PowerPoint プレゼンテーションbioanalysisforum.jp/images/2016_7thJBFS/05_DG2015-14_HP.pdf35 27 16 3 18 17 24 16 5 ニードル外部ニードル内部高圧バルブインジェクションループ

Japan Bioanalysis Forum

7th JBF Symposium, DG2015-14 1

http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

DG2015-14 キャリーオーバー

野田巧1，神波亜矢子2，栗山早織3 ，

佐野友一4 ，牟田口国則5 ，横山智教6

小野薬品工業株式会社1，田辺三菱製薬株式会社2，日本新薬株式会社3，積水メディカル株式会社4，株式会社住化分析センター5，テバ製薬株式会社6



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/ アンケート結果



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q1：キャリーオーバーの経験は？

Q2：キャリーオーバーが生じた時期は？（複数回答可）

63

31

31

0 60

分析法検討時

バリデーション試験時

サンプル測定時

回答数：68件ある

100.0%

ない

0.0%

回答数：68件

アンケート結果



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q3：キャリーオーバーした化合物の物性（複数回答可）

34

46

19

35

2

11

1

難溶性

脂溶性

親水性

吸着性

ミセル形成

不明

その他

回答数：68件

その他：金属との配位結合


Q4：キャリーオーバーした箇所（複数回答可）回答数：68件

33

35

27

16

3

18

17

24

16

5

ニードル外部

ニードル内部

高圧バルブ

インジェクションループ

イオンソース部

LC流路

カラムのフリット

カラム内部

不明

その他

その他：注入ポート（ニードルシール）オートサンプラ周りとそれ以外の区別のみインジェクターポッドニードルをぬぐうパーツ（フリットなど



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q5：キャリーオーバー箇所の同定方法

カラムを外す

洗浄条件の変更（洗浄箇所，洗浄溶媒，洗浄回数，洗浄量）

空打ちの実施

部品交換（カラム，流路，バルブ，シリンジ）連続注入→カラムの交換→内部洗浄の追加→高圧バルブの切り替え等を実施し，箇所を特定するオートサンプラーを介さずに注入

1つずつ条件を変更し，箇所を特定する

出来るところから検討する

バルブの連続切り替え

消去法で特定

経験から

流路を洗浄

Blank試料の連続注入




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q6：キャリーオーバーの回避方法

洗浄方法の変更ニードル内部洗浄の追加

リンスボリュームの増量

洗浄回数を増やす

リンス時間の延長

ループの洗浄洗浄溶媒の変更有機溶媒比率を上げる

溶出力の高い溶媒への変更

洗浄溶媒に酸を加える

洗浄溶媒のpHを変える

洗浄溶媒にEDTAを加えるオートサンプラーの変更同一機種のLCへ変更

LCメーカーの変更




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


カラム ODSからHILICへ

カラムを変更

流路切り替えによるカラム洗浄（バックフラッシュ）サンプル周り注入試料を希釈し，注入量を増やす

注入試料に酸を加える（自浄効果を持たせる）

注入量を減らす

注入試料の有機溶媒比率を変える

注入試料の有機溶媒を変える

Blank試料を注入する

注入条件を変更




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

部品周り部品を交換

部品の材質を変更

バルブ切り替えを連続で行う

部品を洗浄するグラジエント条件の変更 Initialの有機溶媒比率を上げる

1run中に複数回のグラジエントをする

グラジエント条件からアイソクラティック条件へ変更

移動相の変更





http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q7：キャリーオーバーを持つ分析法での実検体測定は？

ある

48.5%

ない

51.5%

回答数：68件




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q8：キャリーオーバーを有する分析法における検体測定方法

高濃度検体の後にBlank試料を組み込んだ

高濃度試料注入後，何％キャリーオーバーが生じるか確認しておく

定量値に影響を及ぼしたと考えられる試料の再分析を行う

測定毎に洗浄用のブランク試料等を注入する

キャリーオーバーの度合いが一定のため，“ゲタ”として分析を実施する

LLOQをキャリーオーバーの5倍以上のレスポンス濃度に変更する（LLOQの変更で対応）

キャリーオーバーが生じるが， LLOQの20％以下であったため測定結果に影響はないと判断した

予想濃度が低いサンプルから高いサンプルに並べ替えて測定する

測定バッチ毎にキャリーオーバーの比率を評価し，連続注入した試料濃度への影響を評価

高濃度と予測される試料については予め希釈を実施する




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Q9：LC購入時の選択基準にキャリーオーバー性能は含む？

はい

80.9%

いいえ

13.2%

その他

5.9%

その他：考慮するが，優先順位は高くない今後考慮するなど

Q10：キャリーオーバーが生じにくいLCメーカーは？

0

4

31

8

1

0

8

0 30

A社

W社

S社

S社

T社

A社

その他

その他：どのメーカーもなくならない C社，化合物との相性大きな差はないなど

回答数：68件回答数：52件




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/ 1.キャリーオーバー箇所の同定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

①空打ち

②ブランク（複数）注入

フローチャート(2)へ

④高圧バルブ切換

⑤ニードルシール交換

③洗浄方法変更ニードル

ニードルループa

高圧バルブ

ニードルシール

コンタミ（試料） ⑥注入量を増やす

と強度が上がる

キャリーオーバー改善キャリーオーバー改善なし

操作原因箇所

a:ニードルループ（押込方式）及びニードル内部（ニードル内洗浄がない場合）

箇所の同定(1)オートサンプラ 1.箇所の同定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

⑬Graa測定において、待機時間を長くすると強度が上がる

箇所の同定(2)オートサンプラ以外

①空打ち

⑦カラムを外す・交換

フローチャート(1)へ

カラムフリット

カラム内部

流路b

MS コンタミ（移動相）

キャリーオーバー改善キャリーオーバー改善なし

操作原因箇所

a:Gradient b:配管及びニードルループ（ダイレクト注入方式）

カラム

⑧Graaの傾きをゆるめる

⑨カラム変更により挙動が変化

⑪バルブ穴の変更切換バルブ

イオンソース

⑫イオンソース洗浄・交換

⑩流路洗浄・パーツ交換

1.箇所の同定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

解説(1) 1. 空打（オートサンプラの注入動作なし）によるキャリーオーバーの有無

を確認．改善すればオートサンプラが原因箇所と判断．

2. ブランク試料を複数調製し，連続注入によりキャリーオーバーが改善するか確認．検出力が高いため，溶媒ではなくブランク試料の使用を推奨．ニードルから試料への汚染が懸念されるため，単独試料での実施は

推奨しない．

3. ニードル内洗浄の追加，洗浄液の変更等．次項(2. 回避法)の記載も参照．

4. 高圧バルブの切換え．

5. ニードルシールを交換．

6. ブランク試料の注入量を増やすとCOの強度が上がる場合は，ブランク試料調製に使用する試薬のコンタミまたは容器成分の溶出が原因と判断．

1.箇所の同定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

解説(2) 7. カラムを外す，または予備カラムと交換し，ブランク試料を注入．

キャリーオーバーがなくなればカラムが原因と判断．

8. 移動相条件がグラジエントであれば，カラムを付けた状態でグラジエントの傾きをゆるめる，またはアイソクラティックに変更．キャリーオーバーが改善すれば，カラム先端部での濃縮が原因であり，原因箇所はカラムフリットと判断．

9. 予備カラムとの交換でキャリーオーバーの挙動が変化すれば，カラム内部への吸着が原因と判断．

10. 移動相の有機溶媒比率を上げて一定時間流す等，流路洗浄を実施．条件については次項(2. 回避法)も参照．キャリーオーバーが改善すれば流路への吸着が原因と判断．より詳細に原因箇所を特定するためには，一箇所ずつパーツを交換してCOを確認．グラジエント条件ではカラム手前，アイソクラティック条件ではカラム後の配管に吸着することが多い．流路洗浄を行わず，直接パーツ交換を実施することも可能．

1.箇所の同定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

解説(3)

11. MSの切替バルブの穴を変更，またはバルブを切替えてバルブ内部を洗浄．

12. イオンソースを洗浄，または互換性のある他の機器のイオンソースと交換し，キャリーオーバーへの影響を確認．

13. グラジエント条件において，測定待機時間を長くすることでキャリーオーバーの強度が上がる場合，移動相へのコンタミが原因であると判断．

1.箇所の同定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/ 2.キャリーオーバーの回避法



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Case1：分析法構築時の対策

分析法構築時は期間の許す限り徹底的にフローチャートで同定し，同定した箇所に対して対策を実施．

部品交換は，同一構成のシステムでキャリーオーバーの有無を確認後に実施することを推奨．

＜推奨順＞

分析時間に与える影響が小さい

対応しやすい

他試験に影響を及ぼす可能性がある

オートサンプラ

ニードルインジェクター

①洗浄液の変更*1

①移動相の変更*2

②洗浄プログラムの変更

③注入試料の工夫

④部品交換

カラム

①溶離条件の変更

②追い出し条件の最適化

洗浄プログラムの設定

③カラム変更

④注入試料を工夫

流路，MS，

切り替えバルブ

①移動相の変更

②分析後ライン洗浄

プログラムの追加

③部品交換

*1 ニードル *2 バルブ，ループ，ニードルシールなど

2.回避法



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

ニードル

洗浄液の変更

洗浄プログラムの変更

インジェクター

洗浄プログラム

の変更

カラム

追い出し条件の最適化

洗浄プログラムの設定

流路

キャリーオーバーを抱えたまま続行

MS

切り替えバルブを外す (or 切替なし)

Case2：バリデーション・検体測定時にキャリーオーバーが発生した場合の対策

機器関連の影響である可能性が高い．同一構成のシステムでキャリーオーバー有無を確認後に部品を交換する．

解決しない場合，次の対処法を実施する．

キャリーオーバーに不安を抱えた分析法（15～20％未満）であり，基準を超えてきた場合，実施する項目を限定する．

2.回避法



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

推奨法：キャリーオーバー対策オートサンプラインジェクター(1) ①ニードル洗浄液の変更フローチャート

物性が不明なケースも考慮し，水/メタノール/アセトニトリル/2-プロパノール(1/1/1/1)

をベースとする

EDTAやカウンターイオンを添加

10％まで目安にDMSOを加える

洗浄液の溶出力を高くする

キャリーオーバーが発生

金属素材への吸着を抑制する

特異的なpkaがある

2.回避法（オートサンプラ）

脂溶性高い：アセトニトリル/2-プロパノールの組成を上げる水溶性高い：水の組成を上げる

酸あるいは塩基を加える

脂溶性高い：さらにアセトニトリル/2-プロパノールの比率を上げる， 2-プロパノールの比率を上げる水溶性高い：さらに水の組成を上げる



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

ニードル洗浄液の実例

洗浄液の系統 DG推奨組成洗浄液構成例（DG内経験）

複数液混合系水:MeOH:MeCN:IPA （1:1:1:1）

比率 1:5:5:1, 0:5:5:1, 0:7:3:0,etc. さらに， 0.1%～1%ギ酸あるいは酢酸含有 0.1%～0.28%アンモニア含有 10%ジメチルスルホキシド含有

1溶媒系 100%MeOH，100%MeCN 50%MeOH，50%MeCN

有機溶媒割合：10%～100% 酸添加量：上限1% （ギ酸・酢酸・トリフルオロ酢酸）塩基添加量：上限0.3% （アンモニア）

MeOH:メタノール MeCN:アセトニトリル IPA:イソプロパノール（2-プロパノール）

2.回避法 2.回避法（オートサンプラ）



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

推奨法：キャリーオーバー対策オートサンプラインジェクター(2)

②移動相の変更

有機溶媒比，pH変更

疎水相互作用による吸着の場合，有機溶媒による洗浄及び酸・塩基の添加が有効．ニードルシールや高圧バルブロータなどの樹脂製部品の洗浄に効果的

イオン性，配位性相互作用による吸着が考えられる場合，EDTAやカウンターイオンの添加が有効．サンプルループなどの金属製部品への吸着防止に効果的




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


③洗浄プログラムの変更

ニードル液量，回数，時間を変更する洗浄方式，動作タイミングも検討するニードル内洗浄が有効な場合がある

バルブ，ループ，ニードルシール測定毎に洗浄液を注入ニードル内洗浄を実施する




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

A社Software制御下での洗浄プログラムの実例 2.回避法（オートサンプラ）

S社製オートサンプラ項目名実例設定範囲

Rinsing Volume 200 uL 1 to 2000 uL (500 uLシリンジ)

Rinse Dip Time 0 sec 0 to 60 sec

Rinse Mode Before and after aspiration 洗浄なし、注入前、注入後、注入前後

Rinsing speed 35 uL/sec 1 to 35 uL/sec

空打の方法 Batch fileにおいて、Injection volumeを”-1”にする．

項目名実例設定範囲

Weak wash Volume

600 uL 2000 uL程度まで (シリンジ容量依存)

Strong wash Volume

600 uL 2000 uL程度まで (シリンジ容量依存)

空打の方法 LCメーカー純性ソフトウェアの使用で可能性有 ①Inlet MethodからAutosamplerを選択 ②Advanced内の”No injection”をチェック

W社製オートサンプラ

特徴：ユーザー側で洗浄時期や洗浄液への浸す時間の選択が可能

特徴：ニードル内外の洗浄に溶媒の使い分けが可能

① Tune and calibrate モードのManual tuning内でAcquisition Methodを開く ② Manual tuning画面上のStartボタンを押すと注入せずにScan開始（Startの代わりにAcquireボタンを押すと、データ取得も可能）

空打の方法（その他）



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

逆相モードにおける各溶媒の特徴

水メタノール DMSO アセトニトリルアセトンエタノール 2―プロパノール THF

極性溶出力


注溶出力は対象の化合物の性質で変動する



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


④注入試料を工夫

有機溶媒比や溶媒の種類変更

測定試料を希釈して注入量増加（注入する測定対象の絶対量で調節）

ニードル内で析出が考えられる場合，移動相より溶出力の弱い試料溶媒に変更

金属吸着が考えられる場合は高濃度サンプルの事前注入が有効な場合がある




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

PEEK ポリエーテルエーテルケトン樹脂疎水性サンプルの吸着が生じにくい上，全pH域で使用できる特長

Vespel 全芳香族ポリイミド樹脂耐磨耗性能が高く，ローターシールの材料として多くの6方バルブに採用疎水性サンプルが吸着しやすい上，高pH域において耐薬品性に劣る

Delrin ポリアセタール樹脂 pH域において耐薬品性の問題は生じない．疎水性サンプルの吸着が生じにくい

島津社の資料より

2.回避法推奨法：キャリーオーバー対策オートサンプラインジェクター(5)

⑤部品交換（インジェクター部品の素材変更）

2.回避法（オートサンプラ）



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

推奨法：キャリーオーバー対策カラム(1)

①溶離条件の変更

GradientからIsocraticに変更

Gradient勾配の変更

有機溶媒比変更

有機溶媒の種類変更

移動相に酸添加

2.回避法（カラム）



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


②追い出し条件の最適化，洗浄プログラムの設定

複数回Gradient

高流速洗浄

カラムスイッチング法




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

洗浄プログラムの実例追い出し条件の最適化

<複数回Gradient> <高流速洗浄>

time

Inte

nsity

Analyte

I.S.

time

Inte

nsity

Analyte

I.S.

流速(mL/min) 移動相B (%)

流速(mL/min) 移動相B (%)

Time (min)

Mobile phase B (%) Flow rate(mL/min)

0 10 0.30.5 10 0.32 90 0.33 90 0.3

3.5 90 0.65 90 0.6

5.5 90 0.35.6 10 0.37 10 0.3

Time (min) Mobile phase B (%)

Flow rate(mL/min)

0 100.5 102 903 90

3.1 103.5 103.6 904.5 904.6 106 10

0.3




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

洗浄プログラムの実例 <カラムスイッチング法>

（Waste）

Switching valve

Auto sampler

Pump A

Pump B MS

Pump C

Column

（Waste）

Switching valve

Auto sampler

Pump A

Pump B MS

Pump C

Column Step 1：試料注入～LC分離

Step 2：送液方向を反転させカラムを洗浄


Pump A:0.1%ギ酸 Pump B:メタノール Pump C:アセトニトリル

LC分離用

カラム洗浄用

カラム洗浄液はA，Bとは異なる性質のもので，より溶出力の高い溶媒を選択



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

洗浄プログラムの実例 A社Software制御下でのS社LCシステムのプログラム設定例

Pump設定画面

Pump A，B：グラジエントモード

Pump C：アイソクラティックモード

タイムプログラム設定画面

③カラムの洗浄：スイッチングバルブを切り替えてPump Cの移動相をカラムに流入させる

②Pump B(有機溶媒)リッチな条件で流路を洗浄

①4minまでPump AとBによるグラジエント分析

<カラムスイッチング法> 2.回避法（カラム）



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


③カラム変更

新品，メーカー，充填剤，洗浄（使用後）プレカラム交換（あるいは着けない）カラム本体やフリットの素材変更（メタルフリーカラムも有効）

④注入試料変更

酸添加による自浄洗浄




http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

推奨法：キャリーオーバー対策流路，MSイオンソース，切り替えバルブ

2.回避法（流路・MS・切替バルブ）

①分析後のライン洗浄プログラムの追加

高割合の有機溶媒を通液測定終了後，別溶媒の通液

②部品交換・部品洗浄

配管，キャピラリー，シール（バルブ）の交換・洗浄

③ローター素材の変更（切り替えバルブ）

他試験への影響を考慮して変更する



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

3.キャリーオーバーを有する分析法を用いた検体測定方法



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

フローチャートバリデーション時のキャリーオーバー

実測定（条件変更なし）

問題なし LLOQ変更

・ブランク試料注入回数評価・濃度差基準評価

実測定において濃度差が

問題なし再分析

LLOQの20%以下 LLOQの20%超

LLOQの20%以下 LLOQの20%超

基準以内基準以上

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

分析法バリデーションでキャリーオーバーの影響を評価する(1)

分析法バリデーションとしての基準は満たしているため，検体測定結果に影響はないと判断して問題ない．ただし，基準付近であるため，検体測定時，検量線のULOQ測定後にブランク試料を測定するなどし，測定バッチ毎にキャリーオーバーを評価することを推奨する．

Case1：キャリーオーバーは生じるが、LLOQの15～20%以下

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

検体測定時にキャリーオーバーが生じた場合．．．

ガイドラインでは，実試料測定の際に検量線用標準試料のLLOQまたはULOQが基準を満たさなかった場合，他に3種類のQC濃度を含む場合に限り，それらの次の濃度をLLOQまたはULOQに再設定し，定量を行うことを認めている．計画書に明記することで，キャリーオーバーにおいても同様の措置をとり，キャリーオーバーの基準を満たすLLOQに変更し，検量線を作成する．

LLOQを変更し，キャリーオーバーのピークをLLOQの20%以下にする．

1 10 100 1000, Caliburation QC

変更前

変更後

例) 検量線範囲(1-1000ng/mL)，QC(3，200，750ng/mL)において，キャリーオーバーが基準を超えた場合 → LLOQを1ng/mLから2ng/mLに変更することで，キャリーオーバーは25.0%から12.5%となり基準を満たす．

Response % Carry over 250 -

1ng/mL 1000 25.0%2ng/mL 2000 12.5%

LLOQを変更し，キャリーオーバーを

基準内に

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


バリデーションでULOQ測定後にブランク試料を繰り返し測定し，キャリーオーバーがLLOQの20%以下となる回数を確認，報告書に記載する．検体測定時においては，高濃度であると予測される試料の測定後には規定回数ブランクを注入し，次サンプル測定前にキャリーオーバーの影響がLLOQの20%以下となることを確認する．

キャリーオーバーの影響がなくなるブランク注入回数を評価

0

100

0

ULOQ測定ブランク測定

0

100

0

0

100

0

0

100

0

3回目で基準内

レポート化

Case2：キャリーオーバーが、LLOQの20%以上

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/


例) 検量線範囲1～1000ng/mLの分析法において，LLOQの30%のキャリーオーバーが認められた場合

キャリーオーバーとしてULOQの0.03%(1000ng/mL×0.03%=0.3ng/mL)が次の測定に影響を及ぼすこととなる．このキャリーオーバーがガイドラインの基準以下(LLOQの20%以下)となる濃度は，1.5ng/mLであり，この時のサンプル間の濃度差は約667倍(1000ng/mL÷1.5ng/mL≒666.66・・・)となる．

次サンプルとの濃度差が667倍以下の場合，キャリーオーバーが次サンプルの測定結果に影響を及ぼしていないと判断する．

→バリデーション報告書にキャリーオーバーが影響を及ぼさないサンプル間の濃度差を明確に記載する．また，検体測定の計画書においても，影響を及ぼさない濃度差について記載する．

キャリーオーバーが影響を及ぼさない基準を報告書で明確に記載する．

Sample Number

Quantitative Value ( ng/mL)

123 1000

456 2.00 500倍→Safe !!

Sample Number

Quantitative Value ( ng/mL)

789 2000

000 2.00 1000倍→再分析

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

検体測定時に測定結果が検量線上限を超えてしまった場合．．．

ただし，検量線上限を超え，検出の飽和が著しい場合においては，定量値が過小評価されている可能性があり，正確な濃度差の評価が困難であるため，次サンプルの再分析を実施することを推奨する．再分析の結果，定量値に影響がない場合には，初回測定値を採用する．

✓ 濃度差を確認することで，次サンプルの測定結果の妥当性を評価する．

次サンプルとの濃度差がキャリーオーバーが

影響を及ぼさない基準を上回っていないか？

影響を及ぼす程度の

キャリーオーバーはない

キャリーオーバーが測定結果に影響を

及ぼしている可能性があるため再分析

上回っていない上回っている

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

検体測定時に測定順序等を工夫する

静脈注射による検体やあらかじめ体内動態の予測が可能な検体については低濃度→高濃度の順になるように測定を行う．検量線測定直後のQC試料の測定においては高濃度側より測定を実施(QCH→QCM→QCL)し，検体試料の測定を行う．

キャリーオーバーの影響が小さくなるように測定時の検体の順番を考慮する．

高濃度と予想される検体については，あらかじめ検体の希釈を行って測定する．

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

キャリーオーバーを有する分析法を用いた検体測定方法

バリデーション実施時に基準を満たした分析法においても，検体測定時には，測定バッチ毎にキャリーオーバーを評価することを推奨する．

キャリーオーバーが回避できない分析法においては，バリデーション報告書，検体測定計画書またはSOP等にキャリーオーバーの影響が及ぼされた測定結果をどのように取り扱うか，またはどのように検体測定を実施するかを明確に記載し，一定の手順に従って処理することが重要である．

3.検体測定



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/ 4.キャリーオーバーの検討期間・内容



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

分析法構築バリ試験検体測定

箇所の同定，対策を実施

回避できない場合，ハンドリング方法を検討

事前に懸念がなかった場合事前に懸念があった場合

部品交換を実施

回避できない場合，回避法case2を参照

回避法case2を参照に対策キャリーオーバーを抱えたまま実施

バリデーション試験以降の対策（メソッド変更等）はパーシャルバリデーション（PV）が必要

Ex. 1 Ex. 2 Ex. 3

分析ステージごとのキャリーオーバーの検討内容

キャリーオーバー発生

4.検討期間・内容

キャリーオーバー発生



http

://bi

oana

lysi

sfor

um.jp

/

Ex. 1 •原因箇所の究明

•原因箇所への対策の実施

•部品交換の実施は，原則推奨しない*

Ex. 2 •原因箇所究明，部品交換

•改善しない場合，EX. 3へ．この場合，分析法検討時のLC環境が特殊だった可能性大**

EX. 3 •原因箇所の究明

•原因箇所への対策の実施回避法case1では大掛かりなPVが必要となる場合があり，case2を推奨

•回避できた場合，変更項目に応じたPVを実施

•回避できなかった場合，その対応をレポート化し，検体測定を実施

*：同一機種を持っている場合で機種変更によってキャリーオーバーが軽減される場合に部品交換を実施

**：分析法構築時には新旧のカラムでの検討，LC機種を変更しての検討の実施を推奨

実質検討できる期間は1週間弱．原因箇所の究明に1～2日程度要し，キャリーオーバー対策後のPVの実施を考慮すると，対策を実施できる期間は1～2日．そのため，回避法case2（スライド20）に示したように検討項目を絞った．検討してもキャリーオーバーが回避できない場合は，前項（3.検体測定）を参照．

分析ステージごとのキャリーオーバーの検討内容（詳細）と期間

その後のリスクを考慮して，分析法構築時にはキャリーオーバーの原因箇所の究明や対策（回避法case1を参照）を詳細に（1週間程度）実施することを推奨

4.検討期間・内容

Documents

PowerPoint プレゼンテーションbioanalysisforum.jp/images/2016_7thJBFS/05_DG2015-14_HP.pdf35 27 16 3 18 17 24 16 5 ニードル外部 ニードル内部 高圧バルブ インジェクションループ

PowerPoint プレゼンテーションbioanalysisforum.jp/images/2016_7thJBFS/05_DG2015-14_HP.pdf35 27 16 3 18 17 24 16 5 ニードル外部ニードル内部高圧バルブインジェクションループ