Upload
mis-mali
View
706
Download
15
Embed Size (px)
Citation preview
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
ISTRAŽIVANJE MIKROORGANIZAMA
MIKROSKOPIMA
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Mikroskop (grč. mikros=malen, sitan; skopeo = gledam) je optičkiinstrument koji se upotrbljava za promatranje objekata, kao što sumikroorganizmi, koji su presitni da bi se mogli vidjeti golim okom - to je osnova primjene mikroskopa za stvaranje slike mikrobnog svijeta
MIKROSKOP
• razvoj:- 1600. god. Zacharias i Hans Janssen konstruirali prvi složeni mikroskop- 1625.god. Giovanni Faber - daje nazivmikroskopu- 1665.god. Robert Hooke primitivnimmikroskopom otkrio žive stanice- 1674.god. Antony van Leeuwenhoekpomoću jednostavnog mikroskopa(bikonveksna leća umetnuta izmeđumjedenih ploča) otkrio nevidljive oblikeživota - “najsitnije životinje” tj. mikroorganizme
• Svjetlosni ili optički mikroskopi:a) mikroskop sa svijetlim vidnim poljemb) mikroskop s tamnim vidnim poljemc) fluorescentni mikroskop - uzorak je fluorescentan; reflektirana i fluorescentna
svjetlost se razdvajaju zrcalom – propušta se samo fluorescentna svjetlost iz dijela uzorka u ravnini žarišta objektiva; velika rezolucija
d) fazno-kontrastni mikroskop – povećanje kontrasta preparata obavlja se promjenom faze svijetla što prolazi kroz preparat u odnosu na svijetlo koje prolazi pozadinom i tako se eliminira potreba za bojanjem promatranih organizama; omogućuje istraživanje unutarnje strukture stanice
Mikroskopi koji se danas koriste sastavljeni su od niza optičkih i mehaničkih djelova, a u osnovi razlikujmo dva tipa: svjetlosne (optičke) i elektronske mikroskope
(c)
(c) (d)
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
• Elektronski mikroskop:
a) transmisijski mikroskop – omogućuje velika povećanja tankih presjeka preparata
b) pretražni elektronski mikroskop – omogućuje 3-dimenzionalno promatranje preparata pod povećanjem najčešće oko 10000 puta
(a)
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Grafički prikaz tipova uzoraka što se istražuju često upotrebljavanimmikroskopima u mikrobiologiji i srodnim područjima. Prikazan je i djelotvoran domet tih instrumenata.
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Jednostavni svjetlosni mikroskop
- ima samo jednu leću i nalik je napovećalo
- sastoji se najmanje dvaju sustava leća: objektiva koji povećava uzorak i okulara koji povećava sliku što je dobivena od objektiva
- kao izvor svjetlosti u složenom mikroskopu se upotrebljava vidljivi dio spektra- upotrbljava se za istraživanje vrlo sitnih objekata, a i njihove fine detalje iliultrastrukture
- ukupno povećanje mikroskopa dobiva se tako da se pomnoži povećanjeobjektiva s povećanjem okulara
Složeni svjetlosni mikroskop
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Mehanički dijelovi mikroskopa:1. postolje (podloga)2. stativ (ručica)3. tubus s revolverom4. stolić mikroskopa5. makrovijak i mikrovijak6. uređaj za osvjetljavanje
Optički dijelovi mikroskopa:1. okular2. objektiv3. kondenzor4. iris-zaslona
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Optički dijelovi - služe za uvećavanje i osvjetljavanje predmeta koji se promatraju
1. OKULAR- kratka cijev koja sadrži dvije leće (gornja ili okularna i donja ili sabirna leća)- nalazi se na gornjem kraju tubusa- povećanja okulara su: 1x, 2x, 5x, 10x, 15x
2. OBJEKTIV- najvažniji optički dio mikroskopa - leće objektiva služe za skupljanje i koncentriranje zraka svjetlostikoje dolaze iz preparata i za povećavanje stvorene slike predmeta
- MOĆ RAZDVAJANJA - najvažnija osobina objektiva -sposobnost leće da istakne fine detalje i strukturu
- većina mikroskopa ima 3 objektiva s različitim povećanjima:malo povećanje (10x)srednje povećanje (40x) veliko povećanje (100x)
Prema načinu promatranja preparata razlikujemo 2 sistemaobjektiva:
a) SUHI sistem objektiva - za promatranje gljiva, algi, protozoa- između frontalne leće i preparata nalazi se zrak- zrak nema isti indeks refrakcije kao staklo te dolazido prelamanja svjetlosnih zraka
- malo i srednje povećanje
b) ULJNO IMERZIONI (MOKRI) sistem objektiva - za promatranje bakterija, njihovih oblika i rasporeda stanica- između preparata i frontalne leće nalazi se imerzijska tekućina (anisol,
cedrovo ulje i sl.) kojoj je indeks refrakcije blizu indeksa refrakcijestakla
- veliko povećanje
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
3. KONDENZOR- kondenzor se nalazi ispod stolića mikroskopa između izvora
svjetla i promatranog preparata- sastoji se od sustava leća koje sabiru svjetlosne zrake i
usmjeravaju ih prema promatranom preparatu
4. IRIS-ZASLON- služi za kontrolu intenziteta svjetla tj. za reguliranje količine svjetla koja ulazi u kondenzor
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Elektronski mikroskop
- mikroskop koji upotrebljava snop elektrona kao izvor svjetlosti za dobivanje slike predmeta
- prvi elektronski mikroskop načinili su Knoll i Ruska 1931. godine→ temeljni način rada tog mikroskopa nije promijenjen ni do današnjih dana
- moć razdvajanja koja se postiže elektronskim mikroskopom za biološke pripravkeiznosi oko 0,4 nm (dok kod svjetlosnog mikroskopa iznosi “samo” 0,2 mm)
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
PRIPRAVA UZORAKA ZA MIKROSKOPIRANJE
SVJETLOSNIM MIKROSKOPOM
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Mikroskopski preparati služe nam za promatranje morfološkihkarakteristika mikroorganizama.
Dijelimo ih u dvije kategorije:
1. NEBOJENI (NATIVNI) PREPARATI2. OBOJENI PREPARATI
1. NEBOJENI (NATIVNI) PREPARATI
- koriste se za mikroskopiranje živih, većih mikroorganizama kao što su kvasci, plijesni, alge, veće bakterije
- mikroskopiraju se pod povećanjem od 400x
Vrste nebojenih preparata: a) vlažni preparati – služi za mikroskopiranje mikroorganizama u
normalnome živom stanju, tj. oblika i rasporeda stanica
b) viseća kap – služi za pripremanje pripravaka u kojima se određuje pokretljivost bakterijskih stanica
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
2. OBOJENI PREPARATI
- većina mikroorganizama je bezbojna, a da bismo ih mogli istraživati svjetlosnim mikroskopom, moramo ih obojati
Obojeni preparati omogućuju:- bolje i detaljnije izučavanje mikroorganizama- bolje uočavanje pojedinih struktura (spore, st. stjenka) - razlikovanje različitih tipova mikroorganizama
- bojila za bojanje mikrobnih stanica najčešće su u obliku soli, u kojima je jedan od iona nosilac boje – kromogeni dio
- sposobnost bojila da se veže na makromolekulske komponente stanice ovisi o električnom naboju na kromogenom dijelu, a i o staničnim komponentama koje se boje
MIKROBIOLOŠKE BOJE
- budući da je najveći broj mikroorganizama gotovo bezbojan često ih moramo bojati kako bismo ih mogli istraživati standardnim svjetlosnim mikroskopom
KISELA (anionska) bojila - imaju negativan naboj i afinitet prema pozitivno nabijenim dijelovima stanice
- kiseli fuksin (crveno), eozin (crveno), eritrozin (crveno), fluorescein (žuto), nigrozin (crno)
BAZIČNA (kationska) bojila - imaju pozitivan naboj te afinitet prema negativno nabijenim dijelovima stanice
- metilensko modrilo (plava), gentiana violet(ljubičasta), karbol fuksin (crveno)
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Vrste postupaka bojenja:- JEDNOSTAVNO bojanje – koristi se jedno bojilo, služi za vizualizaciju
morfološkog oblika- DIFERENCIJALNO bojanje – upotreba dvaju kontrasnih bojila:
a) izdvajanje u skupine (bojanje po Gramu)b) vizualizacija struktura (bojanje čahura, spora, bičeva, jezgre)
JEDNOSTAVNO BOJANJE – postupak:
1. Priprema preparata za bojanje- odmašćivanje stakalca- nanošenje kapljice vode- nanošenje mikrobne kulture u kap vode - ezom se nanesena kap razmaže
po površini predmetnice- sušenje na zraku- fiksiranje
2. Bojanje s jednom mikrobiološkombojom
3. Ispiranje vodom nakon bojanja4. Sušenje pomoću upijajućeg papira5. Mikroskopiranje uz kap anisola i najveće
povećanje mikroskopa
Postupak bojanja po Gramu
Bojanje bakterijskih endospora po Schaeffer – Fultonovoj metodi
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Bojanje bakterijskih čahura (kapsula)
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
HRANJIVE PODLOGE ZA UZGOJMIKROORGANIZAMA
Hranjive podloge - služe nam za uzgoj mikroorganizama u laboratorijskimuvjetima
- svojim sastavom i karakteristikama osiguravajumikroorganizmima onakve uvjete života koje bi oniimali u prirodnim sredinama
Hranjive podloge
način primjene konzistencija
kemijski sastav
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
a) Hranjive podloge prema načinu primjene dijelimo:
obične podloge - služe za izolaciju i uzgoj većeg brojamikroorganizama
specijalne podloge - služe za uzgoj točno određene grupemikroorganizama
Za utvrđivanje specifičnosti koristimo selektivne i diferencijalne podloge.
SELEKTIVNE hranjive podloge – sadrže komponente koje inhibiraju rast nekih mikroorganizama te potiču rast ostalih organizama ili im ne škode
DIFERENCIJALNE hranjive podloge - omogućuju lakše razlikovanjekolonija željenog mikroorganizma od drugih kolonijakoje rastu na istoj hranjivoj podlozi
b) Hranjive podloge prema kemijskom sastavu dijelimo na:
b1) prirodne hranjive podloge - točan kemijski sastav takvih podloga nijepoznat, a priređuju se od produkata biljnog (plodovi, sokovi) iliživotinjskog (mlijeko, krvni serum, žuč) porijekla
b2) umjetne (sintetske) hranjive podloge - pripremaju se iz čistihkemijskih spojeva po određenim recepturama čije komponente mogubiti organskog ili anorganskog sastava
b3) kompleksne hranjive podloge služe za uzgoj većine heterotrofnih gljiva i bakterija. Kemijski sastav takvih podloga varira i djelomično je poznat→ komponente su im kvasni i mesni ekstrakt
Svaka hranjiva podloga mora osiguravati mikroorganizmima izvor ugljika, dušika, fosfora, aminokiselina, vitamina.
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
c) Hranjive podloge prema konzistenciji dijelimo na:
- tekuće- čvrste (krute)- polutekuće
-čvrstoća podloge postiže se dodavanjem agara tekućim hranjivimpodlogama
Agar - heteropolisaharid koji se dobiva iz morsih algi roda Gelidium- zagrijavanjem agara (koji je u obliku praška) na temperaturu 95-98°C on se otopi u tekućoj podlozi, a prilikom hlađenja kod temp. 40-45°C uzrokuje skrućivanje hranjive podloge
- koncentracija agara u čvrstim hranjivim podlogama je1-2%, a u polučvrstim podlogama 0,1-0,5%
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Bez obzira na pripadnost pojedinoj skupini nabrojenih hranjivih podloga, svaki hranjivi supstrat mora:
• sadržavati sve hranjive sastojke koji su potrebni za rast i razmnožavanje• sadržavati dovoljnu količinu vode• imati povoljnu pH vrijednost• biti sterilan• biti prozračan
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
STERILIZACIJA
Sterilizacija kemijskim putem vrši se pomoću nekih kemijskih agensa(dezinficijensi, antiseptici) koji suzbijaju rast mikroorganizama(npr.bakteriostatici) ili ubijaju mikroorganizme i endospore.
- alkoholi, kiseline, halogeni, fenoli, soli teških metala, oksidirajući agensi
Sterilizacija podrazumijeva svaki proces, kemijski ili fizički, pomoćukojeg se ubijaju svi oblici života, osobito mikroorganizmi
Prema sredstvu kojim se sterilizacija provodi razlikujemo:
1) STERILIZACIJU TOPLINOM2) STERILIZACIJU FILTRACIJOM 3) STERILIZACIJU ZRAČENJEM4) STERILIZACIJU ULTRAZVUKOM
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
1. STERILIZACIJA TOPLINOM
- najčešći oblik sterilizacije koji je i najsigurniji i najprikladnijiA) Suha sterilizacija
a) plamenom – koristi se za sterilizaciju mikrobiološkog pribora od metala (žarenje eze),stakla (otvori epruveta radi spriječavanjakontaminacije hranjive podloge ili kulture mikroorganizama) te opaljivanje radnih površina
b) vrućim suhim zrakom - izvodi se pri temperaturi 160°C do 180°C uz trajanje1-2 sata ili pri temp. 200°C do 250°C ako se sumnja na kontaminaciju bakterijskim sporama
- vrši se u suhom sterilizatoru (Pasteurova peć)- primjena: sterilizacija metalnog i staklenog
laboratorijskog pribora- neprikldan za sterilizaciju tekućina koje isparavaju,
predmeta od gume ili sličnih materijala koji se tale ili zapale na visokoj temp
Suhi sterilizator – Pasteurova peć
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
B) Vlažna sterilizacija
a) sterilizacija kuhanjem (prokuhavanje u vrućoj vodi)- najjednostavniji oblik sterilizacije- rijetko se primjenjuje- spore nekih bakterija mogu preživjeti
b) sterilizacija vodenom paromb1) sterilizacija strujećom vodenom parom - odvija se u Kochovu loncu
- primjena: sterilizacija hranjivih podloga s tvarima koje nepodnose temperature iznad 100°C → za sterilizaciju svih materijala koji se mogu navlažiti i na koje zasićena vodena para ne djeluje štetno
- trajanje sterilizacije: 30 – 60 min
- jednokratna sterilizacija u Kochovu loncu ne ubija spore nekih vrsta bakterija → u tom slučaju primjenjuje se višekratna sterilizacija koja se naziva TINDALIZACIJA ili FRAKCIONA STERILIZACIJA
Materijal se nekoliko puta stavlja na sterilizaciju - npr. hranjive podloge ili neki drugi materijali se nakon sterilizacije ostave na sobnoj temperaturi ili u termostatu da bi spore mogle isklijati u vegetativni oblik, a nakon toga sterilizacija se ponovi (zbog sigurnosti i nekoliko puta).
Frakcionom sterilizacijom ili tindalizacijom uspješno se sterilizirajumaterijali koji sadrže spore aerobnih bakterija.
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
b3) pasterizacija
- djelotvoran način sterilizacije za većinu mezofilnih nesporulirajućih mo. koji se nalaze u mlijeku
- primjena: za sterilizaciju mlijeka i drugih napitaka- pasterizacija nije sterilizacija, ali uništava patogene i smanjuje kvarenje
reducirajući razinu nepatogenih mikroorganizama kvarenja (ne ubija spore i termorezistentne mikroorganizme)
- izvodi se na temperaturama nižim od 100°C- 2 načina pasterizacije: niska pasterizacija – 30 min na 63°C
visoka, kratkotrajna pasterizacija – 15 sec na 72°C nakon čega slijedi hlađenje
- koristi se i sterilizacija mlijeka visokom temp. (140-150°C) 1-3 sec
b2) sterilizacija strujećom vodenom parom pod tlakom -odvija se u autoklavu
- najsigurniji način sterilizacije toplinom- uništavaju se sve vrste mikroorganizama (vegetativni oblici,spore)sterilizacija se provodi u autoklavu
- trajanje sterilizacije: 15 min do 1 sat pri 1-2 atm- primjena: za sterilizaciju većine hranjivih podloga i kemikalija te predmeta od gume, porculana i običnog stakla
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
2) STERILIZACIJA FILTRACIJOM- primjena: za sterilizaciju tekućina koje ne podnose sterilizaciju nekim
drugim načinom jer bi im se izmjenila fizikalna i kemijskasvojstva
- postupak: tekućine se filtriraju pod tlakom kroz filtre poznate veličinepora → filter zadrži mikroorganizme, a propusti tekućinu i u njoj topljive sastojke koje želimo sačuvati
- vrste filtera: a) Chamberlandovi (porculanski) filterib) Berkefeldovi filteric) Seitzovi azbestni filterid) Membranski ili ultrafilteri
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
3) STERILIZACIJA ZRAČENJEM
a) ultraljubičasto zračenje (UV) - zrake valnih duljina 240-280 nm- oštećuju i zaustavljaju sintezu mikrobne DNA
- primjena: za sterilizaciju zraka u laboratoriju, operacijskim dvoranama koriste se UV lampe (kvarcne lampe)
- djeluju samo na one mikroorganizme koji su im izravno izloženi
b) ionizacijsko zračenje - elektromagnetske x-zrake i gama zrake, infracrvene zrake
- jačeg mikrobicidnog djelovanja od UV-zraka- primjena: sterilizacija kirurškog pribora, laboratorijskog plastičnog posuđa
(medicina, prehrambena i farmaceutska industrija)- infracrvene zrake zagrijavaju materijal do temperature pri kojoj dolazi do
koagulacije proteina
4) STERILIZACIJA ULTRAZVUKOM- zvučni valovi visoke frekvencije uništavaju mikroorganizme- uglavnom se koristi za razbijanje stanica i oslobađanje intracelularnih enzima, rijeđe za sterilizaciju
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
METODE ZA IZOLACIJU ČISTIH KULTURA
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
IZOLACIJA je značajna mikrobiološka tehnika kojom se izdvajaju čistekulture mikroorganizama iz mješovite populacije
- za proučavanje morfoloških i fizioloških osobinamikroorganizama, kao i njihove identifikacije, potrebno jeimati njihove čiste kulture
Pod čistom kulturom se podrazumijeva kultura mikroorganizama koje sadržesamo jedan tip stanica.
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Za dobivanje čistih kultura koriste se slijedeće metode:
1. METODA RAZRIJEĐENJA2. METODA ISCRPLJENJA
1. METODA RAZRIJEĐENJA - služi za izolaciju i određivanje broja mikroorganizama
POSTUPAK:
- u seriju od npr. 6 epruveta odpipetira se 9 ml vode- u prvu se odvaže 1 g tla ili nekog drugog materijala koji se istražuje- sterilnom pipetom se odpipetira 1ml iz prve epruvete i prenese u slijedeću, isti
postupak ponovimo do kraja (do šeste epruvete) mijenjajući pipete pri promjeni razrjeđenja – na taj način dobivamo željenu seriju razrjeđenja (10-1 do 10-6)
- kad želimo odrediti broj mikroorganizama uzimamo po 1ml suspenzije iz posljednja tri razrjeđenja (10-6, 10-5, 10-4) te stavljamo u Petrijevu zdjelicu, a potom se ulijeva hranjiva podloga. Postupak se vrši u 3 ponavljanja
- Petrijevke se stavljaju u termostat na inkubaciju -- na petrijevkama izraste određen broj kolonija- nakon inkubacije određuje se prosječan broj mikroorganizama ispitivanog uzorka
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
- broj živih stanica datog uzorka određuje se množenjem broja izbrojanih kolonija s faktorom razrjeđenja (faktor razrjeđenja je recipročna vrijednost eksponenta razrjeđenja)- dobivena vrijednost označava se kao CFU (colony forming unites) tj.jedinice koje tvore kolonije
- broj CFU jednak je broju živih stanica samo kada jedna kolonija nastaje od jedne stanice
broj izraslih kolonijaCFU = ------------------------------- x recipročna vrijednost razrjeđenja
volumen uzorka
CFU se izračunava prema formuli:
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Metoda razrijeđenja
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
• metoda razrijeđenja: - daje nam brojnost živih, aerobinh mikroorganizama- nije uključeno: obligatni Anaerobi
mikroaerofili- izražava se: Colony Forming Unit (CFU)/gramu ili ml
NE kao ukupne bakterije (mikroorganizmi)
Ograničenja ove metode: mogu se prebrojati samo aerobni mikroorganizminije poznata nijhova vrstapodloge nisu univerzalneljudska greškaponekad je teško razlikovati čestice hrane i kolonijekolonije mogu biti premale da se vide
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
2. METODA ISCRPLJENJA - brz i kvalitetan postupak koji služi samo za izolaciju mikroorganizama
POSTUPAK:- na prethodno izliven i ohlađen hranjivi supstrat u Petrijevoj zdjelici stavimo kap mikrobiološkog materijala
- materijal razvlačimo po površini čvrste podloge pomoću Pasteurove vilice ili eze, te bez ponovnog uzimanja materijala razmažemo po drugoj i trećoj Petrijevoj zdjelici.
- na taj način smanjujemo brojnost mikroorganizama i na trećoj Petrijevoj zdjelici nalazi se najmanji broj kolonija.
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
IDENTIFIKACIJA BAKTERIJA
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
- identifikacija je praktičan dio taksonomije koji svrstava izolat u određenetaksone
-do danas je klasificirano i identificirano više od 2000 vrsta bakterija
- Fischer i Muller napravili prvu klasifikaciju i sistematizaciju- 1923. izašlo prvo izdanje Bergeyeva priručnika za bakterija- tijekom godina zabilježena su sva važnija dostignuća, zabilježene nove vrste,kriterijiklasifikacije i poboljšane sheme klasifikacije
- danas priručnik sadrži 4 podvolumena, a svaki od njih prikazuje specifične skupinebakterija
Karakteristike koje se koriste u klasifikaciji i identifikaciji mikroorganizama:
1. MORFOLOŠKE KARAKTERISTIKE KOLONIJA - svaka vrsta bakterijaima karakterističan tip kolonija na hranjivoj podlozi
2. MORFOLOŠKE KARAKTERISTIKE BAKTERIJA- oblik stanice, veličina, ultrastrukture, bojanje po Gramu, pokretljivost, raspored cilija i flagela, obliki smještaj edospora, stanične inkluzije
3. FIZIOLOŠKE I BIOKEMIJSKE KARAKTERISTIKE - odnose se na prirodu i aktivnost bakterijskih enzima i transportnih proteina- neke od fizioloških i biokemijskih karakteristika koje se ispituju su:izvor C i N, sadržaj st. stjenke, izvori energije, produkti fermentacije,sekundarni metaboliti, osmotska tolerancija, osjetljivost na metaboličkeinhibitore i antibiotike, pH optimum
5. SEROLOŠKE KARAKTERISTIKE - imunološke tehnike koriste se zakomparaciju proteina različitih mikroorganizama
6. GENETIČKE I MOLEKULARNE KARAKTERISTIKE - jedan od najvažnijihpristupa taksonomiji nastao kroz: analize proteina
analize nukleinskih kiselina
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Uvod u mikrobiologiju tla - vježbe
Hvala na pažnji
- sva pitanja, konzultacije, nejasnoće : Katarina Huić Babić, dipl.ing.