PITESTI - ROMANIA

PLAN SECTORIAL– ADER 2020 Contractor:

INSTITUTUL DE CERCETARE DEZVOLTARE PENTRU POMICULTURĂ PITEŞTI-MĂRĂCINENI

Obiectivul general: 2 STCPM

Numărul /codul proiectului 31/ADER 2.2.7.

Contract: 227/27. 10. 2011

Anul începerii: 01.11. 2011 Anul finalizării: 10.12. 2014 Durata: 37,5 luni

Denumirea proiectului:ADER 2.2.7- Tehnici de producere şi menţinere a materialului săditor

pomicol din categoriile biologice candidat, prebază şi bază

Persoana de contact:Dr. ing. ISAC VALENTINA

Date contact:Tel: 0040-248-278066; Fax: 0040-248-278477; v_isac2002@yahoo.com

31/ADER 2.2.7. Obiectivul general 2 STCPM:Perfecţionarea sistemelor şi tehnologiilor de cultura a

plantelor în vederea asigurării sustenabilităţii fermelorcomerciale în contextul creşterii performanţelor demediu

Obiectivul specific 2.2 ADERVerigi tehnologice/ tehnologii inovative de cultură a

plantelor care să asigure garantarea veniturilor fermelorcomerciale în condiţiile respectării criteriilor de mediu şieco - condiţionalitate

31/ADER 2.2.7.Obiectivele Proiectului1. Elaborare model experimental

2. Crearea condiţiilor impuse de reglementările în vigoare pentru menţinereaplantelor candidat (spaţii insect proof). Experimentarea şi introducereatehnicilor moderne privind diagnosticarea şi testarea virală

3. Evaluarea şi implementarea metodelor rapide (ELISA, PCR) pentrudeterminarea stării de sănătate virală a regeneranţilor după terapie.

4. Dezvoltarea procedeelor de termo- şi chimioterapie, cultură de meristemepentru eliminarea virusurilor la speciile pomicole şi menţinerea materialuluibiologic candidat.

5. Managementul producerii materialului săditor pomicol conform schemelor decertificare din legislaţia actuală prin folosirea unor elemente biotehnologice înînmulţirea plantelor sănătoase.

6. Realizarea unor verigi tehnologice privind obţinerea materialului biologic dincategorii biologice superioare

31/ADER 2.2.7.Rezultatele scontate a se obţine

Metode noi, rapide, fiabile, economice şi cu o mare putere discriminatorie îndetectarea şi identificarea patogenilor virali.

Tehnologii/verigi tehnologice eficiente privind testarea virală, eliberarea devirusuri şi menţinerea materialului biologic pomicol necesar producerii unorplante care să îndeplinească toate standardele impuse de certificare;

Selecţionarea celor mai bune clone din punct de vedere al autenticităţii,calităţilor pomologice şi al productivităţii;

Metode optimizate pentru devirozarea materialului infectat, obţinereaplantelor candidat;

Tehnologii/secvenţe tehnologice de menţinerea şi înmulţire a materialuluisăditor pomicol prin metode clasice şi neconvenţionale (culturi de ţesuturi);

Ghiduri de bune practici pentru producerea, menţinerea şi multiplicareamaterialului săditor pomicol;

Metode şi proceduri care să conducă la îmbunătăţirea schemelor actuale decertificare a materialului săditor;

Spaţii protejate pentru menţinerea plantelor candidat, prebază şi bază înconformitate cu normele în vigoare;

Obţinerea materialului prebază şi conservarea în biodepozitar; Completarea bazei materiale necesare testărilor şi stabilirii tehnicilor şi

tehnologiilor de lucru; Producerea materialului săditor bază.

31/ADER 2.2.7.- FAZA 5

Denumirea fazei 5:- Obţinerea materialului biologic Prebază şi

introducerea în biodepozitar. Menţinereamaterialului Prebază şi Bază existent

Obiectivele fazei 5:– Înmulţirea şi menţinerea materialului

biologic- Diseminare rezultate

31/ADER 2.2.7.- FAZA 5Rezultatele scontate: Producerea prin metode clasice şi

neconvenţionale şi menţinerea plantelor din categorii biologice superioare. Constituirea nucleului de plante prebază sănătoase şi conservarea în biodepozitar/raport

Lucrări ştiinţifice, publicaţii

Protocol înrădăcinare măr – portaltoiul M 106

COMPONENTA Autor CantitateaMacroelemente Quoirin&Lepoivre, (1977) 100 ml/lMicroelemente Quoirin&Lepoivre, (1977) 10 ml/lVitamine Walkey D.G, 1972 10 ml/lFitohormoni

-GA3 0,01 mg/l,

-IBA 1 mg/l,

Chelat de fier 32 mg/l

Zaharoză 30 g/l

Agar 7 g/l

Protocol înrădăcinare măr –portaltoiul M 9

COMPONENTA Autor CantitateaMacroelemente Murashige&Skoog 50 ml/lMicroelemente Murashige&Skoog 5 ml/lVitamine Linsmaier & Skoog (1965) 10 ml/lFitohormoni

-GA3 1 mg/l

-IBA 2 mg/l

Chelat de fier 32 mg/l

Dextroză 30 g/l

Agar 7 g/l

Protocol înrădăcinare cireş/vişin –portaltoiul IPC 5

COMPONENTA Autor CantitateaMacroelemente Lee&Fossard (1977) 100 ml/lMicroelemente Lee&Fossard (1977) 10 ml/lVitamine Walkey D.G, 1972 10 ml/lFitohormoni

-IBA 1,5 mg/l,

Chelat de fier 32 mg/l

Dextroză 40 g/l dextroză

Agar 7 g/l

Rezultate obţinute: Înmulţirea şi menţinerea materialului biologic la speciile

lemnoase Au fost optimizate protocoale de lucru privind

înrădăcinarea in vitro la portaltoii de măr M9 şi M106şi a portaltoiului de cireş/vişin IPC 5.

randamente de înrădăcinare: 82% la portaltoiul M106,70 % la portaltoiul M9 şi 73,33 % la portaltoiul decireş/vişin IPC 5.

Aclimatizarea şi fortificarea plantelor astfel obţinute adus la crearea unui stoc de portaltoi categoriabiologică Prebază, format din 120 plante portaltoi IPC5, 100 plante M9 şi 100 plante M 106.

Portaltoiul IPC 5 faza de

înrădăcinarein vitro

31/ADER 2.2.7.- FAZA 5 -Rezultate obţinute

Evoluţia portaltoilor la 2 săptămâni de aclimatizare

Genotip Nr. plante viabile

Media înalţimii (cm) Media nr. frunze/plantă

iniţiala la 14 zile diferenţa iniţiala la 14 zile

M106 120 5 6,8 1,8 6 6

M9 120 5 6,5 1,5 6 7

IPC 5 150 6 7,7 1,7 5 3

M 106 –planta aclimatizată (foto 1) IPC 5-portaltoi de cireş/vişin;

Categoria biologică Prebază - plante fortificate (foto 2)

Foto 1 Foto 2

Rezultate obţinute Înmulţirea şi menţinerea

materialului biologic la speciile lemnoasePlantele mama Prebază pentru ramuri altoi au fost obţinute prin

metoda altoirii.Nucleul de plante Prebază astfel obţinut, este constituit din: măr: Jonathan, Idared, Florina, Goldspur, Golden delicious,

Prima, Generos, Romus 3, Starkrimson, Mutsu;

păr: Williams alb, Curé, Tudor, Argessis, Carpica, Williams roşu, Euras, Conference;

prun: Agent, Centenar, Silvia, Minerva, Diana, Andreea, Ialomiţa, Gras ameliorat;

cireş: Tentant, Stella, Daria, Ponoare, Germersdorf, Superb;

vişin: Ţarina, Ilva, Schattenmorelle Rival, Stelar, Mocăneşti.

Reînnoirea stocului de plante mamă in vitrola căpşun

Rata de regenerare în medie pe soiuri a fost de 82,60%.

Procentul de regenerare al soiurilor din sortiment a fost cuprins între 80% la soiul Benton şi 98% la soiul Premial şi la soiurile noi între 64,3% la soiul Coral şi 79% la soiul Elsanta.

Pe total soiuri cea mai mare rată de regenerare a fost înregistrată la soiurile Premial 98% urmat de Real 95% şi de Redgauntlet 90%.

Pierderile cauzate de infecţia culturilor fie din cauze endo- sau exogene sau cauzate de necroze au fost reduse.

Influenţa acestora asupra eficienţei lucrărilor de iniţiere şi stabilire in vitro a Prebazei de căpşun o considerăm nesemnificativă.

Rezultate privind procesul de iniţiere a culturilor in vitro la căpşun

Denumirea soiului

Total explante inoculate

Infecţii Necroze Regenerare(%)

Premial 120 15 3 98

Real 120 7 0 95

Magic 120 8 5 82,5

Redgauntlet 120 10 2 90

Benton 120 5 7 80

Mira 80 8 3 76

Coral 80 6 2 64,3

Alba 80 10 0 78,6

Elsanta 80 4 0 79

Media 68,88 8,11 2,44 82,60

Rata de iniţiere in vitro la soiurile de căpşun luate în studiu

Rezultate privind aclimatizarea la căpşun

În faza de aclimatizare lacăpşun a fost obţinută omedie de 84,16% planteaclimatizate. Procente depeste 80% au fostînregistrate la 8 din cele11 soiuri plantate pentruaclimatizare, 5 dinacestea supravieţuind înprocente de peste 90 %:Queen Elisa 99,31%,Redgauntlet 97,05%,Record 96,48%, Real96%, Alba 95,85

Pre

mia

l

Rea

l

Mag

ic

Red

gaun

tlet

Ben

ton

Med

ia

% Plante aclimatizate% Plante fortificate

0102030405060708090

100

%

Mira Onebor Alba Record Clery QueenElisa

Media

% Plante aclimatizate% Plante fortificate

010203040

5060

7080

90

100

%

soiuri din sortiment

Soiuri noi

Rezultate privind aclimatizarea -fortificarea soiurilor de zmeur (1)

şi mur (2)

Opal Ruvi Star Gustar Cayuga Vely Media

% Plante aclimatizate% Plante fortificate

010203040

5060

70

80

90

100

%

DarrowThornfree

Media

% Plante aclimatizate

% Plante fortificate

93,11 94,7793,94

77,46 81,7379,59

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

%

Fig. 9Fig. 9Fig. 9

Fig. 1 Fig. 2

Aspecte din faza de fortificare la ghiveci a prebazelor de zmeur (A), căpşun(B), mur (C),

portaltoi (D)

A B

C D

Plante certificate la categoria PrebazăSpecia/soiul Plantat la aclimatizare Număr plante certificate Lot nr.

Premial 5400 2500 3AG6091 – 3AG01

Real 1100 500 3AG6101 – 3AG01

Magic 3000 1500 3AG6111 – 3AG01

Redgauntlet 1700 800 3AG6121 – 3AG01

Benton 1250 500 3AG6131 – 3AG01

Mira 3350 - -

Onebor 3300 - -

Alba 1400 - -

Record 1850 - -

Clery 320 - -

Queen Elisa 1750 - -

Darrow 1500 250 3AG6471 – 3AG01

Thornfree 750 250 3AG 6481– 3AG01

Opal 1560 360 3AG3411 – 3AG01

Ruvi 440 40 3AG3421– 3AG01

Star 200 18 3AG3431– 3AG01

Gustar 500 10 3AG3491– 3AG01

Cayuga 960 165 3AG7361– 3AG01

Vely 500 100 3AG3551 – 3AG01

31/ADER 2.2.7 - FAZA 4Rezultate privind menţinerea materialului

Prebază şi Bază existentTestarea materialului Prebază la CPRezultatele obţinute în urma testării virale a Prebazelor scot în

evidenţă că probe pozitive au fost identificate numai la prun,diagnosticul de infecţie cu PPV la cele două soiuri fiindconfirmat atât prin metoda DAS-ELISA cât şi prin AGRISTRIP.

În urma diagnosticării pozitive la virusul PPV au fost eliminate dinstocul de câte 5 plante PREBAZĂ pentru fiecare soi 3 plante lasoiul Gras ameliorat şi 2 plante la soiul Ialomiţa.

Materialul sănătos rămas în biodepozitariile ICDP Piteşti-Mărăcineni constitue materialul din care se va trece la înmulţirepentru obţinerea plantelor din categoria biologică BAZĂ, plantenecesare înfiinţării plantaţiilor mamă ramuri altoi, de butaşi şi amarcotierelor.

Rezultatele retestărilor efectuate la soiurile de căpşun şi arbuştiifructiferi şi ale inoculărilor mecanice au arătat că planteletestate sunt sănătoase, starea lor sanitara fiind liber de virusuri.

Rezultatele testării virale la mărNr.crt Specificare ACLSV ApMV ASGV ASPV ApP Russet

ringPlatycarpascaly bark

1. Jonathan - - - - - - -2. Idared - - - - - - -3. Florina - - - - - - -4. Goldspur - - - - - - -5. Golden

delicious- - - - - - -

6. Prima - - - - - - -7. Generos - - - - - - -8. Romus 3 - - - - - - -9. Starkrimso

n- - - - - - -

10. Mutsu - - - - - - -

11. M106 - - - - - - -

12. M9 - - - - - - -

Rezultatele testării virale la păr

nr.crt

Specificare ASGV

ASPV PearDecline

Rubbery wood

Vein yellows/

red mottle

1. Williams alb - - - - -

2. Cure - - - - -

3. Tudor - - - - -

4. Argessis - - - - -

5. Carpica - - - - -

6. Williams roşu - - - - -

7. Euras - - - - -

8. Conferance - - - - -

Rezultatele testării virale la cireş şi vişinnr.crt.

Specificare ACLS ApMV ArMV CLRV PDV PNRS SLRV RpRS TBRV

1. Tentant - - - - - - - - -

2. Stella - - - - - - - - -

3. Germersdorf - - - - - - - - -

4. Ponoare - - - - - - - - -

5. Daria - - - - - - - - -

6. Superb - - - - - - - - -

7. Rival - - - - - - - - -

8. Ţarina - - - - - - - - -

9. Mocăneşti - - - - - - - - -

10. Stelar - - - - - - - - -

11. Ilva - - - - - - - - -

12. Schattenmorelle - - - - - - - - -

13 IPC 5 - - - - - - - - -

Rezultatele testării virale la prunNr.Crt.

Soi ACLSV ApMV PPV PDV PNRSV ApricotChloroticleafroll

1. Agent - - - - - -2. Ialomiţa - - + - - -3. Gras

ameliorat- - + - - -

4. Centenar - - - - - -5. Silvia - - - - - -6. Minerva - - - - - -7. Diana - - - - - -8. Andreea - - - - - -9. Mirobolan

4Kr- - - - - -

Partenerul 1 Obţinerea de material biologic din categoria Prebază

Trei plante Candidat din fiecare soi de prun cărora li s-a conferitstatusul “virus-free” în etapa precedentă, au fost supusediagnosticului molecular pentru detecţia fitoplasmei EuropeanStone Fruit Yellows (ESFY).

Testele au evidenţiat lipsa agentului patogen ‘CandidatusPhytoplasma prunorum’ la toate plantele testate. Ca urmare arezultatelor testărilor serologice (faza 4) şi moleculare (faza 5)efectuate în cursul acestui an, plantele Candidat libere devirusuri şi fitoplasma ESFY au intrat in procesul de certificare.

Plante din fiecare soi au fost selectate pentru certificare lacategoria Prebază iar dosarul cu documentaţia necesarăcertificării s-a înaintat Inspectoratului Teritorial pentru ControlulSeminţelor şi Certificării Materialului Săditor (ITCSMS) Cluj,filiala Bistriţa.

În urma inspecţiei efectuate la SCDP Bistriţa, ITCSMS Cluj aeliberat documentele oficiale de certificare la categoriaPREBAZA a celor şase soiuri de prun: Agent, Gras ameliorat,Centenar, Minerva, Andreea şi Delia.Rezultatele analizelorreconfirmă statusul „virus-free” al plantelor BAZA menţinute înbiodepozitarele de la SCDP Bistriţa.

Materialul biologic certificat la categoria Prebază în 2013 SCDP Bistriţa – prun

Soi/portaltoi Cant. Lot nr. Etichete oficiale atribuite

Nr. total/serie/de la...pana la

Agent/Mirobolan29C 3 3BN0671-3BN01 3/BN/799840-799842Gras

ameliorat/Mirobolan29C

3 3BN0672-3BN01 3/BN/799843-799845

Centenar/Mirobolan29C 3 3BN0673-3BN01 3/BN/799846-799848Minerva/Mirobolan29C 3 3BN0674-3BN01 3/BN/799849-799851Andreea/Mirobolan29C 3 3BN0675-3BN01 3/BN/799852-799854Delia/Mirobolan29C 3 3BN0676-3BN01 3/BN/799855-799857Total 18

Retestarea serologiă a materialului biologic Bazăexistent la specia prun SCDP Bistriţa - 2013Denumire soi –pozitie pom

DAS-ELISA Status fitosanitarPPV

PDV

PNRSV

ACLSV

ApMV

MLRSV

Iulia –P4 - - - - - - Virus freeIulia – P5 - - - - - - Virus freeIulia – P6 - - - - - - Virus freeMatilda – P4 - - - - - - Virus freeMatilda – P5 - - - - - - Virus freeMatilda – P6 - - - - - - Virus freeGeta-P4 - - - - - - Virus freeGeta-P5 - - - - - - Virus freeGeta-P6 - - - - - - Virus freeZamfira-P4 - - - - - - Virus freeZamfira-P5 - - - - - - Virus freeZamfira-P6 - - - - - - Virus freeIvan-P3 - - - - - - Virus freeIvan-P4 - - - - - - Virus free

Romaner-P4 - - - - - - Virus freeRomaner-P5 - - - - - - Virus freeRomaner-P6 - - - - - - Virus freeElena –P4 - - - - - - Virus freeElena –P5 - - - - - - Virus freeElena –P6 - - - - - - Virus freeRc. Althan-P4 - - - - - - Virus freeRc. Althan-P5 - - - - - - Virus freeRc. Althan-P6 - - - - - - Virus freeStanley-P4 - - - - - - Virus freeStanley-P5 - - - - - - Virus freeStanley-P6 - - - - - - Virus freeAnna Sp. –P4 - - - - - - Virus freeAnna Sp. –P5 - - - - - - Virus freeAnna Sp. –P6 - - - - - - Virus free

Rezultatele retestărilor serologice a materialului biologic Bază existent la specia prun SCDP Bistriţa - 2013

PPV+ +

PPV - -

PDV + +

PDV - -

PNRSV + +

PNRSV - -

ACLSV + +

ACLSV - -

ApMV + +

ApMV - -

MLRSV + +

MLRSV - -

Rezultatele retestărilor serologice a materialului biologic Bază existent la specia prun SCDP Bistriţa - 2013

Partenerul 2 – Obţinerea de material biologic din categoria Prebază

Rezultatele arată că din 25 soiuri de piersic 24 au fost depistatenegativ, sănătoase libere de virus, iar pozitiv au fost depistatsoiul Cardinal. Acelaşi soi a prezentat şi infecţii cu PPV care aînregistrat un procent de 10% din clonele testate.

Soiurile ce vor constitui materialul Prebază pentru aceastăspecie pomicolă sunt: Cora, Costin, Cecilia, Romamer 2,Redhaven, Marina, Delta, Springold, Springcrest, Raluca,Southland, Catherine Sel.1, Filip, Liana, Florin, Fantasia,Melania, Mimi, Minodora, Marina, Iustin, Valerica, Anemona,Monica.

La specia cais au fost testate 23 soiuri şi un portaltoi, şi nu aufost depistate infecţii virale produse de : PPV = Plum poxpotyvirus; ACLSV = Apple chlorotic leaf spot trichovirus;PNRSV = Prunus necrotic ring spot virus; PDV = Prune dwarfilarvirus; ApMV = Apple mosaic ilarvirus; Toate soiurileretestate au prezentat test negativ şi vor constitui materialPrebază.

31/ADER 2.2.7.- FAZA 5Diseminare rezultate

Echipa de lucru a proiectului a pregătit, susţinut şi publicat 9 lucrări ştiinţifice şi de popularizare şi a participat la 4 manifestări ştiinţifice ale USAMV Iaşi, USAMV Bucureşti, Universitatea din Craiova şi ICDP Piteşti.

CONCLUZII A fost realizată înmulţirea şi menţinerea materialului biologic la toate speciile şi soiurile

de pomi, căpşun şi arbuşti fructiferi planificate prin proiectare şi repartizate fiecăruipartener.

Au fost optimizate protocoale de lucru în cea ce priveşte înrădăcinarea in vitro laportaltoii de măr M9 şi M106 şi a portaltoiului de cireş/vişin IPC 5 cu obţinerea unorrandamente de înrădăcinare bune: 82% la portaltoiul M106, 70 % la portaltoiul M9 şi 73,33% la portaltoiul de cireş/vişin IPC 5.

A fost creat un stoc de portaltoi categoria biologică Prebază, format din 120 planteportaltoi IPC 5, 100 plante M9, 100 plante M 106, 20 610 căpşun, 1 660 mur şi 3 410zmeur.

Au fost certificate cu documente oficiale ca plante Prebază 6 993 plante după cumurmează: căpşun 5 800 plante, mur 500, zmeur 693.

A fost constituit un nucleu de plante Prebază pentru ramuri altoi din 10 soiuri de măr, 8soiuri de păr, 8 soiuri de prun, 6 soiuri de cireş şi 6 soiuri de vişin pentru care a fostdepusă documentaţia la ITCSMS Argeş în vederea certificării ca Prebază.

Au fost certificate cu documente oficiale la categoria Prebază şase soiuri de prun: Agent,Gras ameliorat, Centenar, Minerva, Andreea şi Delia existente in biodepozitarele de laSCDP Bistriţa

A fost constituit nucleul de material Prebază format din 24 soiuri de piersic şi 23 soiurila cais.

A fost realizată activitatea de diseminare, membrii echipei de lucru au participat la 4simpozioane ştiinţifice organizate la nivel naţional cu participare internaţională şi aupregătit 9 lucrări ştiinţifice.