Técnicas moleculares para el estudio de parásitos

CAPÍTULO 42

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Figura 42-1. Esquema de un plásmido de expresión.

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Figura 42-2. Esquema del marcaje de una sonda molecular con el método de iniciadores al azar (random primer).

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Figura 42-3. La técnica de hibridación permite detectar la presencia de una secuencia específica dentro del DNA.

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Figura 42-4. Uno de los métodos para detectar DNA de interés es utilizar nucleótidos marcados con isótopos radiactivos. La presencia de una señal opaca en una película

para rayos X indica una señal positiva.

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Figura 42-5. Dot blot con muestras de DNA provenientes de heces de triatomídeos infectados con T. cruzi.

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Figura 42-6. Esquema de un plásmido de expresión que contiene la secuencia clonada de una proteína que sirve para diagnóstico. La proteína se expresa como híbrido (recombinante) que contiene parte de la proteína de fusión y la totalidad de la proteína clonada.

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Figura 42-7. Estudio Western blot para diagnóstico. Los sueros de los pacientes se ponen en contacto con la tira de papel de NC que contiene una proteína recombinante específica. El carril 1 es el control negativo y el carril 2 el control positivo.

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Figura 42-8. La prueba ELISA para el diagnóstico de numerosas enfermedades causadas por parásitos es el estudio de elección cuando se cuenta con un antígeno específico.

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Figura 42-9. Esquema representativo de una reacción de PCR. Esta prueba se basa en la replicación exponencial de una secuencia específica para algún parásito. Es

una prueba muy sensible.

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Figura 42-10. Electroforesis en gel de agarosa de los productos de una reacción de PCR para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. En el carril 1 se

observa el control positivo y en el carril 2 el control negativo de la reacción.

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Figura 42-11. Esquema de los pasos que requiere una reacción de PCR in situ; esta prueba permite detectar DNA del parásito en tejidos fijados.

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Figura 42-12. Autorradiografía de una búsqueda en un banco de DNAC. Cada una de las señales oscuras representa una placa lítica que

contiene la secuencia que hibridó con las sondas moleculares. La flecha indica la placa elegida para el análisis.

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Figura 42-13. Análisis de las secuencias amplificadas al azar (RAPD) de cinco especies de parásitos relacionados entre sí. El análisis de cada una de las

bandas que aparece en el gel de agarosa teñido con bromuro de etilo indica la relación filogenética que existe entre ellas.

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Figura 42-14. Imagen de parte de la secuencia de un gen de Trypanosoma cruzi. Cada uno de los carriles contiene la terminación de

la secuencia en el nucleótido indicado en la parte superior.

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Figura 42-15. Fotografía de un gel de agarosa que contiene el producto de una reacción de RT-PCR. Las bandas pueden ser

clonadas y secuenciadas para corroborar el resultado.

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Figura 42-16. Gráfica de una cuantificación por PCR de tiempo real del virus del HIV. Cada línea indica la presencia del virus en cantidades de 1010 (línea azul) hasta 101 (línea verde).