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5/24/2018 Ppt de Adn Recombinante
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BIOTECNOLOG A;
CONCEPTO E HISTORIA
Aplicaci n de los sistemas
de problemas relacionado
calidad de vida del hombre.
En ste contexto podemos
ha desarrollado Biotecno
a os.-
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La biotecnolog a pod
como"toda aplicaci n te
que utilice sistemas bio
organismos vivos opara la creaci n o modi
productos o proceso
espec ficos".
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En la actualidad la biote
revolucionada por la inIn
Gen tica o tambi n llamada tec
recombinante.
Para situar a la biotecno
nueva era, se ha incorpo
Biotecnolog a Molecular.
BIOTECNOLOG A MOLECUL
La nueva era.
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50s 60s 70s 80s 90s 20
Primer genomasecuenciado
Primera prote naterapeutica producida
por ingenier a gen tica
El codigo gen tico
Es controlado.
Era de la g
Chips de D
Diagn s
Farmaco
Biomedi
Clonaci n del pr
animal
Inicio de la
ingenier a gen tica
Sintesis enzim tica
del ADN por PCR
Taq
Creaci n de base
de datos
de ADN y p ptidos
Producci n de
SOMATOSTATINA
en bacterias
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BIOTECNOLOG A;
Ambitos de desarrol
Alimentos
Antibi ticos
Nuevos f rmacos
Vacunas
Hormonas
Terapias g nicas
Mejora de procesos
Obtenci n de nuevos alimentos
Desarrollo de nutrace ticosDesarrollo de aditivos
Tratamiento de residuos
Biorremediaci n
Energ as limpias
Farmacia
Medio ambien
Diagn stico
Salud humana
Agricultura y g
Calidad de alim
Calidad ambien
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Microorganismos
Bacterias levaduras
Veget
tran
Animales
Transg nicos
Prod
C lulas
animales
Prote nas terap uticas
Anticuerpos
Mol culas complejas
Prote nas terap uticas
Anticuerpos
Mol culas complejas
Cultivos celularesen bioreactores
No hay necesidadde reactores
Cultivos de
c lulas mamarias
Ratones de investigaci
Vacunos, ovinos
Antibi ticos
P ptidos simples
Vacunas
Mol culas simples
Cultivos en bioreactores
Bacterias levaduras hongos
Resista virus
No hay nde react
Gen tiGen tica complejaGen tica complejaGen tica simple
Insulina
Hormona hGH
Vacuna Hepatitis B
Activador tisular
de plasmin genotPA
Factor VIII
Hormona hGH Vitami
Beta Car
R R S R
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PRODUCCI N DE FRMACOS EN MICROO
Tecnolog a de bioreactor
Tiempos generacionales c
Velocidad de crecimiento
Metabolismo
Manejo gen tico y molecul
Como carencias:
Problemas de regulaci n g
Problemas en los
requerimientos metab lic
Tecnoopero
Ingenmetab
Actualmente enpleno desarroll
B squeda de nu
compuestos b
Antibi tico
Antitumoral
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Sustancia Empresa Enfermedad
factor antihemof licoMiles, Baxter, Genetics
InstituteHemofilia A
DNasa I Genentech Fibrosis qu s tica
Eritropoyetina (EPO) Amgen, Ortho Biotech Anemia, e
Glucocerebrosidasa Genzyme Enfermedad de Ga
Hormona del crecimiento Genentech Enanis mo
Insu lina Eli Lilly Diabetes
Interfer n alfa-2a Hoffmann-LaRocheciertas leucemias, sarco
Kaposi
Interfer n alfa-2b Schering-Ploughciertas leucemias, Sarco
Kaposi, hepatitis B y C
Interfer n alfa-n3 Interferon Sciences Herpe
Interfer n gamma -1b Genentech enf. granulo
Interleucina-2 Chiron Carcinoma c
Somatotropina Eli LillyDeficiencia hormona
crecimiento
Activador tisular del
plasmi n geno (tPA)Genentech
Infarto agudo de miocar
embolismo pulmonar mas
F rmacos recombinantes producido
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RECOMBINANTE
ES UN T RMINO QUE AGRUPA UNA GRAN VARIEDAD DE T CN
EMPLEADAS EN EL LABORATORIO PARA MANIPULAR LAS MOL
ADN CON EL FIN DE ESTUDIARLAS.
CONSISTE EN LA INTRODUCCI N DE GENES EXTRA OS EN E
GEN TICO DE OTRA C LULA.
REQUIERE DE CULTIVOS CELULARES, ENZIMAS DE REST
VECTORES DE CLONACI N, LABORATORIOS EQUIPADOS Y
ENTRENADO.
Esta tecnolog a es muy
importante para la
investigaci n en biolog a
celular y molecular.
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Los procedimientos b sicos de la tecnol
incluyen de manera general los siguiente
Los fragmentos de DNA se generan utilizan
endonucleasas de restricci n, que reconmol cu
DNA por secuencias espec ficas.
La piedra angular de la tecnolog a del DNA
enzimas denominadasendonucleasas de restriccLas enzi
restricci n reconocen una secuencia es
sitio de restricci n) de una mol cula de DN
DNA por esa secuencia.
Hasta la fecha, se han aislado y caracteriza
restricci n diferentes. Las enzimas de r
organismo en el que se descubrieron, util
enzima EcoRI proviene deEscherichia coli; HindIII se de
Hemophilus influenzae.
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Hay dos tipos de enzimas de restricc
Las enzimas de Tipo I cortan las dos caden
aleatoria a cierta distancia del sitio
normalmente en la investigaci n de DNA r
corte no es preciso.
Las enzimas de Tipo II reconocen una secu
cadenas de la mol cula de DNA con absolu
secuencia reconocida. Se usan ampliame
recombinante puesto que cortan en sit
reconocidas por las enzimas de Tipo II so( palindr
decir, la secuencia de una de las cadenas lea 3' e
misma que la secuencia de la cadena complem
direcci n 5' a 3'.
T
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CULTIVO CELULAR
Proceso mediante el cual, c lulas procari
cultivarse en condiciones controladas
Los "cultivos celulares" hacen referencia a la si
eucariotas pluricelulares, especialmente c lulas
Cultivo de
humanas en
enriqueci
amino ci
factores d
Medios de cultivo
s lidos para
siembra de las
c lulas
(Variedad de agares)
Procesamiento de cultivo de c lulas
madre
S T
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MEDIOS DE CULTIVO
MEDIO DESCRIPCION
Medio Basal de Eagle (BME) Medio elemental con s
necesita siempre la supl
con suero bovino fet
rat n y c lulas HeLa.
McCoy 5A Medio dise ado para el cr
l neas celulares diplo
humanas.
Medio L-15 de Leibovitz Utilizado para el cultiv
RPMI 1640 Medio dise ado para el cr
celulares leuc micas en
rango de aplicaciones
5 S SDE TE G DE
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5 PASOS DE LA TECNOLOG A DEL A
RECOMBINANTE
Vector declonaci n
Selecci
ADN con
gen de in
Corte c
de restr
Pl smido
recombinadoCromosoma
bacteriano
Pl smido dentro
de la bacteriacultivo de
recombin
Corte del ADN en posiciones
precisas (secuencias pal ndromes)con endonucleasas de restricci n,
Uni n de fragmentos por la
ADNligasa,
Selecci n de un fragmento de ADN
cap z de autoreplicarse,
Insertar los vectores de clonaci n ac lulas espec ficas que contienen
toda la maquinaria gen tica para la
expresi n de la informaci n contenida
en el vector
Selecci n o identificaci n de las
c lulas que contienen al ADN
recombinante.
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Las 2 mol culas de ADN
son digeridas con la misma
endonucleasa de restricci
La enzima corta extremos
complementarios que se
aparean,
La ligasa repara hebras
cortadas de ADN y rehace
las nuevas bicatenarias.
Manipulaci n del ADN
Z S R STR
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ENZIMAS DE RESTRICCI N
Catalizan la hidr lisis de los enlaces fos
capaces de cortar ambas hebras del DNA en sitio
Ciertas cepas de E. coli degradan (cortan) e
infectivos, a menos que los cidos nucle c
grupos metilo) en algunos residuos de aden
T R S
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VECTORES DE CLONACI N
Bacteri fagos:son virus
que sirven de portadores de
Material gen tico a bacterias
Pl smismol culaextra cro
de forma c
bacterias
Cosmivectores
combina
caracter
lambda que p
extremos
regionescos
Sonmol culasque transportan y replican
llevan insertados.
S T S
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VIRUS BACTERI FAGOS
Part culas infectantes de bacterias,
Algunos (Lambda y M13) han sido utilizados
han modificado oportunamente sus genom
Pueden tener efecto l tico o lisog nico
ti id dde os irus
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Actividad de los virus bac
MANI ULACI NDEC LULAS
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MANIPULACI N DE C LULAS
HUMANAS
UT T G
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UTILIDAD DE LA BIOTECNOLOG
bacteri fagos)
Utiliza
microor
modificadgeneticam
como plan
animales
transg n
elaborac
antibi ti
hormona
de sustanc
utilidad pa
hombre.
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El sistema tradicional d
vacunasa partir de microor
pat genos inactivos, p
riesgo potencial.Muchas vacunas, como lahepati
se obtienen actualment
gen tica.
Como la mayor a de losfactores ason proteinas lo que seclon
de la proteina correspo
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ENAGRICULTURA
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EN AGRICULTURA
-En el mbito de la agricultur
pretendido obtener plantas
rendimientos sean ptimos
Desde hace muchos a os se util
conocimientos de la Gen ti
de una forma inadvertida, y en
entenderse los procesos de
realizados provocando crpoliploid as, para luego seleccio
de buenos resultados ymultiplicarlas
formandoclonescon ellas.
Losprincipalescaracter,
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os rinci es c r cterplantas transg nicas, s
a)resistencia a herbicida
enfermedades microbian.
b)incremento del rendim.
c)mejora en la calidad de lo
agr colas.
Las primeras plantas obtenid
t cnicas fueron un tipo de t
sus frutos tardan en madurar
despu s de haber sido cosecha
ENANIMALES
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EN ANIMALES
-En animales, la aplicaci n de la
Gen tica persiguen los objetivo
a)favorecer la investigaci n bfisiolog a de los genes y la biol
b)mejorar la productividad o la
enfermedades de animales tiles pa
c)producci n de prote nas de va
La correcci n de errores inna
mediante terapia g nica.
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GRACIAS