UDK: 577.152.27.018.3 ID: S D - C E / 2

Iz rada IFCC-a From IFCC

PREPORUČENE IFCC METODE ZA MJERENJE KATALITIČKE KONCENTRACIJE LDH

Dio 8: IFCC metoda za laktat deh id rogenazu (L-laktat: NAD'oksidoreduktaza, EC 1.1.1.27)

Hence Bais i Margaret I'liilcox Dcpl. of Biochemistry-Royal North Shore Hospital St Leonard/Sydney. Australia

Preuzelo i/.: Kinoprau Journal ol Clinical Chemistry and Clinical Biochemistry 1994; 32: 033-55

UVOD

Ljudska laktat deh idrogenaza j e te t ramer sačinjen od dviju vrsta podjedinica, II (heart) i M (muscle) pocljedinica. Kombinacijom ovih podjedinica nastaje pet izoenzima koji se mogu naći u tkivima sisavaca. Relativni udjeli po jedin ih izoen-zima u se rumu bolesnika ovise o jač ini oštećenja o rgana ili tkiva iz kojega potječu i o njihovu biološkom poluživotu. Sve to ukazuje kako nije moguće predvidjeti relativne odnose različitih izoenzima u uzorku bolesnika.

Laktat dehidrogenaza katalizira reverzibilnu oksidaciju laktata u piruvat i obje se reakcije mogu mjerit i . Među t im, u ovoj metodi izabrana j e reakcija od laktata p r ema piruvatu zbog slijedećih razloga: reakcija j e duže l inea rna s v r e m e n o m , reakcija j e obilježena poras tom apsorbancije a m o g u ć e j e i opt imiranje supstrata .

Ljudski se rum i tkivni ekstrakti upotrebljavani su kao izvori enz ima. Konačne koncentracije supst ra ta i p l l odab rane su na temelju ispitivanja i opt imiranja . Katalitička i fizikalna svojstva izoenzima se razlikuju, ali zbog značenja s rčanoga izoenzima u praćenju srčanih bolesti i kao tumorskoga biljega, me toda j e opt imi-rana za taj izoenzim. Međut im, metoda je također pogodna iako manje opt imalna, za određivanje i d rug ih izoenzima laktat deh id rogenaze koji se mogu naći u serumu.

N A Č E L O M E T O D E

Preporučena metoda za mjerenje katalitičke koncentracije laktat dehidrogenaze u serumu zasniva se na načelima koja su objavili Waeker i suradnic i (1) i Van-der l inde (2). Modifikacije uključuju optimiranje koncentracija supstrata i p l l , kao i izbor N-meti l -D-glukamina kao pufera.

Reverzibilna reakcija koju katalizira laktat deh idrogenaza j e sljedeća: L(+)-laktat piruvat + H*

*> Laktat deh idrogenaza <* + NAD* + NADU

B10CHEMIA MEDICA god. 5, br. 4, 1995. 155

Preporučene I FCC metode R. Bais i sur.

U reakciji se prati redukcija NAD' pri 339 nm. Ravnoteža pospješuje stvaranje piruvata kod p H iznad 9. Enzim je ap so lu tno specifičan za L(+) izomer. L(+)-alfa-hidroksibuvirat j e t akođer mogući supstrat .

O P T I M A L N I UVJETI MJERENJA

IFCC uvjeti su opl imirani uvjeti koji su najpris lupačnij i za kinetičku reakciju i tehničke pogodnos t i mjerenja, što znači da ne moraju osiguravati maks imalnu aktivnost enzima.

Tablica I. — Oplimirani uvjeti mjerenja Ta ble l. — Optimized measurement conditions

Temperatura pl 1 (30 " O N-inclil-D-gliikaiiiiii 1. (+)-laktai

Udio volumena uzoi NAD-

ka

30.00 ± 0.05 °C 9.40 ± 0.05 325 iumol/L 50 miiiol/L 0.05(1:21) 10 IIIIIIOI/L

Reakcija započinje doda tkom NAD'

I N S T R U M E N T I I O P R E M A

Za mjerenje katalitičke koncentracije laktat deh id rogenaze n e b a se rabili spektrofotometar s t e rmos ta i i r anom kivetom, uz zadovoljavanje svih uvjeta objav­ljenih u prijašnjim p r e p o r u k a m a .

REAGENCIJE

5.1. N-ineii l-D-glukamiii , C ,H | 7 NO, , M, 195.22 5.2. L(+)-Iitij laktat, C.H.O^Li. M, 96.01 5.3. p -n iko t inamid-aden ind inuk leo t id , (NAD*), C M H 2 ,N.0 1 4 P 2 , M, 633.4 5.4. Klor idna kiselina, I ICL, M, 36.46 (1 m o l / L i 5 mo l /L ) 5.5. Natrij k lor id , NaCl , M, 58.44 (150 inmol / I . )

ČISTOĆA REAGENCIJA

Shvaćanje čistoće reagencija temelji se na funkcionalnim, kemijskim i instru­men ta ln im svojstvima. Reagencije se čuvaju u s ter i lnim bočicama, kako bi se spri­ječ io rast mikroorganizama u o top inama. Sve reagencije se pr ipremaju u kali-br i ran im posudama s vodom elektr ične rezistencije > 2.0*10' o h i w x m na 25 "C; p l l 6.0-7.0; silikati < 0.1 m g / L .

156 BIOCI1EMIA MEDICA god, 5, br. 4, 1995.

R. Bais i sur. Preporučene IFCC inciodc

PRIPRAVCI O T O P I N A

I. Pufer. N-meti l -D-glukamin (379.2 m m o I / L , p H 9.4 n a 30 °C) Otop i 74.03 g N-metil-D-glukaiiiina n pribl ižno 800 ml vode, p l l namjest i na

9.4 na 30 "C s HCI. Dopuni des t i l i ranom vodom d o 1000 ml.

II. Puferirana otopina supstrata. N-meti l-D-glukamin/l i t i j laktat (N-metil-D-g lukamin 379.2 m m o l / L , p l l 9.4, koji sadrži 58.3 m m o l / L litij laktata)

Prenesi 80 ml N-metil-D-glukamin pufera (otopina I.) u posudu s magnetskom miješalicom. Otopi uz miješanje na sobnoj tempera tur i litij laktat, 0.5G g. Namjesti p H , ako j e pot rebno, na 9.4 na 30 "C s HCI, 1 m o l / L . Prenesi otopinu u odmjer im tikvicu od 100 ml i d o p u n i o top inom I.

I I I . Otop ina NAD" (NAD' 105 m m o l / L u vodi) Otop i 0.697 g NAD' u 8 ml des t i l i rane vode u volumnoj tikvici od 10 ml.

Nakon p o t p u n o g otapanja d o p u n i vodom do 10 ml.

IV. O top ina natri j klorida ( 154 m m o l / L ) . O t o p i 0.9 g natrij klorida u 100 ml vode.

S T A B I L N O S T O T O P I N A

Otop ine I. i II. čuvaju se u hladnjaku na 4"C ili zamrzivaču na - 2 0 ° C . Otopina I I I . može se čuvati na 4 "C ili -20 "C. Nema značajnijeg smanjenja katalitičke koncentracije laktat dchidrogei iaze u miješanom [pool) s e rumu, kada se o top ine II. ili III . čuvaju na 4 "C najmanje 12 d a n a . Bakterijska kontaminacija o topina I. i II . na sobnoj t empera tu r i je ogtaničavajuči č imbenik.

PRIPRAVA I S T A B I L N O S T U Z O R A K A

Serum se preporuča kao uzorak za određivanje katalitičke koncentracije laktat deh idrogenaze . Plazma može biti zagađena t romboci t ima koji sadrže visoke koncentracije laktat deh idrogenaze . Uzorak krvi treba uzeti venepunkci jom bez dugotra jne staze. Treba spriječiti hcmolizu, kako bi se umanj i le interferencije laktat deh idrogenazom iz eritrocita. Serum bez stanica dobiva se centrifugiranjem zgrušanc krvi nakon centrifugiranja na 1000 g tijekom 10 minuta .

M J E R E N J E

1. Uvjeti mjerenja

Valna dužina: 339 nm (±1 nm) Širina zrake: 2 nm Prolaz svjetla: 10.0 ± 0.01 mm Konačni volumen reakcijske smjese: 3.15 ml T e m p e r a t u r a : 30.0 ± 0.05 "C

BIOCHEMIA MEDICA god. 5, bi: 4, 1995. 157

Preporučene l¥CC UVCUHIC R. Bnis i sur,

2 . Rukovanje o top inama

Prije pipciiranja, t empera tu ra otopina i uzoraka m o r a biti j e d n a k a kalibracijskoj temperatur i pipeta. Za vrijeme predinkubacije, otopina u kiveti mora dostići t empera tu ru od 3(5.0 ± 0.05 "C prije početka reakcije.

3. Postupci koji ć ine j e d n o mjerenje

3.1. V i s t e r e a k c i j a

Ta bli ca 2. — SashtV reakcijshe smjese A. B i C potrebne za jednu mjerenje brzine pretvorbe Table 2. ~ Contents of A. B. C reaction mixture, neccessvry for single measurement of

transformation rale

Vista reakcije Uzorak Otopina

(A) Sveukupna reakcija Serum II. i III. UM Reakcija slijepe probt reagensa Voda II. i III. (C) Reakcija slijepe probe uzorka Serum I. i III.

Otopina 11.

Serum

2.70

0.15 ml

N-nietil-D-glutantin I.itij laktat

Udio volumena

3.2. S v e u k u p n a r e a k c i j a

Ta bi i c a 3. — Analitički sustav za mjerenje sveukupne brzine pretvorbe Ta b te 3. - Analytical measurement system of total rate af transformation

Pipetiiaj u kiveiu Volumen Koncentracija supstrata u konačnoj kompletnoj reakcijskoj smjesi

325 uunol/L 50 mmol/I. 1:21

Promiješaj pažljivo i inkubiraj reakcijsku smjesu na 30 "C čekajući najmanje 180 s da se post igne željena tempera tura . Prije dodatka , otopina III. mora biti na 30 " C .

Otopina III. 0.30 ml NAD- 10 inmol/L

Pomiješaj ponovno i čekaj 30 s. Prati porast apsorbancije na 339 n m kao funkciju vremena najmanje 240 s.

3 .3. S l i j e p a p r o b a r e a g e n s a

Cijeli postupak opisan za sveukupnu reakciju u Tablici 3 provodi se za uvjerenje slijepe probe reagensa, osim što se umjesto se ruma kao uzorak uzima dest i l i rana voda. Slijepa proba reagensa j e približno 0.05 p k a l / L (3 U / L ) .

3.4. S l i j e p a p r o b a u z o r k a

Slijepa proba uzorka određuje se za svaki uzorak tako što se umjesto o topine II. pipetira otopina I. i postupa kako je pr ikazano u Tablici 3. Eksperimentalni podaci pokazuju da slijepa proba uzorka može biti i do 10% u k u p n e kataliiičkc aktivnosti, a potječe od laktala pr isutnog u serumu.

158 BIOCHEMIA MEDICA god. 5, br. 4, 1995.

R. Bais i MU\ Preporučene IFCC metode

4. Mjern i intervali Vrijednosti A / s sveukupne reakcije laktat dehidrogenaze (A) stalne su tijekom

vremenskog razdoblja od 240 s za s e rume S katali t ičkom koncentraci jom laktat deh id rogenaze d o 10 u k a t / L (600 U / L ) . Ako su p romjene apsorbancije veće od 0 .0030/s , uzorak seruma mora se razrijediti s o top inom IV. i mjerenje ponoviti . Vremenski tijek praćenja slijepe probe, veagensa i slijepe p robe s e r u m a mora biti isti.

5 . Korekci je za sl i jepe reakcije Brzina sveukupne reakcije (A) ispravlja se za vrijednosti slijepe probe reagensa

kako slijedi: a. = a. - a„

Ispravljena vrijednost rabi se u daljnjim izračunavanjima, a j e d n a k a j e stvarnoj brzini pretvorbe koju katalizira laktat deh idrogenaza .

Vrijednosti za slijepu probu uzorka ne ulaze u račun, j e r potječu o d laktata p r i su tnog u uzorku. Količina laktata p r i su tnog u uzorku se ruma u usporedbi s koncentraci jama laktata u sveukupnoj reakciji ne može značajnije utjecati na brzinu pretvorbe djelovanjem laktat deh idrogenaze .

IZRAČUNAVANJE KATALITIČKE K O N C E N T R A C I J E

Molarn i apsorpcijski koeficijent, NADU (30 "C, 339 nm) j e 630 m ' / m o l . Debljina kivete (1) je 0.01 m, porast apsorbancije u sekundi na 339 n m j e a,s"', u k u p n i volumen (V) j e 3.15><10:,L, a volumen uzorka 0.15xl03L

b=ax3.15x 107630x0.01 X0.15X10-14

b=ax3.333 molx s 'xm••• b=ax3333 uka t / l Ako se porast apsorbancije tijekom 60 s označi kao A, proizlazi d a j e b=Ax3333 umo|x(60 s) 'xL•' b=Ax3333 U / L

A N A L I T I Č K A VARIJABILNOST

Nepreciznost unu ta r serije određena j e uzastopnim mjerenjem katalitičke kon­centracije enz ima u uzorcima s niskom, srednjom i visokom aktivnošću (Tabli­ca 4).

Ta bi i c a 4. — Nepreciznost unutar serije Table 4. - Williiii-rnn imprecision

Uzoiak Ifl

Broj

20 18 20

Kalaliii<ka koncentracija Srednja vrijednost Standardna devijacija

(jlkal/L) (ukal/L) ili 1.33 2.98 4.58

CV (%)

0.96 0.97 0.97

HIOCIIEMIA MEDICA »od. 5. /„. •/, l'"'\ 159

Preporučene IKCC metode R. Bais i sur.

R E F E R E N T N I INTERVALI

Ovom me todom nisu određivani referentni intervali na 30 "C.

ČIMBENICI PRETVORBE

Određivanjem katalitičke koncentracije laktat deh idrogenaze u 4 8 uzoraka se ruma na 30 "G i 37 "C izračunali faktor konverzije iznosi;

(aktivnost).,.. ( = I.59()x(aktivnost)1(lc

OPIS POSTUPAKA PRI IZBORU O P T I M A L N I H UVJETA ZA M J E R E N J E KATALITIČKE K O N C E N T R A C I J E LAKTAT DEHIDROGENAZE

1. Uvod

Sva ispitivanja provedena su upo t rebom seruma bolesnika sa srčanim ili j e t r en im bolestima ili s laklal del i idrogcnazama 1 i -r> koje su izolirane iz tkiva. Sva ispitivanja provedena su na 30 "C (3,4,5).

2. Izbor pufera

Prema rezultat ima ispitivanja p H profila i l inearnost i , u uži izbor pufera za preporučenu metodu određivanja katalitičke koncentracije laktat dehidrogenaze odabran i su d ie tanolamin, 2-ainino-2-meli l- l-propanol i N-mcli l -D-glukamin.

Dietanolainin nije odabran, j e r može poslužili kao supstrat za alkohol deh idrogenazu (gotovo 38% aktivnosti u usporedbi s e lanolom kao supst ra tom), koja može biti prisutna u visokim koncentracijama u nekim serumima (6). U nekim publikaci jama la se aktivnost pogrešno pripisivala laktat dehidrogenazi-6 (7-10). Iako j e to problem i sa 2-amino-2-metiI- l -propanolom (u usporedbi s e lanolom kao sups t ra tom, mjeri se i do 20% aktivnosti alkohol dehidrogenaze) , ovaj pu le r j e uspoređivan s N-metil-D-glukamiiioiu stoga šio j e laj pufer p reporuč i lo Njemačko društvo za kliničku kemiju (11,12)

2.1 Slijepe reakcije Njemačko društvo za kliničku kemiju odbacilo je N-ivietil-D-glukamin kao

pufer, jer daje veću slijepu reakciju od 2-amino-2-nietil-l-propanola. U oba slučaja slijepa reakcija može se smatrati beznačajnom u rut inskom mjerenju aktivnosti laktat dehidrogenaze , ali se mora uzeli u obzir kada se ispituju i određu ju vrijednosti u referentnom materijalu (12).

2.2. Slijepa proba uzorka Slijepa proba uzorka uz prisutnost N-melil-D-glukainina odnosno 2-amino-

2-meti l - l -propanola ispitivana j e tako s to je u reakcijskoj smjesi izostavljen NAD' ili laktat. Izostavljanjem NAD' ne dobiva se značajna reakcija s oba pufera dok se izostavljanjem laktata dobiva značajna slijepa reakcija s oba pufera. Reakciju omogučava laktat p r i su tan u uzorku seruma (no rma lne koncentracije laktata u se rumu su 0.2 - 2.0 inmol /L) . Pretpostavka j e potvrđena s doda tkom 100 m u i o l /

160 BIOCHEMIA MEDICA god. 5, br. 4, 1995.

R. Bais i sur. Prcponičcnc IKCC metode

L oksamata, koji je specifični inhibitor lakiai dehidrogenaze. Smatra se d a j e učinak endogenog laktata na mjerenje aktivnosti laktat dehidrogenaze zanema­rujući u usporedbi s dodanom količinom laktata(13).

2.3. Utjecaj temperature na pfl pufera U praksi se puferi često priređuju na sobnoj temperaturi, a u metodi se

primjenjuju na drugoj temperaturi, što može dovesti do netočne pH vrijednosti pri mjerenju katalitičke koncentracije enzima. Promjene pl l nešto su jače izražene kod 2-amino-2-metil-l-propanola (0.021 pl l jedinice po"C) u odnosu na N-metil-l)-glukamin (0.010 pH jedinice po °C).

N-metil-D-glukamin jc bijeli kristalni prah, netoksičan je,' ne djeluje kao supstrat za alkohol dehidrogenazu pa je zbog toga i odabran kao pufer u preporučenoj IFCC metodi za određivanje katalitičke koncentracije laktat dehidrogenaze (14).

2.4. Optimalni pH Ispitivanja pl l optimuma za laktat dehidrogenazu provedena su od pH 8.0

do pH 11.0. Prethodna ispitivanja pokazala su da jc pll optimum za laktat dehidrogenazu-1 veći od 10.0. Kako što se metodom moraju određivati i drugi izoenzimi prisutni u serumu, zbog nestabilnosti NAD' i laktat dehidrogenaze-5 iznad pH 9.6, pH reakcijske smjese je izmijenjen.

Odabrani pH reakcijske smjese je 9.40, jer su promjene u aktivnosti laktat dehidrogenaze-1 najmanje u rasponu pH od 9.4 do 9.55, što uključuje i pl l opti­mum za laktat dcliiđrogcnazu-5, a vrlo je blizu i pK vrijednosti N-metil-D-glukamina.

Pripravljaju li se puferi na 24 °C potrebno je pripremiti pufer pH 9.5 ako se mjeri na 30 "C ili 9.63 ako se mjeri na 37 °C.

2.5. Koncentracija prijem Koncentracija pufera od 325 mmol/L zadovoljava uvjete mjerenja na 30 °C i

37 "C.

3. Uvjeti reakcije

3.1. Udio uzorka Najmanji utjecaj na mjerenje je uz 0.05 mL seruma u reakcijskoj smjesi.

3.2. Stabilnost uzorka Inkubacijom seruma lijekom 25 minuta u N-metil-D-glukaminskom puferu

pH 9.40, dokazana j e stabilnost enzima na 30 "C i 37 "C.

3.3. Stabilnost NAD' Ograničavajuća okolnost u mjerenju enzima jc stabilnost NAD' u različitim

otopinama. Otopina NAD' stabilna je najmanje 12 dana na 4 "C ako je pl I manji od 6.0.

BIOCHEMIA MEDICA god. 5, bi: 4. 1995. 161

Preporučene IKCC metode R. Bais i sur.

3.4. Određivanje K^ za NAD' i lahlat

U o b i č a j e n o j e d a se za m j e r e n j e e n z i m a u z i m a j u o n e k o l i č i n e s u p s t r a t a k o d k o j i h j e e n z i m z a s i ć e n . T o s u o b i č n o k o n c e n t r a c i j e v e ć e ili j e d n a k e 2 0 K t k o d k o j i h e n z i m p o s t i ž e više o d 9 5 % t e o r e t s k e m a k s i m a l n e a k t i v n o s t i . K r a v r i j e d n o s t i za N A D ' i l a k t a t r a z l i k u j u se o v i s n o o v r s t i i zoe tvz ima .

Lakta) dehidrogenaza-1 Laktat dehidrogenaza -5 K|jlia 2.00 ± 0.40 mmol/L 5.60 ± 1.20 mmol/L K M̂> 0.18 ± 0.03 mmol/L 0.22 ± 0.06 mmol/1. I z p r e t h o d n i h r a d o v a d o k a z a n o j e d a j e n e l i n e a r n o s t r e a k c i j e o d l a k t a t a d o

p i r u v a t a je d i j e l o m u z r o k o v a n a s t v a r a n j e m m r t v i h k o m p l e k s a , s t o j e i r a z l o g o m d a 2 0 X K k o n c e n t r a c i j e s u p s t r a t a n e ć e b i t i d o v o l j n e za p o s t i z a n j e m a k s i m a l n i h a k t i v n o s t i e n z i m a .

I s p i t i v a n j e m p o m o ć u " R e s p o n s e S u r f a c e O p t i m i z a t i o n " a n a l i z a p o t v r đ e n o j e d a u o d r e đ e n o m r a s p o n u k o n c e n t r a c i j a l a k t a t a i N A D ' p o s t o j e m a l e va r i j ac i j e a k t i v n o s t i l ak t a t d e h i d r o g e n a z e . Taj r a s p o n i znos i 2 6 - 5 0 m m o l / L z a l a k t a t i 10-16 i n m o l / L za N A D ' . A n a l i z a m a j e t a k o đ e r p o t v r đ e n o k a k o p o s t o j i n e g a t i v n a i n t e r a k c i j a i z m e đ u o p t i m a l n i h k o n c e n t r a c i j a l a k t a t a i N A D ' ( 1 5 - 17).

L I T E R A T U R A

1. Wacker WEC, Ulmrn OD. Valle BL. Metalocnzynics awl myocardial infarction II. Malic dehydrogenase and lactic dehydro­genase activities and zinc concentration. N Engl J Med L95fr,255:449-56.

2. Vanderlindr R. Measurement of total lactate dehydrogenase activity. Ann Clin Lab Sci­ence 198')-, 15:13-31,

S. Biibl SN.Jrtcksom KY. Optimal conditions and comparison of lactate dehydrogenase cataly­sis of lactate to pyruvate and pyruvate to lac-late reactions in luuuau sevrivn at 25, 30 and 37 "C. Clin Client 1978;24:828-31.

4. McComb RB. The measurement of lactate dehydrogenase. In: Clinical and Analytical Concepts in Emyuiology (Hoinburg HA. cd) Skokic HI. College of American Pa­thologists 1983:157-71.

5. Choi PI. Km/ilk WJ llriuln.mil Ali. A simple and rapid procedure for the preparation of human LDII-1 and I.DII-5 using an ion-exchange iiiiiii-coluiiin. Clin Chim Acta 1976;30:361-6.

ft. Bilbl .V.V. Jackson KY. Liibimki R. Vanderlindc RE. A search for the best buffer to use in assaying human lactate dehydrogenase with laciatc-to-v*'Yvivatc reaction. Clin Chem 1976;22:1872-5.

7. Bais R. EdiKirdiJB. Alcohol dcliydmgciia.se interference in lactate dehydrogenase assay. Clin Uicm 1980;26:525-0.

8. Cabdio R. Lubin J. Rjrolin AM. Fmnk/I R. Significance of a sixth lactate dehydrogenase isoenzyme (LDII 6). Amcr J Cliu Pathol 19.60.73:253-8.

9. Bhagamn NV. Dorm JR. Scoltalivic AG- A sixth lactate dehydrogenase (LI) 6) and its significance. Avcti Pathol Lab Med 1982;100:521-3.

10. l'oilhsek SJ, McPhenon RA, Threalle GA. Characterization of apparent "lactate dehy­drogenase 6": a laclatc-indepcndcnt dehy­drogenase. Clin Client 1984;30:266-70.

U. Kalo S. Isliii H, Horii K, Tmchiya M. Evi­dence that "lactate dehydrogenase isoen­zyme 5" is In fad alcohol dehydrogenase. Clin Chem 1984;30:1585-6.

12. Schmidt E. Hrnkel H, Klanke K, lorentz K. Sonulng O, Sinn \V, Wridrmann G Gerhardl W. Working group on enzymes of the Ger­man -Society of Clinical Chemistry. Proposal of standard routine methods for the deter­mination of enzyme catalytic activity concen­tration in serum and plasma at 37"C. IV Lactate dehydrogenase (L-lactatc osi-doiciluctasc, EC 1.1.1.27.). Eui J Clin Chem Clin Biochcm 1992;30:787-92.

13. Novoa WB; Winter AD, Glaid AJ. Schmrl GW. Lactic dehydrogcnascV: inhibition by oxanratc ami oxalate, j Biol Chem 1958, 234:1143-8.

162 BIOCIIEMIA MEDICA god. 5, br. 4, 1995.

R. Bais i sur. Preporučene IFCC metode

14. Schmidt E. Hrnkrl II. KUnikr K. Lorntlz K. Somilag O. Slrin W, Wridrmiinii C. (irritant! W. Working group of enzyme of llic Ger­man Society of Clinical Chemistry. Proposal of standard routine methods for the deter­mination of enzyme catalytic activity concen­tration in scrum and plasma at 37 "C. 1. Al-kuUue phosphatase (oiihophosphoric acid-nionocslcr phosphohydrolase. alkaline op­timum, EC 3.1.3.1.) Era J Clin CIlCUl Clin Biochcm 1992;30:247-256.

15.

16.

Ouggleby RG. Nonlinear regression program for small computers. Anal Biochem 1981; 25:269-272. Howrll BF. McCune S, Schaffrr R. Uictatc-Io-pvruvate assay for lactate dehydrogenase. A re-examination. Clin Chcm 1979;25:Ž69-72. London JW. The application of response surface methodology to clinical enzyme as­say design. to\ Clinical and Analytical Con­cepts ill Enzymology (Honihurgcr HA.ed.) Skokie III. College of American Patholo­gists, pp. 114-22.

Pripremile : Dubravka Juretić, Branka Šurina* Fnrmaccutsko-biokemijski fakultet

Zavod za medicinsku biokemiju i hematologiju. Zagreb * KB Mrrkur, Zavod za kliničku kemiju, Zagreb

BIOCHEMIA MEDICA god. 5, br. 4, 1995. 163