PARA LA IDENTIFICACIN DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCIN

PRUEBAS

RPIDAS PRUEBAS BIOQUIMICAS

Las pruebas bioqumicas se basan en la determinacin de la presencia o ausencia de diferentes enzimas codificadas por el material gentico del cromosoma bacteriano.

Las pruebas bioqumicas tambin evalan: la capacidad de reducir ciertos iones (ferroso afrrico), la presencia o ausencia de flagelos (prueba de movilidad), la produccin o no de

hemolisinas, el requerimiento o no de algunos factores especiales (protenas sricas), laproduccin o no de algunas toxinas con capacidad virulenta (toxina diftrica, toxina

botulnica, etc).Importancia mdica

Cuando se han aislado las bacterias causantes de un proceso infeccioso, stas deben seridentificadas hasta llegar a GENERO Y ESPECIE, para lograrlo se debe evaluar su actividad bioqumica o metablica. Del microorganismo aislado depender el tipo de tratamiento que debe ser administrado al paciente

Catalasa

Citocromooxidasa

Fundamento:

Detecta la presencia de la enzima catalasa Procedimiento: En un portaobjetos colocar sobre una colonia unas gotas de H202 3 %. Interpretacin Liberacin de burbujas rpida y sostenida indica la produccin de oxgeno molecular = prueba (+)

Fundamento: El sistema citocromooxidasa, se halla en microorganismo aerobios, microaerfilos y anaerobios facultativos. Procedimiento: Hacer una suspensin del microorganismo con solucin fisiolgica (inculo) en un tubo de vidrio, agregar un disco (disco comercial de papel impregnado de tetrametil-para-difenilamina) se agita y antes de los 2 minutos se debe leer. Interpretacin: Un cambio de color del disco a rosado o violeta = prueba (+). Si no hay cambio de color el microorganismo es oxidasa negativo.

AGAR

HIERRO TRIPLE AZCAR

(TSI) AGAR LISINA-HIERRO (LIA) AGAR MOVILIDAD INDOL ORNITINA (MIO) AGAR CITRATO DE SIMMONS AGAR UREA AGAR O/F

ComposicinExtracto de carne, extracto de levadura, peptona, proteasa, lactosa, dextrosa, cloruro de sodio, tiosulfato de sodio, agar

IndicadorRojo de fenol Acido: amarillo Alcalino: rojo Medio no inoculado: naranja-rojizo (ph- 7.4)

FundamentoDetermina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporado en un medio de crecimiento bsico de posible cido sulfhdrico.

Consistencia Inoculacin

del medio

solido en pico de flauta Picadura y estra en pico de flauta

Condiciones

de incubacin

Tiempo: 18 -24 horas Temperatura: 35- 37 C

Posibles1.K/A

lecturas

pico rojo-alcalino, fondo amarillo-cido 2.A/A pico amarillo-cido, fondo amarillo-cido 3.K/K pico rojo.alcalino, fondo rojo.alcalino Pueden producir solo gas y gas con produccin de H2S

Interpretacin1.(K/K)

No fermentacion de hidratos de carbono 2.(K/A) Glucosa fermentada, lactosa no fermentada 3.(K/A + H2S) Glucosa fermentada, lactosa no fermentada produccin de cido sulfhdrico. 4.(A/A) Glucosa y lactosa fermentadas

ComposicinPeptona, extracto de carne, piridoxal, L-lisina, citrato de amonio, tiosulfato de sodio, glucosa, agua destilada agar.

IndicadorPrpura de bromocresol cido: amarillo Alcalino: color prpura Medio no inoculado: prpura intenso (pH= 6)

FundamentoMide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar la lisina para formar una amina, con la siguiente alcalinilidad

ConsistenciaSlido en pico de flauta

InoculacinPor picadura, estria y picadura

CondicionesTemperatura: 35-37CTiempo: 18-24 horas

de inoculacin

Posibles1.

lecturas

K/K - pico prpuraalcalino , fondo prpura-alcalino

2.

K/A - pico prpura-alcalino, fondo amarillo-cido

Pueden producir gas y cido sulfhdrico

Interpretacin1.

(K/K) desaminacin oxidativa/descaboxilacin

2.3.

(K/A) no desaminacinProduccin de H2S- ennegrecimiento del medio

4.

Produccin de gas burbujas o medio desplazado

ComposicinExtracto de levadura, peptona, L-ornitina.dextrosa,agar agua

IndicadorPrpura de bromocresol cido: amarillo Alcalino:prpura Medio no inoculado: prpura intenso (ph=6)

FundamentoEl medio MIO se utiliza para la identificacin de enterobacterias sobre la base de movilidad, la produccin de ornitina y de indol DESCARBOXILACIN DE ORNITINA Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar la ornitina para formar una amina, con la consiguiente alcalinidad. PRUEBA DE INDOL El triptfano es un aminocido que puede ser oxidado por ciertas bacteria para formar tres metabolitos prinipales: indol, escatol e indolactico. MOVILIDAD Determina si un organismo es mvil o inmvl.las bacterias tienen movilidadpor medio de sus flagelos que se encuentran principalmente entre los bacilos

ConsistenciaSemislido en forma vertical

InoculacinPor picadura en forma vertical

CondicionesTiempo: 24-48 horas

de inoculacin

Temperatura: 35-37 C

InterpretacinOrnitina descarboxilasa Positivo:color prpura del medio Negativo: color amarillo en el fondo del tubo Movilidad:

Positiva si existe turbuedad en el medioNegativa: crecimiento bacteriano acentuado siguendo la linea de siembra

Prueba del indol-Reactivo de KovacsPositivo: anillo rojo en la superficie del medio

Negativo: no se produce color o color naranja en la superficie del medio

ComposicinCitrato de sodio, glucosa, extracto de levadura, monoclorhidrato de cistena, citrato frrico de amonio, cloruro de sodio tiosulfato de sodio rojo de fenol agar agua destilada

IndicadorAzul de bromotimol cido: amarillo Alcalino: azul de Prusia intenso

Medio sin inocular: verde (pH=6.9)

FundamentoDetermina la capacidad de un microorganismo de emplearel citrato como nica fuente de carbono en ausencia de fermentacin de azcares o de produccin de cido lctico

ConsistenciaSlido en pico de flauta

InoculacinEstra en pico

CondicionesTiempo: 24-48 horasTemperatura: 35C

de inoculacin

InterpretacinPrueba positiva: crecimiento con un color azul intenso en pico de flauta

Prueba negativa: no se observa crecimiento ni cambio de color

Composicin

Peptona, cloruro de sodio, fosfato monopotsico, glucosa, urea, agar, agua destilada

IndicadorRojo de fenol cido: amarillo Alcalino: Rojo rosado Medio no inoculado: amarillo (pH=8.4)

FundamentoDetermina la capacidad de un microorganismo de desdoblar la urea formando dos molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa produciendo un cambio de color rojo en el medio

ConsistenciaSlodo en pico de flauta

InoculacinEstra en pico de flauta

CondicionesTiempo: 18-24 horasTemperatura: 35-37C

de inoculacin

InterpretacinPositivo: rojo rosado intenso en pico de flauta Negativo: amarillo

ComposicinPeptona, cloruro de sodio, fosfato de potasio, hidratos de carbono (glucosa lactosa, sacarosa, maltosa), agar agua destilada

Indicador Azul

de bromotimol

cido: amarilloAlcalino: azul Prusia intenso

Medio no inoculado: verde (pH= 7.1)

FundamentoDetermina el metabolismos oxidativo o fermentativo de un hidrato de carbono

ConsistenciaSemislido

InoculacinPicadura

CondicionesTiempo: 18-24 horas

de inoculacin

Temperatura: 35-37 C

InterpretacinParte superior amarilla: oxidativo Todo el medio amarillo: fermentativo Sin cambio en el medio: no fermentador no oxidativo