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PROCEDIMENTO PARA VERIFICAÇÃO DA PERFORMANCE DAS PIPETAS GILSON (OPERATION QUALIFICATION) REF: LT802292B

PROCEDIMENTO PARA VERIFICAÇÃO DA PERFORMANCE DAS PIPETAS ... · INTRODUÇÃO . Este documento descreve o método para verificação da performance das pipetas Gilson utilizando-se

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PROCEDIMENTO PARA VERIFICAÇÃO DA PERFORMANCE DAS PIPETAS GILSON

(OPERATION QUALIFICATION)

REF: LT802292B

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INTRODUÇÃO

Este documento descreve o método para verificação da performance das pipetas Gilson

utilizando-se o método gravimétrico. A utilização dos procedimentos descritos neste

método garante conformidade com as especificações Gilson para exatidão e precisão.

Embora este documento não relacione outros métodos, que podem estar sendo utilizados

pelo usuário, o método e cálculos aqui descritos podem ser aplicados em outros testes, fora

do escopo deste documento.

O teste de conformidade para verificação da exatidão e precisão é aplicável a qualquer

pipeta Gilson: Pipetman (P e F), Pipetman Ultra, Distriman ou Microman. Este teste, que

está de acordo com padrões internacionais, analisa o sistema de pipetagem como um todo:

pipeta, ponteira e operador.

Nota: Para resultados confiáveis, o operador deve ser bem treinado e qualificado.

O método descrito neste documento inclui um procedimento para correção das perdas por

evaporação para pequenos volumes. Também, na conversão para volume das massas

obtidas na balança, são feitas correções referentes à temperatura e pressão no momento da

execução do teste.

O usuário deve estabelecer uma rotina para testar suas pipetas com base em: necessidades

em termos de exatidão e precisão, frequência de uso, número de usuários para uma mesma

pipeta, número de ciclos em cada utilização da pipeta e a natureza dos líquidos pipetados.

Auxílio para se estabelecer estes procedimentos está disponível na Analítica (representante

Exclusivo da Gilson no Brasil).

Nota 1: para a Pipetman Ultra, o teste a ser feito pelo usuário está descrito no Manual de

Operação, como parte do procedimento de recalibração.

Nota 2: As especificações de exatidão e precisão descritas para cada modelo só são

garantidas pelo fabricante quando se utiliza ponteiras originais Gilson (ponteiras

DIAMOND ).

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DOCUMENTOS RELACIONADOS

Documento Referência

Manual de operação da Pipetman P LT801117

Manual de operação da Pipetman F LT801118

Manual de operação da Pipetman 8x200 LT801236

Manual de operação da Microman LT801367

Manual de operação da Distriman LT801285

Manual de operação da Pipetman Ultra LT801441

prEN ISO/ FDIS 8655 *

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DEFINIÇÕES Exatidão (Erro Médio ou Erro Sistemático): diferença entre o volume dispensado e o

volume nominal ou o volume selecionado na pipeta.

Calibração (Ajuste): conjunto de operações que estabelecem a relação entre o volume

dispensado e o volume nominal ou selecionado correspondente na pipeta.

Volume morto de ar: nas pipetas de deslocamento de ar, é o volume de ar entre a parte

inferior do pistão e a superfície do líquido.

Taxa de evaporação: estimativa da perda de água causada pela evaporação durante o

processo de pesagem.

Análise gravimétrica: procedimento geral baseado na determinação da massa das

alíquotas de água dispensadas por uma pipeta. Os valores são corrigidos com relação à

perda por evaporação, e então, a massa real e o volume são calculados, com base na

densidade da água em temperaturas específicas com correções para a pressão atmosférica

do local (fator Z).

Volume Nominal: maior volume selecionável pelo usuário e especificado pela Gilson.

Nota: isto significa que, para uma pipeta de volume variável com uma faixa de volume útil

de 10µl a 100µl, o seu volume nominal é 100µl.

Volume selecionado: volume ajustado pelo usuário, para a dispensa do volume escolhido

dentro da faixa de volume útil.

Nota: para as pipetas e volume fixo, o volume selecionado é igual ao volume nominal.

Precisão (Erro Aleatório): dispersão dos volumes dispensados ao redor da média dos

volumes dispensados. Também conhecida (de acordo com o contexto) como desvio padrão,

reprodutibilidade ou repetibilidade.

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Repetibilidade: é a dispersão entre os resultados de medidas sucessivas (realizadas em um

curto espaço de tempo), onde não há alteração dos parâmetros nem das condições.

Reprodutibilidade: é a dispersão entre os resultados de medidas realizadas em condições

diferentes (local ou operador diferente), mantendo todos os parâmetros constantes.

Especificações Volumétricas (Erros Máximos Admissíveis): são os extremos permitidos

(superior e inferior) para o desvio entre o volume dispensado e o volume nominal ou o

volume selecionado.

Faixa de volume útil: parte do volume nominal que pode ser dispensado, dentro do erro

máximo especificado na Norma Internacional ISO/ DIS 8655. O valor superior da faixa de

volume útil é sempre o volume nominal. O valor inferior é 10% do volume nominal, se não

estiver especificado de forma diferente pelo fabricante.

Recalibração (ajuste feito pelo operador): é um procedimento, definido pela Gilson e que

pode ser executado pelo usuário final, para garantir que a pipeta opere conforme as

especificações publicadas.

Pesagem: pesar significa determinar a massa de uma alíquota.

Fator Z: fator de conversão (µL/mg) considerando-se a densidade da água em contato com

o ar, em função da temperatura e da pressão.

Ex: Designação (abreviatura) de um instrumento projetado para dispensar volumes.

In: Designação (abreviatura) de um instrumento projetado para aspirar volumes.

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CONDIÇÕES AMBIENTAIS

A sala de teste (laboratório) deve ter controle de temperatura e umidade para que as

condições ambientais do local onde será feita a verificação e a temperatura dos

equipamentos utilizados sejam estáveis e homogêneas antes e durante todo o procedimento.

A temperatura da pipeta e da água destilada utilizada no teste gravimétrico deve estar

estabilizada antes do início do procedimento (coloque-as na sala 12 horas antes do início do

procedimento). Idealmente, a verificação deve ser feita nas seguintes condições:

1) Temperatura estável (água,pipeta e ambiente) em 21.5 ± 1.5ºC

Se por alguma razão a pipeta for verificada em uma temperatura fora da especificada, a

correção é feita utilizando-se um fator Z diferente para a conversão da massa em volume

(µl/mg).

2) Umidade Relativa de 45% a 75%

Para minimizar a taxa de evaporação, esta faixa de umidade relativa deve ser mantida

durante todo o procedimento de verificação.

3) Pressão barométrica de 1013 ± 25 hPa

Se o local do teste possuir uma pressão atmosférica diferente, a correção é feita utilizando-

se um fator Z diferente na conversão de massa para volume (µl/mg).

OPERADOR

Operação da pipeta

Um procedimento adequado de pipetagem contribui significantemente para a

reprodutibilidade dos resultados no teste de verificação. Operadores sem experiência

podem ter variações importantes nos resultados. Para resultados confiáveis, o operador

deve ser bem treinado e qualificado.

Se deve ter cuidado em manter um ritmo constante na aspiração e na dispensa das

alíquotas: pressionar/ liberar o botão de operação suavemente e com velocidade constante.,

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Observar a profundidade de imersão da ponteira (veja esta informação no manual de

operação da pipeta que está sendo testada).

Treinamento

O teste de conformidade deve ser feito por um operador qualificado. Se necessário, contate

a Analítica para maiores informações sobre treinamento.

PONTEIRAS

A pipeta que será testada deve ser operada segundo as instruções fornecidas pelo manual de

operação. Novamente, com base no manual de operação que acompanha a pipeta que será

testada, tenha certeza, antes de começar o teste, que ela está limpa, montada corretamente e

de estar utilizando genuínas ponteiras Gilson.

Como a qualidade das ponteiras utilizadas no teste é um fator importante para se assegurar

que a performance da pipeta esteja de acordo com a especificação, a escolha da ponteira é

um passo fundamental no processo de calibração. Por exemplo, todos os modelos da

Pipetman possuem calibração de fábrica, realizada com ponteiras Gilson Diamond, de

ótima qualidade. Então, para a Pipetman, você deve usar exclusivamente as ponteiras

Gilson Diamond para realizar o teste gravimétrico.

EQUIPAMENTOS UTILIZADOS NO TESTE

Para garantir a integridade do procedimento de verificação, todos os equipamentos

utilizados durante o procedimento devem ser verificados regularmente.

Balança

Balanças apropriadas, conforme a OIML R 76-1 (OIML - International Organization of

Legal Metrology), devem ser selecionadas para realização do teste de performance da

pipeta, conforme tabela abaixo.

As balanças devem ser calibradas e certificadas por pessoal qualificado usando pesos

rastreáveis a autoridades reconhecidas nacionalmente (Empresas/ Instituições pertencentes

à Rede Brasileira de Calibração - RBC). REF: LT802292B NOV/ 2001 Pag 7 / 26

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A legibilidade da balança deve ser escolhida de acordo com o nível de exatidão requerido,

que deve ser um décimo do desvio a ser conseguido. Para a Pipetman e Microman, escolha

a balança de acordo com o volume nominal da pipeta - volume máximo - (veja tabela). Para

a Distriman, os volumes que serão testados são específicos para cada modelo de Distritip,

de acordo com a alíquota de volume específica (escolha a legibilidade de acordo com o

volume da alíquota).

VOLUME NOMINAL DISPLAY (mg) LEGIBILIDADE DA BALANÇA (g)

< 100µL 0,001 10-6

100µL a 1000µL 0,01 10-5

> 1000µL 0,1 10-4

Termômetro

Use um termômetro calibrado para medir a temperatura da água no começo e no final de

cada série de teste. Use um termômetro com uma incerteza de medição de até 0.1ºC.

Recipientes

Recipientes que serão utilizados durante o procedimento:

- Recipiente de origem

É o recipiente que contém a água que será utilizada para a realização das medidas (o

volume deste recipiente deve ser suficiente para a execução de TODAS as medidas).

- Recipiente de pesagem

É o recipiente que será utilizado para a realização da medida (é o que será colocado

no prato de pesagem da balança).

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- Recipiente de descarte

É um terceiro recipiente que recolherá as alíquotas que não serão pesadas.

Containers especiais são utilizados como recipiente para a dispensa da água durante a

pesagem. O controle da evaporação durante o teste gravimétrico é essencial. Para

minimizar a evaporação, a Gilson utiliza recipientes cilíndricos e com tampa, feitos de

plástico não poroso.

A Gilson fornece um kit para pesagem (ref. F144700) que contém 4 recipientes para

pesagem de tamanhos diferentes (tipos A, B, C e D), 3 recipientes de origem (recipiente

que contém a água que será utilizada para a realização das medidas, e que deve ser

suficiente para a execução de todas as medidas), filtros para limpeza/ secagem dos

recipientes e uma pinça. Componentes individuais do kit também estão disponíveis como

peças de reposição.

Quando os volumes a serem testados são menores do que 200µL, a Gilson utiliza

recipientes para pesagem com tampas (tipo A e B, mostrados na página seguinte).

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• recipiente tipo A e sua tampa (ambos têm que ser manipulados com a pinça) deve ser

utilizado para volumes de até 20 µL (requer balança de 6 casas).

• recipiente tipo B e sua tampa devem ser utilizados para volumes entre 21 a 200µL

(requer balança de 5 casas). Este recipiente possui o´rings da Pipetman P5000

acoplados para evitar aquecimento devido a manipulação (evitando-se contato direto da

mão do operador com o recipiente evita-se aquecimento da água).

• recipiente tipo C (50 mm x 35 mm) deve ser utilizado com volumes entre 201 a 5000µL

(requer balança de 4 casas).

• recipiente tipo D (70 mm x 50 mm) deve ser utilizado para volumes acima de 5000µL

(requer balança de 4 casas).

Tipo A

Tipo B

Tipo C

Tipo D

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Água

No teste, utiliza-se água destilada ou deionizada e degaseificada, conforme a Norma ISO

3696, à temperatura ambiente. Para evitar flutuações na temperatura da água, use um

recipiente de origem grande (por exemplo, o recipiente tipo D, mostrado anteriormente). O

recipiente de origem deve conter água suficiente para a realização de todas as medidas.

VERIFICAÇÃO DA PERFORMANCE A verificação da performance analisa tanto a exatidão (erro sistemático) como a precisão

(erro aleatório). Condições, procedimentos e qualificações previamente descritas neste

documento devem ser implantados para garantir a validade dos resultados dos testes.

Após rinsar a ponteira, faça 10 pesagens individuais para cada volume selecionado. Para as

pipetas de volume variável três volumes diferentes devem ser selecionados de acordo com a

faixa de volume do modelo que está sendo avaliado (veja a próxima tabela). Estes volumes

devem ser o volume nominal (máximo), 50% do volume nominal (volume intermediário) e

o volume mínimo da faixa de volume do modelo. Para as pipetas de volume fixo (Pipetman

F) utiliza-se apenas o volume nominal.

1. Ajuste na pipeta o volume do teste (este deve ser mantido durante todo o

procedimento).

2. Estime a taxa de evaporação (para volumes pequenos, menores do que 20µl).

3. Faça o teste de verificação: registre as massas no Relatório de Verificação de

Performance.

4. Faça os cálculos: registre os resultados no Relatório de Verificação de Performance.

5. Compare os resultados com as especificações de exatidão e precisão que estão

relacionadas no manual de operação da pipeta.

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Volume Mínimo (µL) Volume Intermediário (µL) Volume Máximo (µL)

PIPETMAN

P2, U2 0,5 1 2

P10, U10 1 5 10

P20, U20 2 10 20

P100, U100 20 50 100

P200, U200 50 100 200

P8x200 20 100 200

P1000, U1000 200 500 1000

P5000, U5000 1000 2500 5000

P10 ml, U10ml 1000 5000 10000

MICROMAN

M10 1 5 10

M25 3 12,5 25

M50 20 - 50

M100 10 50 100

M250 50 125 250

M1000 200 500 1000

DISTRIMAN

125µL 2 5 10

1250 µL 20 50 100

12,5 ml 200 500 1000

Estimando a taxa de evaporação (massa média evaporada por ciclo de pesagem)

Para volumes abaixo de 200 µL, a pesagem requer o uso de tampas nos recipientes para

pesagens. Para volumes abaixo de 20µl, além da tampa, é necessário o uso de pinça. O

objetivo é minimizar, controlar e quantificar a perda por evaporação durante o ciclo de

pesagem.

A evaporação pode ser estimada, realizando-se uma série de quatro simulações de

pesagens, onde se repete o ciclo de pesagem sem que haja dispensa de água no recipiente

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de pesagem. A diferença total atribuída à evaporação é calculada e dividida por 4, para se

obter uma média. A faixa é expressa em mg/ciclo (ou se for um único ciclo, deve ser

expresso em mg).

As taxas de evaporação geralmente estão entre 0,010mg e 0,025 mg por ciclo de pesagem.

Recalcule a taxa de evaporação a cada 4 horas ou sempre que as condições ambientais

forem alteradas (temperatura, pressão e umidade).

1. Adicione água ao recipiente para pesagem até que este esteja com 1/3 do seu volume

cheio.

2. Utilize a pinça para colocar a tampa no recipiente e colocá-lo no prato da balança.

3. Com a pipeta, aspire a alíquota do recipiente de origem.

4. Tare a balança e remova o recipiente para pesagem do prato da balança.

5. Use a pinça para removê-lo.

6. Dispense a alíquota no recipiente de descarte ou retorne-a para o recipiente de origem.

Não a dispense no recipiente para pesagem.

7. Utilize pinças para colocar a tampa no recipiente e colocá-lo no prato da balança.

8. Registre o resultado e1.

9. Repita as etapas de 3 a 8, três vezes para obter e2, e3 e e4.

10. Calcule a perda/ ciclo: e = (e1 + e2 + e3 + e4)/4 (mg).

11. A evaporação por ciclo e (mg) deve ser adicionada ao peso médio antes do cálculo do

volume médio.

Teste Gravimétrico

As técnicas de aspiração e dispensa estão descritas no manual de operação da pipeta que

está sendo testada. Embora vários métodos alternativos de pipetagem sejam possíveis,

sempre utilize o modo normal (modo direto, não utilizar o modo reverso). Para todas as

pipetas, evite segurar ou esquentar o porta-cone com a mão durante o teste.

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Para pipetas multi-canal, encaixe as ponteiras em todos os canais, mas teste um canal por

vez. E registre os resultados para cada canal.

1. Preparação

1.1 Coloque água do recipiente de origem no recipiente para pesagem a uma

profundidade de, no mínimo, 3 mm.

1.2 Meça e registre a temperatura da água do recipiente de origem (t1), a pressão do ar e

a umidade relativa da sala. Se o recipiente para pesagem possui tampa, coloque-a (usando

uma pinça).

1.3 Encaixe uma nova ponteira.

1.4 Selecione e ajuste o volume que será testado (este não deverá ser alterado durante o

teste).

1.5 Pré-rinse a ponteira, aspirando a alíquota do recipiente de origem e dispensando no

recipiente de descarte 5 vezes, para equilibrar a umidade do ar dentro da atmosfera da

pipeta.

1.6 Coloque o recipiente para pesagem com água no prato da balança e tare-a (m0= 0).

2. Ciclo do teste

Cada ciclo do teste deve demorar menos de 1 minuto. Entretanto, um ritmo constante

durante a operação de pesagem deve ser mantido (o ritmo do ciclo e entre os ciclos).

2.1 Encaixe uma nova ponteira na pipeta.

2.2 Pré-rinse a ponteira aspirando e dispensando no recipiente de descarte uma vez.

2.3 Aspire, como especificado no manual de operação da pipeta, o volume a ser testado

(consulte tabela página 12).

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2.4 Se o recipiente para pesagem possuir tampa, remova-a usando a pinça.

2.5 Dispense o volume testado no recipiente para pesagem e recoloque a tampa com o

auxílio da pinça.

2.6 Registre a massa m1 do volume testado.

2.7 Tare a balança.

3. Repita o teste descrito acima (do item 2.1 ao 2.7) até completar 10 medidas (m1 a

m10).

4. Após a última medida, verifique e registre a temperatura da água do recipiente de

origem (t2), a pressão atmosférica e a umidade relativa da sala.

CÁLCULOS

Fórmulas (Parte 1 de 2)

1. Cálculo da temperatura média

Calcule a temperatura média (t) da água

destilada (próximo a 21,5 ± 1,5°C)

t = (t1 + t2)/ 2

2. Cálculo da pressão média

Use a pressão barométrica média (B) e a temperatura média (t) para determinar o Fator-Z correspondente na tabela.

B = (B1 + B2)/ 2

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3. Cálculo do volume a partir da massa

Multiplique as massas (mg), depois das correções das perdas por evaporação (para volumes abaixo de 200 µL) pelo fator Z para obter os volumes (µL).

Vi= Z (mi + e )

Vi = volumes individuais (µL)

mi= massas individuais (mg)

e = taxa de evaporação (mg)

Z= fator Z (µL/ mg)

4. Cálculo do volume médio

Após calcular o volume individual das pesagens, calcule o volume médio (resultado expresso em µL).

Vi= Volumes individuais

V = volume médio

n= número de pesagens

nV =

1n

V∑ 1=i

i

Fórmulas (Parte 2 de 2)

5. Exatidão (Erro Sistemático)

Diferença entre o volume médio do teste e o volume ajustado na pipeta. Para pipetas de volume fixo, substitua Vs por Vo = volume nominal. A exatidão pode ser expressa em µL ou...

es = V - Vs

es = erro médio

V = volume médio

Vs = volume ajustado

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...como porcentagem: es = 100% (V - Vs)/Vs

6. Precisão (Erro aleatório) Dispersão dos volumes dispensados ao

redor da média dos volumes dispensados.

Também conhecida (de acordo com o

contexto) como desvio padrão,

reprodutibilidade ou repetibilidade.

Vi = volumes individuais

V = volume médio (calculado como no item anterior)

n = número de medidas

DP = desvio padrão

Como porcentagem, também conhecido como coeficiente de variação (CV).

CV = (DP/ V)x 100%

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Cálculos: fator Z

Z = fator de conversão (µL/ mg), t (°C) = média da temperatura* , B = pressão atmosférica (hPa)

* esta média é obtida a partir do valor da temperatura da água do recipiente de origem medida no início do teste (t1)e da temperatura da água do recipiente de origem medida ao final do teste (t2). Consulte página 15 item "Cálculo da temperatura média".

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RELATÓRIO DO PROCEDIMENTO DE VERIFICAÇÃO

Identificação da pipeta Modelo Número de série Ponteiras utilizadas no teste

Identificação do técnico Empresa Nome Tel/Email

Técnico Nome Tel/Email

Condições Data/ Hora do teste Localização

Temperatura (°C) Umidade (%) Pressão (hPa)

Balança Modelo Número de série Sensitividade

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Resultados do teste De acordo com o documento "Procedimento para Verificação da Performance das Pipetas Gilson".

mi (mg) Vi (µL) mi (mg) Vi (µL) mi (mg) Vi (µL)

Pesagem 1

Pesagem 2

Pesagem 3

Pesagem 4

Pesagem 5

Pesagem 6

Pesagem 7

Pesagem 8

Pesagem 9

Pesagem 10

Volume médio (V, µL)

Exatidão (V - Vo)

Exatidão (%)

Precisão (DP)

Precisão (CV, %)

COMPARADO COM AS ESPECIFICAÇÕES: APROVADA

REPROVADA

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TABELAS DE ESPECIFICAÇÕES GILSON

Pipetman Ultra

2

REF: LT80

U

U10 U20

2

U100

U200 U1000 U5000

l

U10 m

292B NOV/ 2001 Pag 21 / 26

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Pipetman F

Microman REF: LT802292B NOV/ 2001 Pag 23 / 26

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Distriman

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Laboratório de Serviços de Pipetas (LSP)

Um dos nossos laboratórios (sob orientação e supervisão da Gilson) é dedicado

exclusivamente às manutenções e calibrações das pipetas Gilson. Peças originais e pessoal

treinado na França garantem serviços de qualidade internacional. Cada pipeta recebida

passa por um processo de descontaminação, desmontagem, limpeza, troca de peças

danificadas, montagem e calibração. Todo o trabalho é feito de acordo com as Normas

Internacionais Gilson, em ambiente controlado e com instrumentos de medidas (balanças,

pesos padrão, termômetros, etc) calibrados e com certificados rastreavéis à Rede Brasileira

de Calibração (RBC). O Certificado de Conformidade, que é emitido ao final dos serviços,

garante que sua pipeta está operando dentro das rígidas especificações Gilson. Peças

originais (porta-cone, selo, o’ring, botão, etc) são disponíveis para que o usuário possa, ele

mesmo, realizar os procedimentos básicos de manutenção.

O envio das suas pipetas é muito fácil!!

Importante: Descontamine suas pipetas antes de envia-las

Se você está na CIDADE DE SÃO PAULO ou GRANDE SÃO PAULO, solicite a

retirada das suas pipetas via fax ou via e-mail:

Fax: (11) 2162-8081

E-mail: [email protected], aos cuidados do Laboratório de Serviços de

Pipetas.

Se você preferir, envie-nos sua pipeta via Sedex (lembre-se de reforçar a embalagem,

evitando danos durante o transporte), ao seguinte endereço:

Nova Analítica Ltda

Rua Assungui, 432 - Saúde

04131-000 - São Paulo - SP

Aos cuidados do Laboratório de Serviços de Pipetas

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Page 26: PROCEDIMENTO PARA VERIFICAÇÃO DA PERFORMANCE DAS PIPETAS ... · INTRODUÇÃO . Este documento descreve o método para verificação da performance das pipetas Gilson utilizando-se

Em outras localidades, envie-nos sua pipeta via Sedex para o mesmo endereço

mencionado acima ou contate um de nossos representantes, espalhados pelo Brasil.

Consulte-nos para maiores detalhes.

Orçamento Prévio

Assim que a pipeta é recebida em nosso laboratório, ela é inspecionada e um orçamento

prévio é enviado via fax ou e-mail ao cliente. Nenhuma pipeta será reparada ou

calibrada sem aprovação prévia do responsável. O orçamento é gratuito. Caso você não

aprove os serviços, não haverá outras despesas exceto o transporte de ida e volta

Rua Assugui, 432 04131-000 - São Paulo - SP Fone (0XX11) 2162 - 8080 Fax (0XX11) 2162 - 8081 Email: [email protected]

Rua da Tranquilidade, 38 21221-270 - Rio de Janeiro -RJ Fone (0XX21) 3351 - 6895 Fax (0XX21) 3351 - 4653 E-mail: [email protected]

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