Présentation d’un projet de recherche pour le concours de l’Ecole Doctorale de Bordeaux II

par Stéphanie COCHAUD

Plan de la présentation

1ère partie : Présentation de la candidate

Curriculum Vitae

Initiation à la Recherche

2ème partie : Présentation du projet de Recherche

Introduction

Méthodologie

Conclusion

Curriculum Vitae

2005-2006 : Master 2 Recherche Biologie, Santé et Agronomie. Mention B

Faculté des Sciences Fondamentales et Appliquées, POITIERS (86).

2004-2005 : Master 1 Biologie, Santé et Agronomie.

Parcours : Biologie Moléculaire et Génétique. Mention B

Faculté des Sciences Fondamentales et Appliquées, POITIERS.

2003-2004 : Licence Physiologie, Biologie Cellulaire et Moléculaire. Mention B

Faculté des Sciences Fondamentales et Appliquées, POITIERS.

2001-2003 : DEUG Sciences de la Vie. Mention B

Faculté des Sciences Fondamentales et Appliquées, POITIERS.

Initiation à la Recherche

2 Stages effectués en Master 1 et Master 2 Recherche :

-Etude de l’expression de gènes par RT-PCR classique et/ou quantitative.

0,0

10,0

20,0

30,0

40,0

IGFBP-rP1 Transgéline Palladine

Po

ur

1000

de

GA

PD

H

H157-Ctl

H157-S1

H157-S2

Initiation à la Recherche

- Etude de l’organisation du cytosquelette d’actineH157-Ctl H157-S1 H157-S2H157-Ctl H157-S1 H157-S2

20µm 20µm 20µm

- Dosage de l’interleukine IL-1β par ELISA

0

1000

2000

3000

4000

5000

5ng/ml 10ng/ml 25ng/ml 50ng/ml 150ng/ml

IL-1

be

ta s

éc

rété

e e

n

pg

/ml

Milieu contrôle Milieu + SEMA3F

Les tétraspanines

Forment une superfamille de protéines

Schéma des tétraspanines

Impliquées dans de nombreuses fonctions

Levy et Shoham, Physiology (2005).

La tétraspanine KAI1/CD82

Protéine ubiquitaire

Identifiée au cours de l’étude de l’activation des cellules T

Supresseur de métastases :

1- corrélation inverse entre l’expression de KAI1 et les pouvoirs métastasique et d’invasion des cellules cancéreuses

2- KAI1 inhibe la migration cellulaire et l’invasion in vitro

3- KAI1 empêche la formation de métastases in vivo

Fonctions de la tétraspanine KAI1/CD82

Intégrine α6β1

KAI1/CD82

Intégrines β1

Baisse de la dégradation de la matrice extracellulaire

MMP9

Jee et al., BBRC (2006)

Baisse de l’adhérence cellulaire

He et al., J. Biol. Chem. (2005)

Src

CAS

FAK

Inhibition de la migration cellulaire

Sridhar et Miranti, Oncogene (2006)

P

P

P

Les objectifs

1. Etudier le pouvoir anti-métastasique de KAI1/CD82 dans un modèle du cancer du poumon in vivo.

2. Déterminer les mécanismes moléculaires mis en jeu

Méthodologie : l’étude in vivo

H12999?(Carcinome de poumon à non petites cellules)

Clone contrôle Clone(s) réexprimant KAI1

Transfection

Injection orthopique

Mettre image de rats

Etudier la survie des rats

Etudier le volume et la vascularisation de la tumeurEtudier la formation de métastases

(pcDNA3.1)

Méthodologie : l’étude in vitro

KAI1/CD82

Intégrines β1

Src CAS

FAK

Réorganisation de l’actine (migration cellulaire)

? Perte de l’adhérence :(- test d’adhérence)(- test de migration)

P

P

P

DOCK180 CrkCAS

P

Rac-GDPRac-GTP

(Immunofluorescence)

Anticorps P5D2

Anticorps 8A2

SU6656

(Immunoprécipitation)

(Pull-Down)

Conclusion

Montrer la fonction anti-métastasique de KAI1/CD82 in vivo

Déterminer la voie de signalisation mise en jeu

Par la suite :

Influences des interactions entre KAI1 et KASP et entre KAI1 et Kitenin?

Merci de votre attention

KAI1/CD82 : un supresseur de métastases