Prof. Dr. Feresin - editoraopirus.com.br · lâmina de vidro, do preparado e lamínula; e penetra no canhão, atravessando antes a objetiva 4) Engatilhe a objetiva de menor aumento

O MUNDO MICROSCÓPICO

BIOLOGIA

Prof. Dr. Feresin

• MICROSCOPIA

• 1. O domínio do uso do microscópio.

• 2. O conjunto de técnicas que permitem a

investigação científica por meio do

microscópio.

Introdução e objetivos




• MICROSCÓPIO DE LUZ

Muitos dos seres vivos < Capacidade visual humana

Capacidade visual

(~ 0,1mm a 0,2 mm)


• MICROSCÓPIO DE LUZ

Principal finalidade:

- Permitir a observação individualizada de pontos que

estejam situados bem próximos uns dos outros

PODER DE RESOLUÇÃO

(aproximadamente 0,2 nm)


• Após a aula de hoje:

Identificar e manusear corretamente as peças do microscópio

de luz

Determinar o aumento fornecido pelos diferentes jogos:

objetiva – ocular

Entender adequadamente algumas preparações

Fazer escalas relativas aos campos observáveis

Fazer esquemas relativos às estruturas observadas


• Microscópio

Sistema óptico que transforma objeto pequeno em uma

imagem bastante ampliada

Século XV

- Primeiros microscópios simples (única lente)

- Utilizados inicialmente para

investigar o mundo dos insetos

- Dificuldade na produção de vidro puro

- Distorção de imagens

Generalidades

• 1590

Primeiro microscópio

- Hans Janssen e Zacharias

- Composto por uma objetiva de lente convexa e uma lente (de

luneta) côncava

Generalidades

Anton van Leeuwenhoek (1632-1723)

- Trabalhava em uma loja de tecidos

- Fazia experiências com vidro moído para produzir lentes

- Usava o microscópio para observar os fios e depois passou a

examinar a anatomia dos menores animais conhecidos

- Ele produziu microscópios tão eficientes que estabeleceu,

praticamente sozinho, o ramo da microbiologia

Generalidades


Generalidades


Generalidades


- Importância:

Convenceu a comunidade científica que a teoria da

geração espontânea estava incorreta.

Generalidades


- Importância:

• Glóbulos vermelhos

Generalidades


- Importância:

• Bactérias que habitam a boca e os intestinos dos

seres humanos

Generalidades


- Importância:

• Forma e locomoção do espermatozoide humano

Generalidades

Microscópio mais simples

- Uma simples lente de aumento

- Fortes defeitos de distorção

- Necessidade de mais uma lente

AUMENTO FINAL É

CONSEGUIDO POR

DOIS AUMENTOS

SUCESSIVOS

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz


- Objetos iluminados por cima

Objeto é formado por finos

cortes histológicos que são

iluminados “por trás”,

isto é, por transparência

Microscópio de Luz


- Objetos iluminados por cima

Objeto é formado por finos

cortes histológicos que são

iluminados “por trás”,

isto é, por transparência

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Considerações sobre aumentos

- A distância entre a ocular e objetiva é fixa

- Aumento é obtido pela troca das objetivas

Microscópio de Luz

Abertura numérica

- Refere-se à abertura do diafragma para a lente, em

termos do semiângulo de visão, que subentende o

objeto.

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Limite de resolução

- Depende dos seguintes fatores:

Comprimento de onda de

luz empregada

Abertura numérica

Índice de refração do meio

Microscópio de Luz

Profundidade de campo

- É a distância acima e abaixo do ponto focal do

objeto que ainda se pode mover sem se perceber

modificações de foco

Microscópio de Luz

Componentes

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Componentes

Componentes

Microscópio de Luz

Componentes

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Fixação do material

Importante para preservar a morfologia e a

composição química dos tecidos e das células

A escolha do FIXADOR adequado depende do

estudo que se deseja realizar

Ex:

- Fixadores ácidos (Núcleo)

- Acetona

- Formaldeído

- Glutaraldeído

Microscópio de Luz

Corte do material

Micrótomos: Corte em lâminas delgadas

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Coloração do material

Corantes: Básicos e Ácidos

Microscópio de Luz

Coloração do material

Corantes: Básicos e Ácidos

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Microscópio de Luz

Normas básicas

1) Nunca levante a platina do microscópio olhando pela ocular

2) Nunca toque com os dedos ou com os cílios na ocular

3) Nunca levante o microscópio da mesa segurando pelo canhão

4) Transporte o microscópio sempre em posição vertical

5) Nunca substitua uma objetiva por outra de maior aumento,

sem observar, por fora, se a objetiva trocada tocará na lâmina

6) Cuidado para não usar a objetiva de imersão pensando que é

outra

Microscópio de Luz

Normas básicas

7) Nunca deixe o tubo do microscópio sem a ocular

8) Não se retire do laboratório antes de engatilhar a objetiva de

pequeno aumento e abaixar a platina completamente, bem

como observar a limpeza da objetiva de imersão

9) Verifique se todas as peças estão em ordem, manipule-o com

delicadeza e conserve-o limpo

10) Caso encontre algum defeito no seu microscópio, não tente

consertá-lo. Chame o professor e mostre-lhe o defeito

constatado

Microscópio de Luz

Rotina com o microscópio

1) Levante a presilha e fixe a lâmina sobre a platina

2) Verifique se o diafragma está aberto

3) As variações da intensidade luminosa auxiliam no controle

da luz que atravessará o diafragma e o orifício da platina, da

lâmina de vidro, do preparado e lamínula; e penetra no

canhão, atravessando antes a objetiva

4) Engatilhe a objetiva de menor aumento na posição de

observação

5) Levante a platina com o dispositivo macrométrico

Microscópio de Luz


6) Caso use óculos, guarde-os, pois o microscópio corrige o seu

efeito de visão

7) Utilizando-se do dispositivo micrométrico, obtenha a maior

nitidez

8) Repita o procedimento com outros aumentos

9) Para trocar as objetivas, basta girar o revólver

10) Para calcular a ampliação, basta multiplicar os números

gravados nas lentes: Ocular e Objetivas

Microscópio de Luz


Microscópio de Luz


Microscópio de Luz

Microscópio de contraste de fase

Espécimes biológicos que não tenham sido corados, em geral,

se apresentam transparentes

O microscópio de contraste de fase é um instrumento que

converte diferenças do índice de refração que não podem ser

vistas, em diferenças de intensidade que se tornem visíveis

As ondas luminosas que atravessam núcleos, mitocôndrias e

inclusões celulares emergirão em tempos diferentes e em

fases diversas, de um elemento em relação ao outro

Outros tipos de microscópio

Microscópio de contraste de fase


Microscópio de interferência

Princípios semelhantes aos do microscópio de fase

Permite determinar as mudanças no índice de refração

Microscópio de Nomarski

Ideal para visualizar espécies não coloridas ou transparentes

Permite obter informações sobre a densidade óptica exata das

amostras em estudo






Microscópio de fundo escuro

A luz se dispersa ao nível dos limites entre os diferentes

componentes celulares, sempre que tenham índices de

refração diferentes

A visualização ao redor do objetivo fica completamente

escura, e o contraste criado é de um espécime brilhante

localizado em um fundo escuro

Ideal para revelar contornos, bordas, limites e gradientes de

índice refrativo


Microscópio de fundo escuro


Microscópio de polarização

É formado por dois prismas (ou dois discos polaroides), que

recebem o nome de polarizador

Baseia-se no comportamento de certos componentes celulares

e teciduais quando são observados com luz polarizada


Microscópio eletrônico de transmissão (MET)

Possui sistemas de iluminação e vácuo que produz feixes de

elétrons de alta energia (energia cinética)

Incidência sobre uma amostra de tecido ultrafina

Fornece imagens planas, imensamente ampliadas, possuindo a

capacidade de aumento útil de até um milhão de vezes e assim

permitindo a visualização de moléculas orgânicas, como o

DNA, RNA, algumas proteínas, etc.



O sistema de vácuo remove o ar e outras moléculas de gás da

coluna do microscópio, propiciando a formação de uma

imagem com excelente qualidade e contraste

A imagem é projetada em um anteparo fluorescente, que

poderá ser redirecionada para uma chapa fotográfica para

registro, ou ainda a imagem pode ser captada por um sistema

computadorizado de captação de imagens

Poder de resolução maior que o do microscópio de luz








Microscópio eletrônico de varredura (MEV)

Os feixes de elétrons atuam sobre a superfície do material

É um aparelho mais simples, menor e mais barato

Podem ser obtidas imagens topográficas tridimensionais

A amostra é muitas vezes recoberta com metais pesados

(como urânio e chumbo) para aumentar o poder dispersante

das estruturas e com isso a resolução










Esporos e hifas do fungo Epicoccum nigrum usado com

agente de controle biológico de patógenos de plantas



Raiz de orquídea epífita (Cyrtopodium saintlegerianum)

com peloton de fungo micorrízico rizoctonioide



Raiz de orquídea rupícula (Epidendrum nocturnum) com

peloton de fungo micorrízico rizoctonioide



Hifas de Epulorhiza sp. micorrízico da orquídea

terrícola Cyrtopodium vernum

Até a próxima aula...

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