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3. Conceptos (Mentefacto)
¿Se cumplió la Ley de Michaellis
en este experimento? Porqué?
¿Cuál es el valor de la cons-
tante de Michaellis, la velo-
cidad Máxima y el coeficien-
te de correlación ( R), de la
cinética estudiada
¿Cual es la ecuación
de Michaellis en este
experimento?
Caracterización enzimática
de Ureasa, proveniente de
un suelo del Sumapaz
Dimensión Metodológica
10. Conclusiones:
1. El Problema
Interacción
2. Preguntas centrales Fundamentación conceptual
TCA y colisiones 5. Teorias:
4. Principios:
El complejo activado y las colisiones
moleculares, Describen el comportamiento
cinético molecular de la enzima Ureasa
sobre los enlaces Qcos de la urea (sustrato).
Michaellis-Menten
Establece relación entre V de la RBE y la
Concentración del sustrato (urea).
9. interpretación y discusión:
• La constante de Michaelis ó de afinidad, Km,
corresponde a una conc. de 0.0103 mol de urea
por litro de solución.
• La gráfica de la doble recíproca presentó una
correlación lineal altamente significativa (p<0.01).
7. Transformacion de datos (Cálculos) • Hallar: 1/[S| y 1/V (doble recíproca)
• Graficar 1/[S| y 1/V y linealizar
• Aplicar Regresión lineal por mínimos cuadrados
• Mediante esta técnica se obtiene:
• b = 0.9874 min/mol; m= 0.0102min/L; R2 = 0.999
• Se calcula Km y Vmax; así
• Km = m / b ; Vmax = 1 / b
1 / b m / b
UREASA
V max. [S|
V = --------------
Km + [S|
cumple
Cinética Michaelliana
Desdobla
la
Urea
produciendo
NH4OH CO2
V [S]
relaciona
V
[S|
Puede
ser es
Donde
aparece
así
Vmax Km
es es
6.Procedimiento yTabla de Datos
Velocidad
(mol/min)
0,0050 0,330
0,0100 0,500
0,0200 0,670
0,0500 0,830
0,1000 0,910
Indicador Valor
Km 0,0103 mol/L
Vmáx 1,013 mol / min
R2 0,999
Ecuación cinética de Michaelis
8.Tabla de Resultados 8.1 Gráficas
y = 0,0102x + 0,9874R² = 0,9999
0
1
2
3
4
-100 0 100 200 300
1/V
(m
in/m
ol)
1/ [S](L/mol)
Gráfica 2: Doble Recíproca para la cinética ureásica
• La cinética de la Ureasa, proveniente del suelo
de Sumapaz, cumplió la Ley de M-M, debido
a la alta correlación lineal entre los recíprocos de
[s | y la V.
Jairo Granados., MSc
DETERIORO DE
SUELOS
PROBLEMA
Manejo
cultural Monocultivos
Sobrepastoreo
Intensivo
Labranza
Tradicional
Calidad de la
MO
CAUSAS
CAUSAS
Fertilización
arbitraria
Productividad
Desgaste
Nutrientes
Desertificación
Microbiota
Actividad
Enzimática
Fijación Biológica
del Nitrógeno
.
Jairo Granados., MSc
2
Quemas
Erosión
Agricultura
intensiva
Actividad
Microbiológica
Bioactividad
NNP
Actividad
Ureásica
Muestreo Pesada Extracción Titulación ¿Viraje de
color?
Finalizar Resultados Datos
No
Si
Cuantificación Actividad Ureásica (AU)
Jairo Granados., MSc 3
Jairo Granados., MSc 4
Ureasic Activity
Carbon Dioxide
(CO2) Optimun
Temperatura:
37°C
Relates to
NPN in plants
and soils Organic
Matter
Ammonio
(NH3)
Optimun pH:
7,0
(H2N-CO-NH2)
Characteristics
Is based on
:
Ammonium
Hydroxide
NH4OH
Microbial Activity
in Soils
Molecular
kinetic theory
Activated
complex theory
Biochemical
reactions
of hydrolysis
their
products are
The enzyme is
urease
(amidohydrolase)
Urea is the
substrate
Biological Fixation
of Nitrogen
Jairo Granados., MSc
5
Gráfica 1 : Curva Cinética de Michaelis-Menten
Ley Cinética de Michaelis-Menten para una RBE
Jairo Granados., MSc 6
Ecuación Cinética de Michaelis-Menten:
V= 𝑉𝑚á𝑥.[𝑈𝑅𝐸𝐴]
𝐾𝑚+ [𝑈𝑅𝐸𝐴]
Ecuación Cinética de la Doble Recíproca de Linneweaver and Burk
1
𝑉=
𝐾𝑚
𝑉𝑚á𝑥×
1
[𝑢𝑟𝑒𝑎]+
1
𝑉𝑚á𝑥
Ecuaciones Cinéticas de una RBE
Jairo Granados., MSc 7
E + S (E--S)*K1
K2
K3 P + E
Teoría del Complejo Activado(TCA)
Gráfica 2: Curva energética del avance de una RBE, según TCA Jairo Granados., MSc 8
Indicador Significado Valor
Km
Constante de Afinidad ó
de Michaelis 0,0103 mol/L
Vmáx Velocidad ó Actividad
Máxima 1,013 mol / min
R2 Coeficiente de
correlación de Pearson 0,999
Ecuación cinética de Michaelis-Menten
Tabla 1:Parámetros cinéticos para la RBE de la ureasa
Jairo Granados., MSc 9
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1
0 0,02 0,04 0,06 0,08 0,1 0,12
Velo
cid
ad
de R
BE
(m
ol/
min
)
Concentración de la Urea (mol/L)
Gráfica 3: Gráfica cinética de Michaelis para la RBE de la ureasa
V= 1,013.[𝑈𝑅𝐸𝐴]
0,0103+ [𝑈𝑅𝐸𝐴]
Gráfica cinética de Michaelis-Menten
Jairo Granados., MSc 10
1/ V
(min/ mol)
200 3,03
100 2,00
50 1,49
20 1,20
10 1,09
y = 0,0102x + 0,9874 R² = 0,9999
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
0 50 100 150 200 250
1/V
(m
in/m
ol)
1/ [S](L/mol)
Gráfica 4: Gráfica de la doble recíproca para la RBE de la ureasa
Tabla 2: Datos para Doble recíproca
Gráfica Cinética de la Doble Recíproca de Linneweaver and Burk
1
𝑉= 0,0102 ×
1
[𝑢𝑟𝑒𝑎]+ 0,9874
Jairo Granados., MSc 11
1. En este experimento, Se cumplió la Ley de Michaellis-Menten, debido a que se presentó un comportamiento
hiperbólico en la curva cinética de Velocidad contra Concentración de Urea y también a la alta correlación lineal
entre los recíprocos de [s | y la V.
2. La constante de Michaelis para la ureasa extraída fue de 0,0103 mol/L, lo cual significa que la enzima
mostró una buena afinidad por el sustrato: Urea
3. La velocidad ó actividad máxima de la RBE fue de 1,013 mol/ min, lo cual indica que por cada minuto se
produjeron 1,013 moles de Hidróxido de amonio
4. El coeficiente de correlación ( R2), de la cinética estudiada fué de 0,999, lo que demuestra que se presentó
una alta dependencia lineal entre el recíproco de la velocidad de RBE y el recíproco de la concentración
de sustrato
5. La ecuación de Michaellis de este experimento es: la cual corresponde a una
curva hiperbólica
Conclusiones
V= 1,013.[𝑈𝑅𝐸𝐴]
0,0103+ [𝑈𝑅𝐸𝐴]
Jairo Granados., MSc 12