Upload
haduwig-georgen
View
106
Download
3
Embed Size (px)
Citation preview
Pseudomonaden und Pseudomonaden und AeromonadenAeromonaden
Shahla SoltanmohammadlouShahla Soltanmohammadlou
und Elisabeth Kuhnertund Elisabeth Kuhnert
PseudomonadenPseudomonaden
Familie PseudomonaceaeFamilie Pseudomonaceae gram negative Stäbchengram negative Stäbchen polar begeißeltpolar begeißelt strikt aerobstrikt aerob pH: bis 5pH: bis 5 Temp. 0°C- 43°CTemp. 0°C- 43°C Über 60°C letal!Über 60°C letal! keine Sporen keine Sporen Pyocyanin, Pyorubin,Pyocyanin, Pyorubin, FluoresceinFluorescein
Abb.: Farbstoffbildung von Pseudomaden http://www.lg1.ch/cpg/displayimage.php?album=12&pos=0
Abb.: Mikroskopie von Pseudomonas http://www.lg1.ch/cpg/displayimage.php?album=12&pos=0
PseudomonadenPseudomonaden Feucht, BiologischeFeucht, Biologische Abwasserbehandlung.Abwasserbehandlung. Meereswasser(3,5%)Meereswasser(3,5%) LM: Fäulnis (schleimig)LM: Fäulnis (schleimig) Kühlhausflora(P.putida,Kühlhausflora(P.putida, P.fluorescens)P.fluorescens) SauerstoffeliminierteSauerstoffeliminierte BedingungenBedingungenFettsäurenFettsäurenVorläuferVorläufervon Acetatvon AcetatSubstrat Substrat methanogener MO!methanogener MO!
Abb.: Wasserspenderhttp://www.stern.de/wissenschaft/ernaehrung/551649.html?nv=nl_hp_rt
Abb.: kontaminiertes Fleischhttp://www.wdr.de/tv/service/kostprobe/inhalt/20040216/b_1.phtml
PseudomonadenPseudomonaden
Malachitgrün- Pepton- Bouillon Malachitgrün- Pepton- Bouillon (20h bei(20h bei 36°C)36°C)TrübungTrübungVerdacht aufVerdacht auf P.aeruginesaP.aeruginesa
Cetrimid- Agar Cetrimid- Agar (20h bei36°C)(20h bei36°C)Farbstofproduktion Farbstofproduktion ((blau- grunblau- grun)) spricht für P. aeruginesa spricht für P. aeruginesa
Chloroform: Pyocyanin in Chloroform und Wasser Chloroform: Pyocyanin in Chloroform und Wasser löslich, Fluorescein in Wasser aber nicht in Chloroform löslich, Fluorescein in Wasser aber nicht in Chloroform löslichlöslich
Cytochromoxidasereagenz(Cytochromoxidasereagenz(positivpositiv)) Gramfärbung(Gramfärbung(negativnegativ))
TiterbestimmungTiterbestimmung
ZL- KA: Bei der unverdünnten Wasserprobe waren ZL- KA: Bei der unverdünnten Wasserprobe waren Pseudomonaden nachzuweisen.Pseudomonaden nachzuweisen.
AL-KL: Bei der I.Verdünnungsstufe waren AL-KL: Bei der I.Verdünnungsstufe waren Pseudomonaden noch nachweisbar.Pseudomonaden noch nachweisbar.
BR- I: 100ml und10ml+5ml3XMPB(+)BR- I: 100ml und10ml+5ml3XMPB(+) ZL- PKA: Bei I.Verdünnungsstuffe waren noch ZL- PKA: Bei I.Verdünnungsstuffe waren noch
Pseudomonaden nachweisbar.Pseudomonaden nachweisbar.
MPN- VerfahrenMPN- Verfahren
0
50
100
150
200
250
300
ZL- KA ZL-PKA AL-KA BR- I
0
200
400
600
800
1000
1200
MPN
LL
UL
MembranfilterverfahrenMembranfilterverfahren
Cetrimidagar-NKS, Nachweis von Pseudomonas
0
5
10
15
20
25
30
35
40
1 2 3 4 5 6 7 8
Gruppennummer
Kei
me/
ml
BW (1 ml)
TW
Diagramm: Vergleich der Keimzahlen
AeromonasAeromonas
Charakterisierung und NachweisCharakterisierung und Nachweis
EinordnungEinordnung
Abteilung: Abteilung: ProteobacteriaProteobacteria Klasse: Klasse: DeltaproteobacteriaDeltaproteobacteria Ordnung:Ordnung: AeromonadalesAeromonadales Familie: Familie: AeromonadaceaeAeromonadaceae Gattung Gattung AeromonasAeromonas
MorphologieMorphologie
gramnegatives gramnegatives KurzstäbchenKurzstäbchen
monopolare, monotriche monopolare, monotriche BegeißelungBegeißelung
keine Sporenkeine Sporen
Abb. 2: REM-Bild von Aeromonas 2)
Abb. 1: Mikroskopisches Bild (1000x) 1)
KrankheitsbilderKrankheitsbilder
Abb. 3: verendeter Krebs 3)
Abb. 4: mit Aeromonas infizierter Fisch 4)
Abb. 5: Krankheitsbild von Aeromonas 2)
VorgehensweiseVorgehensweise
Beimpfung von Beimpfung von
Ampicillin-Dextrin-Medium zur AnreicherungAmpicillin-Dextrin-Medium zur Anreicherung bei Gelbfärbung bei Gelbfärbung Verdacht auf Aeromonas Verdacht auf Aeromonas verschiedene Verdünnungsstufen zur Prüfung verschiedene Verdünnungsstufen zur Prüfung
des Keimgehaltes von Gewässerndes Keimgehaltes von Gewässern
MPN-VerfahrenMPN-Verfahren
EL AL-KA BW BR ZL-PKA AL-PKA TS ZL-KA
MPN/ml 0,6 23 2,3 0,44 44 24 2,3 35000
LL 0,85 5 0,5 5 0,5 9100
UL 4,2 110 11 110 11 130000
Tab. 1: MPN-Werte
EL =Elbwasser AL-KA = Ablauf KläranlageBW = Badewasser BR = BrunnenwasserZL-PKA = Zulauf Pflanzenkläranlage AL-PKA = Ablauf Pflanzenkläranlage TS = Talsperrenwasser ZL-KA = Zulauf Kläranlafe
Graphische DarstellungGraphische Darstellung
MPN-Werte für Aeromonas
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
EL AL-KA BW BR ZL-PKA AL-PKA TS ZL-KA*e3
Wasserprobe
MP
N/m
l
Diagramm: MPN-Werte in Abhänigkeit der Wasserprobe
EinzelkolonienEinzelkolonien
Gelbfärbung der Gelbfärbung der BouillonBouillon
Überimpfung auf Überimpfung auf GSP-AgarGSP-Agar
gelbe Kolonien gelbe Kolonien BestätigungsreaktionenBestätigungsreaktionen
Abb. 6: mit Aeromonas bewachseneGSP-Agarplatte 5)
BestätigungstestsBestätigungstests
Lactoseverwertung Lactoseverwertung auf ENDO-Agar auf ENDO-Agar (positiv)(positiv)
Oxidasetest (positiv)Oxidasetest (positiv) Katalasetest (positiv)Katalasetest (positiv) Äsculinspaltung Äsculinspaltung
(positiv)(positiv) OF-Test (positiv)OF-Test (positiv) Voges-Proskauer Voges-Proskauer
(positiv)(positiv)Abb. 7: OF-Test mit Aeromonas 5)
API mit AeromonasAPI mit Aeromonas
Identifizierung von NichtenterobakteriaceenIdentifizierung von Nichtenterobakteriaceen Oxidase positiv Oxidase positiv api 20 NE api 20 NE Aeromonas hydrophila: 7577755Aeromonas hydrophila: 7577755
Abb. 8: ApiNE-Test 5)
LiteraturangabenLiteraturangaben1) http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/
cacnhomvikhuanchuyeu3.htm2) http://web.umr.edu/~microbio/BIO221_2004/ A_hydrophila.htm3) http://www.indian-ocean.org/bioinformatics/prawns/
GIF/DISEASE/Brownspo.htm4) http://www.practicalfishkeeping.co.uk/pfk/pages/
show_article.php?article_id=2635) eigene Fotos Dr. Münch (2007): „Praktikumsskript zum Wassermikrobiologischen
Praktikum Sommersemester“ Hans G. Schlegel (1992): „Allgemeine Mikrobiologie“, Georg Thieme Verlag,
Stuttgart