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7/26/2019 Pruebas Bioqumicas de Gram Positivos y Negativos
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PRUEBAS DE
IDENTIFICACIN DECOCOS GRAMPOSITIVOSY GRAMNEGATIVOS
Yessenia UchupailleJos Ugalde
7/26/2019 Pruebas Bioqumicas de Gram Positivos y Negativos
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Introduccin
Para identifcar microorganismos implicados en procesosclnicos, se necesitan tcnicas que permitan reconocer elaente responsable de infecciones y enfermedades de losseres humanos.
a identifcaci!n bacteriana se "asaen las caracter#sticas$"ser%a"&es de las bacterias! '$r($&$#a) *r$*iedades"i$+,#'icas - 'eta"!&icas - s,s reacci$nes (rente a&'edi$ de c,&ti%$.
"stas tcnicas permiten el ais&a'ient$ de&'icr$$ranis'$, su identi#cacin, determina la sensibilidad
a los antimicrobianos, (aci&itan &a di(erenciaci!n."s esencial la correctae&ecci!n de& 'edi$ de creci'ient$ yde unas buenas c$ndici$nespara la incubacin.
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$b%eti&os
'onocer las tcnicas para cada pruebabioqumica.
(eterminar el fundamento de cadaprueba.
Interpretar los resultados.
)elacionar los resultados con la clnica delpaciente.
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Justi#cacin
C$n$cer &as*r,e"as
"i$+,#'icas esde gran
importanciapara as$ciaralas "acterias
c$n &$s
*r$ces$sin(ecci$s$s enel hombre.
as pruebasbioqumicasindican e&ner$ -
es*ecie de &a"acteria
aislada.
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ENTIFICACIN DE UNA BACTERIA
M$r($&$#a'acr$sc!*icade &a c$&$nia
Descri*ci!nde
re+,eri'ient$s
at'$s(ric$s-
n,trici$na&es
M$r($&$#aMicr$sc!*ica
Pr,e"as"i$+,#'icas
A-,darn$s de&aar de
MacC$n.e-
A-,darn$s de&a in($r'aci!n
e/istente
Pr,e"as
es*ec#fcas0
Gra' neati%$s* +erealia la prueba dela O/idasa
Gra' *$siti%$s* +erealia la prueba dela cata&asa
-ene#cios de un proceso*
)educcin decostoshorro de tiempo
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1AS PRUEBAS B2SICASDE IDENTIFICACINPARACOCOS GRAM
POSITIVOS
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'/+
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+taphylococcus producencatalasa que es una enimaque*
$b%eti&o
(iferencia +taphylococcus012 de los Estre*t$c$c$s
032
4undamento
"l desprendimiento de",r",3asprocedentes del$/#en$indica que laprueba es *$siti%a0
565$5$51565$.
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7ateriales
'ulti&o con8
positi&os09:35; h2
sa de
siembra8otero
Per.
Portaob%etos
/ubo de"nsayo
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Procedimiento
"n elPortaob%etoscolocar con elgotero 9 gota
de 65$5.
/omar lamuestra delculti&o y
emulsionar con
el 65$5.
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Interpretacin
+i se realia en c,&ti%$o t,"$ deensa-$ con el inoculo colocardirectamente el 4 '& 56O6 a& 7 80
+i la colonia se encuentra en agarsangre, aseg?rese de n$ t$car e&'edi$0
"rroral usar asas de 'eta&.
-urbu%as o efer&escencia
@o hay cambio
1 "sta#lococos
3 "streptococos
O9O
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'$8U+
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$b%eti&o
(iferencia al Staphylococcusaureus :;< de esta#lococos
Staphylococcus epidermidis ysaprofticum:= U'I,cefalosporinas, &ancomicina,trimetoprim sulfato @unca se asla en la
circulacin sangunea.
Pri'er$s cas$s en 1atin$a'ricafueron reportados por Uruguay en elao 6@@7
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@$$-I$'I@
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4undamentoUna cepa de +taphylococcus coagulasa negati&o, sesiembra en plateado para realiar antibiograma pordifusin, se coloca un disco de @o&obiocina, se
incuba a =Eo ' durante 5; horas.
+i presenta halo de inhibicin es sensible0+taphylococcus epidermidis2
+i hay resistencia 0+taphylococcus sapro#ticum2.
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7ateriales
'ulti&o conesta#lococos coagulasa
K.
/ubo deensayo. 6isopos.
gar. +angre.(isco de
@o&obiocina
.
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Procedimiento
'olocar elinculo en
tubo deensayo.
+embrar lacoloniausando elhisopo en
agarsangre.
'olocar eldisco de
@o&obiocina.
Incubar a=EF' por
5;h.
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Interpretacin
6alo de inhibicin L 9Mmm
6alo N o O a 9Mmm
+ensible
+. epidermidisotros coagulasa 3
)esistente
Staphylococcussaproticum
+ensible +epidermidis yotros
cuagulasa 3
"s
resistenteStaphylococ
cussaproticum
.
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Stre*t$c$cc,s *-$enes essensi"&e a ba%asconcentraciones deBacitracina 0discos D,D;U2,los $tr$s grupos son
resistentes0
$b%eti&o
+eparar el Streptococcuspyogenes de los demAsestreptococos beta hemolticos:Streptococcusagalactiae)
4undamento
-'I/)'I@
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Materia&es9. 'ulti&o puro
deestreptococos
-3hemolticos aidenti#car.
5. /ubo de
ensayo
=. sas desiembra06isopo
saturado consuspensinmicrobiana2.
=. Placa garsangre.
;. (isco debacitracina de
D.D; U
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'olocar elinculo en
tubo deensayo
'on unasa
esteriliada, sembraren estrasdos o tres
coloniassospechos
aspro&enientes de unculti&o
puro deuna placade agarsangre .
'olocar un
disco debacitracin
a en elprimer
cuadrante.
Incubar la
placadurante95 a 5;horas a=CF' en
aerobiosis
"&aluar la
presenciade halo deinhibicinalrededordel disco.
Pr$ces$
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Interpretacin
'ualquier halo deinhibicin alrededordel disco.
usencia de 6alo deinhibicin.
+ensible Streptococcuspyogenes
)esistente
S. Agalactiae
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OPTOUINA
os Ne,'$c$c$s sonsensi"&es a la optoquina y losE0 %iridans $ a&(a e'$tic$sson resistentesa la optoquina
$b%eti&o
4undamento
(iferencia al E0 ne,'$niae:Ne,'$c$c$< de los E0%iridans $ E0 a&(a e'$tic$s0
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7ateriales
C,&ti%$ c$nestre*t$c$c$
s
Disc$s dec&$ridrat$de
eti&idr$c,*reina
$*t$+,ina
Aar M,e&&er5int$n $
ti$&ic$&at$
Asas desie'"ra
T,"$ deensa-$ Sa&es "i&iares
Inc,"ad$ra
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Procedimiento
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Interpretacin
6alo L 9;mm
6alo :mm
+ensible +. @eumoniae
)esistente
S. Viridans
6alo G K 9= mm Prueba de disolucin de sales biliares
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+"+ -II)"+
a "i&is &isa c$n ra*ide lascolonias de neumococos porquedisminuyen la tensinsuper#cial entre la membrana
de la clula bacteriana y elmedio de culti&o.
$b%eti&o
4undamento
(iferencia al E0 ne,'$niae:Ne,'$c$c$< de los E0%iridans $ E0 a&(a e'$tic$s0
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Procedimiento"
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Interpretacin
/ransparente, isis,es soluble
/urbide de7c4arland. @o hay
lisis o no es soluble
1 S. Pneumoniae
3"s cualquier otro Qhemoltico
o S.viridans.
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"ntoncesB.
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@eumona
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@eumonaFact$res *resdis*$nentes>
Infecciones res*irat$rias%ira&es, alcoholismo, diabetesmellitus, enfermedad crnicarenal, cAncer.
Trans'isi!n> +ecreciones respiratoria
os ne,'$c$c$s semultiplican en los a&%$&$s y*r$d,cen ,n ,id$ ser$s$que fa&orece el crecimiento dela bacteria.De(ensas> polimorfonuclearesy anticuerpos anticapsulares
"scalofros 4iebre alta /os con
presencia deesputosanguinolento
(olor de pecho
S#nt$'as>
Rpocas llu&iosas yh?medas.
E*ide'i$&$#a> @ios
'en$res de aH$s yad,&t$s 'a-$res a
Ec,ad$r 6@44> *ri'era ca,sade ',erte enera& y 5F ennios.
Tasa de '$r"i&idad>8uayas con el 5D,=>Pichincha el 9:,G>A,a- J)?8para el resto de pro&incias este&alor estA por deba%o del C,D>.
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1AS PRUEBAS B2SICASDE IDENTIFICACIN
PARACOCOS GRAM
NEGATIVOS
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4undamento"nima citocromo c3o
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Utilidad
+olo paraaerobios,aerobios
facultati&os y
microaero#los
Identi#ca@eisserias sono
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7ateriales)eacti&o de
So&acs
'ulti&o de 5;horas del
microorganismo.
Papel de #ltrode =
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Proceso Indirecto con papel #ltro
"
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"n caso de que el reacti&o estelio#liado en el papel #ltro
6umedecer el papel.
4rotar con la cepa usando el asa. @o usar asas de nichrome porriesgos de obtener resultados falsos positi&os pro&enientes delmetal reducido.
$bser&ar cambio de color en 9D seg.
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Interpretacin
'olor *Kr*,raen 9D segundos.
@o se producecambio decoloracin.
1
Pse,d$'$nasM$ra/e&&aVi"ri$Aer$'$naNeisserias
3 "nterobacteria
'olor *Kr*,raentre9D3MD segundos.
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8onorrea
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8onorrea"s una ina'aci!n a,dade& e*ite&i$ transici$na& de
&a ,retra, el cuello uterino, elrecto, la faringe y lacon%unti&a ocular.a g$n$c$ce'ia diseminada0sangre2 puede ser gra&e,&arios das a 5 semanas
despus de la infeccin degonorrea primaria.
Ma-$ren los drogadictos,migrantes, pobres, personasque tienen &arias pare%asse
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V X
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")7"@/'IV@ (" $+ WX')"+
a identifcaci!n de lasdistintas especies sedeterminarA por la capacidadde fermentar ademAs otroscarbohidratos.
+i (er'enta car"$idrat$s*r$d,cen Lcid$, el p6 serAmenor a M,: y cambiarA elcolor! pero si no fermenta el
p6 estarA igual o aumentarA.
$b%eti&o
(eterminar si la bacteria puedeutiliar ese car"$idrat$ enes*ec#fc$0
4undamento
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Bater#a deaKcares en ca&d$
de c,&ti%$ c$n ,nindicad$r :r$3$ de(en$& &,c$sa)'a&t$sa) &act$sa)
etc
T,"$ de D,ra'C,&ti%$ *,r$ deNeissserias a
identifcar0
Asas de sie'"ra:5is$*$ sat,rad$c$n s,s*ensi!n
'icr$"iana
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Interpretacin
4ermenta?nicamente laglucosa4ermenta sologlucosa y maltosa
es Neisseriagonorreae
es Neisseriameningitidis
4ermenta glucosa ylactosa
es
"l color amarillo indica acide ysigni#ca fermentacin del a?car.
Neisseria lactamica
'olor original naran%ao ro%o la fermentacines negati&a 0p6 se
qued igual2.
posible
N. #atarralis
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+/$
as partculas de lAte e
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"nfermedades con +/$ ele&ado.Farinitis
estre*t$c!cica* mAs
com?n, sntomas son#ebre, dolor abdominal einamacin de las
amgdalas.
End$carditis"acteriana. Infeccin delas paredes internas del
coran.
G&$'er,&$ne(ritis0Infeccin del rin por
comple%os inmunesdepositados, presenta
proteinas y sangre en laorina, y reduccin del
#ltrado del rin.
Fie"re re,'Ltica>"nfermedad inamatoriaautoinmune que afecta a
las articulaciones y alcoran.
Escar&atina>
"nfermedad infecciosa,afecta sobre todo a nios.
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C$ntr$& ;> +uero humano, con una concentracinde +$ L5DD U[ml..
C$ntr$& => +uero animal con +$ normal.1Lte/> +uspensin de partculas de lAte< cubiertascon +$.
Reacti%$s>
Pr$cedi'ient$>
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Interpretacin
Infeccin reciente
Infeccin noreciente
1
'oncentracin de
+$ igual o superiora 5DD UI[m
C$ntr$& de Ca&idadSensi"i&idaddian!stica> G:>.Es*ecifcidaddian!stica> GE>.
3 @o nos indica hace quetiempo estu&o en contacto.
3 @o informacin su#cienteacerca del estado actual de la
enfermedad.3(ebe considerarse al mismotiempo los datos clnicos delpaciente.
imitaciones del mtodo*
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"ntoncesB
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PACIENTE.
.
6aca 4 das presentaba procesocatarral, habiendo recibido 48
horas
antes del ingreso una dosis de
ceftriaxona.
Nia de ! ao de edad.
Cuadro de fiebre de
"#$C % &'(itos
E)P*+ACI+N E -IT+IA C)
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E)P*+ACI+N E -IT+IA C)
Pes$ ?07@@
Ta&&a EC cmTe'*erat,ra =G F'TA :C[;C mm6gEn &ae/*&$raci!nne,r$&!ica
Inamacin de lasmeninges
Antecedentes(a'i&iares
+in antecedentesfamiliares de inters
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Estudios5e'$&$"ina ?) d&5e'at$crit$ 5G,;>
1e,c!cit$s=ne,tr!f&$s=ca-ad$s=&in($cit$s='$n$cit$s
59.;DD[mm=E;>95>95>5>
P&a+,etas ;=E.DDD[mm=VSG 99C mmPCR GG,C mg[1#+,id$ ce(a&$rra+,#de$ 5.MDD clulas[mm= 0P7@*
:C>2.G&,c$sa G= mg[dl
A&"K'ina 5E mg[dl.
Tinci!n de Gra'> 'ocos 8ram positi&os.C,&ti%$ 1CR> +treptococcus pneumoniaeC,&ti%$ gar +angreCata&asa @egati&oO*t$+,ina +ensible
Tinci!n de Gra'> C$c$s Gra' *$siti%$s0C,&ti%$ 1CR> +treptococcus pneumoniaeC,&ti%$ gar +angreCata&asa @egati&oO*t$+,ina +ensible
)"+U/($+* +e aislaron neumococos.
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E/+*0CI+N1
Trata(iento con1
2 Cefotaxi(a 355
(g67g6da
2 9exa(etasona 35,:(g67g6da
Cada : horas.
48 hr. despu;s reali
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Al > da la paciente
continuaba febril, con (a%or
deterioro clnico % en el *C
su citologa (ostraba una
persistencia de cocos =ra(positi&os por lo @ue se
procedi' a reali
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9os se(anas (s tarde la paciente
estaba clnica(ente curada,
con un *C nor(al.
A los : (eses dee&oluci'n la nia
est asinto(tica % el
electroencefalogra(a
es nor(al.
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C+NC*0I+N1
*a asociaci'n de &anco(icina % rifa(picina es
una opci'n &lida para el trata(iento de las
(eningitis por neu(ococos resistentes a
cefalosporinas de tercera generaci'n.
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)"+U7"@
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