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Philippe LABARTHE Paul KONINCKX
CLAD
Canine leukocyte adhesion deficiency
2ème doctorat médecine vétérinaire - 2003-2004
Canine leukocyte adhesion deficiency colony for investigation of novel hematopoietic therapies
Kate E.Creevy, Thomas R. Bauer Jr., Laura M. Tuschong, Lisa J; Embree, Lyn Colenda, Kevin Cogan, Matthew F. Starost, Mark E. Haskins, Dennis D. Hickstein
Veterinary Immunology and Immunopathology, Juil 2003
CLAD
Mutation dans la sous unité CD18 de l’intégrine des leucocytes
=> empêche l’expression du complexe CD11/CD18 à la surface membranaire du leucocyte
=> non adhésion à l’endothélium des vaisseaux sanguins et abscence de migration vers le site d’infection
• Setter irlandais
• Signes cliniques – Apparition précoce après la naissance
Omphalite
Infection bactérienne sévère
Fièvre
•Traitement : Antibiothérapie insuffisante
• => Mort ou euthanasie dans les premiers mois de vie
•LAD = déficience d’adhésion leucocytaire chez l’ homme
•Thérapie unique = transplantation de cellules souches hématopoiétiques
•Développement des protocoles de transplantation de moëlle depuis 30 ans chez le chien par extrapolation de la CLAD
CLAD >< LAD
Développement de nouvelles thérapies hématopoiètiques chez le chien
Extrapolation pour traiter la LAD
MATERIEL ET METHODES
1. Chiens : vaccins,…2. Pédigrée : Setter Irlandais,…3. Management de la portée F2 : identification et type de
statut CLAD à J7 - J10 après la naissance4. Cytomètrie de flux 5. Séquençage du DNA pour la mutation CLAD6. Radiographie7. Test d’histocompatibilité8. Préparation d’os pour analyse histologique
RESULTATS
Pédigrée : mutation récessive autosomale
Signes cliniques : – Apparition précoce– Leucocytose– Taille, omphalite, fièvre, HOD (hypertrophic
osteodystrophy)– Infection bactérienne sévère
Prophylaxie : AB large spectre jusqu’à confirmation du statut CLAD.
Si chiots atteints : AB mais infections bactériennes fréquentes
Size difference of a CLAD-affected pup
Omphalitis and umbilical abscess in a 2-week old pup
Umbilical abscess in a 3-week-old pup
Metaphysal swelling of the left carpal joint typical in a CLAD-affected pup at 3 months of age
• HOD :
Apparition vers 2 mois d’âge
Macroscopiquement :douleurs métaphysaires, sensibilité des tendons à la palpation, boiterie et tuméfactions
Radiographie : bande radio-opaque correspondant à un dépôt osseux au niveau du périoste avec inflammation
Microscopiquement : foyer de nécrose osseuse, perte d’os trabéculaire, dépôt d’os sans structure régulière
Lateral radiograph of the normal distal radius and ulna from a 4-month-old dog
Lateral radiographs of the distal radius and ulna of a 4-month-old CLAD dog with HOD
Normal metaphysis with normal bonetrabeculae displaying organized linearareas of bone formation
Bone histopathology from the CLAD dogWith HOD demonstrating loss of bonetrabeculae with disorganized new boneformation
•Cytomètrie de flux :
Analyse des neutrophiles
Atteints de CLAD: pas de fluorescence -> pas de CD18
Fluorescence : hétérozygotes < normaux
Expression CD18 : hétérozygotes < normaux
•DNA : transposition G-C
•Test d’histocomptabilité :
2 microsatellites (VNTR) liés à un Ag du leucocyte
Identification des donneurs potentiels de cellules souches hématopoiétiques
DISCUSSION
Identification des hétérozygotes et des homozygotes par la cytométrie de flux et le séquençage du DNA
=> Antibiothérpie appropriée dés les premiers jours de la vie
Typage de l’histocompatibilité => identification de donneurs potentiels
CLAD = modèle pour le développement d’une
nouvelle thérapie hématopoiétique
1. CLAD / LAD : même phénotype clinique
2. Chiens CLAD sont homozygotes récessifs pour la mutation
3. Plusieurs paramètres quantitatifs distincts
4. CLAD : évaluation d’une nouvelle thérapietransplantation de cellules souches hématopoiétiques
thérapie génique sur cellules hématopoiétiques
Thérapie génique
Identification des homozygotes récessifs => déficience en CD18
Leucocytose due à l’incapacité des leucocytes à marginer et à progresser vers le site d’infection
Correction de la séquence DNA codant pour le CD18 grâce aux marqeurs (gene targeting)
Quantification des leucocytes par cytométrie de flux
Espoir de thérapie génique applicable à l’homme
Autres références bibliographiques
Mixed chimeric hematopoietic stem cell transplant reverses the disease phenotype in canine leukocyte adhesion deficiency,
Creevy KE, Bauer TR, Tuschong LM, Embree LJ, Silverstone AM, Bacher JD, Romines C, Garnier J, Thomas ML, Colenda L, Hickstein DD.Vet Immunol Immunopathol. 2003 Oct 15;95(3-4):113-21.
Mixed hematopoietic chimerism reverses the clinical phenotype in CLAD and represents a potential therapeutic approach for the human disease leukocyte adhesion deficiency.
CLAD : beta-2 integrin mutation in an affected US Irish Setter cross-breed dog and in US Irish Red and White Setters.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_uids=12322699&dopt=Abstract
• LAD : 2 types de déficiences http://www.ecu.edu/intmedresidency/currentresidents/Review%20Articles/first%20collection/Immunodeficiency%20Diseases%20Caused%20by%20Defects%20in%20Phagocytes.pdf
• BLAD : déficience de glycoproteine de surface = beta2 integrines
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_uids=8095042&dopt=Abstract
• BLAD : déficience du complexe CD11/CD18 http
://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&list_uids=1682156&dopt=Abstract