Prcticas de Toxicologia Para Los Alumnos a-2011

MATERIA CLAVE PLAN

TOXICOLOGIA 11349 UNAM

PRACTICA No. 01TITULO:

DETERGENTES EN MUESTRAS ACUOSAS

OBJETIVO Conocer y aplicar la técnica de separación “extracción”. Realizar una prueba de contenido de detergente en una muestra acuosa.

HIPOTESIS

MARCO TEORICO

MATERIAL

Pipetas graduadas de 10mL Probeta de 10 mL Probeta de 50mL Probeta de 100mL Matraces erenmeyer de

250mL Embudos para filtracion Embudos de separacion de

500mL Matraces afotados de 100mL Fibra de vidriopapel filtro

whatman Cronometro

Espectrofotometro Celdas para espectrofotometro. Agua destilada Sol. Indicadora de fenoftaleina Sol. NaOH 1N Sol H2SO4 1N Cloroformo Sol. De azul de metileno Sol. De lavado. Suspension de AlOH

UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICOCAMPUS CHAPULTEPEC

PROCEDIMIENTO

El procedimiento requiere que la muestra se encuentre libre de color y de turbiedad: lo cual se logra adicionando 25mL de suspensión de hidróxido de aluminio y aproximadamente 150mL de muestra y filtrando a través de papel filtro.

En un embudo de separación tomar 100mL de muestra o parte alícuota aforada a 100mL con agua destilada. Correr un testigo de agua destilada.

Adicionar unas gotas de fenoftaleína para estimar si la muestra esta ácida (incolora) o alcalina (rosa). Neutralizar a pH de 7 con NaOH o H2SO4.

Extraer con 25mL de la solucion de azul de metileno y 10 mL de cloroformo.

Transferir la capa de cloroformo a un segundo embudo de separación.

Repetir esta operación de extraccion 2 veces mas, cada una con 10 mL de cloroformo.

Adicionar 50mL de olucion de lavado al segundo embudo de separación, agitar vigorosamente por 30 seg., dejar escapar el gas, para separar las fases.

Transferir la capa de cloroformo a un matraz aforado de 100mL filtrando a través de un embudo de tallo largo que contenga lana de vidrio.

Repetir la extracción de la solución de lavado dos veces mas, usando 10mL de cloroformo en cada ocasión.

Diluir con cloroformo hasta la marca del matraz de 100mL y agitar bien.

Leer absorbancia a 652 nm contra testigo de cloroformo.

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- Cual es la función del Al (OH)3?

2.- Detergente: Concepto, Composición, Clasificación (biodegradables o no). Impacto ambiental y toxicológico?

BIBLIOGRAFIA

ALUMNOGRUPO

CALIFICACION

OBSERVACIONES

PROFESOR FECHA

M en C. ISIDRO HINOJOSA LÓPEZ

PRACTICA No. 02TITULO:

EXTRACCION DE TOXICOS NO VOLATILES, MEDIANTE EL PROCEDIMIENTO DE EXTRACCION GENERAL

OBJETIVO

1.- Indicar los criterios para seleccionar una muestra de orina, lavado gástrico ó sangre, en la búsqueda e identificación de principios activos, así como los requerimientos necesarios para su conservación antes de efectuar el análisis correspondiente.

2.- Identificar las etapas básicas del análisis cualitativo de substancias tóxicas.

3.-Establecer los fundamentos en que basan los procesos de extracción de substancias con fines toxicológicos.

PROCEDIMIENTO(DIBUJOS, ESQUEMAS, DIAGRAMAS, SEGÚN REQUIERA)

a).- Extracción de orina o de contenido gástrico:

Si la muestra es de orina agregar ácido tartárico sólido hasta un pH de 3.0. Si es contenido gástrico añada 5 ml de agua y 0.5 g de ácido tartárico y calentar. Agitar y filtrar. Después extraer con 2 ml de éter. Dejar separar la capa etérea y la acuosa.

Reunir los extractos etéreos y lavar con 5 ml de agua. Dejar que se separen las dos capas. Reunir el agua de lavado a la primera capa acuosa. La fase etérea se trata con 5 ml de solución saturada de bicarbonato de sodio. Agitar suavemente y dejar separar las dos fases. La fase acuosa se denominará Fracción A (ácidos fuertes).

La fase etérea remanente se extrae con 5 ml de NaOH 0.45N ( la fase acuosa de denominará fracción B ( ácidos débiles ).

La fase etérea residual se lava con agua destilada y se desecha el agua de lavado. La capa etérea se trata con Na2SO4 anhidro. Y se decanta; se evapora a sequedad en una cápsula de porcelana en baño maría. El residuo de denominará fracción C (Substancias neutras).

La fase acuosa retenida en la primera extracción se alcaliniza con NH4OH a pH 8.0; extraer con dos porciones de 2 ml de cloroformo. La capa clorofórmica, previamente se le agregan unos cristales de ácido tartárico y se evapora a sequedad en baño maría; el residuo se denominará fracción D (substancias básicas).

Reacciones de Identificación

1.- AnfetaminasAl residuo de la fracción D colocado en la cápsula de porcelana agregarle unas gotas del reactivo de Marquis ( 2 gotas de formaldehído con 1 ml de ácido sulfúrico, se prepara al momento de uso ); se produce una coloración naranja que pasa a café, en caso positivo.

2.- Acetaminofen ( Paracetamol )A 1 ml de la fracción B, se le agrega 1 ml de HCL conc. La mezcla se calienta en baño maría (aproximadamente 70 a 80ºC ) por 10 min. Se deja enfriar. En un tubo de ensayo colocar 0,1 ml de la mezcla anterior y agregarle 0.9 ml del reactivo de O-cresol (10 g aforados a 1lt ). A ésta mezcla agregarle 2 ml de NH4OH 4 M; la presencia de un color azul después de 2 min., indica la presencia de Acetaminofen.

MATERIAL CANTIDAD MATERIAL CANTIDADGradilla Pipeta graduada 1, 2, 5 y 10 mlMatraz Erlenmeyer 125 mlPinza para tubo de ensayoTubos de ensayo 13x100Cápsula de porcelanaAnillo metálico con soportePipeta PasteurEmbudo de separación

12 c/u

2152142

Agitador de vidrioEmbudo de filtración Vaso de pp de 250 mlBaño MaríaResistencia eléctricaGogles, cubre boca, guantesMatraz aforado 10 y 100 mlPapel filtroPapel p

11211

1 c/u2 c/u

11 caja

SUSTANCIASCANTIDAD SUSTANCIAS CANTIDAD

Acido clorhídrico Acido sulfúrico Acido tartáricoHidróxido de amonio Hidróxido de sodio

Cloroformo Éter dietílicoFormaldehído Sulfato de sodio anhidro Orto-cresol

CUESTIONARIO

5.- Que antioxidante se recomienda para la conservación de fármacos en muestras biológicas a analizar? ¿En que consiste el efecto apple-jacket?.

6.- Porque se prefiere el NaF como anticoagulante para analizar fármacos de tipo éster?.

7.- A que grupos de fármacos pertenecen la Anfetamina y el acetaminofen ?.

1.- Cuál es el fundamento químico de las reacciones de identificación?

2.- Cuales son las tres etapas básicas en que se puede dividir un análisis cualitativo?

3.- Mencione las indicaciones que permite seleccionar un espécimen (orina, lavado gástrico, sangre) para la identificación de substancias tóxicas.?

4.- Que propiedades químicas del solvente deben tenerse en cuenta al seleccionarlo para un proceso de extracción ?

BIBLIOGRAFIA

1.- Amadeo J. Pesce, Kaplan L.A. Methods in Clinical Chemistry. C.V. Mosby Co. U.S.A. 1987, Cap. 44. Pp. 315-323. Cap. 368-384.

2.- Boer N.C. et al. Clinical Chemistry. Plenum Press. U.S.A. 1989. Cap. 3 pp. 75-93.

3.- Chamberlain J. Analysis of Drugs in Biological Fluids. CRC Press. U.S.A. 1985 pp. 189- 193.

PRACTICA No. 03

TITULO: EXTRACCION DE TOXICOS NO VOLATILES, MEDIANTE EL PROCEDIMIENTO DE

EXTRACCION SELECTIVA

OBJETIVO

Conocer la técnica de extracción mas importante en Toxicología Analítica Conocer los tipos de substancias comprendidas entre los tóxicos no volátiles,

que pueden extraerse por medio de esta técnica. Comparar la técnica de STASS – OTTO con otras usadas en la Toxicología

Analítica.

MATERIAL CANTIDAD MATERIAL CANTIDADGradilla Pipeta graduada 1, 2, 5 y 10 mlMatraz Erlenmeyer 125 mlPinza para tubo de ensayoTubos de ensayo 13x100Cápsula de porcelanaAnillo metálico con soportePipeta PasteurEmbudo de separación

12 c/u

2152142

Agitador de vidrioEmbudo de filtración Vaso de pp de 250 mlBaño MaríaResistencia eléctricaGogles, cubre boca, guantesMatraz aforado 10 y 100 mlPapel filtroPapel pH

11211

1 c/u2 c/u

11 caja

NOTA: ESPECIFICAR SI EL MATERIAL ES POR EQUIPO DE TRABAJO O INDIVIDUAL E INDICAR DE CUANTOS ESTUDIANTES CONSTA EL EQUIPO.

SUSTANCIAS CANTIDAD SUSTANCIAS CANTIDADAcido clorhídrico Acido sulfúrico Acido tartáricoHidróxido de amonio Hidróxido de sodio

Cloroformo Éter dietílicoFormaldehído Sulfato de sodio anhidro Orto-cresol


A).- Tipos de muestra:

a).- Muestras para extracción directa: Tabletas, Cápsulas, polvos, jarabes, soluciones, etc.

b).- Muestras para extracción por el método de STASS-OTTO, en orina, sangre, vísceras, etc.

B).- Extracción.-

a).- Extracción directa:A la muestra problema se le agregan 10 ml de HCL 2N; se agita la mezcla durante 5 min. Y posteriormente se filtra; a la solución filtrada se le llamará solución a

b).- Extracción por el método de STASS-OTTO:La muestra se enfría en baño de hielo, una vez fría se acidula con ácido tartárico; se agita con 25 ml de etanol y se coloca en baño maría a 60 ºC durante 30 min.

Se enfría la mezcla y se filtra. El filtrado se evapora en baño maría hasta obtener un extracto siruposo, se agregan 25 ml de etanol caliente en pequeñas porciones, decantando cada vez una nueva porción. Los extractos etanólicos se evaporan a sequedad en baño maría en una cápsula de porcelana. Se enfría y el residuo se restituye con 6 ml de HCL 2N ( solución b).

c).- Obtención y separación de las diferentes fases:La solución a o b obtenidas según el apartado anterior, se coloca en un embudo de separación y se le agregan 10 ml de Cloroformo y se separan las fases. Con la fase orgánica se lleva a cabo el tratamiento I y con la fase acuosa el tratamiento II.

I.- Tratamiento de la fase etérea.-Se extrae con 5 ml de solución de Bicarbonato de sodio al 5 %, se separa la fase acuosa a la que se le denominará A1.

La fase etérea remanente en el embudo de separación se extrae con 5 ml de NaOH 0.1N. a la fase acuosa se le denominará A2 y a la fase etérea C.

Las A1 y A2 cada una por separado, se acidulan con HCL 2N hasta un pH= 3.0 y se extraen con dos porciones de cloroformo de 5 ml cada una, separando las fases orgánicas y desechando las acuosas en cada caso.

II.- Tratamiento de la fase acuosa.Se coloca en embudo de separación y se alcaliniza con NH4OH hasta un pH entre 8.0-8.5. Se agregan 5 ml de cloroformo, se agita suavemente y se dejan separar ambas fases.

La fase clorofórmica se acidula con HCL 2N, hasta un pH de 3.0, se evapora en una cápsula de porcelana en baño maría y se deja enfriar. El residuo se recupera con 10 ml de agua y se extrae con 5 ml de cloroformo. La fase clorofórmica se denominará D1.

La fase acuosa se alcaliniza con NaOH 2N y se extrae con dos volúmenes de cloroformo (aproximadamente 5 ml c/u ), los extractos clorofórmicos se denominarán D2.

La fase acuosa se acidula con HCL 2N y después se alcaliniza con NaHCO3 hasta un pH de 8.0. Se extrae con 10 ml de agua de una solución cloroformo-etanol (1:1). La fase clorofórmica será D3.

En cápsulas de porcelana, se colocan separadamente las fases D2, D3, y se evaporan a sequedad en baño maría; se enfrían y se reconstituyen con 2 ml de agua ligeramente acidulada con HCL. En ésta solución se efectuarán las reacciones de identificación respectivas.

d).- Substancias que se identifican en cada fase:

A1= Sustancia fuertemente ácidas.A2= Sustancia fuertemente ácidas.C= Substancias Neutras.D1= Sustancia básicas solubles en cloroformo.D2= Sustancia básicas no anfotéricas.D3= Sustancia anfotéricas.

e).- Reacciones de identidad.-

Las substancias que tratarán de identificar serán la aspirina y la cafeína de acuerdo a las siguientes reacciones:

1.- Aspirina.- Se puede identificar en las fases A1 o A2 de la siguiente manera:

En una cápsula de porcelana se coloca 1 ml de la fase A1 o A2; se le agregan 2 ml de una solución de nitrato férrico al 0.55 % en ácido nítrico 0.4 N. En caso positivo se producirá una coloración púrpura.

2.- Cafeína.-

Se puede identificar en la fase D1, mediante la siguiente reacción:

Un ml de la fase D1, se coloca en una cápsula de porcelana evaporándola a sequedad en baño maría, luego se le agregan 2 gotas de HCL concentrado y unos cristales de clorato de potasio; la mezcla se evapora a sequedad en baño maría, se enfría y se añaden 2 gotas de NH4OH 2N. En caso positivo se produce una coloración púrpura.

CUESTIONARIO

1.- Cual es la razón de que en las fases A1 y A2 se pueda encontrar aspirina.?2.- Cómo separaría una mezcla de .R-OH, R-NH2, R-COOH.?3.- Explique el fundamento químico de las reacciones de identificación de la Cafeína y la aspirina?4.- Cómo se manifiesta la dependencia y la tolerancia a la cafeína? 5.- Que síntomas produce la cafeína en dosis de 300-600 mg? Guarda alguna relación directa el consumo de cafeína con el infarto al miocardio?.

BIBLIOGRAFIA1.- Amadeo J. Pesce, Kaplan L.A. Methods in Clinical Chemistry. C.V. Mosby Co. U.S.A. 1987, Cap. 44. Pp. 315-323. Cap. 368-384.2.- Boer N.C. et al. Clinical Chemistry. Plenum Press. U.S.A. 1989. Cap. 3 pp. 75-93.3.- Chamberlain J. Analysis of Drugs in Biological Fluids. CRC Press. U.S.A. 1985 pp. 189-193.

PRACTICA No. 04

TITULO: “EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE BARBITÚRICOS”

OBJETIVO

Aplicación de las técnicas generales a un problema especial.Poner en conocimiento del alumno las reacciones mas sencillas aplicables para identificar este tipo de sustancias.Establecer la importancia que tiene la farmacodependencia, el empleo inmoderado de este grupo de compuestos.

MATERIAL CANTIDAD MATERIAL CANTIDADGradillaMatraz Erlenmeyer de 125mlPinzas para tubo de ensayoTubos de ensayo de 13 x 100Anillo metálicoEmbudo de separación de 250mlPipetas graduadas de 1mlPapel filtro

12 c/u

215214

Agitado de vidrioResistencia eléctricaCápsula de porcelanaBaño MaríaVaso de precipitados de 100mlPipetas graduadas de 10ml

11211

1 c/u

NOTA: ESPECIFICAR SI EL MATERIAL ES POR EQUIPO DE TRABAJO O INDIVIDUAL E INDICAR DE CUANTOS ESTUDIANTES CONSTA EL EQUIPO.

SUSTANCIAS CANTIDAD SUSTANCIAS CANTIDADHidróxido de sodioAcetato de cobaltoBicarbonato de sodioHidróxido de sodioHidróxido de litioCloruro cobalticoÁcido tartarico

Ácido clorhídricoAcetonaEtanolÁcido clorhídricoMetanolFormaldehídoCloroformoÉter etílico

EQUIPO

ESPECTROFOTOMETRO DE LUZ ULTRAVIOLETA. LÁMPARA DE ULTRAVIOLETA.


1.- Obtener la capa etérea de la fase A2 del procedimiento de extracción selectiva.

2.-Una vez obtenida la capa etérea de la fase A2 se procede a identificar la presencia de barbitúricos con las siguientes reaccione:

Colocar una gota de solución etérea de la fase A2 en una hoja de papel filtro y observar con luz ultravioleta; se aprecia un punto que absorbe dicha luz y cuya reacción se incrementa al exponer el papel a los vapores de hidróxido de amonio. Después se impregna el papel con una solución al 1% de cloruro de cobalto en acetona, dejar secar a temperatura ambiente y exponer el papel a los vapores de hidróxido de amonio, en caso positivo se produce una coloración violeta.

Otro procedimiento de identificación, consiste en colocar la fase etérea restante de A2 en una cápsula de porcelana y evaporar a sequedad en baño María. Dejar enfriar y restituir con 1ml de cloroformo. A esta solución colocada en un tubo de ensaye, agregarle 2 gotas de solución al 1% de acetato de cobalto en metanol, recién preparada. Después gota a gota añadir una solución al 1% de hidróxido de litio en metanol para tratar de estratificar, En caso positivo un anillo azul en la interfase.

CUESTIONARIO

1.- Desde el punto de vista estructural, explique la razón del por que esperamos que los barbitúricos estén en la fase A2.2.-¿Cuáles son los síntomas que producen los barbitúricos en el organismo humano?.3.- Proponga una clasificación de los barbitúricos según su tiempo de acción farmacológica.4.- Presente las relaciones estructura-actividad que se han encontrado en los barbitúricos. Así como la interpretación de sus coeficientes de participación cloroformo/agua. 5.-¿Qué papel juega el hidróxido de litio en la identificación de los barbitúricos?.6.- Desde el punto de vista estructural de los barbitúricos, considera que se presentarían problemas en la conservación de las muestras que analizaría para determinar su presencia.

7.-Mencione cuatro rutas metabólicas que puede sufrir una molécula de barbitúrico en el hígado.

8.- ¿Cuáles son las reacciones de identificación efectuadas?.

BIBLIOGRAFIA

PRACTICA No. 05

TITULO: CUANTIFICACIÓN DE DROGAS DE ALCALOIDES POR

ESPECTROFOTOMETRIA DE ULTRAVIOLETA.

OBJETIVO

1.- Conocer las reacciones con las cuáles se puede identificar alcaloides.2.- Establecer la importancia que las reacciones a estudiar tienen en toxicología.3.- Diseñar técnicas de cuantificación de alcaloides por Espectrofotometría Ultravioleta.

MATERIAL CANTIDAD MATERIAL CANTIDAD

SUSTANCIAS CANTIDAD SUSTANCIAS CANTIDAD

EQUIPO


Gradilla 1 Pipeta graduada 1 ml 2

Pipeta pasteur 1 Guantes p/cirujano 1

Pinza para tubo de ensayo 1 Cubreboca 1

Tubos de ensayo 13x100 5 Gogles 1

Pipeta graduada de 5 ml 2 Baño María con parrilla 1

Capsula de porcelana 1 Matraz aforado de 100 ml 2

Matraz Erlenmeyer 125 ml 2 Matraz aforado de 10 ml 4

Agitado de vidrio Baño María

Resistencia electrica Vaso de precipitados de 100ml

Pipetas graduadas de 10ml Silica gel

Etanol Hidróxido de amonio

Cloroformo Ácido acético

Éter etilico Bicarbonato de sodio

Acido Sulfúrico concentrado Metanol


1.-Obtener la fase D de la técnica de extracción general o las fases D1, D2, D3 de la extracción selectiva, según las indicaciones del profesor.

D1, D2, D3--------------equipos, fase D-------------equipo

2.- Una vez obtenidas éstas fases, se evaporan a sequedad en baño maría. Se dejan enfriar y el residuo se restituyeron 0.5ml de ácido acético 2N.

3.- Se preparar una placa de cromatografía de placa fina (silica gel más acetato de etilo) utilizando una placa de vidrio.

4.- Prepare la fase móvil para correr la placa cromatografiaza con hidróxido de amonio concentrado- metanol (1.5:100). Sature la cámara cromatográfica con esta mezcla.

5.-Se coloca una gota, con una pipeta Pasteur de la restitución acética del problema y del estándar proporcionado por el profesor, desarrolle el cromatograma.

6.-Visualice la presencia de la nicotina con una lámpara de luz ultravioleta y posteriormente revele la placa con un a cámara de yodo. Calcule el Rf para la nicotina y compare el valor obtenido con el reportado en la bibliografía.

CUESTIONARIO

1.-Define el termino alcaloide y mencione cinco ejemplos así como su empleo farmacéutico y aspectos toxicológicos.

2.- Presente al menos tres reacciones de identificación para los alcaloides.

3.-En esta practica cual es la reacción que se lleva a cabo?

4.-Que ventajas podría señalar entre el uso del procedimiento de extracciones selectivas sobre el de extracción general.

5.-Como se comportan la nicotina en un medio ácido y en un medio básico.

6.-Que indica el termino de receptores nicotínico y que relación presenta con la molécula de la nicotina

7.-Presenta un mapa metabólico de la nicotina indicando a que fase del metabólico pertenece cada una de las reacciones

8.-El valor del pKa de la nicotina es el parámetro mas importante para la absorción por vía respiratoria.

9.-Todos los alcaloides presentes afinidades para un mismo tipo de receptor.

BIBLIOGRAFIA

1.- Clark E:E Isolation and Identification of Drugs.. Pharmaceutical Press, London 1972. I y II..

2.- Curtis D. Klassen, et,al, Casarett and Doull’s Toxicology. Third Edit. Eds. Macmillan Publishing Co. New York. 1986.

3.-Goodman y Gilman. Las bases Farmacológicas de la Terapéutica. Editorial Panamericana. México. Octava Edición. 1991

PRACTICA No. 06

TITULO: “IDENTIFICACION DE ALCOHOL METILICO Y ETÍLICO”

OBJETIVO

1.- Conocer las reacciones con las cuáles se puede identificar estos dos alcoholes.

2.- Establecer la importancia que las reacciones a estudiar tienen en toxicología.

3.- Precisar la importancia de estos alcoholes en problemas toxicológicos.



EQUIPO


RESULTADOS (TABLA DE RESULTADOS, OPERACIONES, GRAFICAS)





Pipeta graduada de 5 ml 2 Baño María con parrilla 1

Mechero 1

Dicromato de Potasio Acido Cromotrópico.

Acido Sulfúrico Acetato de SodioSalicilato de Sodio Yoduro de Potasio

Hidróxido de Sodio Yodo metálico

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuáles son los efectos tóxicos del metanol ?.

2.- ¿Qué diferencia se presentan entre el metabolismo del etanol y metanol en el organismo.?

3.- ¿Cuáles son los procedimientos utilizados para tratar una intoxicación por metanol.?

4.- ¿Mencione las fuentes de exposición al metanol ?.

5.-¿Cómo influye el vaciamiento gástrico en la absorción de los alcoholes ?.

6.- ¿Cuáles son las reacciones químicas que se realizan en la identificación del etanol y metanol ?. 7.-¿Cuáles son las principales rutas de entrada al organismo del metanol?.

BIBLIOGRAFIA

1.- Clark E:E Isolation and Identification of Drugs.. Pharmaceutical Press, London 1972. I y II..2.- Curtis D. Klassen, et,al, Casarett and Doull’s Toxicology. Third Edit. Eds. Macmillan Publishing Co. New York. 1986.3.-Goodman y Gilman. Las bases Farmacológicas de la Terapéutica. Editorial Panamericana. México. Octava Edición. 1991

ALUMNOGRUPO

CALIFICACION

OBSERVACIONESPROFESOR FECHA


PRACTICA No. 07

TITULO: “SCREENING DE METABOLITOS DE DROGAS DE ABUSO”

OBJETIVO

1.- Conocer las diversas técnicas de Inmunoensayo ( Elisa, RIA, EMIT,etc. ).2.- Revisar el fundamento de las técnicas en cuestión3.- Identificación un metabolito de droga de abuso en medio biológico (orina) por inmunoensayo en placa de un solo paso.4.- Conocer técnicas de embalaje, transporte y preservación de muestras biológicas.5.- Conocer la importancia de la Cadena de custodia respecto a una muestra biológica.



Muestra de orina Negativa Muestra de orina positiva a metabolitos de benzodiacepinasMuestra de orina Cuestionada

EQUIPO


Frascos de Inmunoensayo.





Pipeta graduada de 5 ml 2 Placas de Inmunoensayo


Recolección

1.- Recolectar las muestras control y las cuestionadas de orina 2.- Embalar, transportar, preservar y analizar.

Análisis:

1.- Descongelar los frascos si es el caso

2.- Abrir los frascos y con una pipeta pasteur sacar la cantidad de muestra suficiente para su análisis.

3.- Depositar una o dos gotas en la placa de un solo paso de inmunoensayo o bien una cantidad de 5 a 10 ml si se trata de un frasco.

RESULTADOS (TABLA DE RESULTADOS, OPERACIONES, GRAFICAS, ESQUEMAS)

CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuáles es el fundamento de las técnicas de inmunoensayo: ELISA, EMIT, RIA?

2.- ¿Cómo debes preservar una muestra de orina para su posterior análisis.?

3.- ¿Investigar qué es y diseñar una cadena de custodia para una muestra de orina recolectada.?

4.- ¿Investigar que es la orina?.

5.-¿Investigar que es la estabilidad de una droga de abuso en una muestra de orina?. 7.-¿Cuál es influencia del contenedor en los metabolitos de una droga de abuso en orina?.

BIBLIOGRAFIA



ALUMNOGRUPO

CALIFICACION



MATERIA CLAVE PLAN


PRACTICA No. 08

TITULO: EFECTO DEL PH. EN LA LIBERACION DE METALES PESADOS POR UTENSILIOS

DE CERAMICA

OBJETIVO

1.- Determinar cualitativamente la presencia de plomo en recipientes de cerámica a diferentes valores de pH.

2.- Discutir los efectos toxicológicos que presenta el plomo sobre los organismos vivos.

INTRODUCCION

HIPÓTESIS

1.- General

2.- Particular




Matraz aforado de 10, 100 ml 2 C/U Vaso de p.p. de 500 ml 2

Pinza para tubo de ensayo 1 Rejilla de asbesto 1

Tubos de ensayo 13x100 10 Probeta de 100 ml 1

Anillo metálico 1 Vasija de cerámica 3

Mechero 1 Papel PH 3

Termómetro 1 Guantes D/cirujano 1

Baño María 1 Cubrebocas 1

Gogles 1

SUSTANCIASSUSTANCIAS

EQUIPO


Agua destilada Acido Clorhídrico 1N.Hidróxido de Sodio 1 N. Sulfato de Sodio 1 %Yoduro de Potasio Acido Nítrico-Agua (1:1)


1.- El alumno debe traer vasijas de barro nuevas con capacidad aproximadamente de 200 ml.

2.-Marcar las vasijas como A, B, C.

3.-Colocar 100 ml de agua destilada en la vasija A. Colocar 99 ml de agua destilada mas 1 ml de solución de ácido clorhídrico 1N; en basija B. Colocar 99 ml de agua destilada en la vasija C más 1 ml de solución de hidróxido de Sodio. Medir el pH. de cada vasija.

4.-Calentar las vasijas a ebullición y dejarlas hervir 30 minutos. Después cada vasija se afora a 100 ml con agua destilada.

5. Se mide el pH a cada solución.

6.-Colocar por separado 0.5ml de solución de cada vasija en tubos de ensayo y agregue 2 ml de solución de sulfato de sodio al 1% más tres gotas de ácido nítrico concentrado.

7.-En caso de que aparezcan precipitados proceda a decantar. Posteriormente se calientan los tubos entre 60-65º C a baño maría durante 5 minutos.

8.-Retire los tubos del baño María y agregue a cada tubo 1 ml. de solución de yoduro de potasio (16.5 gr de yoduro de potasio aforados a 100 ml con agua destilada), esta solución es sensible a la luz., procura que la solución caiga directamente en el contenido del tubo no agite, y observe.

9.-Un precipitado amarillo indica la presencia de plomo en la solución original.

10.- Emplee un blanco de agua destilada y proceda de la misma forma, como se indica del paso 5 al 8.

11.-Para el reporte elabore una tabla que relacione el valor de pH en el paso 2 y en el paso 4 con la presencia del plomo.


CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuáles son los minerales que pueden ser fuentes de contaminación de plomo?.

2.- Mencione 5 elementos cuyo pH ácido. Y 5 cuyo pH sea alcalino.

3.- Construya una tabla donde se indiquen otras fuentes de exposición al plomo y la cantidad estimada que estas fuentes contienen del metal.

4.- ¿Cómo influye la edad del individuo en la absorción gastrointestinal del plomo?.

5.-¿Cuáles son los tejidos principales de la distribución y depósito del plomo en el organismo?.

6.- ¿Qué efectos ocurren en los eritrocitos cuando la concentración de plomo rebasa el valor de 80 µg/dl y que es lo que provoca esta manifestación?.

7.-Proponga a través de un esquema la influencia del plomo en la biosíntesis del grupo hem.

8.- ¿Como se manifiesta principalmente la intoxicación por plomo en el sistema nervioso central?.

9.- ¿Cuáles son los síntomas principales de intoxicación por plomo en el tracto gastrointestinal?.

10.- ¿Cómo influye la edad y el sexo en los niveles de plomo en sangre en los seres humanos?.

11.- ¿Qué defectos producen la anemia que se manifiesta por la intoxicación por plomo?.

12.- Esquematice los valores de plomo en sangre debajo de los cuales no hay manifestación clínica de intoxicación.

13.- ¿Cuál es el t1/2 del plomo en sangre y huesos?. Y ¿Qué papel juegan los eritrocitos en la relación de concentración plasma-orina en la eliminación del mismo?.

14.- ¿Cómo se manifiesta una intoxicación crónica (30-50 ug/dl) por plomo en los niños?.

15.- ¿Qué papel juega la sal Na2CaEDTA, en dósis de 40mg/kg en el diagnóstico por intoxicación por plomo?.

16.-¿Qué medidas terapéuticas se toman en una intoxicación por plomo y que concentración plasmática del mismo debe de estar presente para que se le aplique a los niños?.

17.- ¿Cuál es el producto de solubilidad (kp) del producto formado en la reacción?

BIBLIOGRAFIA



1.- Goodman y Gilman. Las bases Farmacológicas de la Terapéutica. Editorial Panameeericana. México. Octava Edición. 1991.

ALUMNOGRUPO

CALIFICACION



MATERIA CLAVE PLAN


PRACTICA No. 09

TITULO: MICRODETERMINACION DE DDT EN MATERIALES BIOLÓGICOS

OBJETIVO

1.- Presentar un método simple para el aislamiento e identificación de pequeñas cantidades de DDT y sus productos de metabolismo, presentes en muestras biológicas.

2.- Analizar la posible presencia de DDT u otros plaguicidas como paratión en muestras vegetales que son empleadas para el consumo humano y que normalmente son ingeridas en forma cruda.

3.- Realizar la identificación de DDT en una muestra proporcionada por los profesores mediante una reacción de nitración y la inducción del efecto batocrómico en el compuesto tetrahidratado.

INTRODUCCION

HIPÓTESIS

1.- General

2.- Particular



Vaso de p.p 100ml 2 Pipeta graduada 1ml 1Matraz Erlenmeyer 125ml 2 Embudo de tallo largo 1Embudo de separación125ml 1 Agitador de vidrio 1Gogles 1 Anillo metálico 1Gradilla 1 Pipeta graduada de 5 ml 1Baño maría y resistencia 1 Cápsula de porcelana 2Pinza para tubo de ensayo 1 Guantes p/cirujano 1Tubos de ensayo 17x150 4 Cubrebocas 1


Hidróxido de potasio alcohólico 20% Acido Sulfúrico

Etanol absoluto Acido nítricoAcetona y cloroformo Hidróxido de potasio acuoso al 1%

EQUIPO



1.-El alumno seleccionará el material biológico, que desee analizar (tomate, zanahoria, etc.) con cuatro días de anticipación a la sesión, depositará el vegetal escogido, sin lavarlo, en un recipiente, agregándole etanol comercial (o acetona), y guardándolo en refrigeración hasta el día de su evaluación.

2.- Filtrar el extracto alcohólico y concentrar a la mitad del volumen por calentamiento en baño maría. Enfriar y adicionar acetona hasta que la precipitación de proteínas sea completas. Agitar y filtrar.

3.-Evaporar el filtrado a sequedad en baño maría. Enfriar a temperatura ambiente.

4.- Tratar el residuo con 5ml de mezcla nitrante fría.

5.-Transferir totalmente a un tubo de ensayo 17 x 150 y calentar en baño maría por 30 minutos.

6.- Enfriar y diluir con agua destilada a 20ml. Extraer con 2 porciones de cloroformo de 5ml cada una.

7.-Lavar los extractos clorofórmicos reunidos con 5ml de KOH al 1% (pH básico), separar la fase clorofórmica y lavarla nuevamente con 2 porciones de 5ml de agua destilada. Secar la fase clorofórmica con sulfato de sodio anhídrido y evaporar en baño maría hasta 1ml aproximadamente.

8.-Transferir una parte de este extracto a una cápsula de porcelana y adicionar dos gotas de KOH alcohólico ( este reactivo es estable por 24 hrs ) y observar. En presencia de DDT se forma un color rosa que cambia inmediatamente a azul, gradualmente a verde y por ultimo a amarillo.

9.- A una segunda porción agregar una gota de KOH alcohólica seguida por dos gotas de acetona. El color azul cambia a púrpura, gradualmente a verde y finalmente a amarillo.

Preparación de los reactivos:

1.- KOH alcohólico al 20 %. Disolver 5g de KOH en 25ml de agua destilada, enfriar y posteriormente adicionar 22.5 ml de etanol y agitar bien.

2.- Mezcla nitrante. Mezclar cantidades de ácido sulfúrico concentrado y ácido nítrico fumante.


CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.-¿Cuál es la reacción de identificación del DDT con mezcla nitrante?.2.- ¿A qué se debe el cambio de coloración en la determinación de este insecticida? 3.- ¿Qué propiedad fisicoquímica determina la persistencia del DDT dentro del organismo humano? .4.- ¿Cuáles serían algunos de los efectos tóxicos del DDT sobre la fauna silvestre?.5.-¿Cómo logra metabolizarce el DDT? Y ¿Cuál es la importancia toxicológica de los metabolitos generados?6.- Proponga las estructuras resonantes de la molécula trinitrada de DDT que explique la aparición de efecto batocrómico.7.- Actualmente cuales son los usos de los compuestos que contienen DDT.

BIBLIOGRAFIA



3.- Goodman y Gilman. Las bases Farmacológicas de la Terapéutica. Editorial Panameeericana. México. Octava Edición. 1991.

4.-Irudayasamy A., Natarajan A.R. “Spot test microdeterminación of DDT and its related compounds in biological materials”. Analytical Chemistrry. 11961. 33. 630.

ALUMNOGRUPO

CALIFICACION



MATERIA CLAVE PLAN


PRACTICA No. 10

TITULO: EXTRACCIÓN E IDENTIFICACION DE TOXICOS VOLATILES

OBJETIVO

1.- Conocer la técnica para extraer este grupo de substancias toxicas.

2.- Identificar las fuentes de exposición y riesgo en un individuo para que se pueda presentar la intoxicación por tóxicos volátiles.

3.- Conocer el fundamento de la identificación de cianuro en una muestra.

INTRODUCCION

HIPÓTESIS

1.- General

2.- Particular



Gradilla 1 Pipeta graduada 10 ml 2Matraz Erlenmeyer 125ml 3 Matraz aforado 10, 50ml 2 C/UPinza para tubo de ensayo 1 Guantes p/cirujano 1Tubos de ensayo 13x100 10 Cubrebocas 1Embudo de cola corta 1 Vaso de p.p. 250 ml 4Celdilla de vidrio 1 Pipeta graduada 5 ml 2 Caja de petri 1 Pipeta graduada 1ml 2Papel filtro 1Gogles 1


Acido Pícrico Hidróxido de Sodio

Bicarbonato de Sodio Acido SulfúricoSulfato Ferroso Cloruro Férrico

EQUIPO



1.- Preparación de la muestra.

a).- Víceras.- Se maceran con 25 ml de agua destilada durante 10 minutos y se filtran a través del papel filtro. En el filtrado se efectuaran las reacciones de identificación.

b).- Sangre, orina o contenido gástrico.- Se efectuará el análisis en forma directa sin tratamiento previo.

II.- Identificación de cianuro. 1.- Reacción Presuntiva.

Preparación del papel reactivo .- Se impregna una tira de papel filtro de 1X10 cm, con una solución de ácido pícrico al 5% en solución acuosa. Se deja secar en la estufa cuidando que no se encuentre otro material dentro de la misma.

Procedimiento.- En el recipiente A de la celdilla se coloca 1 ml de muestra a analizar y en el recipiente B el papel pícrico-sódico, unidos por dos extremos y alrededor del recipiente. Se tapa la caja con el recipiente C y se pone en una estufa a 60º C por 30 minutos. En caso positivo el papel indicador tomará una coloración roja.

2.- Reacción confirmativa.-

En el recipiente marcado en la figura con la letra A, se coloca 1 ml de solución de hidróxido de sodio 0.1N. En el recipiente B, se ponen 2 ml de la muestra por analizar, acidulándose con 1 ml de solución al 10% de ácido sulfúrico. Se tapa inmediatamente la celdilla y se coloca en la estufa a 60º C durante 1 hora. Al término de este tiempo el contenido del recipiente A, se pasa a un tubo de ensaye y se diluye con 1 ml de agua destilada; se agrega 1ml de solución de sulfato ferroso (8g de sulfato ferroso en 100 ml de agua recién hervida y fría. Preparar el mismo día de la práctica) se agita y luego se añade 1 ml de solución de cloruro férrico (9g de cloruro férrico en 100 ml de agua destilada). En caso positivo de cianuro, se producirá un p.p. azul.


CONCLUSIONES

CUESTIONARIO

1.- ¿Cuáles son las reacciones químicas de identificación que se efectuarán en esta práctica?.

2.- Mencione los efectos de intoxicación aguda por cianuro.

3.- ¿A qué nivel metabólico actúa el cianuro como agente tóxico?.

4.- ¿Por qué el cianuro inhibe a los citocromos a y c, pero no al b?.

5.-¿Cuáles son los lugares o sitios de trabajo donde se pueda un individuo intoxicar con cianuros?.

6.- ¿En qué consiste y en que se basa el tratamiento para la intoxicación con cianuros?.

BIBLIOGRAFIA1.- Clark E:E Isolation and Identification of Drugs.. Pharmaceutical Press, London 1972. I y II..2.- Curtis D. Klassen, et,al, Casarett and Doull’s Toxicology. Third Edit. Eds. Macmillan Publishing Co. New York. 1986.1.- Goodman y Gilman. Las bases Farmacológicas de la Terapéutica. Editorial Panameeericana. México. Octava Edición. 1991.

ALUMNOGRUPO

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Prcticas de Toxicologia Para Los Alumnos a-2011