 29.777 .000 Crude_oil 60.433 3 20.144 14.376 .000 Glomus * Crude_oil 4.651 3 1.550 1.106 .376 Error 22.420 16 1.401 Total 900.245 24 Corrected Total 129.228 23 a. R Squared = .827 (Adjusted R Squared = .751)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Biomassa Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

10.00 6 3.0364417 1.00 6 6.0004500

3.00 6 6.3736500

.00 6 7.2612833

Sig. 1.000 .098

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 1.401. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

88

UNIANOVA Rasio_Tajuk_per_Akar BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Rasio_Tajuk_per_Akar

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 2.3969463 .37172365 3

1.00 1.6406577 .23363766 3

3.00 1.4713700 .09794689 3

10.00 1.3296647 .45949259 3

Total 1.7096597 .51007052 12

G1 .00 2.3129963 .33644276 3

1.00 1.7587763 .18060402 3

3.00 1.2174903 .10687495 3

10.00 1.2318327 .35015271 3

Total 1.6302739 .52179645 12

Total .00 2.3549713 .32041093 6

1.00 1.6997170 .19765463 6

3.00 1.3444302 .16656171 6

10.00 1.2807487 .36927967 6

Total 1.6699668 .50625182 24

89

Tests of Between-Subjects Effects Dependent Variable:Rasio_Tajuk_per_Akar

Source Type III Sum of Squares Df Mean Square F Sig.

Corrected Model 4.508a 7 .644 7.431 .000 Intercept 66.931 1 66.931 772.281 .000 Glomus .038 1 .038 .436 .518 Crude_oil 4.365 3 1.455 16.790 .000 Glomus * Crude_oil .105 3 .035 .403 .753 Error 1.387 16 .087 Total 72.826 24 Corrected Total 5.895 23 a. R Squared = .765 (Adjusted R Squared = .662)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Rasio_Tajuk_per_Akar Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2 3

10.00 6 1.2807487 3.00 6 1.3444302 1.3444302 1.00 6 1.6997170 .00 6 2.3549713

Sig. .713 .053 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .087. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

90

UNIANOVA Biomassa_akar BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Biomassa_akar

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 1.7575333 .34189496 3

1.00 1.6111667 .33262180 3

3.00 1.9700667 .61971291 3

10.00 1.1370500 .71031698 3

Total 1.6189542 .55239782 12

G1 .00 2.6563833 .76006221 3

1.00 2.8241667 .50199379 3

3.00 3.5670833 .47838509 3

10.00 1.6970833 .86722486 3

Total 2.6861792 .90171253 12

Total .00 2.2069583 .72125868 6

1.00 2.2176667 .76580984 6

3.00 2.7685750 1.00513543 6

10.00 1.4170667 .77249134 6

Total 2.1525667 .91210059 24

91

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Biomassa_akar

Source Type III Sum of

Squares Df Mean Square F Sig.

Corrected Model 13.281a 7 1.897 5.186 .003 Intercept 111.205 1 111.205 303.969 .000 Glomus 6.834 1 6.834 18.680 .001 Crude_oil 5.566 3 1.855 5.071 .012 Glomus * Crude_oil .881 3 .294 .803 .510 Error 5.853 16 .366 Total 130.339 24 Corrected Total 19.134 23 a. R Squared = .694 (Adjusted R Squared = .560)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Biomassa_akar Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

10.00 6 1.4170667 .00 6 2.2069583

1.00 6 2.2176667

3.00 6 2.7685750

Sig. 1.000 .146

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .366. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

92

UNIANOVA Biomassa_tajuk BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Biomassa_tajuk

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 4.1345833 .40042757 3

1.00 2.5915667 .19707807 3

3.00 2.9013167 .91756606 3

10.00 1.2944333 .24160783 3

Total 2.7304750 1.14596615 12

G1 .00 5.9740667 .85135976 3

1.00 4.9740000 1.01674357 3

3.00 4.3088333 .19521768 3

10.00 1.9443167 .58954644 3

Total 4.3003042 1.67078648 12

Total .00 5.0543250 1.17011621 6

1.00 3.7827833 1.46008201 6

3.00 3.6050750 .97280312 6

10.00 1.6193750 .53766183 6

Total 3.5153896 1.61431916 24

93

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Biomassa_tajuk

Source Type III Sum of

Squares Df Mean Square F Sig.

Corrected Model 53.451a 7 7.636 18.832 .000 Intercept 296.591 1 296.591 731.479 .000 Glomus 14.786 1 14.786 36.467 .000 Crude_oil 36.256 3 12.085 29.806 .000 Glomus * Crude_oil 2.409 3 .803 1.980 .158 Error 6.487 16 .405 Total 356.530 24 Corrected Total 59.939 23 a. R Squared = .892 (Adjusted R Squared = .844)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Biomassa_tajuk Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2 3

10.00 6 1.6193750 3.00 6 3.6050750 1.00 6 3.7827833 .00 6 5.0543250

Sig. 1.000 .635 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .405. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

94

UNIANOVA Jumlah_tunas BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Jumlah_tunas

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 6.5000 1.73205 3

1.00 4.3333 .76376 3

3.00 6.5000 1.32288 3

10.00 .0000 .00000 3

Total 4.3333 2.94135 12

G1 .00 6.6667 .76376 3

1.00 6.1667 1.60728 3

3.00 6.1667 .76376 3

10.00 .0000 .00000 3

Total 4.7500 2.98861 12

Total .00 6.5833 1.20069 6

1.00 5.2500 1.50831 6

3.00 6.3333 .98319 6

10.00 .0000 .00000 6

Total 4.5417 2.90770 24

95

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Jumlah_tunas

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 176.292a 7 25.185 22.181 .000 Intercept 495.042 1 495.042 436.000 .000 Glomus 1.042 1 1.042 .917 .352 Crude_oil 171.042 3 57.014 50.214 .000 Glomus * Crude_oil 4.208 3 1.403 1.235 .329 Error 18.167 16 1.135 Total 689.500 24 Corrected Total 194.458 23 a. R Squared = .907 (Adjusted R Squared = .866)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Jumlah_tunas Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

10.00 6 .0000 1.00 6 5.2500

3.00 6 6.3333

.00 6 6.5833

Sig. 1.000 .055

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 1.135. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

96

UNIANOVA Panjang_tajuk BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Panjang_tajuk

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 74.3333 7.50555 3

1.00 58.5000 .86603 3

3.00 58.8333 4.01040 3

10.00 .0000 .00000 3

Total 47.9167 29.88070 12

G1 .00 77.1667 3.05505 3

1.00 71.5000 11.62970 3

3.00 68.3333 2.75379 3

10.00 .0000 .00000 3

Total 54.2500 33.29858 12

Total .00 75.7500 5.35490 6

1.00 65.0000 10.25183 6

3.00 63.5833 6.04497 6

10.00 .0000 .00000 6

Total 51.0833 31.10909 24

97

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Panjang_tajuk

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 21808.167a 7 3115.452 110.608 .000 Intercept 62628.167 1 62628.167 2223.485 .000 Glomus 240.667 1 240.667 8.544 .010 Crude_oil 21407.250 3 7135.750 253.340 .000 Glomus * Crude_oil 160.250 3 53.417 1.896 .171 Error 450.667 16 28.167 Total 84887.000 24 Corrected Total 22258.833 23 a. R Squared = .980 (Adjusted R Squared = .971)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Panjang_tajuk Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2 3

10.00 6 .0000 3.00 6 63.5833 1.00 6 65.0000 .00 6 75.7500

Sig. 1.000 .650 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 28.167. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

98

UNIANOVA Panjang_akar BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Panjang_akar

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 73.3333 8.54888 3

1.00 92.1667 26.04003 3

3.00 83.5000 32.04684 3

10.00 .0000 .00000 3

Total 62.2500 42.20055 12

G1 .00 72.0000 21.51743 3

1.00 98.8333 9.56992 3

3.00 80.6667 8.25126 3

10.00 .0000 .00000 3

Total 62.8750 40.65773 12

Total .00 72.6667 14.66174 6

1.00 95.5000 17.92205 6

3.00 82.0833 20.98670 6

10.00 .0000 .00000 6

Total 62.5625 40.52678 24

99

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Panjang_akar

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 32973.990a 7 4710.570 15.696 .000 Intercept 93937.594 1 93937.594 313.017 .000 Glomus 2.344 1 2.344 .008 .931 Crude_oil 32892.615 3 10964.205 36.535 .000 Glomus * Crude_oil 79.031 3 26.344 .088 .966 Error 4801.667 16 300.104 Total 131713.250 24 Corrected Total 37775.656 23 a. R Squared = .873 (Adjusted R Squared = .817)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Panjang_akar Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2 3

10.00 6 .0000 .00 6 72.6667 3.00 6 82.0833 82.0833

1.00 6 95.5000

Sig. 1.000 .360 .199

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 300.104. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

100

UNIANOVA Infeksi_mikoriza BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Infeksi_mikoriza

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 72.4739195 23.74165849 3

1.00 34.8447036 22.40613497 3

3.00 29.5075758 21.41686229 3

10.00 .0000000 .00000000 3

Total 34.2065497 31.65103494 12

G1 .00 91.7328042 4.79622772 3

1.00 65.1140397 35.17935572 3

3.00 56.8525033 20.53024128 3

10.00 .0000000 .00000000 3

Total 53.4248368 39.05062345 12

Total .00 82.1033619 18.59944761 6

1.00 49.9793717 31.15635722 6

3.00 43.1800395 24.00817855 6

10.00 .0000000 .00000000 6

Total 43.8156933 36.12188702 24

101

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Infeksi_mikoriza

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 23597.257a 7 3371.037 8.411 .000 Intercept 46075.559 1 46075.559 114.957 .000 Glomus 2216.055 1 2216.055 5.529 .032 Crude_oil 20544.933 3 6848.311 17.086 .000 Glomus * Crude_oil 836.268 3 278.756 .695 .568 Error 6412.930 16 400.808 Total 76085.746 24 Corrected Total 30010.187 23 a. R Squared = .786 (Adjusted R Squared = .693)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Infeksi_mikoriza Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2 3

10.00 6 .0000000 3.00 6 43.1800395 1.00 6 49.9793717 .00 6 82.1033619

Sig. 1.000 .565 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 400.808. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

102

UNIANOVA Bakteri_bulk_soil_pekan_12 BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Bakteri_bulk_soil_pekan_12

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 680000.00 300499.584 3

1.00 696666.67 266333.125 3

3.00 312000.00 210758.155 3

10.00 253333.33 80467.903 3

Total 485500.00 289753.892 12

G1 .00 667333.33 435845.538 3

1.00 663333.33 237135.685 3

3.00 601666.67 444756.488 3

10.00 398000.00 513684.728 3

Total 582583.33 376607.454 12

Total .00 673666.67 334892.022 6

1.00 680000.00 226274.170 6

3.00 456833.33 349375.109 6

10.00 325666.67 338256.362 6

Total 534041.67 332333.414 24

103

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Bakteri_bulk_soil_pekan_12

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 7.002E11 7 1.000E11 .870 .550 Intercept 6.845E12 1 6.845E12 59.520 .000 Glomus 5.655E10 1 5.655E10 .492 .493 Crude_oil 5.411E11 3 1.804E11 1.568 .236 Glomus * Crude_oil 1.026E11 3 3.420E10 .297 .827 Error 1.840E12 16 1.150E11 Total 9.385E12 24 Corrected Total 2.540E12 23 a. R Squared = .276 (Adjusted R Squared = -.041)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Bakteri_bulk_soil_pekan_12 Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1

10.00 6 325666.67 3.00 6 456833.33 .00 6 673666.67 1.00 6 680000.00 Sig. .114

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 115000302083.334. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

104

UNIANOVA Bakteri_bulk_soil_pekan_1 BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Bakteri_bulk_soil_pekan_1

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 10833333.33 8523105.850 3

1.00 8000000.00 5597320.788 3

3.00 2476666.67 2272318.933 3

10.00 3066666.67 416333.200 3

Total 6094166.67 5749720.085 12

G1 .00 20766666.67 1.362E7 3

1.00 3486666.67 1899482.386 3

3.00 9670000.00 9712347.811 3

10.00 2911666.67 608283.103 3

Total 9208750.00 1.038E7 12

Total .00 15800000.00 1.153E7 6

1.00 5743333.33 4481770.483 6

3.00 6073333.33 7437772.964 6

10.00 2989166.67 473860.915 6

Total 7651458.33 8361659.587 24

105

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Bakteri_bulk_soil_pekan_1

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 8.218E14 7 1.174E14 2.389 .071 Intercept 1.405E15 1 1.405E15 28.592 .000 Glomus 5.820E13 1 5.820E13 1.184 .293 Crude_oil 5.656E14 3 1.885E14 3.836 .030 Glomus * Crude_oil 1.980E14 3 6.600E13 1.343 .296 Error 7.863E14 16 4.914E13 Total 3.013E15 24 Corrected Total 1.608E15 23 a. R Squared = .511 (Adjusted R Squared = .297)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Bakteri_bulk_soil_pekan_1 Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

10.00 6 2989166.67 1.00 6 5743333.33 3.00 6 6073333.33 .00 6 15800000.00

Sig. .481 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 49142646875000.000. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

106

UNIANOVA Bakteri_rizosfer BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Bakteri_rizosfer

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 1.53E8 3.485E7 3

1.00 37033333.33 2.899E7 3

3.00 38433333.33 3.574E7 3

10.00 .00 .000 3

Total 57033333.33 6.474E7 12

G1 .00 28510000.00 4.287E7 3

1.00 53296666.67 8.810E7 3

3.00 31933333.33 4.435E7 3

10.00 .00 .000 3

Total 28435000.00 4.995E7 12

Total .00 90588333.33 7.645E7 6

1.00 45165000.00 5.933E7 6

3.00 35183333.33 3.620E7 6

10.00 .00 .000 6

Total 42734166.67 5.840E7 24

107

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Bakteri_rizosfer

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 4.866E16 7 6.951E15 3.733 .014 Intercept 4.383E16 1 4.383E16 23.535 .000 Glomus 4.907E15 1 4.907E15 2.635 .124 Crude_oil 2.507E16 3 8.358E15 4.488 .018 Glomus * Crude_oil 1.868E16 3 6.225E15 3.343 .046 Error 2.980E16 16 1.862E15 Total 1.223E17 24 Corrected Total 7.845E16 23 a. R Squared = .620 (Adjusted R Squared = .454)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Bakteri_rizosfer Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

10.00 6 .00 3.00 6 35183333.33 1.00 6 45165000.00 45165000.00 .00 6 90588333.33

Sig. .104 .087

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = 1862259817708333.000. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

108

UNIANOVA pH BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:pH

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 6.6433 .06351 3

1.00 6.3933 .03215 3

3.00 6.4833 .12583 3

10.00 5.9167 .08505 3

Total 6.3592 .29166 12

G1 .00 6.6733 .15044 3

1.00 6.3700 .18520 3

3.00 6.3100 .08185 3

10.00 5.7967 .15695 3

Total 6.2875 .35263 12

Total .00 6.6583 .10458 6

1.00 6.3817 .11957 6

3.00 6.3967 .13426 6

10.00 5.8567 .13064 6

Total 6.3233 .31858 24

109

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:pH

Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 2.102a 7 .300 20.634 .000 Intercept 959.629 1 959.629 65953.888 .000 Glomus .031 1 .031 2.118 .165 Crude_oil 2.033 3 .678 46.568 .000 Glomus * Crude_oil .038 3 .013 .871 .477 Error .233 16 .015 Total 961.963 24 Corrected Total 2.334 23 a. R Squared = .900 (Adjusted R Squared = .857)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

pH Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2 3

10.00 6 5.8567 1.00 6 6.3817 3.00 6 6.3967 .00 6 6.6583

Sig. 1.000 .832 1.000

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .015. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

110

UNIANOVA Kelembaban BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics

Dependent Variable:Kelembaban

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 7.2667 .49863 3

1.00 9.3800 .26458 3

3.00 9.5000 .86603 3

10.00 9.7767 .38682 3

Total 8.9808 1.14568 12

G1 .00 6.7500 .89011 3

1.00 8.9600 .31193 3

3.00 9.6633 .44411 3

10.00 9.7500 .43301 3

Total 8.7808 1.35419 12

Total .00 7.0083 .70460 6

1.00 9.1700 .34618 6

3.00 9.5817 .62201 6

10.00 9.7633 .36751 6

Total 8.8808 1.23095 24

111

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Kelembaban

Source Type III Sum of

Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 29.865a 7 4.266 13.693 .000 Intercept 1892.861 1 1892.861 6075.137 .000 Glomus .240 1 .240 .770 .393 Crude_oil 29.159 3 9.720 31.195 .000 Glomus * Crude_oil .466 3 .155 .499 .688 Error 4.985 16 .312 Total 1927.711 24 Corrected Total 34.850 23 a. R Squared = .857 (Adjusted R Squared = .794)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Kelembaban Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

.00 6 7.0083 1.00 6 9.1700

3.00 6 9.5817

10.00 6 9.7633

Sig. 1.000 .099

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .312. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.

112

UNIANOVA Suhu BY Glomus Crude_oil /METHOD=SSTYPE(3) /INTERCEPT=INCLUDE /POSTHOC=Glomus Crude_oil(DUNCAN) /PRINT=DESCRIPTIVE /CRITERIA=ALPHA(.05) /DESIGN=Glomus Crude_oil Glomus*Crude_oil.

Univariate Analysis of Variance

Warnings

Post hoc tests are not performed for Glomus because there are fewer than three groups.

Between-Subjects Factors

N

Glomus G0 12

G1 12 Crude_oil .00 6

1.00 6 3.00 6 10.00 6

Descriptive Statistics Dependent Variable:Suhu

Glomus Crude_oil Mean Std. Deviation N

G0 .00 29.9967 .28868 3

1.00 29.4467 .38682 3

3.00 29.6133 .09815 3

10.00 29.8867 .41789 3

Total 29.7358 .35710 12

G1 .00 30.7233 .82373 3

1.00 29.6100 .53507 3

3.00 29.5533 .85711 3

10.00 30.3900 .19053 3

Total 30.0692 .76840 12

Total .00 30.3600 .68056 6

1.00 29.5283 .42706 6

3.00 29.5833 .54661 6

10.00 30.1383 .40047 6

Total 29.9025 .61021 24

113

Tests of Between-Subjects Effects

Dependent Variable:Suhu

Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig.

Corrected Model 4.258a 7 .608 2.260 .084 Intercept 21459.828 1 21459.828 79739.259 .000 Glomus .667 1 .667 2.477 .135 Crude_oil 3.041 3 1.014 3.766 .032 Glomus * Crude_oil .551 3 .184 .682 .576 Error 4.306 16 .269 Total 21468.392 24 Corrected Total 8.564 23 a. R Squared = .497 (Adjusted R Squared = .277)

Post Hoc Tests Crude_oil Homogeneous Subsets

Suhu Duncana,,b

Crude_oil

Subset

N 1 2

1.00 6 29.5283 3.00 6 29.5833 10.00 6 30.1383 30.1383 .00 6 30.3600

Sig. .070 .470

Means for groups in homogeneous subsets are displayed. Based on observed means. The error term is Mean Square(Error) = .269. a. Uses Harmonic Mean Sample Size = 6.000. b. Alpha = .05.