QUPRELPR01 - Manuel de prélèvement - Manuel de...analytiques afin d’obtenir les prélèvements dans des conditions optimales pour la réalisation des analyses. 2 Termes et définitions

Laboratoire de Biologie Clinique CHU Dinant Godinne

Avenue Dr Thérasse, 1 B-5530 YVOIR

MANUEL DE PRELEVEMENT QUPRELPR01 – Version 06 du 15/12/2015 Imprimé le 09/10/2015 Page 1/30

MANUEL DE PRELEVEMENT QUPRELPR01

Version 06 Date de validation 15/12/2015 Type de document Procédure Date de mise en application 14/01/2016

Etape Nom Prénom Dates

Auteur Baude Cédric 9/10/2015 Vérificateur Galanti Laurence 11/12/2015 Approbateur Galanti Laurence 15/12/2015 Validateur Baude Cédric 15/12/2015

HISTORIQUE DES VERSIONS

06 Transfert Sapanet avec ajout Dinant 15/12/2015

CLASSEUR CHAPITRE Pré-analytique

Distribution supplémentaire

Nom - Prénom Date de lecture Signature




Manuel de prélèvement Laboratoire du CHU Dinant Godinne




Table des matières 1 OBJET ............................................. .......................................................................................................... 3

2 TERMES ET DÉFINITIONS ...................................................................................................................... 3

3 PRÉSENTATION DU LABORATOIRE ....................... .............................................................................. 3

3.1 MISSION ............................................................................................................................................... 3

3.2 ORGANISATION ..................................................................................................................................... 4

3.2.1 Site de Godinne .......................................................................................................................... 5

3.2.2 Heures d'ouvertures et disponibilité du laboratoire .................................................................... 9

3.2.3 Horaires de prélèvements au laboratoire ................................................................................... 9

3.2.4 Responsables: .......................................................................................................................... 11

4 PRÉLÈVEMENT ...................................................................................................................................... 12

4.1 LA DEMANDE D’ANALYSE ...................................................................................................................... 12

4.1.1 Prescription ............................................................................................................................... 12

4.1.2 Prescription médicale informatisée (PMI) ................................................................................. 12

4.1.3 Bons de demande sous forme papier....................................................................................... 12

4.2 LE PRÉLÈVEMENT ................................................................................................................................ 13

4.2.1 Prise de sang ............................................................................................................................ 14

4.2.2 Urines ....................................................................................................................................... 15

4.2.3 Moelle ....................................................................................................................................... 16

4.2.4 Prélèvement à visée microbiologique ....................................................................................... 16

5 TRANSPORT DES ÉCHANTILLONS ET DE LA DEMANDE ....... ......................................................... 28

5.1 TRANSPORT DES ÉCHANTILLONS .......................................................................................................... 28

5.1.1 Au sein du CHU ........................................................................................................................ 28

5.1.2 Du site de Dinant ou de l’extérieurs vers le site Godinne ......................................................... 28

5.2 RÉCEPTION AU LABORATOIRE .............................................................................................................. 28

6 ANNEXES ET DOCUMENTS ASSOCIÉS ..................... ......................................................................... 29




Manuel de prélèvement

1 Objet Ce manuel est destiné à tous les prescripteurs et aux préleveurs travaillant avec le CHU Dinant Godinne. Il contient les instructions relatives au prélèvement, à la conservation et au transport des échantillons destinés au laboratoire du CHU. Il a pour objectif de fournir des informations précises concernant les processus pré-analytiques afin d’obtenir les prélèvements dans des conditions optimales pour la réalisation des analyses. 2 Termes et définitions Prélèvement (échantillon) : Matériel humain destiné à l’examen biologique par le laboratoire (sang, urines, fèces, pus, liquide, frottis, tissu, organe…) Demande d’analyse : Document reprenant les informations administratives concernant le patient et le prescripteur ainsi que les analyses demandées par ce dernier. La demande d’analyse est déposée ou transmise (voie électronique) au laboratoire avec le(s) prélèvement(s) associé(s) 3 Présentation du laboratoire 3.1 Mission

Le laboratoire a pour mission de répondre à la demande de prescripteurs (cliniciens, sociétés pharmaceutiques, assurances, caisses d’assurance maladie, organismes de soins, …). Le laboratoire est décrit sur le site Internet du CHU Dinant Godinne (http://www.uclmontgodinne.be/); ses activités sont également reprises sur le site intranet du CHU. Les missions principales du laboratoire sont l’accueil des patients ambulants et le prélèvement des milieux biologiques, la réception, le traitement et la gestion de toutes les demandes d’analyses et des échantillons biologiques, la réalisation des analyses demandées, la gestion des résultats, et le conseil aux prescripteurs. Les activités du laboratoire sont réalisées sur deux sites : le site de Godinne (site principal) pour l’ensemble des activités et le site de Dinant (site de proximité) pour une activité d’urgence.

Les prestations du laboratoire d’analyses de biologie médicale, incluant interprétation et conseil, sont conçues pour répondre aux besoins des patients et de l’ensemble du personnel médical chargé des soins prodigués aux patients. Elles concernent les




différents domaines de la nomenclature des soins de santé : biochimie, hématologie, hémostase, hormonologie, immunohématologie, microbiologie, sérologie. Certaines analyses non reprises dans la nomenclature sont réalisées par le laboratoire afin d’aider plus efficacement les cliniciens dans leurs investigations biologiques et peuvent être facturées aux patients. Le laboratoire est divisé en différents secteurs : chimie, hématologie, microbiologie, immuno-hématologie, ayant chacun leurs activités propres et bénéficiant d'un secteur logistique commun pour diverses tâches (administratives, de secrétariat, d’approvisionnement, activité de prélèvement, tâches pré-analytiques et de laverie). L’activité principale du laboratoire consiste en la prise en charge d'analyses demandées pour les patients hospitalisés, ambulants et extérieurs à l'institution. Cette prise en charge, comprenant la réalisation des analyses de biologie médicale, la validation, l’interprétation et la transmission des résultats et la prestation de conseils, s’effectue dans le respect de la norme ISO15189 - 2012. Le laboratoire supervise les activités de transport des échantillons biologiques sous-traités assurées par des chauffeurs faisant partie des services techniques du CHU et s’assure de la qualité de ce transport. Le laboratoire assure en qualité de service universitaire une mission d’enseignement et accueille des assistants et stagiaires en formation soumis au respect des mêmes règles de qualité que l’ensemble du personnel. 3.2 Organisation

Le laboratoire fait partie du CHU Dinant Godinne, représenté par : Pr Meunier B. – Administrateur-délégué Pr De Coster P. – Directeur général Numéro d’agrément du laboratoire : 91605 Numéro de certificat d'accréditation BELAC : 431-MED Des informations pratiques peuvent être trouvées sur le site Internet du CHU Mont-Godinne (http://www.uclmontgodinne.be) ainsi que, en interne, sur le site intranet des Cliniques. Pour toute information, le secrétariat du laboratoire peut être contacté au call center : 081 42 32 12.




3.2.1 Site de Godinne

Adresse : Avenue du Docteur Gaston Thérasse, 1 - 5530 Yvoir Plan d’accès :




Localisation géographique du laboraroire au sein du site de Godinne : Le laboratoire est situé au rez-de-chaussée du CHU (route 19), à proximité de la radiologie, des urgences, des soins intensifs et du bloc opératoire. Sa surface est de 1000m2 et il est composé de différents locaux: administratifs, médicaux, techniques et de stockage. (Voir plan fonctionnel du laboratoire [QUMAQAN 01])

Laboratoire




3.2.1.1 Site de Dinant

Saint Vincent (Centre hospitalier + Laboratoire) Adresse : Rue Saint Jacques, 501 - 5500 Dinant

Sainte Anne: Adresse : Rue Pont d'Amour, 50 - 5500 Dinant Plan d’accès :




Policlinique de Ciney (Sainte Marie) : Adresse : Avenue Schlogel, 90 - 5590 Ciney

Centre Erpent : Adresse : Chaussée de Marche, 489 - 5101 Erpent




3.2.2 Heures d'ouvertures et disponibilité du laboratoire

Sur le site de Godinne, les analyses de routine sont effectuées tous les jours ouvrables de 08H00 à 17H00. Les analyses nécessitant une réalisation rapide d’un point de vue analytique ou demandées en urgence sont effectuées 7 jours sur 7, 24 H sur 24. En dehors des heures ouvrables, les analyses sont effectuées par un technologue de garde sur place, encadré des superviseurs techniques sectoriels et sous la responsabilité et la supervision d’un biologiste de garde, appelables par téléphone. Sur le site du laboratoire de Dinant, seules les analyses provenant du centre hospitalier de Dinant et demandées en urgence sont effectuées 7 jours sur 7, 24 H sur 24. 3.2.3 Horaires de prélèvements au laboratoire

Les prélèvements sont réalisés : Sur le site de Godinne : au laboratoire (route 19) du lundi au vendredi de 08h00 à 18h00. Une garde est disponible le samedi de 10h00 à 12h00. Le service prélèvement est fermé le dimanche et les jours fériés. Sur le site de Dinant : - Au laboratoire, les prélèvements sont réalisés de 8H00 à 18H00 du lundi au

vendredi et le samedi de 8H00 à 12H00. Des prélèvements urgents sont possibles en dehors des heures d’ouverture du centre de prélèvements.

- À l’hôpital de jour du CHU Dinant, les prélèvements sont réalisés du lundi au vendredi de 08H00 à 18H30




Contact : Site de Godinne : Les différents secteurs du laboratoire sont accessibles par téléphone. Pour un appel venant de l'extérieur, il faut faire précéder l'extension de 081 42 xx xx. Tel Contact Center .................................... .......... 3212 Secrétariat ...................................................... 3200 Fax ......................................................... 3204 Urgences (résultats en garde) ..................... 3210 Prélèvements (rendez-vous) ........................ 3205 Chimie ............................................................ 3216 Assistant/Chef technicien chimie ............ 3222 Hématologie ................................................... 3217 Assistant hématologie ........................... 3202 Immuno-hématologie Laboratoire ............................................. 3230 Biologie moléculaire/HLA ....................... 3218 Bactériologie Assistant microbiologie .......................... 3213 Biologie moléculaire / CNR .................... 3206 Email Godinne: [email protected] Site de Dinant : Secrétariat ....................................... 082 212880 Laboratoire ....................................... 082 212882 Banque de sang ............................... 082 212876 Email Dinant : [email protected]




3.2.4 Responsables:

Pr B. Meunier Administrateur Délégué Tel : 081 42 30 79 [email protected] Pr P. De Coster Directeur général Tel : 081 42 30 01 Fax : 081 42 30 02 [email protected] Pr Y. Glupczynski Directeur du Laboratoire Biologiste Microbiologie Godinne Tel : 081 42 32 45 Fax : 081 42 32 46 [email protected] Pr L. Galanti Biologiste Chimie Responsable Qualité Godinne Tel : 081 42 32 40 [email protected] Ph. B. B. Chatelain Biologiste Hématologie Godinne Tel : 081 42 32 43 [email protected] Ph. B. F Mullier Biologiste Hématologie Godinne Tel : 081 42 49 86 franç[email protected]

Dr. D. Huang Biologiste Microbiologie Godinne Tel : 081 42 32 11 [email protected] Mr P. Bogaerts Responsable Biologie moléculaire Godinne Tel : 081 42 32 41 [email protected] Pr. V. Deneys Biologiste Immuno-hématologie Chef de l’Etablissement de transfusion sanguine Godinne Tel : 081 42 32 42 [email protected] Dr N. Fonteyn Biologiste Dinant Tel : 082 21 23 57 [email protected] Mr C. Baude Coordinateur qualité Godinne Tel : 081 42 32 14 [email protected]

Laboratoire de Biologie Clinique CHU Dinant Godinne Avenue Dr Thérasse, 1 B-5530 YVOIR


4 Prélèvement 4.1 La demande d’analyse

4.1.1 Prescription

Tout prélèvement à destination du laboratoire doit être accompagné d’une prescription médicale (sous forme d’une demande d’analyse) émanant d’un médecin prescripteur. Celle-ci peut être transmise au laboratoire sous forme écrite, de manière préférentielle sur les bons de demande émis par le laboratoire ou sous forme électronique. Dans certains cas, il est possible d’ajouter une analyse par contact téléphonique direct avec le laboratoire. La prescription doit indiquer au minimum : - l’identité du prescripteur (nom, prénom, numéro d'i dentification et en

interne son service), - l'identification du patient : nom (de jeune fille), prénom, sexe et date de

naissance, - la nature du spécimen (liquide de ponction, LCR …) quand il ne s’agit pas

de sang, - la date du prélèvement (voire l’heure si cela se ju stifie), - les renseignements cliniques y compris les traiteme nts éventuels pouvant

influencer le résultat de l’analyse demandée ou son interprétation. La prescription contient une liste positive des diverses analyses demandées. Les analyses sont reprises sur des bons de demande disponibles sur le site intranet des Cliniques. Les sites intranet et internet du CHU permettent la visualisation de la liste des analyses. Il est également possible de contacter le call center pour toute information. 4.1.2 Prescription médicale informatisée (PMI)

La PMI est mise à la disposition des prescripteurs hospitaliers via le logiciel de gestion des dossiers patients. Ce type de prescription est d’application, sur le site de Godinne, pour les patients hospitalisés, de l’hôpital de jour et certaines consultations. 4.1.3 Bons de demande sous forme papier

Les bons de demande sous forme papier sont mis à la disposition des prescripteurs n’ayant pas accès à la PMI. Ces demandes reprennent les informations administratives du patient et du prescripteur ainsi que les éléments nécessaires à la bonne exécution du travail (type de prélèvement pour chaque analyse, spécifications de prélèvement et de transport éventuelles…).



Des bons de demande d'analyses différents sont prévus pour les demandes :

QUPRANFO 05 Urgent QUPRANFO 09 Extérieur site Dinant QUPRANFO 10 Hématologie / Biochimie QUPRANFO 11 Liquides QUPRANFO 12 Routine site Dinant QUPRANFO 13 Cytométrie en flux QUPRANFO 18 Toxicologie et allergies QUPRANFO 20 Microbiologie QUPRANFO 22 Helicobacter QUPRANFO 25 Biologie moléculaire QUPRANFO 30 Etude clinique QUPRANFO 35 LBA QUPRANFO 40 Envois

Ces bons de demande font office de contrat entre le laboratoire et le prescripteur. Ils contiennent les informations requises pour la collecte et l'exécution adéquate des analyses demandées. L’impression de ces bons est prise en charge par le Service Achat du CHU Godinne ou Dinant qui assure leur distribution aux différentes unités de soins et services prescripteurs sur les différents sites. Le laboratoire informe les prescripteurs de toute modification par un message sur l’intranet du CHU. Le bon de demande peut parfois être imprimé à partir du dossier du patient. 4.2 Le prélèvement

Le prélèvement peut être réalisé directement au laboratoire, dans les unités de soins ou hôpital de jour (pour les patients hospitalisés ou ambulants), ainsi qu’à l’extérieur du CHU (autres institutions, médecins traitants…)

Tout échantillon doit être identifié par le nom, pr énom et date de naissance du patient.

En cas de malaise du patient, le préleveur évalue la gravité du malaise. Il exécute les premières mesures nécessaires (installation confortable, relever les jambes, lui donner une boisson sucrée,…) et contacte si besoin le service d’intervention urgente institutionnel (n° de téléphone disponibles dans le local de prélèvement). La qualité du prélèvement conditionne la qualité des résultats. Il est important pour la qualité du travail de labo ratoire de respecter le type et le nombre de tubes de prélèvement requis pour les a nalyses demandées en se basant sur les indications reprises sur les bons de demande d’analyses (colonne associée aux différentes analyses).



4.2.1 Prise de sang

Le patient doit en général être en position couchée ou assise. Il est préférable d’utiliser un garrot automatique dont la pression est plus limitée et qui pourra être relâché partiellement du bout des doigts. L’usage du brassard d’un tensiomètre gonflé entre la pression artérielle minima et maxima du patient, peut également convenir. Un garrot adapté à la pédiatrie est conseillé pour les prélèvements chez les enfants. Le garrot doit être posé à ± 10 cm au-dessus du pli du coude. Mode opératoire :

1. Contrôle positif de l’identité et installation du patient

2. Analyse de la demande et des informations cliniques éventuelles

3. Préparation du matériel (tubes, aiguille, tampons, désinfectant, …). Prélèvement à l’aiguille sauf en cas de prélèvement difficile (personnes âgées, enfants) où l’usage du papillon est toléré.

4. Choisir le site de prélèvement, le désinfecter et placer le garrot, le patient ayant la main fermée.

5. Introduire l’aiguille d’un geste sec et contrôlé, dans un angle de 15° à 30° et selon l’axe longitudinal de la veine au plus tard 1 minute après la pose du garrot.

6. Changer de bras s’il faut repiquer.

7. Prélever les tubes dans l’ordre approprié, en s’assurant du remplissage correct :

a. Hémoculture éventuelle

b. BLANC (sec sans additifs)

c. BLEU (citrate / CTAD)

d. ROUGE+noir (sec sans gel)

e. ROUGE+jaune (sec avec gel)

f. VERT (héparine)

g. MAUVE (EDTA)

h. GRIS (fluorure de sodium)

Remarque : Si un tube bleu doit être prélevé, une amorce doit impérativement être prélevée avant le tube bleu pour les bilans d'hémostase, ils ont une coiffe blanche avec pastille noire. Ils ne contiennent pas d'activateur de la coagulation et doivent être utilisés en priorité (avant tout autre tube principalement avant le tube bleu). Cette amorce doit être envoyée au laboratoire avec le tube bleu.



8. Relâcher la pression du garrot dès le remplissage du 1er tube mais sans le détacher.

9. Incliner le tube vers le bas en cas de reflux sanguin pour éviter le contact du sang avec le bouchon et l’aiguille.

10. Retirer le dernier tube avant l’aiguille, détacher le garrot et retirer l’aiguille, main ouverte du patient, sans presser sur l’aiguille.

11. Maintenir une compresse sur le site de ponction avec une pression sur la veine bras tendu et mettre un pansement.

12. S’assurer de l’absence de complications liées au prélèvement.

13. Vérifier la conformité des tubes prélevés et les mélanger 5 à 10 fois calmement par retournement au plus tard 2 minutes après le prélèvement.

14. Identifier les tubes par le nom, prénom et date de naissance du patient.

15. Envoyer rapidement les échantillons prélevés en respectant les spécificités de demande du laboratoire.

Remarque : - Respecte le niveau de remplissage pour permettre une réaction

optimale de l’additif. - Pour les prélèvements réalisés via un cathéter veineux, il faut s’assurer d’un

rinçage préalable de la tubulure avec un volume adapté à la longueur de celle-ci. - En cas d’utilisation d’étiquettes sur les tubes, veiller à laisser une portion vierge

afin de permettre la visualisation du contenu. - Le non-respect des recommandations de prélèvement peut entraîner une

hémolyse qui affecte le résultat d’un certain nombre de paramètres biologiques. - Pour un bilan d’hémostase contacter le laboratoire d’hématologie. - Bien respecter le type et le nombre de tubes nécessaires à la réalisation des

analyses demandées 4.2.2 Urines

a) Pour un prélèvement usuel, un échantillon d’urine sera demandé au patient dans un flacon à urine non stérile (200ml) convenablement identifié avec le nom et prénom du patient ainsi que sa date de naissance. Le flacon à urine est remis au patient avec un set de désinfection pour récolter une partie des urines émises spontanément (le patient ne doit pas être à jeun). Une fois les urines émises, remplir un tube à urine

b) Pour les urines de 24, un pot à diurèse opaque de 2 litres (avec ou sans HCl

suivant la demande du prescripteur) est remis au patient. - Avant de commencer l’épreuve, le patient vide une première fois la vessie à la

toilette (ces urines ne sont pas gardées) et note l’heure de début.



- Toutes les urines suivantes sont récoltées et conservée au réfrigérateur (debout car le bouchon n’est pas étanche). Bien fermer le flacon après chaque utilisation et l’agiter.

- Apres 24H (à la même heure que la première urine qui a été éliminée), le patient vide une dernière fois sa vessie dans le pot de prélèvement (ces urines sont gardées).

- Apporter le pot à diurèse au laboratoire le plus rapidement possible, sinon conserver le pot au réfrigérateur (max 24H).

Rem : - Le patient doit boire normalement pendant l’épreuve - Attention de ne pas perdre d’urine en allant à selle (uriner avant) - Lorsqu’il s’agit d’une récolte d’urine avec de l’acide, fournir au patient un petit pot

de 200ml afin qu’il puisse uriner d’abord dans ce pot pour le transvaser dans le pot contenant de l’HCl afin d’éviter les brûlures et les accidents. Donnez au patient les recommandations suivantes : • Ne pas vider ni toucher l’HCL qui se trouve dans les pots à urine • Garder ces pots hors de portée des enfants • Ramener les pots qui n’ont pas été utilisés • Procéder à la récolte d’urine dans les deux semaines car l’HCl ne se conserve

pas et risque de dégrader le pot 4.2.3 Moelle

Le prélèvement de moelle est réalisé dans un milieu d’aspiration préparé au laboratoire selon la procédure [HECYTMO01]. Il est constitué d'une suspension protéique (SSPP) et d'anticoagulants (EDTA et Héparine) et permet le prélèvement et la conservation longue durée (sans coagulation et autres altérations) du suc médullaire obtenu à partir de la ponction médullaire. Celle ci se réalise normalement à l'Hôpital de Jour hématologique : - Un tube EDTA spécifique de 9 ml est à décongeler peu de temps avant le

prélèvement. - Le prélèvement se fait à la seringue. Le contenu de l’aspiration est ensuite

transféré dans le tube EDTA contenant la suspension SSPP. Le tube EDTA est à amener rapidement au laboratoire. 4.2.4 Prélèvement à visée microbiologique

Réaliser le prélèvement, si possible, avant la mise en route du traitement antibiotique et l’acheminer rapidement au laboratoire sans oublier de l’identifier. Tout prélèvement doit être accompagné d’une demande d’analyse correctement remplie. Indiquer également l’heure du prélèvement et les renseignements cliniques tel que préciser l'origine du produit, la présence de température chez le patient, l'affection suspectée, l’antibiothérapie à venir ou en cours…



4.2.4.1 Liquide céphalo-rachidien (LCR)

• Indication d’analyse microbiologique du LCR : - contexte de suspicion de méningite et de méningo-encéphalite d’origine

infectieuse. Des demandes spécifiques et des justifications cliniques sont indispensables pour la recherche de germes particuliers (mycobactéries, champignons notamment le Cryptococcus…)

- Une mise au point dans le cadre de maladie neurologique inflammatoire ou de néoplasie/hémopathie maligne n’est pas une indication d’analyse microbiologique du LCR.

• Prélèvement : - Asepsie de type chirurgical avec un kit de ponction lombaire. - Volume :

o Minimum 2 ml à répartir sur 3 tubes pour l’analyse biochimique, cytologique et microbiologique standard (recherche de germes pathogènes méningés habituels). Eviter d’utiliser le premier tube prélevé pour l’analyse microbiologique à cause du risque de contamination.

o 2 à 5 ml supplémentaire pour la recherche de mycobactéries o 2 ml supplémentaire pour la recherche de virus (Enterovirus, Herpes) o 2 ml supplémentaire pour l’analyse sérologique pour la recherche de

neuroborréliose • Transport et conservation :

- Immédiat à T° ambiante au laboratoire car urgence médicale et technique (risque de lyse des leucocytes jusqu’à 50% en 2 heures)

- NE JAMAIS conserver le LCR au frigo (germes pathogènes sensibles au froid)

4.2.4.2 Hémocultures

• Indications : - Patient fébrile >38°C - Hypothermie < 36° - Suspicion d’infection systémique chez un patient immunodéprimé ou chez un

patient agé - Suspicion d’endocardite ou d’infection chronique sur site profond - Réactions transfusionnelles

• Matériels :

- Un désinfectant - Une paire de gants stériles - Des compresses stériles - Un Holder spécifique (cloche) aux flacons d’hémoculture et une aiguille à

ailettes (butterfly) - Flacons d’hémoculture Bact/Alert (bioMérieux):

o flacon aérobie BTA SA (ou PF = flacon pédiatrique) o flacon anaérobie BTA SN



• Précautions avant le prélèvement : - Avant toute antibiothérapie idéalement ; non à jeun - ASEPSIE rigoureuse (cfr procédure ci-dessous):

o Lavage ou désinfection des mains du préleveur o Port de gants non stériles o Désinfection du capuchon des flacons d’hémocultures o Après repérage du point de ponction veineuse, désinfection par application

d’antiseptiques alcooliques sur le site de ponction de la peau du malade pendant minimum 30 secondes

• Volume de sang à prélever :

- Adulte : 40 ml en 4 à 6 flacons (2 à 3 paires de flacon aérobie et flacon anaérobie) avec 5-10 ml par flacon

- Enfant : en fonction du poids de l’enfant :

• Sites à prélever : - Règles générales :

o Préférer la ponction veineuse directe au prélèvement par cathéter o Prélever sur minimum deux sites différents (interprétation contamination vs

infection) - Suspicion de septicémie sur dispositif intra-vasculaire : au moins un

prélèvement par ponction périphérique et un par le dispositif intra-vasculaire idéalement des volumes de sang équivalents sur les différents sites prélevés (comparaison de temps de positivité des flacons).

• Fréquence du prélèvement : - Règle générale : Une série de prélèvements par 24h suffit. - Suspicion d’endocardite ou d’infection chronique sur site profond: répéter les

prélèvements si première série négative après 24-48h d’incubation. - En cas de suspicion de bactériémie ou de fungémie malgré hémocultures

négatives persistantes, contacter le laboratoire de microbiologie pour des méthodes complémentaires de détection (prolongement de durée d’incubation, repiquages finaux, colorations spéciales, subcultures sur milieux spéciaux…)

• Identification des prélèvements : - Données du patient (cfr généralités préanalytiques)

Poids Culture 1 Culture 2Aero Ana Aero Ana

<1 kg 0,5-2 ml 4%1-2 kg 1,5-4,5 ml 4,5%2-12 kg 3-6 ml 3%12-36 kg 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 2,9%>36 kg 10 ml 10 ml 10 ml 10 ml 2%

% Volume total



o Etiquette du patient : NE PAS coller l’étiquette sur le code-barre du flacon nécessaire à leur introduction dans l’automate incubateur.

o Indiquer sur les flacons et/ou les demandes le site de prélèvement (ponction périphérique, par cathéter veineux central, par port-à-cath…)

• Procédure de réalisation du prélèvement 1. Etiqueter et numéroter tous les flacons d’hémoculture pour respecter l’ordre du

prélèvement. Désinfection des bouchons et séchages 15’’ 2. Repérage du site de ponction n°1 3. Désinfection du site cutané (après palpations) et laisser sécher 30’’ 4. Désinfecter une seconde fois avant le prélèvement 5. Prélèvement de la paire d’hémoculture n°1 au moyen du Holder spécial et de

l’aiguille à ailettes. Il faut 5 à 10 ml de sang par flacon. 6. Prélever de la même façon la paire d’hémoculture n°2 à partir d’un autre site

cutané. 7. Même opération pour la paire d’hémoculture n°3, seulement si le patient a une

voie d’entrée, mais le prélèvement se fera par le cathéter veineux ou un autre dispositif intravasculaire (ex : port-à-cath).

Attention : - Si autres prélèvements sanguins, prélever en prem ier les hémocultures. - Prélèvements des différentes paires sans délai in termédiaire mais sur

sites différents. - Noter sur le bon de demande, si une antibiothérap ie est en cours. • Conservation et transport :

- Les hémocultures sont des prélèvements URGENTS (raisons techniques et médicales) à acheminer à T° ambiante le plus rapidement possible au laboratoire.

- Déposer les paires d’hémocultures au centre de tri du laboratoire qui les prendra en charge pour les acheminer vers le service de bactériologie.

4.2.4.3 Urines

• Matériels : - Un désinfectant - Compresses stériles - Pot stérile (50ml) - Si nécessaire, collecteur Urinocol, sonde urinaire ou matériels de ponction

sus-pubienne

• Sédiments urinaires et culture d’urine

- Recueil d’urines mi-jet : Le prélèvement aseptique d’urines (pour la culture) se fait après désinfection du méat avec des compresses stériles imbibées de désinfectant non



alcoolique. Prélever en évitant le contact avec la peau le 1er jet d’urine dans un pot non stérile (200 ml) et le milieu de jet dans un pot stérile (50ml). Eviter de mettre les doigts à l’intérieur du pot stérile. Fermer hermétiquement le pot stérile qui est acheminé rapidement au laboratoire <2h ou conservé 24h au maximum à 4°C.

- Ponction sus-pubienne et cathéterisme vésical direct :

Ces prélèvements invasifs sont considérés comme des prélèvements en condition « stérile » et sont à considérer comme urgents et précieux.

- En cas de suspicion d’infection urinaire chez un enfant cliniquement septique ou en l’absence de prélèvement urinaire non contaminé, on peut avoir recours à une ponction vésicale. Après avoir assuré que la vessie est remplie et après désinfection cutanée sus-pubienne, une ponction à l’aiguille avec une seringue est réalisée au-dessus de la symphyse pubienne. Après retrait de l’aiguille remplacée par un capuchon stérile, la seringue contenant l’urine est acheminée telle quelle immédiatement au laboratoire.

- Chez un patient incapable d’uriner (vessie neurologique, globe vésical…), un recueil d’urine par sondage vésical « in-out » peut être réalisé. Après préparation cutanée soigneuse, une sonde urinaire est introduite avec une technique appropriée via le méat urétral dans la vessie. Après élimination des premiers ml d’urines, l’urine est recueillie dans un pot stérile. Fermer hermétiquement le pot stérile qui est acheminé le plus rapidement au laboratoire.

- Prélèvement par sonde à demeure :

Si le patient est porteur d’une sonde urinaire ou d’une poche vésicale, il ne faut pas déconnecter le circuit. Après désinfection de l’embout de prélèvement, ponctionner à la seringue pour récolter l’urine.

- Collecteur d’urine pour enfant :

S’il s’agit d’un enfant n’ayant pas acquis la propreté urinaire, utiliser un sachet collecteur Urinicol qui est à changer toutes les 60 minutes.

• Recherche de N. gonorrhoeae et C. trachomatis

Même procédure mais recueil du 1er jet d’urine dans un pot stérile. • Recherche de parasites dans les urines

- Critères d’acceptation : o Présence d’hématurie micro/macroscopique o Séjour dans des pays tropicaux

- Conservation et transport : o Transport immédiat au laboratoire à T° ambiante <2h de prélèvement. o Conservation au frigo à 4°C maximum 24h.



4.2.4.4 Selles

4.2.4.4.1 Coproculture : Recherche de germes entéropathogènes et de C. difficile toxinogène

• Conditions de prélèvement de selles pour coproculture :

- Une seule coproculture est en général suffisante - Avant toute antibiothérapie de préférence - Volume optimal de la taille d’une noix ou d’environ 5 ml (dans un pot stérile

hermétique) - Echantillon muco-purulent ou sanglant à privilégier

• Indications et critères d’acceptation de coproculture:

- Pas de recherche de germes entéropathogènes en l’absence de selles diarrhéiques. (Définition d’une diarrhée: minimum 3 selles liquides non moulées sur une période de 24 h)

- Pas de recherche de germes entéropathogènes hors C. difficile chez un patient hospitalisé de plus de 3 jours sauf excepti ons.

- Germes entéropathogènes hors C. difficile : Salmonella, Shigella, Campylobacter, Yersinia.

- Diarrhées >3 jours après admission et un des critères suivants (exceptions): o Neutropénie <500/uL o HIV+ o Contexte épidémique de gastro-entérites o Retour de séjour à l’étranger (pays tropicaux ou subtropicaux)

• Une recherche d’un Escherichia coli vérotoxinogène (VTEC dont E. coli O157H7)

est indiquée en cas de diarrhées sanglantes ou de tableau clinique de syndrome hémolytique urémique (SHU).Cette recherche spécifique est à préciser sur la demande.

• La recherche de Clostridium difficile toxinogène est à réaliser chez un patient ayant reçu un antibiotique, séjourné dans une autre institution ou hospitalisé depuis plus de 3 jours.

• La recherche de virus dans les selles n’est pas un examen de routine sauf pour

les rotavirus et les adénovirus. En cas d’épidémie il est nécessaire de prendre contact avec le laboratoire pour diriger les recherches et si nécessaire transférer la demande au centre national de référence.

• Procédure : Recueillir les selles dans un pot avec une petite cuillère et fermer hermétiquement le couvercle.



4.2.4.4.2 Recherche des parasites intestinaux

Indications de recherche de parasites intestinaux dans les selles : La recherche de parasites dans les selles est appropriée chez les patients présentant à l’admission des diarrhées ou des troubles digestifs :

- après séjour dans les pays (sub-)tropicaux - Diarrhées persistantes (>2 semaines) ou chroniques (>1 mois) - Hyperéosinophilie inexpliquée - Diarrhées chez un patient HIV+ ou patient greffé ou en neutropénie profonde

(recherche de Cryptosporidium). • TFT-test pour la recherche des parasites intestinaux :

Il existe un kit pour la recherche des parasites intestinaux que le laboratoire fournit à la demande. Mode opératoire a. contenu Le kit de collection de selles comprend trois flacons : 2 flacons (n°1 et 3) contenant du liquide de conservation (SAF) et 1 flacon sans liquide (n°2) b. mode d’emploi Durant trois jours consécutifs, remplir les 3 pots de collection immédiatement après émission de selle, selon le schéma suivant Le jour 1 : Remplir le pot n°1 : ajouter les selles jusqu’à la ligne rouge Le jour 2 : Remplir le pot n°2 : Mettre l’équivalent de trois noix de selles Le jour 3 : Remplir le pot n°3 : Ajouter les selles jusqu’à la ligne rouge Après avoir rempli de selle le flacon, bien visser le couvercle. Agiter doucement pendant 20 secondes les flacons contenant du liquide (n°1 et 3). Noter sur chaque flacon : le nom, la date de naissance et la date de collection de selle.

Remarque :

- Garder les pots n°1 et 2 à température ambiante ou mieux au frais (cave,

terrasse…) et apporter la totalité des pots ensemble au laboratoire le troisième jour, accompagné des trois demandes d’analyse.

- Même si vous avez plus d’une selle par jour, ne remplir le flacon qu’une seule fois par jour. Si vous avez moins d’une selle par jour, attendre que les trois flacons soient remplis pour les rapporter au laboratoire.

- Pour faciliter la collection des selles, déposer une bande de papier toilette pliée en deux au niveau de la surface de l’eau de la toilette. Les selles peuvent alors être facilement collectées à la surface du papier toilette.



- ATTENTION : le liquide des tubes 1 et 3 est potentiellement toxique à l’ingestion. Ne pas boire. Garder hors de portée des enfants. SAF : Acétate de sodium, acide acétique, formaldéhyde, eau. En cas de contact avec la peau, rincer à l’eau. En cas d’ingestion, ne pas faire vomir, boire une gorgée d’eau ou de lait et contacter immédiatement le centre anti poison : 070/245.245

- Pour tout renseignement complémentaire concernant le test, contacter le laboratoire au 081/ 42 32 12

4.2.4.5 Frottis

• Matériels : - Frottis eSwab avec milieu de transport liquide (Copan) : liquid regular,

liquid regular uretral pour frottis ORL ou urétral - MRSA Kit (3 eSwab et milieu NaCl 2,5%) pour dépistage MRSA - GBS (bouillon LIM)

� Le frottis de gorge

Prélever à l’écouvillon en frottant la paroi postérieure du pharynx ainsi que les deux amygdales. Il faut éviter le contact avec la muqueuse buccale ou avec la langue pour minimiser la contamination salivaire. Casser le frottis dans le milieu de transport et fermer en vissant le tube.

� Le frottis de nez Prélever à l’écouvillon la muqueuse nasale en frottant le contour intérieur des deux narines. Casser le frottis dans le milieu de transport et fermer en vissant le tube.

� Le frottis d’oreille Prélever en frottant à l’écouvillon la paroi du conduit auditif externe ou des sécrétions provenant de l’oreille moyenne. Casser le frottis dans le milieu de transport et fermer en vissant le tube.

� Frottis pour recherche de MRSA Utiliser le MRSA kit contenant trois écouvillons : deux rouges pour effectuer un frottis de la gorge et d’un autre site, ainsi qu’un troisième écouvillon blanc pour le frottis de nez à casser dans le tube contenant le milieu NaCl. Fermer en vissant le tube.

� Frottis pour recherche de Streptococcus agalactiae Utiliser le GBS kit : effectuer un frottis vaginal et rectal, casser le frottis dans le bouillon LIM et fermer le tube en le vissant.



4.2.4.6 Pus, plaies et liquides d’épanchement

Il existe une grande diversité de germes isolés dans les pus, liée à la grande diversité des sites de prélèvements; • Classes de stérilité des prélèvements : Classe 1 : Liquide de séreuse (liquide pleural, liquide péricardique, liquide synovial, liquide péritonéal). - Les liquides de séreuses proviennent de zones fermées et donc normalement

stériles. Ces prélèvements sont obtenus en condition d’asepsie de type chirurgical, à l'aide d'une aiguille montée d'une seringue. Ils sont rarement polymicrobiens et ne sont pas contaminés.

- Une odeur fétide et une couleur "chocolat " doivent inciter à une recherche de germes anaérobies et l'utilisation d'un milieu de transport adéquat.

Classe 2 : Pus profonds provenant de zones profondes, mais qui peuvent être en contact avec la flore commensale (exemple : abcès fistulisé). - les renseignements cliniques sont indispensables pour orienter la recherche

bactériologique et différencier contamination et infection. - Le prélèvement doit se faire à l'aiguille montée d'une seringue, en évitant le plus

possible le contact avec la flore commensale. - La quantité de liquide doit être suffisante pour permettre également la recherche

d'anaérobies (milieu de transport). Classe 3 : Pus superficiels : plaies cutanées. - Les renseignements cliniques sont indispensables - Seules les plaies infectées justifient un prélèvement. Le prélèvement de certaines infections cutanées chez un hospitalisé sans comorbidité est inutile (ex: l'érysipèle simple) Les prélèvements d'escarre ne présentent aucun intérêt excepté dans le cadre de dépistage de bactéries multi-résistantes aux antibiotiques (BMR), les escarres sont systématiquement colonisées par des germes commensaux de la peau ou par une flore transitoire. Les antibiotiques ne guérissent pas les escarres mais ils peuvent sélectionner les BMR. Ces prélèvements sont toujours contaminés : la flore de surface, les débris cellulaires et tissulaires doivent d'abord être éliminés par rinçage avec une solution de lavage (eau physiologique). L'idéal est le prélèvement par aspiration à la pipette au à la seringue. Prélever la plus grande quantité possible de pus. • Procédure de prélèvements : Pus de classe 1, 2 - effectuer le prélèvement à la seringue (une seringue héparinée est recommandée afin de disposer d’un prélèvement permettant de réaliser une analyse cytologique).



- transférer si besoin une fraction du prélèvement dans un tube hépariné pour une analyse cytologique - utilisation du milieu de transport pour la recherche d’anaérobes (Portagerm) : après prélèvement du liquide, piquer à travers le bouchon du flacon de transport et injecter quelques ml EN-DESSOUS de la gélose créant l’anaérobiose. - Après avoir chassé l’air restant de la seringue, RETIRER L’AIGUILLE et remettre un capuchon à la seringue avant transport immédiat à T° ambiante au laboratoire. Pus de classe 3 - voir Pus de classe 1, 2 - à défaut, écouvillonner la plaie ou la lésion après rinçage abondant avec une solution de lavage (eau physiologique)

4.2.4.7 Les expectorations

4.2.4.7.1 Recherche de pathogènes bronchopulmonaires non mycobactéries

La difficulté du diagnostic des infections bronchopulmonaires bactériennes est liée au problème de l'obtention de prélèvements des voies aériennes inférieures non contaminés par la flore oropharyngée. Cette dernière peut masquer les microorganismes responsables d’une infection. De plus, les principales espèces bactériennes (H. influenzae, S. pneumoniae, S. aureus) responsables des pneumopathies communautaires, voire nosocomiales précoces (J3-J5), peuvent être présentes à l’état commensal dans l’oropharynx. C’est pourquoi une attention extrême doit être portée aux conditions de recueil de ces prélèvements. Il faut éviter la présence de salive qui risque de diluer le prélèvement et de le contaminer par des bactéries commensales salivaires (staphylocoques à coagulase négative, streptocoques autres que S. pneumoniae, bactéries corynéformes, Neisseria commensales). Pour remédier à cet écueil important, plusieurs mesures sont préconisées : • recueillir les sécrétions bronchopulmonaires des malades ayant une

pneumopathie grave au moyen de méthodes invasives mais plus fiables telles que le lavage bronchoalvéolaire ;

• les prélèvements dont l’examen microscopique montre une contamination salivaire évidente sont éliminés (présence de cellules épithéliales d’origine buccale, absence de macrophages alvéolaires et/ou de cellules bronchiques) ;

• une analyse quantitative de la flore bactérienne est réalisée. Le recueil de l’expectoration doit respecter un protocole rigoureux : il doit se faire idéalement le matin au lever en dehors de traitement antibiotique après rinçage bucco-dentaire à l’eau physiologique et lors d’un effort de toux dans un pot stérile, aidé si besoin d’une kinésithérapie. Patient ambulant : si le patient ne parvient pas à expectorer sur place, donnez lui un pot stérile, ainsi que sa demande afin qu’il réalise ce prélèvement chez lui, en s’assurant qu’il garde cet échantillon au frais en attendant de l’apporter au



laboratoire. Idéalement, le prélèvement doit être réalisé le matin au lever en dehors de traitement antibiotique Le prélèvement doit être ACHEMINE RAPIDEMENT AU LABORATOIRE, pour éviter la multiplication de la flore commensale (oropharyngée) qui pourrait empêcher l’identification des germes responsables de la pneumopathie. 4.2.4.7.2 Recherche de mycobactéries Expectorations : le recueil des expectorations doit se faire le matin au réveil lors d’un effort de toux pour ramener les sécrétions bronchiques accumulées pendant la nuit, aidé si besoin d’une kinésithérapie. Un volume minimal de 2 ml est nécessaire, le volume optimal étant de 5 ml. Tubage gastrique : Chez les malades qui crachent peu ou pas, le tubage gastrique sera proposé. Il consiste à prélever directement dans l'estomac les sécrétions bronchiques qui ont été dégluties pendant le sommeil. Cette épreuve sera réalisée chez un sujet :

- maintenu à jeun ; - alité depuis la veille au soir ; - le plus tôt possible après le réveil.

Il faut recueillir 5 à 6 ml d'aspiration du liquide gastrique dans un récipient stérile, puis injecter dans l'estomac 20 à 30 ml de sérum physiologique stérile, les réaspirer et les mélanger au contenu de l'aspiration.

4.2.4.8 Les phanères

Le matériel est prélevé sur l’ongle après l’avoir débarrassé de toutes les particules friables, facilement détachables qui doivent être rejetées. Le prélèvement se fait en des endroits où le tissu malade est en contact avec le tissu sain. A l’aide d’un scalpel ou d’une curette tranchante (stérile), on détache de fins copeaux d’ongle que l’on recueille dans un récipient stérile. Les prélèvements peuvent être légèrement humidifiés avec un peu de sérum physiologique

4.2.4.9 Echantillons suspects de grippe

Prélèvement et envoi d’échantillons en cas d’hospitalisation (ou de nécessité d’affiner le diagnostic) d’un patient suspect de virose respiratoire (Influenza A et B, RSV), il existe un kit de prélèvement disponible au laboratoire de bactériologie, au service des urgences et à l’hôpital de jour. • Critères d’infectiosité

>38°C et/ou sensation de fièvre avec prise de paracétamol plus 2 des symptômes suivants :



- Douleurs musculaires, maux de tête - Maux de gorge - Toux - Dyspnée - Autre symptôme respiratoire

• Matériel - 2 écouvillons UTM ou 2 e-swab dont un est destiné à l’envoi à l’ISP, l’autre pour

le secteur de biologie moléculaire ou bactériologie - 2 bons de demande d’analyse : un pour l’envoi à l’ISP, l’autre pour le secteur de

biologie moléculaire ou bactériologie. • Prélèvement 2 frottis naso-pharyngés (confirmation de la demande par l’infectiologue) Prendre des mesures de précaution « additionnelles grippe » (Masque chirurgical, lunettes de protection, gants et blouse à usage unique) - Introduire l’écouvillon dans le conduit nasal postérieur jusqu’à atteindre le naso-

pharynx (environ 7cm de l’arcade chez l’adulte), faire 2 rotations pour récolter un maximum de cellules

- Déposer l’écouvillon dans le tube contenant le milieu de transport, couper la tige qui dépasse au trait

- Fermer hermétiquement le tube contenant l’écouvillon - Etiqueter le tube - Répéter l’opération avec le 2ème écouvillon - Placer les 2 prélèvements dans un sachet fermé hermétiquement, accompagné

des 2 demandes d’analyse (bon bactério interne et le bon pour analyse externe) - Identifier le sachet « Echantillons suspects grippe A/H1N1 » et confier les

prélèvements au laboratoire de microbiologie (secrétariat 3210 – garde 3212 ; resp. Prof. Y. Glupczynski) Ne pas utiliser le télétube (transport pneumatique)

- Désinfection des mains (solution hydro-alcoolique) après manipulation des échantillons.



5 Transport des échantillons et de la demande 5.1 Transport des échantillons

5.1.1 Au sein du CHU

Le(s) prélèvement(s) est(sont) placé(s) dans un sac accompagné du(des) bon(s) de demande (ex : les prélèvements dans une pochette plastique et la demande dans la poche kangourou latérale). Ils sont ensuite déposés au centre de tri du laboratoire ou envoyés via le « Télétube » (transport pneumatique) en interne. Note : - Certains échantillons doivent obligatoirement être déposés au laboratoire et ne

peuvent pas être envoyés par le Télétube (LCR, moëlle, gazométrie,…). - Les prélèvements pour gazométrie peuvent être envoyés au laboratoire par

télétube à la condition que les aiguilles aient été enlevées des seringues de prélèvement, que les seringues soient héparinées et correctement bouchées, qu’elles soient identifiées par un code-barres et accompagnées d’un bon de demande, qu’elles soient placées dans un manchon réfrigéré identifié au nom de l’unité, que l’heure d’envoi soit indiquée sur le bon de demande et que le laboratoire soit prévenu de l’envoi.

- Le transport doit se faire dans les plus brefs délais à température ambiante en tenant compte toutefois des recommandations éventuelles reprises sur le bon de demande.

- Tous les échantillons biologiques sont considérés comme potentiellement infectieux ; il faut donc leur appliquer les mesures préventives de base. Les récipients doivent être hermétiquement fermés et propres.

5.1.2 Du site de Dinant ou de l’extérieurs vers le site Godinne

Les échantillons des sites de prélèvement extérieurs au site Godinne sont acheminés au laboratoire via des transporteurs dans des bacs spécifiques en fonction des conditions de température de transport. La température de transport requise est contrôlée via des sondes. 5.2 Réception au laboratoire

Le site de Dinant réceptionne les échantillons urgents pour analyse et prend en charge l’envoi des prélèvements non urgents vers le site de Godinne. Le laboratoire du site de Godinne réceptionne tous les échantillons au centre de tri ou de prélèvement.



!!! IMPORTANT !!! Le laboratoire ne prend pas la responsabilité de tr aiter des échantillons qui ne sont pas correctement identifiés ou qui ne concorde nt pas avec la demande. Lorsqu'il y a incertitude sur la nature d'un échant illon, le laboratoire contacte le service, le préleveur ou le prescripteur qui décide ra de la suite à donner à la demande reçue. Lorsqu'il y a incertitude sur l’identité du patient , le laboratoire indique une non-conformité sur la demande et l’encode dans le SIL c e qui genère un commentaire sur le protocole. Toute modification d’information sur la demande ou sur l’échantillon ne peut être réalisée par un membre du personnel du laborat oire qu’avec l’aval du prescripteur et sous sa responsabilité.

6 Annexes et documents associés

Documents

QUPRELPR01 - Manuel de prélèvement - Manuel de...analytiques afin d’obtenir les prélèvements dans des conditions optimales pour la réalisation des analyses. 2 Termes et définitions