Facultad de Facultad de Facultad de Facultad de QQQQuímica y uímica y uímica y uímica y FFFFarmaciaarmaciaarmaciaarmacia

DDDDepartamentoepartamentoepartamentoepartamento DDDDeeee Control QuímicoControl QuímicoControl QuímicoControl Químico

Laboratorio Farmacognosia II CQ-412

Practica Nº 6

Tubérculo de Dioscorea, Extracción y purificación de las

saponinas utilizando métodos Cualitativos y cuantitativos.

Catedrático: Dra. María Mercedes Arriola

Instructor: Dr. Mario J. Castillo Padilla

Grupo Nº 2

IntegrantesIntegrantesIntegrantesIntegrantes Cta.Cta.Cta.Cta.

Br. Roberto I. Esponda Velásquez 20041011007

Br. Rossana María Hernández Reyes 20021003780

Sección:Sección:Sección:Sección: Lunes 1300 – 1400

FecheFecheFecheFeche: 16 de Mayo de 2011

Tegucigalpa M.D.C. Francisco Morazán Ciudad Universitaria

SAPONINAS

Los vegetales que contienen saponinas se han utilizado profusamente en muchas partes del mundo por sus propiedades detergentes. En Europa, por ejemplo, la raíz de Saponaria officinalis (familia Caryophyllaceae), y en América del sur, la corteza de Quillaia saponaria (familia Rosaceae). Estas plantas contiene un elevado porcentaje de heterósidos llamados saponinas (latín sapo, jabón), que se caracteriza por sus propiedades de producir una solución acuosa espumosa. También posee propiedades hemolíticas y, si se inyectan en el torrente sanguíneo, son muy toxicas. El hecho de que una planta contenga sustancias hemolíticas no prueba que contenga saponinas y de las especies examinadas por Wall (1961), tan sólo aproximadamente la mitad de las que poseían sustancias hemolíticas contenían saponinas. Por via oral, las saponinas son prácticamente inactivas. La zarzaparrilla, es, por ejemplo, rica en saponinas y, sin embargo, también utilizada en la preparación de bebidas no alcohólicas.

Las saponinas tiene elevado peso molecular y su aislamiento en estado puro ofrece ciertas dificultades. Como heterósidos que son, se hidrolizan por ácidos, dando una genina (sapogenina) y diversos azucares y acido uránicos relacionados. Según la estructura de la genina o sapogenina, se conocen dos grupos de saponinas; los tipo esteroide (generalmente triterpenoides tetracíclicos) y los triterpenoides pentacíclicos.

OBJETIVOS GENERALES

Extraer la saponina presente en una droga.

Purificar la saponina extraída de una droga.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Determinar cualitativamente las saponinas presentes en una droga.

Determinar cuánticamente las saponinas presentes en una droga.

ESPÁRRAGO

Nombre científico: Asparagus officinalis Asparagaceae Parte utilizada: La raíz, el rizoma y los turiones (brotes jóvenes). Principios activos: Inulina, fructosanas; saponósidos: asparagósido; flavonoides: rutósido, trazas de antocianósidos; taninos; sales de potasio.

Acción farmacológica: Las fructosanas, las sales potásicas y los saponósidos le confieren una acción diurética. La abundante fibra de los espárragos produce un efecto laxante. Popularmente se considera “depurativo”. Intoxicación/Precauciones: Los saponósidos pueden provocar irritación del endotelio renal. La toma accidental de los frutos puede producir una irritación del endotelio renal. El uso de diuréticos en presencia de urolitiasis, hipertensión o cardiopatías, solo debe hacerse por prescripción y bajo control medico, dada la posibilidad de parición de una descompensación tensional o, si la eliminación de potasio es considerable, una potenciación del efecto de los cardiotónicos. Tener en cuenta el contenido alcohólico del extracto fluido, de la tintura y del jarabe. Evaluar la conveniencia de la administración de las formas de dosificación de las formas de dosificación con contenido alcohólico (extracto fluido, tintura) durante el embarazo, lactancia, a niños pequeños o personas con gastritis, ulceras gastroduodenales, síndrome del intestino irritable o colitis ulcerosa durante los procesos de deshabituación etílica.

ZARZAPARRILLA Nombre científico: Smilax aspera Smilacaceae Parte utilizada: La raíz. Principios activos: Saponósidos triterpénicos: sarsasapogenina, esmilagenina. Aceite esencial. Almidón. Colina. Sales minerales, sobre todo potásicas. Taninos. Fitosteroles: estigmasterol,

β-sitosterol. Acción farmacológica: Diurético uricosúrico y cloroúrico, sudorífico, laxante suave, hipolipeniante, expectorante, antifúngico. Intoxicación/Precauciones: A dosis elevadas, puede provocar gastroenteritis. Debido a la presencia de saponósidos con acción hemolítica (aunque solo se ha comprobado experimentalmente in vitro y en animales tras su administración parenteral), recomendamos prescribir en forma discontinua. Tener en cuenta el contenido alcohólico del extracto fluido y de la tintura. Su uso como diurético en presencia de hipertensión, cardiopatías o insuficiencias renal moderada o grave, solo debe hacerse por prescripción y bajo control medico, ante el peligro que puede suponer el aporte incontrolado de líquidos, la posibilidad de que se produzca una descompensación tensional.

YUCA Nombre científico: Manihot esculenta Euphorbiaceae Parte utilizada: El tubérculo y las hojas. Principios activos: La hoja contiene ácido cianhídrico (0.1- 0.21 mg/g); ácidos orgánicos: oxálico, flavonoides: amentoflavona, podocarpus-flavona, derivados de quercetina. La raíz ha sido ampliamente estudiada

y contiene, entre otros componentes, diterpenos, cumarinas, ácidos orgánicos, glicósidos cianogénicos. Acción farmacológica: Cefaleas, aplicación dermatológica, antipruriginosa, antiinflamatoria Articular, antiinflamatorio, analgésico, hipotensor, hipolipemiante. Intoxicación/Precauciones: No se dispone de datos de la toxicidad de hoja en aplicación externa. El consumo de planta entera en estado fresco es tóxico para el ser humano. La cocción permite destruir la enzima β-glucosidasa encargada de hidrolizar los glucósidos cianogeneticos en ácido cianhídrico. La decocción de hoja fresca administrada oralmente en dosis variable no mostró toxicidad general en humano adulto. No se dispone de información que documente la seguridad de su uso medicinal en niños, durante el embarazo o la lactancia.

CA

RB

ON

AT

O D

E S

OD

IOC

AR

BO

NA

TO

DE

SO

DIO

CA

RB

ON

AT

O D

E S

OD

IOC

AR

BO

NA

TO

DE

SO

DIO

SinónimosSinónimosSinónimosSinónimos: Carbonato sódico anhidro, barrilla, natrón, soda Solvay, E-500, cristal de soda, ceniza de soda, xoda lavada, sosa calcinada, soda ash y sosa Numero CAS:Numero CAS:Numero CAS:Numero CAS: 497-19-8 Estado de agregación: Estado de agregación: Estado de agregación: Estado de agregación: Solido Apariencia:Apariencia:Apariencia:Apariencia: Es una sal blanca y translúcida Densidad:Densidad:Densidad:Densidad: 2540 kg/m3; 2,54 g/cm3 Punto de Ebullición:Punto de Ebullición:Punto de Ebullición:Punto de Ebullición: 1873 K (1600 °C) Punto de Fusión: Punto de Fusión: Punto de Fusión: Punto de Fusión: 1124 K (851 °C) SolubilidadSolubilidadSolubilidadSolubilidad en aguaen aguaen aguaen agua:::: 10,9 g por cada 100 g de agua Usos:Usos:Usos:Usos: El carbonato de sodio es usado para tostar (calentar bajo una ráfaga de aire) el cromo y otros extractos y disminuye el contenido de azufre y fósforo de la fundición y del acero. En la fabricación de detergentes, el carbonato de sodio es indispensable en las formulaciones al objeto de asegurar el correcto funcionamiento del resto de sustancias que lo componen, enzimas, tensoactivo, etc. durante las diferentes fases del lavado. No es de menos importancia el empleo del carbonato de sodio en aquellos procesos en los que hay que regular el pH de diferentes soluciones, nos referimos al tratamiento de aguas de la industria, así como en los procesos de flotación. Cerámica, jabones, limpiadores, ablandador de aguas duras, refinación de petróleos, producción de aluminio, textiles, pulpa y papel. Procesamiento metalúrgico, preparación de farmacéuticos, soda cáustica, bicarbonato de sodio, nitrato de sodio y varios otros usos. El carbonato de sodio y sus derivados se usan para bajar el punto de fusión del silicio y poder trabajarlo mejor, también aporta el sólido necesario para formar la red. Medidas Medidas Medidas Medidas primeros auxiliosprimeros auxiliosprimeros auxiliosprimeros auxilios Inhalación: Retirar al afectado a un lugar fresco. Mantener caliente y en reposos. Contacto con la piel: Despojarse de la ropa contaminada inmediatamente. Lavar con abundantes agua por 15 minutos. Lavar la ropa contaminada antes de reutilizar. Contacto con los ojos: Lavar los ojos con abundante agua, manteniendo los parpados abiertos (por lo menos 15 min.), avisar inmediatamente al oftalmólogo. Puede hallarse en la naturaleza u obtenerse artificialmente, gracias a un proceso ideado y patentado en 1791 por el médico y químico francés Nicolás Leblanc. El método Leblanc implicaba las siguientes reacciones químicas:

1. Reacción de la sal común con el ácido sulfúrico: 2 NaCl + H2SO4 Na2SO4 + 2 HCl

2. Reacción de calcinación del Na2SO4 con caliza y carbón: Na2SO4 + CaCO3 + 2 C Na2CO3 + CaS + 2 CO2

NaNaNaNa2222COCOCOCO3333

RE

AC

TIV

O D

E F

EH

LIN

GR

EA

CT

IVO

DE

FE

HL

ING

RE

AC

TIV

O D

E F

EH

LIN

GR

EA

CT

IVO

DE

FE

HL

ING

Identificación de peligrosIdentificación de peligrosIdentificación de peligrosIdentificación de peligros Peligros que presenta la sustancia según las directivas europeas: Tóxico para los organismos acuáticos. Primeros auxiliosPrimeros auxiliosPrimeros auxiliosPrimeros auxilios Inhalación: Tomar aire fresco. Llamar al médico si prosigue el malestar. Ingestión: Beber abundante agua, provocar vómitos. Llamar al médico si prosigue el malestar. Contacto con la piel: Aclarar con abundante agua. Quitar la ropa contaminada. Contacto con los ojos: Aclarar con abundante agua, con los párpados bien abiertos. Si no desaparecen las molestias, llamar al oftalmólogo. Manipulación y almacenamientoManipulación y almacenamientoManipulación y almacenamientoManipulación y almacenamiento Manipulación: Sin más exigencias. Almacenamiento: Almacenar bien cerrado, en lugar bien ventilado. Almacenar entre +15°C y +25°C. Propiedades físicas y químicasPropiedades físicas y químicasPropiedades físicas y químicasPropiedades físicas y químicas Información general: Aspecto: líquido Color: azul Olor: característico Densidad (20 °C): 1,04 g/cm3 Solubilidad en agua: miscible Información reglamentariaInformación reglamentariaInformación reglamentariaInformación reglamentaria Clasificación CE: Este producto no está incluído en el índice de sustancias peligrosas con su número de índice CE correspondiente, por lo que ha sido clasificado siguiendo el anexo VI de la directiva 2001/59/CE. Pictograma: Frases R: 51 Tóxico para los organismos acuáticos. Frases S: 24/25-61 Evítese el contacto con los ojos y la piel. Evítese su liberación al medio ambiente.

Fehling A Fehling A Fehling A Fehling A Cu2SO4/H2Od Fehling B Fehling B Fehling B Fehling B KNaC4H4O6·4H2O + NaOH/H2Od

ET

ER

DE

PE

TR

OL

EO

ET

ER

DE

PE

TR

OL

EO

ET

ER

DE

PE

TR

OL

EO

ET

ER

DE

PE

TR

OL

EO

SinónimosSinónimosSinónimosSinónimos: Nafta, ligroine, espiritus del petroleo, nafta de petróleo, petróleo, bencina. Numero CAS:Numero CAS:Numero CAS:Numero CAS: 8032-32-4 Estado de agregación:Estado de agregación:Estado de agregación:Estado de agregación: Liquido Apariencia:Apariencia:Apariencia:Apariencia: Liquido claro incoloro y olor a gasolina DensidadDensidadDensidadDensidad relativa: relativa: relativa: relativa: 0.64 ( Agua=1) a 15.6 ºC Punto de Ebullición:Punto de Ebullición:Punto de Ebullición:Punto de Ebullición: 37 - 56 ºC Punto de Fusión: Punto de Fusión: Punto de Fusión: Punto de Fusión: No aplica SolubilidadSolubilidadSolubilidadSolubilidad en aguaen aguaen aguaen agua:::: despreciable 1 Gm/100ml a 15ºC Propiedades:Propiedades:Propiedades:Propiedades: Líquido transparente, incoloro, no fluorescente, volátil y sumamente inflamable. Desde el punto de vista químico no es un éter sino una mezcla de hidrocarburos de bajo peso molecular. Usos:Usos:Usos:Usos: Se emplea como disolvente o eluyente para diferentes usos de laboratorio, análisis, investigación y química fina.

HE

XA

NO

HE

XA

NO

HE

XA

NO

HE

XA

NO

SinónimosSinónimosSinónimosSinónimos: n-hexano, hidruro de hexilo. Numero CAS:Numero CAS:Numero CAS:Numero CAS: 110-54-3 Estado de agregación: Estado de agregación: Estado de agregación: Estado de agregación: Líquido Apariencia:Apariencia:Apariencia:Apariencia: Liquido claro incoloro con olor suave a gasolina Densidad relativa: Densidad relativa: Densidad relativa: Densidad relativa: 0.6548 g/cm Punto de Ebullición:Punto de Ebullición:Punto de Ebullición:Punto de Ebullición: 342 K (68,85 °C) Punto de Fusión: Punto de Fusión: Punto de Fusión: Punto de Fusión: 178 K (-95,15 °C) SolubilidadSolubilidadSolubilidadSolubilidad en aguaen aguaen aguaen agua:::: 6,1 mg/L Usos:Usos:Usos:Usos: La mayor parte del hexano usado en industria se mezcla con sustancias químicas similares llamadas solventes. El uso principal de los solventes que contienen hexano es en la extracción de aceites vegetales de cosechas. También se usa en los laboratorios. Estos solventes también se usan como agentes para limpiar en imprentas, en industrias textiles, de muebles y de calzado. Ciertos tipos de pegamentos especiales usados en industrias de techado y de zapatos y cueros también contienen hexano. Varios productos de consumo tales como gasolina, pegamentos de secado rápido usados y cemento para pegar contienen hexano.

CCCC6666HHHH14141414

ESQUEMATIZACIÓNESQUEMATIZACIÓNESQUEMATIZACIÓNESQUEMATIZACIÓN PRE-TRATAMIENTO 450g Droga + H2Od

Colocar la droga licuada cubrir con una molde de aluminio bolsa negra y dejar reposar por 3 dias a una temperatura inferior a 40 ºC PROCEDIMIENTO HCl hasta obtener una solución aproximada a 4N Hidrolisis acida ºT= 80 – 90 ºC por 1:30 – 2 H Se deja enfriar un momento Residuo del agrega agua filtrado para aumentar pH

Sil el pH no sube agregar buffer (Na dejar reposar 5 min Residuo Filtrado FILTRADO agregar a un tubo ensayo RESIDUO

Sil el pH no sube agregar buffer (Na2CO3)

dejar reposar 5 min

Residuo

Filtrado

agregar gotas del reactivo de Fehling

12 horas

70-80 ºC pulverizarpulverizar

2-5gDx MONTAJE DE SOXHLET

Papel filtro formar un cilindro grapar ambos cada lado debe tocarse extremos 2-5g Dx

agua agua 60mL Eter de petróleo 40mL Hexano Sembrar extracto *si se posee menos de solvente extractor completar con hexano frio

CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA Preparación de la placa cromatográfico 20x20cm Activar placa 20 min a 110 ºC Hacer una marca paralela

al bordeen de la placa

2cm Marcara cada punto de sembrado *Las marcas deben estar x distante entre si

FASES MÓVILES

1. Hexano/Acetato de etilo 4:1 2. Ciclohexano/Acetato de metilo/Agua 6:4:1 3. Cloroformo/Acetona 4:1

PREPARA LA CUBA 1cm

MONTAJE DE CROMATOGR *el eluyente no debe sobre pasar la línea del sembrado

Fase móvil hasta nivel adecuado

MONTAJE DE CROMATOGRAFÍA

Tapar la cuba

4horas

Tapar la cuba

RESULTADOSRESULTADOSRESULTADOSRESULTADOS PRUEBA DE FEHLING La prueba de Fehling arrojo un resultado negativo

CROMATOGRAFÍA CAPA FINA *No fue realizada

OBSERVACIONESOBSERVACIONESOBSERVACIONESOBSERVACIONES

La prueba de Fehling realizada al esparrago arrojo un resultado negativo.

La fermentación del esparrago es mucho mas intensa que la de la yuca o de la zarzaparrilla.

Si la fase móvil del soxhlet nos indica fuga en el montaje.

CONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONESCONCLUSIONES

El método se soxhlet nos permite obtener una extracción eficaz y con un alto grado de pureza sin necesidad de procedimientos posteriores para eliminar impurezas.

La prueba de Fehling nos permite afirmar con seguridad que la muestra utilizada no posee o en muy poca cantidad azucares reductores.

El esparrago contiene saponinas esteroideas.

ANEXOSANEXOSANEXOSANEXOS Se realizo las pruebas siguientes para la identificación de saponinas.

Prueba de espuma: 2ml del extracto más agua destilada en un tubo de ensayo, agitar vigorosamente por 1 min y dejar reposar 5 min, si hay presencia de espumas la prueba será positivo.

Determinación de saponinas triterpénicos o esferoidales: En 2 tubos de ensayo del mismo tamaño y diámetro añadir. Tubo A: 2ml de extracto más 2ml de HCl 0,1N Tubo B: 2ml de extracto más 2ml de NaOH 0,1N Agitar vigorosamente ambos tubos, al mismo tiempo por 1 min. Dejar reposar por 5 min. Y observar resultados. Si la cantidad de espuma del tubo B es superior a la del A se tratara de SAPONINAS ESTEROIDALES. Si ambos tubos presentan la misma cantidad de espuma, entonces se tratara de SAPONINAS TRITERPENICAS. RESULTADOS

PRUEBAPRUEBAPRUEBAPRUEBA RESULTADO

Prueba de espumaPrueba de espumaPrueba de espumaPrueba de espuma Positiva (+)

Saponinas esteroidalesSaponinas esteroidalesSaponinas esteroidalesSaponinas esteroidales Negativa (-)

Saponinas triterpénicosSaponinas triterpénicosSaponinas triterpénicosSaponinas triterpénicos Positiva (+)

INVESTIGACIONESINVESTIGACIONESINVESTIGACIONESINVESTIGACIONES

BUFFER ÁCIDOS Y BÁSICOS Un tampón, buffer, solución amortiguadora o solución reguladora es la mezcla en concentraciones relativamente elevadas de un ácido débil y su base conjugada, es decir, sales hidrolíticamente activas. Tienen la propiedad de mantener estable el pH de una disolución frente a la adición de cantidades relativamente pequeñas de ácidos o bases fuertes. Se puede entender esta propiedad como consecuencia del efecto ion común y las diferentes constantes de acidez o basicidad: una pequeña cantidad de ácido o base desplaza levemente el equilibrio ácido-base débil, lo cual tiene una consecuencia menor sobre el pH. Cada sistema buffer tiene su propio rango efectivo de pH, el cual dependerá de la constante de equilibrio del ácido o base empleado. Son importantes en el laboratorio y en la industria, y también en la química de la vida. Tampones típicos son el par amoníaco-catión amonio, ácido acético-anión acetato, anión carbonato-anión bicarbonato, ácido cítrico-anión citrato o alguno de los pares en la disociación del ácido fosfórico. BUFFER DE ACETATO (0,1 M;BUFFER DE ACETATO (0,1 M;BUFFER DE ACETATO (0,1 M;BUFFER DE ACETATO (0,1 M; pHpHpHpH 3,63,63,63,6----5,6)5,6)5,6)5,6) Solución A (ácido acético 0,2M): disolver 11,55 ml de ácido acético glacial en agua destilada completando 1 litro. Solución B (acetato de sodio 0,2 M): disolver 27,2 g de acetato de sodio (3 H2O) en agua destilada completando 1 litro.

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 463 37 500 3.6 440 60 500 3.8 410 90 500 4 368 132 500 4.2 305 195 500 4.4 255 245 500 4.6 200 300 500 4.8 148 352 500 5 105 395 500 5.2 88 412 500 5.4 48 452 500 5.6

Si se desea obtener SN buffer de acetato 0,2 M, se elimina el agua destilada de la mezcla.

BUFFER DE BORATO BUFFER DE BORATO BUFFER DE BORATO BUFFER DE BORATO –––– CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M,CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M,CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M,CLORURO (borato 0,1 M; cloruro 0,1 M, pHpHpHpH 8,18,18,18,1----10)10)10)10) Solución A (H3BO3 0,2 m, KCl 0,2 M): disolver 12,4 g de H3BO3 en 400 ml de agua destilada, completando luego a 500 ml. En otro recipiente disolver 14,91 g de KCl en 400 ml de agua destilada, llevando a un volumen de 500 ml. Mezclar ambas soluciones. Solución B (NaOH 0,2 N): disolver 0,8 g de NaOH en 500 ml de agua destilada, completando a un litro. Controlar la normalidad con solución valorada de HCl.

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 500 49 451 8.1 500 60 440 8.2 500 72 428 8.3 500 86 414 8.4 500 101 399 8.5 500 118 382 8.6 500 137 363 8.7 500 158 342 8.8 500 181 319 8.9 500 208 292 9 500 236 264 9.1 500 264 236 9.2 500 293 207 9.3 500 321 179 9.4 500 346 154 9.5 500 369 131 9.6 500 389 111 9.7 500 406 94 9.8 500 422 78 9.9 500 437 63 10

BUFFER DE CARBONATO (pH 9BUFFER DE CARBONATO (pH 9BUFFER DE CARBONATO (pH 9BUFFER DE CARBONATO (pH 9----10.8 10.8 10.8 10.8 –––– fuerzafuerzafuerzafuerza iónica 0,1)iónica 0,1)iónica 0,1)iónica 0,1) Solución A (bicarbonato de sodio 0,1 M): disolver 84 g de NaHCO3 en suficiente cantidad de agua destilado completando 1 litro. Solución B (carbonato de sodio 0,1 M): 106 g de Na2CO3 anhidro se disuelven en agua destilada completando 1 litro.

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 76.8 7.7 915.5 9 67.6 10.8 921.6 9.2 56.8 14.4 928.4 9.4 45.3 18.2 936.5 9.6 34.3 21.9 943.8 9.8 24.6 25.1 950.3 10 17 27.6 955.4 10.2

11.2 29.5 959.3 10.4 7.1 30.8 962.1 10.6 4.1 31.7 964.2 10.8

BUFFER DE GLICINABUFFER DE GLICINABUFFER DE GLICINABUFFER DE GLICINA Glicina HCl (glicina 0.1 M, pH 2.2-3.6): Solución A (glicina 1M): disolver 75.07 g de glicina en cantidad suficiente de agua destilada, completando un litro. Solución B: HCl 1 N.

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 100 88 812 2.2 100 64.8 835.2 2.4 100 48.4 851.6 2.6 100 33.6 866.4 2.8 100 22.8 877.2 3 100 16.4 883.6 3.2 100 12.8 887.2 3.4 100 10 890 3.6

Glicina NaOH (glicina 0,1 M, pH 8.6-10.4) Solución A (glicina 1 M): disolver 75,07 g de glicina en 1 litro de agua. Solución B (NaOH 1 N): disolver 40 g de NaOH en agua destilada llevando a 1 litro. Verificar normalidad con SN valorada de HCl.

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 100 8 892 8.6 100 12 888 8.8 100 17.6 882.4 9 100 24 876 9.2 100 33.6 866.4 9.4 100 44.8 855.2 9.6 100 54.4 845.6 9.8 100 64 836 10 100 77.2 822.8 10.2 100 91 809 10.4

Para preparar SN buffer de glicina- cloruro a diferentes pH, se incorpora a las SN A indicadas, NaCl a una molaridad 10 veces superior a la deseada.

BUFFER FOSFATOS (fosfatos BUFFER FOSFATOS (fosfatos BUFFER FOSFATOS (fosfatos BUFFER FOSFATOS (fosfatos 0,1 M, pH 7.5)0,1 M, pH 7.5)0,1 M, pH 7.5)0,1 M, pH 7.5) Solución A (NaH2PO4 0,2 M): disolver 27.6 g de NaH2PO4 • H2O en agua destilada, completando un litro. Solución B (Na2HPO4 0,2 M): 53.65 g de Na2HPO4 • 7 H2O se disuelven en agua destilada, llevando el volumen final a 1 litro. Si se desea molaridad 0,2 se suprime el agua destilada.

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 467.5 32.5 500 5.7 460 40 500 5.8 450 50 500 5.9

438.5 61.5 500 6 425 75 500 6.1

407.5 92.5 500 6.2 387.5 112.5 500 6.3 367.5 132.5 500 6.4 342.5 157.5 500 6.5 312.5 187.5 500 6.6 282.5 217.5 500 6.7 255 245 500 6.8 225 275 500 6.9 195 305 500 7 165 335 500 7.1 140 360 500 7.2 115 385 500 7.3 95 405 500 7.4 80 420 500 7.5 65 435 500 7.6

52.5 447.5 500 7.7 42.5 457.5 500 7.8 35 465.473.5 500 7.9

26.5

500 8

BUFFER DE TRIS (tris hidroximetilBUFFER DE TRIS (tris hidroximetilBUFFER DE TRIS (tris hidroximetilBUFFER DE TRIS (tris hidroximetil----aminometano)aminometano)aminometano)aminometano)–––– HCl (tris 0,05 M, pH 7.2HCl (tris 0,05 M, pH 7.2HCl (tris 0,05 M, pH 7.2HCl (tris 0,05 M, pH 7.2----9)9)9)9) Solución A (tris 0,2 M): se obtiene disolviendo 24.23 g de Tris en agua destilada, llevando a volumen de un litro. Solución B: HCl 1 N Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH

250 44.2 705.8 7.2 250 41.4 708.6 7.4 250 38.4 711.6 7.6 250 32.5 717.5 7.8 250 26.8 723.2 8 250 21.9 728.1 8.2 250 16.5 733.5 8.4 250 12.2 737.8 8.6 250 8.1 741.9 8.8 250 5 745 9

BUFFERBUFFERBUFFERBUFFER VERONALVERONALVERONALVERONAL Veronal – veronal sódico – cloruro sódico (pH 7.4-8.9 – fuerza iónica 0,1): Solución A (veronal 0,025 M): se prepara disolviendo 4,605 g de veronal en agua destilada llevando a un litro. Solución B (veronal sódico 0,05 M): disolver 10,309 g de veronal sódico en agua destilada llevándolo a un litro. Solución C (cloruro de sodio 0,5 M): 29.2 g de NaCl se disuelven en agua destilada hasta 1 litro.

Solución A (ml) Solución B (ml) Solución C (ml) Agua destilada (ml) pH 639 10 190 161 7.4 403 10 190 397 7.6 636 25 175 164 7.8 401 25 175 399 8 506 50 150 294 8.2 639 100 100 161 8.4 403 100 100 397 8.6 509 200 0 291 8.8 321 200 0 479 8.9

Veronal sódico HCl (pH 6.8-9.6 – fuerza iónica 0,1): Solución A (veronal sódico 0,5 M): 103.09 g de veronal sódico en agua destilada y completar 1 litro. Solución B: HCl 1 N

Solución A (ml) Solución B (ml) Agua destilada (ml) pH 104.2 47.8 848 6.8 107.2 46.4 846.4 7 110.8 44.6 844.6 7.2 116.2 41.9 841.9 7.4 123.2 38.5 838.3 7.6 132.4 33.8 833.8 7.8 143.2 28.4 828.4 8 153.8 23.1 823.1 8.2 164.7 17.8 817.5 8.4 174.2 12.9 812.9 8.6 181.2 9.2 809.6 8.8 187.2 6.4 806.4 9 190.4 4.8 804.8 9.2 194.8 2.6 802.6 9.4 197 1.5 801.5 9.6

Soluciones Veronal – Veronal sódico para electroforesis (fuerza iónica 0,1):

Veronal (g) Veronal sódico (g) Agua destilada pH 4.90 17.4 Hasta 1 litro 8.4 3.41 18.95 Hasta 1 litro 8.6 2.34 20.62 Hasta 1 litro 8.8

BUFFER PARA COMPLEMENTOBUFFER PARA COMPLEMENTOBUFFER PARA COMPLEMENTOBUFFER PARA COMPLEMENTO Debe guardarse en la heladera. En el momento de usar se diluye al 1/5 en agua destilada.

NaClNaClNaClNaCl 42.5 g42.5 g42.5 g42.5 g ÁcÁcÁcÁcidoidoidoido dietilbarbitúrico (veronal ácido)dietilbarbitúrico (veronal ácido)dietilbarbitúrico (veronal ácido)dietilbarbitúrico (veronal ácido) 2.875 g

Dietilbarbiturato de sodio (veronal sódico)Dietilbarbiturato de sodio (veronal sódico)Dietilbarbiturato de sodio (veronal sódico)Dietilbarbiturato de sodio (veronal sódico) 1.875 g CaClCaClCaClCaCl2222 anhidroanhidroanhidroanhidro 0.2 g MgClMgClMgClMgCl2222 . H. H. H. H2222OOOO 1.0 g

H2O destilada, c.s.p.H2O destilada, c.s.p.H2O destilada, c.s.p.H2O destilada, c.s.p. 1000 ml Disolver el veronal ácido en aproximadamente 500 ml de agua caliente. Disolver el veronal sódico en agua fría y agregarle en frío, manteniendo el orden, los siguientes componentes: NaCl, CaCl2 y MgCl2. Mezclar con la solución de veronal sódico y medir el pH, el que debe oscilar entre 7,3 – 7,4. Si fuera necesario ajustar con HCl o NaOH de normalidad adecuada. Completar a un litro con agua destilada.

BIBLIOGRAFÍA Trease, G.E., y Evans, W.C. (1988). Saponinas, drogas cardioactivas y otros

esteroides (12a ed., p. 493). México: interamericana S.A. FITOTERAPIA Vademécum de Prescripciones. (1998). [CD-ROM]. España:

Masson S.A., derechos de edición y difusión, Netaldea S. L., derechos de autor, 1, Windows

Riesgos químicos – accidentes graves HEXANO. (2011). En Murcia + salud el

portal sanitario de la Región de Murcia. Recuperado el 4 de mayo de 2011, de http://www.murciasalud.es/recursos/ficheros/138600-Hexano.pdf

Hoja informativa de seguridad y protección ambiental HEXANO. (2011). En

estrucplan on line. Recuperado el 4 de mayo de 2011, de http://www.estrucplan.com.ar/secciones/Hojas/110-54-7Hexano.asp

Hexano. (2011). En Wikipedia La enciclopedia libre. Recuperado el 10 de mayo de

2011, de http://es.wikipedia.org/wiki/Hexano Éter de petróleo. (2011). En Wikipedia La enciclopedia libre. Recuperado el 11 de

mayo de 2011, de http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%89ter_de_petr%C3%B3leo

Preparación de soluciones buffer usadas en inmunología. (2011). En

Monografias.com. Recuperado el 11 de mayo de 2011, de http://www.monografias.com/

Asparagus officinalis. (2011). En Wikipedia La enciclopedia libre. Recuperado el 2

de mayo de 2011, de http://es.wikipedia.org/wiki/Asparagus_officinalis#Gastronom.C3.ADa

Smilax aspera. (2011). En Wikipedia La enciclopedia libre. Recuperado el 9 de

mayo de 2011, de http://es.wikipedia.org/wiki/Smilax_aspera Manihot esculenta. (2011). En Wikipedia La enciclopedia libre. Recuperado el 4 de

mayo de 2011, de http://es.wikipedia.org/wiki/Manihot_esculenta Manihot esculenta. (2011). En Hospital Docente Clínico Quirúrgico “Luc ِ◌ía

Iñiguez Ladín”. Recuperado el 4 de mayo de 2011, de http://www.hcqho.sld.cu/Farmacologia%20I/P-Farmacologia/contenidos/tema_3/bibliografia/Farmacopea%20Vegetal%20Caribe%C3%B1a/Yuca_Manihot%20escuelenta.pdf

HOJA DE SEGURIDAD CARBONATO DE SODIO. (2011). En MAQUIMSA

S.A. Distribución de Insumos Químicos Industriales. Recuperado el 7 de mayo de 2011, de http://www.maquimsaperu.com/index_archivos/carbonato.pdf