Upload
others
View
4
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u
mnohočetného myelomu
Minařík J., Ordeltová M., Ščudla V., Vytřasová, M., Bačovský J., Špidlová A.
III.interní klinika a Oddělení klinické imunologie LF Univerzity Palackého a FN Olomouc
Brno 12/2004
MNOHOČETNÝ MYELOM
MM – klonální, nekontrolovaná proliferace a akumulace neoplasticky transformovaných el. B-buněčné linie/plazmocytů (CD138+) provázená produkcí M-proteinu („paraproteinu“) prokazatelného v séru nebo v moči a projevy orgánové dysfunkce „CRABI“
CRABI
K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb
• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza
K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb
• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza
K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze
K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze
MM – KLONÁLNÍ „KOMPARTMENTY“ MYELOMOVÝCH BUNĚK
• ~1% (
K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb
• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza
K. DIFERENCIAČNÍ• dominující,největší• zástava proliferace/diferenciace ve zralé Pb
• ztráta My. bb- apoptóza- nekrobióza
K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze
K. KMENOVÝCH bb. (velmi malý)• „totipotentní“• samoobnova• doplňování K. expanze
MM – KLONÁLNÍ „KOMPARTMENTY“ MYELOMOVÝCH BUNĚK
• ~1% (
MM : PF - VNITŘNÍ VLASTNOSTI MY. bb.
IMUNOFENOTYP• CD 38+ 45+ 19+ 56+VLA 5-
• CD 20+ CD 10+
• CD 105+
• CD 27-
My. bb.
PROLIFERACE• PC PI/CD 138
•BrdUr LI
•Ki 67
• S - TK• růst in
vitro
KARYOTYP• FISH, CGH
• del 13q, 22q
• abnormní klon
• t (4;14), t(14;18)
• akt. telomerázy
CITLIVOST K TERAPII
• KR → NR
• ER
MORFOLOGIE• Plasmobl. typ
• NCA
APOPTÓZA• Annexin V
• 7 - AAD
• TUNEL
• INSTA
• Kaspázy
Cíle studie
vyšetření cytokinetických parametrů při
diagnóze MM
zhodnocení jejich prognostického významu
stanovení optimálních diskriminačních hodnot
pro prognózu nemoci
Charakteristika souborun-117; věk M 66let (44-85); M/Ž 0,92:1 (56/61)
Léčba: konvenční chemoterapie (VBMCP, MP, VAD)
Stádium (Durie- Salmon)
st.II-5043%
st.I-1513%st.III-52
44%
Imunochemické typy
IgM 11%
BJ 119%
NS 11%
IgA 2320% IgG 81
69%
A 87 (74%) B 30 (26%) Kappa 77 (66%) Lambda 39 (33%)
Propidium-jodidový indexPC-PI/CD 138
• PC-PI/CD138 – kinetický ukazatel proliferačního potenciálu• Vyjadřuje procentuální výskyt plazmatických buněk v S-fázi
buněčného cyklu
Metoda stanovení:1) Izolace buněk aspirátu kostní dřeně pomocí konstantního gradientu2) Identifikace myelomových buněk pomocí specifické monoklonální
protilátky anti-CD138 3) Barvení intracelulární DNA pomocí propidium-jodidu4) Analýza vzorků systémem průtokové cytometrie
PI/CD138
S-fáze (%) (PI/CD138)
Mean G1 = 235.0 CV G1 = 3.5 % G1 = 97.0 Mean G2 = 449.6 CV G2 = 3.7 % G2 = 0.1
% S = 3.0G2/G1 = 1.93 Chi Sq. = 4.6 Cell No. = 4255
Propidium-jodidový indexKT
log rank test: p = 0,0005 [měsíce]
806040200
Cum
Sur
viva
l [%
]
100
80
60
40
20
0
PC-PI/CD138
< 2,8
>= 2,8
Mediány: 13 měsíců42 měsíců
Propidium-iodidový indexKT
log rank test: p = 0,008 [měsíce]
806040200
Cum
Sur
viva
l [%
]100
80
60
40
20
0
PC-PI/CD138
2,0-2,7
< 2,0
>= 2,8
log rank p=0,076
log rank p=0,14
log rank p=0,013
Apoptotický index
Apoptóza: „programovaná smrt buňky“Aktivní vícestupňový dějFyziologická odpověď na řadu podnětůEliminace nežádoucích či nepotřebných buněk z organismu
Apoptotický index: procento myelomovýchbuněk jevících známky apoptózy
Apoptotický indexFosfatidylserin (PS) uložen na vnitřní straně BMPři apoptóze transformace PS na vnější stranu BMZtráta integrity buněčné membrány, fragmentace DNA, kondenzace jádra a cytoplazmy
Metoda stanovení:1) Identifikace myelomových plazmocytů užitím
monoklonální protilátky anti CD-138 2) Navázání annexinu-V na fosfatidylserin3) Odečtení apoptotického indexu (průtoková cytometrie)
Annexin V FITC (%)
Prop
idiu
mio
did
B1: 0,5% B2: 1,2% B3: 96,7% B4: 1,7%
AI/CD138B1: 0,3% B2: 2,2% B3: 74,1% B4: 23,3%
Prop
idiu
mio
did
Annexin V FITC (%)
Apoptotický indexKT
log rank test: p = 0,012 [měsíce]
706050403020100
Cum
Sur
viva
l [%
]
100
80
60
40
20
0
PC-AI/CD 138
>= 4,0
< 4,0M 16 měsíců
Apoptotický indexKT
log rank test: p = 0,012 [měsíce]
706050403020100
Cum
Sur
viva
l
100
80
60
40
20
0
PC-AI/CD 138
> 8,0
4,0-8,0
< 4,0
log rank p=0,012
log rank p=0,031
log rank p=0,96
Souhrnný indexKT
log rank test: p = 0,032 [měsíce]
706050403020100
Cum
Sur
viva
l [%
]
100
80
60
40
20
0
PI/AI
< 0,7
>= 0,7M 18 měsíců
ZávěrPropidium jodidový a apoptotický index – významné ukazatele kinetiky myelomových plazmocytůMetodiky stanovení jsou dostupné, rychlé a výtěžné a použitelné v běžné klinické praxiStatisticky významná korelace PC-PI a PC-AI/CD 138 vzhledem k celkovému přežíváníPodstatný rozdíl v mediánech přežití u skupin s rozdílnou proliferační a apoptotickou aktivitouOptimální diskriminační hodnoty v našem souboru - u propidium-jodidového indexu 2,8%, u apoptotického indexu 4,0%Možnost rozdělení nemocných do prognosticky odlišných skupin a tím i výběr individuálně zvolené léčby
Příspěvek k hodnocení prognostického potenciálu indexu proliferace a apoptózy plazmatických buněk u mnohočetného myelomuMM : PF - VNITŘNÍ VLASTNOSTI MY. bb.Charakteristika souborun-117; věk M 66let (44-85); M/Ž 0,92:1 (56/61)Léčba: konvenční chemoterapie (VBMCP, MP, VAD)Propidium-jodidový indexPC-PI/CD 138Propidium-jodidový indexPropidium-iodidový indexApoptotický indexApoptotický indexApoptotický indexApoptotický indexSouhrnný indexZávěr