アレルギーなどの自己免疫疾患や感染症防御など、種々のpathogenicあるいはprotectiveな免疫反応と ヘルパー T細胞サブセットの関係は、より深く詳細に究明されようとしています。

ミルテニーバイオテク社では、これらの研究にお使いいただけるツールをご提供しております。

Polarizing TH cells from naive CD4+ T cells ヘルパーT細胞分化のための製品群

試験研究用

www.miltenyibiotec.co.jp

脾臓やリンパ節から ナイーブCD4+細胞を分離

サイトカインや中和抗体、培地を組み合わせて最適な分化誘導

豊富な抗体で表面抗原も細胞内サイトカインも検出。さらに液相中のサイトカイン量も測定

サイトカイン分泌細胞を生きたまま解析･分離

I

I II

II III IV細胞分離

高純度なナイーブ CD4+ T細胞の分離 効率の良い in vivo polarization

分化培養 フローサイトメトリー Cytokine Secretion Assay

マウス脾臓の単細胞懸濁液より、Naive CD4+ T Cell アイソレーションキットを用いて、LSカラムとMidiMACS SeparatorでナイーブCD4+ T細胞を分離した。CD45-VioGreen (# 130-102-412) CD4-VioBlue® (# 130-102-456), CD62L-PE (# 130-102-543), CD3ε-APC-Vio770™ (# 130-102-306), CD44-FITC (# 130-102-511) で染色し、MACSQuant® Analyzerにてフローサイトメトリー解析を行った。死細胞とデブリをゲートアウトし、CD45陽性細胞にゲートをかけて解析した。

マウスナイーブCD4+ T 細胞を分離し、CytoBox Th シリーズを用いてin vitro polarization を実施した。各Cytobox 内のサイトカインおよび中和抗体、 T Cell Activation/Expansion Kit (#130-093-627) で刺激しつつ、10% FCS、2-ME 添加各培地で5 日間培養を行った後、intracellular staining を行ってCD4+ T 細胞内サイトカインを�ow cytomery で検出した。その結果、Th1、Th2、Th17 への良好な分化誘導が確認された。

◆ Naive CD4+ T Cell アイソレーションキット マウス#130-104-453

◆ Naive CD4+ T Cell アイソレーションキットⅡ ヒト#130-094-131

◆ TexMACS Medium, research grade ヒト、マウス#130-097-196

◦ RPMI＋Serum培地より優れたT細胞の増殖が認められる無血清培地

◆ T Cell Activation/Expansion Kit ヒト#130-091-441,マウス#130-093-627

◦ μmサイズのビーズで再現性の良いT細胞活性化

◆ CytoBox Th シリーズ マウスTh1 #130-107-761, Th2 #130-107-760, 　　 Th17 #130-107-758

◦ プロトコル付で手軽に分化実験を行える、サイトカインと 中和抗体のセット

◦ カラムにより磁力が増強されるため、抗体もビーズもついていない 非特異的結合も最小限の”Truly untouched cells” が得られる

◦18分の迅速分離

10³-101

10¹ 10²0

10³

10²

10¹

-1 1 10³-101

10¹ 10²0

10³

10²

10¹

-1 1

10³-101

10¹ 10²0

10³

10²

10¹

-1 1 10³-101

10¹ 10²0

10³

10²

10¹

-1 1

Gated on CD45+ CD3ε+ CD4+ T cellsViable CD45+ cells

Gated on CD45+ CD3ε+ CD4+ T cellsViable CD45+ cells

CD4-VioBlue CD62L-PE

CD62L-PECD4-VioBlue

CD

3ε-A

PC-V

io77

0C

D3ε

-APC

-Vio

770

CD

44-F

ITC

CD

44-F

ITC

CytoBox Th1

IFN

-γ

CytoBox Th2

IFN

-γ

CytoBox Th17

IL-17IL-4IL-4

IFN

-γ

種々のダウン ストリーム解析へ

▪共培養▪遺伝子発現解析▪タンパク質解析▪細胞移入　…and more

分離前 マウス 脾臓細胞

RPMI

TexMACS

分離後 Naive CD4+ T細胞

〒135-0041 東京都江東区冬木16-10 NEX永代ビル5FTEL ： 03-5646-8910（代）　FAX ： 03-5646-8911【ホームページ】 w w w. m i l t e n y i b i o t e c . c o. j p【E - m a i l 】 m a c s @ m i l t e n y i b i o t e c . j p

9：00～17：00（土日祝日除く）

9：00～12：0013：00～17：00（土日祝日除く）

9：00～12：0013：00～17：00（土日祝日除く）

学術的なお問い合せ 03-5646-9606

在庫・納期のお問い合わせ03-5646-8566

機器修理のお問い合せ　　0120-03-5645

2016

11 d

E

Polarizing TH cells from naive CD4+ T cells　ヘルパーT細胞分化のための製品群

IL-2* Anti-CD3 Anti-CD28

Naive CD4 T cell

* also available in GMP grade

TH1 cell TH2 cell TH9 cell iTreg cell TH17 cell Tfh cell TH22 cell

IL-12IL-18IL-27IFN-γ

Anti-IL-4

IL-4*IL-6*IL-31IL-23TSLPIL-25

Anti-IL-12 Anti-IFN-γ

TGF-β1IL-1β*IL-6*IL-21IL-23

Anti-IL-2 Anti-IL-4 Anti-IFN-γ

TGF-β1TGF-β1IL-4*

Anti-IFN-γIL-6*TNF-α*

IL-6*IL-21*CXCL13

CD4, CD94, CD119 (IFN-γ), CD183 (CXCR3), CD195 (CCR5), Tim-3

CD4, CD119 (IFN-γ), CD193 (CCR3), CD194 (CCR4), Tim-1

CD4, TCRα/βCD196 (CCR6)

CD4, CD25, CD127

CD4, CD161, CD194 (CCR4), CD196 (CCR6)

CD4, TCRα/β, CD185 (CXCR5), CD197 (CCR7), CD69

CD4,CD194 (CCR4), CD196 (CCR6), CCR10

T-bet, STAT1, STAT4

GATA3, STAT6 IRF4, GATA3, STAT6

FoxP3, STAT5, Smad2

RORγt, STAT3 STAT3, Bcl6 BNC2, FOXO4

IL-2, IL-10, IFN-γ, TNF-α

IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-13

IL-9, IL-10 IL-10, TGF-β1, IL-35

IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22, IL-26

IL-6, IL-10, IL-12, IL-21

IL-13, IL-22, TNF-α

Surface marker profile Transcription factors Secreting cytokinesPolarizing cytokines

Blocking or neutralizing antibodies Activating antibodies

II III サイトカイン＆抗体ミルテニーバイオテク社では、各THサブセットへの分化誘導や表現型解析に便利なサイトカインや抗体を多数取り揃えています。

疾患モデルマウスの組織やヒトの手術検体などから、自動で単細胞調製が行える装置と試薬のセットです。エピトープの抗原性保持に配慮した酵素の組合わせ＊と、評価済みのプロトコールで安心してお使いいただけます。

＊抗原についての情報は、お問い合わせください。

◆ MACSplex Cytokine Kits◦ 培養上清などの液相中のサイトカイン濃度を フローサイトメトリーで測定

◦ ヒト： GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10, IL-12p70, IL-17A, TNF-α の12種類、マウス：GM-CSF, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12p70, IL-17A, IL-23, TNF-α の10種類のサイトカインを一度に測定

◦ MACSQuant® Analyzerにプリセットの Express modeで自動解析が可能

Naive CD4+ T 細胞からTH 細胞サブセットへのpolarization Express modeの解析テンプレート

IV サイトカイン分泌細胞の分離

◆ Cytokine Secretion Assays ヒト、マウス◦ 刺激によってサイトカインを産生するTh細胞を、生きたまま染色、さらに分離濃縮が可能

◦ Primaryサンプルにも分化誘導した培養細胞にも使える

◦ 製品展開は、ヒト：GM-CSF, IFN-α, IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, IL-13, IL-17, TNF-α の11種類、マウス：IFN-γ, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-17 の6種類

オーダー番号 品　　　名 用　途130-097-410 Lamina Propria Dissociation Kit (マウス) マウス腸管組織の分散

130-105-807 Liver Dissociation Kit (マウス) マウス肝臓の分散

130-095-927 Lung Dissociation Kit (マウス) マウス肺の分散

130-095-926 Spleen Dissociation Kit (マウス) マウス脾臓の分散

130-095-929 Tumor Dissociation Kit (ヒト) ヒト癌組織の分散

130-096-730 Tumor Dissociation Kit (マウス) マウス癌組織の分散

TH17 with Ac1-9restimulation

49.6

46.2

Isolated IL-17+ cellsafter two MS Column sorts

99

0.83

IL-17+ cells alone

19 1.15

0.4970.6

培養後

濃縮前

脾臓細胞

濃縮後

A B

IL-17+ cells with IL-23

58.1 0.74

36.1 0.092

D

C

IFN-γ

CD4

Th17

pol

ariz

e

IL-1

7

IL-1

7

▲

EAEモデルのTg4 TCRマウス脾臓細胞をMBP Acl-9 peptide存在下にTh17誘導条件下で培養しAcl-9 peptide再刺激を行い、IL-17 Secretion assay (CSA) で染色、MACSQuantでフローサイトメトリー解析を行った (A)。さらにCSAで磁気標識しMSカラムでIL-17産生細胞を分離した(B)。分離したIL-17+ 細胞をCD3/CD28抗体にて刺激しIL-23添加無し(C)有り(D)で72時間培養し、細胞内サイトカイン染色を行った。C.T. Prendergast and S.M. Anderton, M&M Vol12-1, 19-22

gentleMACS Dissociators withC/M tubes & Dissociation kit

肺や腸などの組織からの細胞調製に