REF 73 112 06125 - fr - 2006/12 SLIDEX Staph-Kit IVDbiologiemarine.com/___fiches/APIpdf/slidex staph kit_-_06125_-_K_... · bioMérieux SA Français - 1 REF 73 112 06125 K - fr -

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REF 73 112 06125 K - fr - 2006/12SLIDEX® Staph-KitSLIDEX® Staph-Kit est un test rapide d'agglutination de particules de latex et d'hématies pour l'identification des souches de Staphylococcus aureus à partir des milieux d'isolement.

INTRODUCTION ET OBJET DU TEST Les staphylocoques font partie des bactéries les plus fréquemment rencontrées en pathologie humaine. Les infections les plus communes provoquées par Staphylococcus aureus sont cutanées, mais des atteintes sévères (septicémies, endocardites, méningites, pneumonies, ostéomyélites) peuvent être observées en milieu hospitalier (1). La méthode la plus répandue pour l'identification de Staphylococcus aureus a longtemps été la recherche de la coagulase. Ce test est basé sur la capacité des souches de Staphylococcus aureus à produire cette enzyme extra-cellulaire qui coagule le plasma de lapin. Ce test permet ainsi de différencier Staphylococcus aureus des autres espèces de staphylocoques, majoritairement coagulase négative. Cependant, cette méthode nécessite 4 à 24 heures d'incubation. D'autres méthodes, basées sur l'agglutination d'hématies ou de particules de latex, sont actuellement reconnues pour l'identification de Staphylococcus aureus (1, 2). En effet, Staphylococcus aureus possède un récepteur protéique pour un fragment du fibrinogène. Ce récepteur est présent sur 96 % des souches d'origine humaine (3) et sur la plupart des autres biotypes. Certaines souches résistantes aux Pénicillines M ne présentent pas ce facteur d'affinité pour le fibrinogène (4). A la surface de Staphylococcus aureus une protéine, la protéine A, réagit électivement avec le fragment Fc de la plupart des immunoglobulines d'isotype G (IgG). Cette protéine est produite sur tous les milieux mais faiblement sur gélose au sang. Elle est présente sur environ 90 % des souches (5). Enfin, des protéines ou glycoprotéines et des acides téichoïques dont les spécificités antigéniques sont extrêmement variables (1) existent à la surface de Staphylococcus aureus.SLIDEX Staph-Kit permet l’identification des souches de Staphylococcus aureus à partir de milieux d’isolement.

PRINCIPESLIDEX Staph-Kit est un réactif constitué d’un mélange :

- d’hématies de mouton stabilisées, sensibilisées par du fibrinogène et agglutinées lorsqu'elles sont mises en présence d'une souche de Staphylococcus aureusportant le récepteur d’affinité pour le fibrinogène,

- de particules de latex sensibilisées par un anticorps monoclonal (IgG) et agglutinées lorsqu'elles sont mises en présence d'une souche de Staphylococcus aureus portant la protéine A et/ou des antigènes protéiques de surface.

COMPOSITION DU COFFRET POUR 50 TESTS

R1S. aureus (H / L)1 x 1,7 ml Flacon compte-gouttes** à bouchon rouge

Réactif anti-Staphylococcus aureus (prêt à l’emploi, stocker en position verticale) Hématies de mouton sensibilisées par du fibrinogène humain* et latex sensibilisé par un anticorps monoclonal souris anti-Staphylococcus aureus (souris) (merthiolate de sodium 0,13 g/l + azoture de sodium 1 g/l)

R2S. aureus (H / LC )1 x 1,7 ml Flacon compte-gouttes** à bouchon blanc

Réactif contrôle négatif (prêt à l’emploi, stocker en position verticale) Hématies de mouton et latex non sensibilisé (merthiolate de sodium 0,13 g/l + azoture de sodium 1 g/l)

1 notice

* L'absence d'antigène HBs, d'anticorps anti-VIH1, anti-VIH2 et d'anticorps anti-VHC a été vérifiée. Cependant, aucun test ne pouvant apporter une garantie absolue, ce produit doit être manipulé avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux.

** 1 goutte = 0,03 mlBien homogénéiser les réactifs avant utilisation.

MATERIEL NECESSAIRE MAIS NON FOURNI Cartes jetables ou, Lames de verre porte-objets parfaitement propres Oeses plastiques ou bâtonnets jetables Minuteur

PRECAUTIONS D’UTILISATION Pour diagnostic in vitro uniquement. Pour usage professionnel uniquement. Ce coffret contient des composants d'origine humaine. Aucune des méthodes d'analyse actuellement connues ne peut garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible. Il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (se reporter au Manuel de Sécurité Biologique en Laboratoire - OMS - Genève - dernière édition). Ce coffret contient des composants d'origine animale. La maîtrise de l'origine et/ou de l'état sanitaire des animaux ne pouvant garantir de façon absolue que ces produits ne contiennent aucun agent pathogène transmissible, il est recommandé de les manipuler avec les précautions d'usage relatives aux produits potentiellement infectieux (ne pas ingérer ; ne pas inhaler). Les prélèvements, cultures bactériennes et produits ensemencés doivent être considérés comme potentiellement infectieux et doivent être manipulés de façon appropriée. Les techniques aseptiques et les précautions usuelles de manipulation pour le groupe bactérien étudié doivent être respectées tout au long de la manipulation ; se référer à "CLSI/NCCLS M29A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections, Approved Guideline – révision en vigueur". Pour informations complémentaires sur les

IVD

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - fr - 2006/12


précautions de manipulation, se référer à "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH dernière édition," ou à la réglementation en vigueur dans le pays d'utilisation. Ne pas utiliser les réactifs après la date de péremption indiquée sur l’étiquette coffret. Eviter le contact avec les yeux, la peau ou les vêtements.Ne pas intervertir ou mélanger les réactifs de lots différents.Ne pas pipeter à la bouche les réactifs. Ne pas utiliser d'oese métallique pour réaliser le test d'agglutination au latex. Ne pas réutiliser les cartes jetables. Les réactifs du coffret contiennent un conservateur (azoture de sodium), susceptible de réagir avec les tuyauteries en plomb ou en cuivre et de former des azotures métalliques explosifs. Il est recommandé de rincer à l'eau tout rejet. L'interprétation des résultats du test doit être faite en tenant compte du contexte clinique, de l'origine du prélèvement, des aspects macro et microscopiques de la souche et éventuellement des résultats d'autres tests.

CONDITIONS DE STOCKAGE Conserver les réactifs à 2-8°C. Ne pas congeler les réactifs.Si les réactifs ont été congelés accidentellement, ils ne doivent pas être utilisés. Tous les composants sont stables jusqu'à la date de péremption indiquée sur l'étiquette coffret, s'ils sont conservés dans les conditions préconisées.

ECHANTILLONS (prélèvements et préparation) Ensemencer le prélèvement sur un milieu d'isolement sélectif (gélose Chapman, gélose Baird Parker, gélose tellurite glycine) ou non sélectif [(gélose Columbia au sang de mouton (5 %), gélose Trypcase soja avec ou sans sang de mouton (5 %), gélose Mueller Hinton avec ou sans sang de mouton, gélose CLED, gélose BCP, gélose CPS ID] : les performances peuvent varier en fonction du type de milieu utilisé. Une étude interne réalisée sur 191 souches de S. aureus(MRSA et MSSA) et 89 souches de S. non aureus montre une sensibilité identique en fonction du milieu utilisé. L’étude montre également que les résultats de spécificité ne sont pas statistiquement différents en fonction du milieu utilisé (voir tableau ci-dessous). Cependant, il est recommandé d’utiliser les milieux suivants : Gélose Columbia au sang, Columbia ANC + sang, TSA, TSA + sang, CPS et Baird Parker.

Milieu Sensibilité Spécificité

Gélose Columbia au sang Columbia ANC + sang TSATSA + sang CPSBaird Parker

94,2 % 89,5 %

Mueller Hinton Mueller Hinton + sang Tellurite Glycine Agar BCPCLED

94,2 % 88,4 %

Chapman 94,2 % 87,2 %

Après incubation 18-24 heures à 33-37°C, repérer les colonies suspectes. S'assurer dans un premier temps qu'il s'agit bien d'un staphylocoque par les réactions classiques (morphologie, Gram, catalase).

MODE OPERATOIRE 1. Laisser les réactifs à température ambiante (18-25°C)

avant utilisation. 2. Bien remettre en suspension les réactifs. Chasser les

bulles retenues dans les compte-gouttes. 3. Sur une carte jetable ou lame de verre porte-objet

parfaitement propre, dans 2 cercles, déposer : - 1 goutte de R1 (réactif anti-Staphylococcus aureus) ;

- 1 goutte de R2 (réactif contrôle négatif). Veiller à tenir les flacons compte-gouttes vertica-lement lors de la distribution des gouttes.

4. Dans chacune des gouttes, disperser très soigneusement et complètement pendant 10 secondes, 1 à 2 colonies suspectes de taille moyenne issues d’une gélose non sélective ou 3 à 6 colonies très petites issues d’une gélose sélective (ex. : gélose Chapman) à l'aide d'une oese ou d’un bâtonnet jetable.

5. Donner à la lame un léger mouvement de rotation pendant 20 secondes et lire la réaction sous éclairage normal sans utiliser de loupe.

LECTURE ET INTERPRETATION DES RESULTATS Un résultat positif est indiqué par l'apparition dans le réactif R1 d'une agglutination dans les 30 secondes (temps du mélange + temps de rotation de la lame) soit des hématies sensibilisées (coloration rouge), soit des particules de latex (coloration blanche), ou des deux simultanément (coloration rouge orangé). Un résultat négatif est indiqué par l'absence d'agglutination avec les réactifs R1 et R2. La réaction est ininterprétable si le réactif R2 présente une agglutination. L'agglutination des hématies sensibilisées indique la présence de facteur d'affinité pour le fibrinogène. L'agglutination du latex indique que la souche possède la protéine A ou l'antigène contre lequel est dirigé l'anticorps monoclonal. Si l'agglutination est très faible avec le réactif anti-Staphylococcus aureus, si le réactif contrôle est agglutiné ou si des grumeaux sont obtenus, l'identifi-cation de la souche doit alors être effectuée par la recherche de la coagulase ou par l'étude des caractères biochimiques.

CONTROLE DE QUALITE Un contrôle de qualité des réactifs doit être effectué à l'ouverture d'un nouveau coffret avec les souches ci-dessous :

Souches contrôle Hématies Latex recommandées R1 R2 R1 R2

S. aureus ATCC® 25923 + - - - S. epidermidis ATCC® 14990 - - - - S. aureus ATCC® 51153 - - + -

Suivre les étapes de la méthodologie et de la lecture à partir des colonies correspondant aux souches ci-dessus. Les souches servant au contrôle de qualité doivent être cultivées sur les milieux habituellement utilisés au laboratoire.



Une détérioration des réactifs doit être suspectée si : - le réactif R1 n'agglutine pas une souche de

Staphylococcus aureus connue et servant de référence positive ;

- le réactif R1 agglutine une souche de Staphylococcus epidermidis connue et servant de référence négative ;

- les réactifs sont autoagglutinés dans les flacons ; - les réactifs sont contaminés, évaporés ou hémolysés.

Remarque : Il est de la responsabilité de l'utilisateur de s'assurer que le contrôle de qualité est mis en œuvre conformément à la législation locale en vigueur.

LIMITES DU TEST Certaines souches peuvent être difficiles à émulsionner et donner des grumeaux ou des filaments dans le réactif. Ces images ne doivent pas être confondues avec une agglutination. Néanmoins, une agglutination peut être visible entre les grumeaux.

Les réactions peuvent être faussement négatives si : - un nombre insuffisant de colonies est utilisé pour le

test (dans ce cas, il faut effectuer une subculture pour avoir une croissance suffisante) ;

- la souche ne produit pas le facteur d'affinité pour le fibrinogène, la protéine A (gélose sang) ;

- l'antigène contre lequel est dirigé l'anticorps monoclonal est absent.

D'autres tests doivent alors être mis en oeuvre (6). Des réactions positives peuvent être obtenues avec les autres espèces de Staphylococcus qui possèdent habituellement un facteur d'affinité pour le fibrinogèneet/ou une coagulase : S. schleiferi, S. lugdunensis,S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7). Des réactions faussement positives sont possibles avec certaines souches de streptocoques (A, C et G) possédant des sites récepteurs pour les immuno-globulines (8) et pour le fibrinogène (9). Des réactions ininterprétables peuvent être observées avec certaines souches d'entérocoques et de micro-coques. SLIDEX® Staph-Kit ne peut pas être utilisé directement sur hémoculture en raison des interférences possibles avec le fibrinogène et/ou les immunoglobulines apportées par le sang.

PERFORMANCES L'évaluation des réactifs a été menée à partir de souches fraîchement isolées (centres hospitaliers) et à partir de souches congelées dans plusieurs centres hospitaliers et les résultats de l'étude multicentrique ont été publiés (10). Toutes les souches de Staphylococcus ont été confirmées par la coloration de Gram, le test de catalase, la coagulase libre (tube) et éventuellement par identification biochimique. Toutes les souches ont été testées pour leur sensibilité à la méticilline. Dans cette étude, 940 souches de S. aureus et 441 souches de S. non aureus ont été testées. SLIDEX Staph-Kit a été également comparé à deux autres réactifs du commerce. SLIDEX Staph-Kit a présenté la meilleure sensibilité pour les souches de S. aureus résistant à la méticilline (en excluant les résultats ininterprétables).

La sensibilité est de 95,4 % pour les souches MRSA et de 100 % pour les souches MSSA :

S. aureus seul

+ – Intervalle de confiance à 95%

MRSA 523 25 93,2% - 97,0%

MSSA 392 0 99,0% – 100%

Total S. aureus + S. non aureus

Identification S. aureus confirmée

+ –

+ 913 5

– 25 424

SLIDEX Staph-Kit

Ininterprétables 2 12

- SENSIBILITE : 97,3 % (913/938) avec un intervalle de confiance à 95 % : 96,0 % - 98,3 %

- SPECIFICITE : 98,8 % (424/429) avec un intervalle de confiance à 95 % : 97,3% - 99,4 %

ELIMINATION DES DECHETSLes réactifs du coffret contiennent un dérivé mercuriel. Il incombe à chaque laboratoire de gérer les déchets et les effluents qu'il produit selon leur nature et leur dangerosité, et d'en assurer (ou faire assurer) le traitement et l'élimination selon les réglementations applicables.

REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES 1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE

MINOR,M. VERON, Bactériologie médicale, 2ème édition, 1990, Flammarion.

2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for the Staphylococcus aureus identification. Zbl. Bakt. Hyg. Orig., 1981, A251, 171-176.

3. HAJEK V., MARSALEK E. - Evaluation of classificatory criteria for staphylococci. Zbl. Bakt. Hyg. I. Abt. Orig., 1976, Suppt 5, 11-21.

4. LALLY R., WOOLFREY B. - Clumping factor defective methicillin resistant Staphylococcus aureus. Eur. J. Clin. Microbiol., 1984, n° 2, 151-152.

5. FLANDROIS J.P., FLEURETTE J., EYRAUD F. - Détection de la protéine A de Staphylococcus aureus par hémagglutination conditionnée. Ann. Biol. Clin., 1975, 33, 365-368.

6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996. 7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT

F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. - Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcus schleiferi sp nov, two species from human clinical specimens. International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38, 168-172.

8. MYHRE E.B., KRONVALL G. - Binding of murine myeloma proteins of different Ig classes and subclasses for Fr reactive surface structures in Gram positive cocci. Scand. J. Immunol. 1980, 11, 37-46.

9. KRONVALL G., SCHONVECK C., MYHRE E. - Fibrinogen binding structures in -hemolytic streptococci group A, C and G. Acta. Path. Microbiol. Scand. Sect. B, 1979, 87, 303-310.

10. CROIZE J., GIALANELLA P., MONNET D., OKADA J., ORSI A., VOSS A. and MERLIN S. - "Improved identification of Staphylococcus aureus using a new agglutination test : Results of an international study". APMIS, 1993, 100, 487-491.


bioMérieux® SAau capital de 12 029 370 € 673 620 399 RCS LYON

69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com Imprimé en France

bioMérieux, le logo bleu et SLIDEX sont des marques utilisées, déposées et/ou enregistrées appartenant à bioMérieux SA ou à l’une de ses filiales.

TABLE DES SYMBOLES

Symbole Signification

Référence du catalogue

Dispositif médical de diagnostic in vitro

Fabricant

Limites de température

Utiliser jusque

Code du lot

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Contenu suffisant pour "n" tests

ATCC est une marque utilisée, déposée et/ou enregistrée appartenant à American Type Culture Collection.

bioMérieux SA English - 1

REF 73 112 06125 K - en - 2006/12SLIDEX® Staph-KitSLIDEX® Staph-Kit is a rapid latex and red blood cell agglutination test for the identification of Staphylococcus aureusstrains from culture media.

SUMMARY AND EXPLANATION Staphylococci represent one of the bacterial species most frequently encountered in human infections. Skin infections caused by Staphylococcus aureus are the most common human staphylococcal infections, but severe forms (septicemia, endocarditis, meningitis, pneumonia, osteomyelitis) may be observed in the hospital environment (1). For a long time, the coagulase test has been the most widely accepted method for identifying Staphylococcus aureus. It is based on the ability of Staphylococcus aureusstrains to produce the extracellular enzyme coagulase which initiates the clotting of rabbit plasma. This test enables the differentiation of Staphylococcus aureus from other species of staphylococci which are mainly coagulase negative. However, this method requires an incubation period of 4-24 hours. Other agglutination methods using red blood cells or latex particles have also become generally recognized for the identification of Staphylococcus aureus (1, 2). Strains of Staphylococcus aureus possess a protein receptor capable of combining with fibrinogen. This receptor is found in 96% of strains of human origin (3) and in most other biotypes. Certain methicillin-resistant strains do not produce clumping factor (4). Protein A is present on the surface of most Staphylococcus aureus strains. It has an affinity for the Fc fragment of most isotype G immunoglobulins (IgG). Protein A is produced on all media, but in lesser quantities on blood agar plates. It is present in approximately 90% of strains (5). Various proteins or glycoproteins and teichoic acids are present on the surface of Staphylococcus aureus. Their antigenic specificities are extremely variable (1).The SLIDEX Staph-Kit enables the identification of Staphylococcus aureus strains from culture media.

PRINCIPLEThe SLIDEX Staph-Kit reagent is composed of:

- stabilized red blood cells (sheep), sensitized with fibrinogen, and which will agglutinate if the Staphylococcus aureus strain produces clumping factor.

- latex particles, sensitized with monoclonal IgG antibodies, and which will agglutinate if protein A and/or antigenic proteins are present on the surface of the Staphylococcus aureus strain.

CONTENT OF THE KIT (50 TESTS)

R1S. aureus (H / L)1 x 1.7 ml Dropper bottle**with red cap

Anti-Staphylococcus aureus reagent(ready-to-use, store in an upright position) Red blood cells (sheep) sensitized with human fibrinogen* and latex particles sensitized with a monoclonal anti-Staphylococcus aureus antibody (mouse) (0.13 g/l sodium merthiolate + 1 g/l sodium azide)

R2S. aureus (H / LC )1 x 1.7 ml Dropper bottle**with white cap

Negative control reagent (ready-to-use, store in an upright position) Non-sensitized red blood cells (sheep) and latex particles (0.13 g/l sodium merthiolate + 1 g/l sodium azide)

1 package insert

* This product has been tested and shown to be negative for HBs antigen, antibodies to HIV1, HIV2 and HCV. However, since no existing test method can totally guarantee their absence, this product must be treated as potentially infectious. Therefore, usual safety procedures should be observed when handling.

** 1 drop = 0.03 mlShake reagents well before use.

MATERIAL REQUIRED BUT NOT PROVIDED Disposable cards or Clean laboratory glass slides Disposable plastic loops or stirring sticks Timer

WARNINGS AND PRECAUTIONS For in vitro diagnostic use only. For professional use only. This kit contains products of human origin. No known analysis method can totally guarantee the absence of transmissible pathogenic agents. It is therefore recommended that these products be treated as potentially infectious and handled observing the usual safety precautions (see Laboratory biosafety manual - WHO - Geneva - latest edition). This kit contains products of animal origin. Certified knowledge of the origin and/or sanitary state of the animals does not totally guarantee the absence of transmissible pathogenic agents. It is therefore recommended that these products be treated as potentially infectious, and handled observing the usual safety precautions (do not ingest or inhale). All specimens, microbial cultures and inoculated products should be considered infectious and handled appropriately. Aseptic technique and usual precautions for handling the bacterial group studied should be observed throughout this procedure. Refer to "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections, Approved Guideline – Current Revision". For additional information on handling precautions, refer to "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Latest edition", or the current regulations in the country of use.

IVD

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - en - 2006/12


Do not use reagents past the expiration date indicated on the label. Avoid contact with eyes, skin or clothes. Do not interchange or mix reagents from different lots. Do not pipette reagents by mouth. Do not use a metallic loop to perform the latex agglutination test. Do not reuse disposable cards. The reagents contain a preservative (sodium azide). Sodium azide may react with lead and copper plumbing to form highly explosive metal salts. To dispose of reagents properly, flush with large volumes of water to prevent azide build-up. Interpretation of test results should be made taking into consideration the patient's history, the source of the specimen, colonial and microscopic morphology and, if necessary, the results of any other tests performed.

STORAGE CONDITIONS Store all reagents at 2-8°C. Do not freeze the reagents.The reagents should not be used if they have been accidentally frozen. If stored according to the recommended conditions, all components are stable until the expiration date indicated on the box label.

SPECIMEN (collection and preparation) Culture specimens on a selective (Mannitol Salt agar, Baird Parker agar, Tellurite glycine agar) or non selective isolation medium [(Columbia sheep blood agar (5%), Trypcase (trypticase) soy agar with or without sheep blood (5%), Mueller Hinton agar with or without sheep blood, CLED agar, BCP agar, CPS ID agar]. Performance may vary depending on the type of medium used. An internal study carried out on 191 S. aureus strains (MRSA and MSSA) and 89 non-aureus staphylococcal strains shows the same sensitivity regardless of the medium used (see table below). The study also shows that the specificity results are not statistically different from one medium to another (see following table). However, it is recommended to use the following media: Columbia Blood Agar, Columbia CNA + blood, TSA, TSA + blood, CPS and Baird Parker.

Medium Sensitivity Specificity

Columbia blood agar Columbia CNA + blood TSATSA + blood CPSBaird Parker

94.2% 89.5%

Mueller Hinton Mueller Hinton + blood Tellurite Glycine Agar BCPCLED

94.2% 88.4%

Mannitol Salt agar 94.2 % 87.2 %

After 18-24 hours of incubation at 33-37°C, suspect colonies should be tested with the classical methods of Gram stain, morphology and the catalase test, to confirm that they may be staphylococci.

INSTRUCTIONS FOR USE 1. Allow reagents to come to room temperature

(18-25°C) before use. 2. Re-suspend the reagents by mixing. Expel any

remaining reagent in the dropper into bottle and mix again.

3. To a disposable card or a thoroughly cleaned glass slide, add the following : - 1 drop of R1 (anti-Staphylococcus aureus reagent);

- 1 drop of R2 (negative control reagent). Hold the bottles in a vertical position when dispensing the reagents.

4. To each drop, carefully add 1-2 suspect colonies of medium size from a non selective agar or 3-6 very small colonies from a selective agar (e.g. Mannitol Salt agar). Mix well with a bacteriological loop or a Pasteur pipette for 10 seconds.

5. Gently rock the slide for 20 seconds and read the reaction under normal lighting conditions without using a magnifying glass.

READING AND INTERPRETATION A positive result is indicated by the development of an agglutination pattern in the R1 reagent within 30 seconds (time taken to mix the colonies and reagent, then rotate the slide) of the sensitized red blood cells (red coloration), of the latex particles (white coloration), or of both simultaneously (red orange coloration). A negative result is indicated by the absence of agglutination with reagents R1 and R2. The test is uninterpretable if the control reagent (R2) shows agglutination. Agglutination of the sensitized red blood cells indicates the presence of clumping factor. Agglutination of the latex particles indicates the presence of protein A or the specific antigen against which the monoclonal antibody is directed. In the case of very weak agglutination with the anti-Staphylococcus aureus reagent, if the control reagent is agglutinated or if lumping occurs, further identification of the strain must be performed with the tube coagulase test or a biochemical range of tests.

QUALITY CONTROL Quality control of the reagents must be performed each time a new kit is opened, using the following strains:

Recommended Red blood cells Latex Control strains R1 R2 R1 R2


Follow the steps listed under “Instructions for Use” and “Reading and Interpretation” using colonies from the strains listed above. The quality control strains should be grown on the usual media used in the laboratory.



Deterioration of the reagents should be suspected if: - reagent R1 does not agglutinate a known

Staphylococcus aureus strain which is used as a positive reference;

- reagent R1 agglutinates a known Staphylococcus epidermidis strain which is used as a negative reference;

- the reagents have autoagglutinated in the bottles; - the reagents are contaminated or hemolyzed, or have

evaporated. Note:It is the responsibility of the user to perform Quality Control, taking into consideration any applicable local regulations.

LIMITATIONS OF THE METHOD Certain strains may be difficult to emulsify and may show stringiness or lumps in the reagent. This should not be confused with true agglutination. Nevertheless, true agglutination may be visible between the lumps.

False negative reactions will occur if: - an insufficient number of colonies is used for the test.

In this case, the isolate should be subcultured and tested when there is sufficient growth;

- the strain does not produce clumping factor or protein A (blood agar);

- the specific antigen against which the monoclonal antibody is directed is not produced.

Other tests should be used (6). Positive reactions may be found with other species of Staphylococcus which possess clumping factor and/orcoagulase: S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7). False positive reactions may be found with certain strains of streptococci (A, C and G) which possess receptor sites for immunoglobulins (8) and for fibrinogen (9).Uninterpretable reactions may be observed with some strains of enterococci and micrococci. The SLIDEX® Staph-Kit should not be used directly with blood culture broth. False reactions may take place due to interference from fibrinogen and IgG present in the blood.

PERFORMANCE The evaluation of the reagents was performed with fresh hospital isolates and strains frozen in several hospitals. The results of the multicenter study have been published (10).All the Staphylococcus strains were confirmed by Gram stain, catalase test, tube coagulase and discrepancies resolved by biochemical procedures. All the strains were tested for their sensitivity to methicillin. In this study, 940 S. aureus strains and 441 non-aureusstrains were tested. The SLIDEX Staph-Kit was also compared with two other commercially available reagents. The SLIDEX Staph-Kit proved to be more sensitive for methicillin-resistant strains (uninterpretable results were not taken into account).

Sensitivity was shown to be 95.4% for MRSA strains and 100% for MSSA strains:

S. aureus only

+ – 95% Confidence interval

MRSA 523 25 93.2% - 97.0%

MSSA 392 0 99.0% - 100%

Total S. aureus + non S. aureus

Confirmed identification of S. aureus

+ –

+ 913 5

– 25 424

SLIDEX Staph-Kit

Uninterpretable 2 12

- SENSITIVITY: 97.3 % (913/938) with a 95% confidence interval: 96.0% - 98.3%

- SPECIFICITY: 98.8 % (424/429) with a 95% confidence interval: 97.3% - 99.4%

WASTE DISPOSAL The kit reagents contain a mercury derivative.It is the responsibility of each laboratory to handle waste and effluents produced according to their nature and degree of hazardousness and to treat and dispose of them (or have them treated and disposed of) in accordance with any applicable regulations.

LITERATURE REFERENCES 1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE













69280 Marcy-l'Etoile / France Tel. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com Printed in France

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US : Catalog number

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bioMérieux SA Deutsch - 1

REF 73 112 06125 K - de - 2006/12SLIDEX® Staph-KitSLIDEX® Staph-Kit ist ein Agglutinationstest mit Erythrozyten und Latexpartikeln zur schnellen Identifizierung von Staphylococcus aureus von festen Kulturmedien.

EINFÜHRUNG UND TESTERKLÄRUNG Staphylokokken gehören zu den am häufigsten isolierten Bakterien in der Humanmedizin. Zu den häufigsten Krankheitsbildern von Staphylococcus aureus Infektionen gehören Hauterkrankungen, im Hospitalbereich kann es aber auch zu schweren Manifestationen wie Septikämie, Endokarditis, Meningitis, Pneumonie und Osteomyelitis kommen (1). Die Röhrchenkoagulase war lange Zeit der am häufigsten durchgeführte Test zur Identifizierung von Staphylococcus aureus. Er beruht auf dem Nachweis des extrazellulären Enzyms Koagulase von Staphylococcus aureusStämmen, welches Kaninchenplasma koaguliert. Staphylococcus aureus kann auf diese Weise auch von den anderen, hauptsächlich Koagulase-negativen Staphylokokken unterschieden werden. Dieses Verfahren erfordert jedoch eine 4 bis 24-stündige Inkubationszeit. Andere Methoden, die auf der Agglutination von Erythrozyten oder Latexpartikel basieren, sind derzeit zur Identifizierung von Staphylococcus aureus anerkannt (1, 2). Staphylococcus aureus besitzt einen Proteinrezeptor für ein Fibrinogenfragment. Dieser Rezeptor ist bei 96% der Stämme humanen Ursprungs (3) und den meisten anderen Biotypen vorhanden. Einige Methicillin-resistenten Stämme besitzen keine Fibrinogenaffinität (4). Auf der Zelloberfläche von Staphylococcus aureusbefindet sich Protein A mit einer Affinität für das Fc-Fragment der meisten Immunglobuline der Klasse G (IgG). Dieses Protein wird auf allen Medien gebildet, auf Blutagar jedoch in geringerer Menge. Protein A ist bei ca. 90 % der Stämme vorhanden (5). Auf der Zelloberfläche von Staphylococcus aureus befinden sich Proteine oder Glykoproteine und Teichonsäuren mit extrem variabler Antigenspezifität (1). SLIDEX Staph-Kit ermöglicht die Identifizierung von Staphylococcus aureus von festen Kulturmedien.

PRINZIPSLIDEX Staph-Kit enthält:

- stabilisierte Schaferythrozyten, die mit Fibrinogen sensibilisiert sind und in Anwesenheit eines Staphylococcus aureus Stammes mit Clumpingfaktor agglutinieren.

- Latexpartikel, die mit einem monoklonalen Antikörper (IgG) sensibilisiert sind und in Gegenwart eines Staphylococcus aureus Stammes, der Protein A und/oder Oberflächenproteine und -antigen besitzt, agglutinieren.

PACKUNGSINHALT FÜR 50 TESTS

R1S. aureus (H / L)1 x 1,7 ml Tropffläschchen**mit roter Verschlusskappe

anti-Staphylococcus aureus Reagenz(gebrauchsfertig, in aufrechter Position lagern)mit Humanfibrinogen* sensibilisierte Schaf-erythrozyten und mit einem monoklonalen anti-Staphylococcus aureus Maus-Antikörpersensibilisierte Latexpartikel (Natrium-merthiolat 0,13 g/l + Natriumazid 1 g/l)

R2S. aureus (H / LC )1 x 1,7 ml Tropffläschchen**mit weißer Verschlusskappe

Negativkontrolle (gebrauchsfertig, in aufrechter Position lagern)Schaferythrozyten und nicht sensibilisierte Latexpartikel (Natriummerthiolat 0,13 g/l + Natriumazid 1 g/l)

1 Arbeitsanleitung

* Die Abwesenheit von HBs-Antigen, HIV-1, HIV-2 und HCV-Antikörpern wurde überprüft. Da keine Testmethode die Abwesenheit dieser Agenzien völlig gewährleisten kann, muss dieses Produkt als potenziell infektiös betrachtet und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmaß-nahmen sachgemäß behandelt werden.

** 1 Tropfen = 0,03 mlDie Reagenzien vor Gebrauch gut homogenisieren.

ZUSÄTZLICH ERFORDERLICHE MATERIALIEN Einwegkarten oder saubere Glasobjektträger Kunststoffösen oder Einwegrührspatel Stoppuhr

VORSICHTSMASSNAHMEN Nur für die in vitro Diagnostik. Nur für die Verwendung durch Fachkundige bestimmt. Dieser Kit enthält Bestandteile humanen Ursprungs. Bislang gibt es kein bekanntes Verfahren mit dem völlig gewährleistet werden kann, dass diese Produkte keine übertragbaren pathogenen Agenzien enthalten. Es ist empfehlenswert, sie als potenziell infektiös zu betrachten und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen sachgemäß zu behandeln; (siehe Laboratory biosafety manual - WHO - Geneva - neueste Ausgabe). Dieser Kit enthält Bestandteile tierischen Ursprungs. Da durch die Kontrolle der Herkunft und/oder des Gesundheitszustandes der Tiere nicht völlig gewähr-leistet werden kann, dass diese Produkte keine übertragbaren pathogenen Agenzien enthalten, ist es empfehlenswert, diese als potenziell infektiös zu betrachten und unter Beachtung entsprechender Vorsichtsmaßnahmen zu behandeln (nicht einnehmen, nicht einatmen). Die Proben, Mikroorganismen und beimpften Produkte müssen als potenziell infektiös betrachtet und unter Beachtung geeigneter Vorsichtsmaßnahmen sach-gemäß behandelt werden. Während der gesamten Testdurchführung müssen aseptische Arbeitsbe-dingungen und entsprechende Vorsichtsmaßnahmen für die zu untersuchende Keimgruppe eingehalten werden, siehe „CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections, Approved Guideline – aktuelle Revision“. Weitere diesbezügliche Informationen finden Sie in „Biosafety in

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SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - de - 2006/12


Microbiological and Biomedical Laboratories, CDC/NIH – Letzte Ausgabe" oder in den jeweils gültigen Richtlinien. Die Reagenzien nach Ablauf des auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Vermeiden Sie einen Kontakt der Reagenzien mit den Augen, der Haut oder der Kleidung. Reagenzien aus unterschiedlichen Chargen nicht mischen oder austauschen. Die Reagenzien nicht mit dem Mund pipettieren. Verwenden Sie für den Latex-Agglutinationstest keine Metallösen. Gebrauchte Einwegkarten nicht wiederverwenden. Die Reagenzien des Kits enthalten ein Konservierungs-mittel (Natriumazid), das mit Blei- oder Kupferrohren zu explosiven Metallaziden reagieren kann. Beim Ableiten in die Kanalisation sollten die Reagenzien immer mit reichlich Wasser verdünnt werden.Bei der Interpretation der Ergebnisse müssen der klinische Hintergrund, die Probenherkunft, Kolonie- und mikroskopische Morphologie des Stammes sowie gegebenenfalls die Ergebnisse anderer Tests berücksichtigt werden.

LAGERUNGSBEDINGUNGEN Die Reagenzien bei 2-8°C lagern. Die Reagenzien nicht einfrieren. Versehentlich tiefgefrorene Reagenzien dürfen nicht mehr verwendet werden. Unter den vorgeschriebenen Lagerungsbedingungen sind alle Kitbestandteile bis zu dem auf der Verpackung angegebenen Verfallsdatum haltbar.

PROBEN (Gewinnung und Vorbereitung) Inkubieren Sie die Probe auf einen Selektivmedium (Chapman-, Baird Parker-, Tellurit-Glycin-Agar) oder einem nicht selektiven Medium [(Columbia-Agar mit Schafblut (5 %), Trypcase Soja Agar mit oder ohne Schafblut (5 %), Mueller Hinton Agar mit oder ohne Schafblut, CLED Agar, BCP Agar, CPS ID Agar]: Die Leistungsdaten können je nach Medium variieren. In einer internen Studie, die mit 191 S. aureus (MRSA und MSSA) und 89 non-aureus Stämmen durchgeführt wurde, wurden unabhängig von den verwendeten Medien dieselbe Sensitivität errreicht. Die Studie zeigt darüber hinaus für die verschiedenen Medien keine statistische Abweichung in der Spezifität. Es ist dennoch empfehlenswert, folgende Medien zu verwenden: Columbia Blutagar, Columbia CNA-Agar + Blutzusatz, TSA, TSA + Blut, CPS und Baird Parker.

Medium Sensitivität Spezifität

Columbia Agar mit Blut Columbia CNA + Blut TSATSA + Blut CPSBaird Parker

94,2 % 89,5 %

Mueller Hinton Mueller Hinton + Blut Tellurit Glycin Agar BCPCLED

94,2 % 88,4 %

Chapman 94,2 % 87,2 %

Nach 18-24 Stunden Inkubation bei 33-37°C werden die verdächtigen Kolonien mit klassischen Methoden wie Morphologie, Gramfärbung, Katalase-Test überprüft, um den Verdacht auf Staphylokokken zu erhärten.

TESTDURCHFÜHRUNG 1. Die Reagenzien vor Gebrauch auf Raumtemperatur

(18-25°C) bringen. 2. Die Latex-Reagenzien gut aufschütteln. In der Tropf-

pipette befindliche Tropfen gut mit dem Fläschchen-inhalt mischen.

3. Geben Sie auf zwei Felder einer Einwegkarte oder eines sauberen Glasobjektträgers: - 1 Tropfen R1 (anti-Staphylococcus aureus Reagenz)

- 1 Tropfen R2 (Negativkontrolle). Halten Sie die Tropffläschchen beim Auftragen der Reagenzien senkrecht.

4. Geben Sie in jeden Tropfen mit einer Kunststoff-Öse oder einem Einweg-Rührspatel 1 bis 2 verdächtige, mittelgroße Kolonien von einem nicht selektiven Nähragar oder 3 bis 6 sehr kleine Kolonien eines Selektivagars (z.B. Chapman-Medium). Verreiben Sie die Kolonien für 10 sec sehr sorgfältig und vollständig in dem Tropfen.

5. Den Objektträger etwa 20 sec leicht rotierend bewegen und die Reaktion bei normalen Licht-verhältnissen ohne Lupe ablesen.

ABLESUNG UND INTERPRETATION Ein positives Ergebnis liegt vor, wenn in R1 innerhalb von 30 Sekunden (Dauer des Mischens + Rotation des Objektträgers) eine Agglutination der sensibilisierten Erythrozyten (rote Färbung), der Latexpartikel (weiße Färbung) oder beider Reagenzien (rot/orange Färbung) sichtbar wird. Ein negatives Ergebnis wird durch eine fehlende Agglutination in R1 und R2 angezeigt. Die Reaktion ist nicht interpretierbar, wenn das Reagenz R2 agglutiniert. Eine Agglutination der sensibilisierten Erythrozyten zeigt die Anwesenheit von Clumpingfaktor an. Eine Agglutination der Latexpartikel weist auf das Vorhandensein von Protein A oder spezifischen Oberflächenantigenen, gegen die der monoklonale Antikörper auf den Latexpartikeln gerichtet ist, hin. Bei sehr schwacher Agglutination mit dem anti-Staphylococcus aureus Reagenz, wenn das Kontrollreagenz agglutiniert oder bei Klumpenbildung sollte die Identifizierung des Stammes mit der Röhrchenkoagulase oder mit biochemischen Methoden erfolgen.

QUALITÄTSKONTROLLE Für jede neu angebrochene Packung sollte mit folgenden Kontrollstämmen eine Qualitätskontrolle der Reagenzien durchgeführt werden:

empfohlene Kontrollstämme Erythrozyten Latex R1 R2 R1 R2


Gehen Sie gemäß den in den Abschnitten Testdurch-führung und Ablesung angegebenen Arbeitsschritten vor und verwenden Sie Kolonien der oben angegebenen Stämme. Die Kontrollstämme sollten auf den laborüblichen Nährmedien angezüchtet werden.



Anzeichen für einen Verfall der Reagenzien sind: - fehlende Agglutination von R1 mit bekannt positiven

Staphylococcus aureus Referenzstämmen. - Agglutination von R1 mit bekannt negativen

Staphylococcus epidermidis Referenzstämmen. - Autoagglutination der Reagenzien in der Flasche. - Sichtbare Kontamination, Hämolyse oder Ver-

dunstungseffekt. Anmerkung: Es liegt in der Verantwortung des Anwenders, die Qualitätskontrolle in Übereinstimmung mit den jeweils gültigen Vorschriften durchzuführen.

LIMITIERUNGENEinige Stämme sind schwierig zu homogenisieren und können im Reagenz zu Klumpen- oder Filamentbildung führen. Dies darf nicht mit einer Agglutination verwechselt werden. Zwischen den Klümpchen kann jedoch eine Agglutinationsreaktion sichtbar sein.

Falsch negative Reaktionen können auftreten: - wenn zu wenig Keimmaterial vorhanden ist (in diesem

Fall muss der Stamm subkultiviert werden, um genügend Wachstum zu erhalten);

- wenn der Stamm keinen Clumpingfaktor oder kein Protein A (Blutagar) enthält;

- wenn der Stamm keine Antigene bildet, die von dem verwendeten monoklonalen Antikörper erkannt werden.

In diesen Fällen müssen andere Tests durchgeführt werden (6).

Positive Reaktionen können bei folgenden Staphylococcus Spezies auftreten, die normalerweise Clumpingfaktor und/oder Koagulase-positiv sind: S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius , S. delphini, S. hyicus (1, 7).Falsch positive Reaktionen werden bei einigen Streptokokken Stämmen (A, C und G) beschrieben, die Rezeptoren für Immunglobuline (8) und für Fibrinogen (9) besitzen. Nicht interpretierbare Reaktionen können bei einigen Enterokokken und Mikrokokken Stämmen beobachtet werden. SLIDEX® Staph-Kit kann nicht direkt mit Proben aus Blutkulturmedien getestet werden (mögliche Störeinflüsse durch das im Blut vorhandene Fibrinogen und/oder Immunglobuline).

PERFORMANCE Die Evaluierung der Reagenzien wurde mit frischen Isolaten (Krankenhäuser) und Stämmen aus Stammsammlungen mehrerer Krankenhäuser durchgeführt. Die Ergebnisse einer Multicenter-Studie wurden veröffentlicht (10). Alle Staphylococcus Stämme wurden durch Gramfärbung, Katalase, freie Koagulase (Röhrchen) und gegebenenfalls biochemische Identifizierung bestätigt.Alle Stämme wurden auf Methicillin-Resistenz überprüft. In dieser Studie wurden 940 Staphylococcus aureus und 441 S. non aureus Stämme getestet. Der SLIDEX Staph-Kit wurde außerdem mit 2 anderen kommerziellen Tests verglichen. Der SLIDEX Staph-Kit zeigte eine bessere Sensitivität für die Methicillin-resistenten S. aureusStämme (nicht interpretierbare Ergebnisse wurden nicht berücksichtigt).

Die Sensitivität beträgt 95,4% für die MRSA (Methicillin-resistente Staphylococcus aureus Stämme) und 100% für die MSSA (Methicillin-empfindliche Stämme).

Nur S. aureus

+ – 95% Vertrauensbereich

MRSA 523 25 93.2% - 97.0%

MSSA 392 0 99.0% - 100%

S. aureus + S. non aureus gesamt

S. aureus-Identifizierung bestätigt

+ –

+ 913 5

– 25 424

SLIDEX Staph-Kit

nicht interpretierbar

2 12

- SENSITIVITÄT: 97,3 % (913/938) bei einem 95%igen Vertrauensbereich 96,0% - 98.3%

- SPEZIFITÄT: 98,8 % (424/429) bei einem 95%igen Vertrauensbereich: 97.3% - 99,4%

BESEITIGUNG DER ABFÄLLE Die Reagenzien enthalten ein Quecksilberderivat. Es liegt in der Verantwortung jedes Labors, die entstandenen Fest- und Flüssigabfälle gemäß der jeweiligen Risikogruppe zu behandeln und deren Entsorgung in Übereinstimmung mit den gültigen gesetzlichen Bestimmungen sicherzustellen. LITERATUR 1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE













69280 Marcy-l'Etoile / France Tel. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com Gedruckt in Frankreich

bioMérieux, das blaue Logo und SLIDEX sind verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marken von bioMérieux SA oder einer ihrer Niederlassungen

SYMBOLE

Symbol Bedeutung

Bestellnummer

In Vitro Diagnostikum

Hersteller

Temperaturbegrenzung

Verwendbar bis

Chargenbezeichnung

Gebrauchsanweisung beachten

Inhalt ausreichend für Prüfungen

ATCC ist eine verwendete, angemeldete und/oder eingetragene Marke von American Type Culture Collection.

bioMérieux SA Español - 1

REF 73 112 06125 K - es - 2006/12SLIDEX® Staph-KitSLIDEX® Staph-Kit es una prueba rápida de aglutinación de partículas de látex y hematíes para la identificación de cepas de Staphylococcus aureus a partir de los medios de aislamiento.

INTRODUCCION Y OBJETIVO DE LA PRUEBA Los estafilococos forman parte del grupo de bacterias más frecuentemente encontradas en patología humana. Las infecciones más comunes originadas por Staphylococcus aureus son cutáneas, pero también pueden observarse en el medio hospitalario afecciones más severas (septicemias, endocarditis, meningitis, pneumonías, osteomielitis) (1). Durante mucho tiempo el método más utilizado para la identificación de Staphylococcus aureus fue la prueba de la coagulasa. Esta prueba está basada en la capacidad de las cepas de Staphylococcus aureus de producir esta enzima extra-celular que coagula el plasma de conejo. Esta determinación permite por tanto, diferenciar Staphylococcus aureus del resto de las especies de estafilococos, mayoritariamente coagulasa negativo. Sin embargo, este método necesita de 4 a 24 horas de incubación. Actualmente son reconocidos otros métodos, basados en la aglutinación de hematíes o partículas de látex, para la identificación de Staphylococcus aureus (1, 2). Las cepas de Staphylococcus aureus poseen un receptor proteico para un fragmento del fibrinógeno. Este receptor está presente en el 96 % de las cepas de origen humano (3) y en la mayoría del resto de los biotipos. Algunas cepas meticilin-resistentes no presentan este factor de afinidad para el fibrinógeno (4).En la superficie del Staphylococcus aureus una proteína, la proteína A, reacciona selectivamente con el fragmento Fc de la mayoría de las inmunoglogulinas de isotipo G (IgG). Esta proteína se produce en todos los medios pero se produce en menor cantidad en los medios con sangre. Está presente en aproximadamente en el 90 % de las cepas (5). Además existen en la superficie de Staphylococcus aureus,proteínas o glicoproteínas y ácidos teicoicos cuya especificidad antigénica son extremadamente variables (1).SLIDEX Staph-Kit permite la identificación de las cepas de Staphylococcus aureus a partir de los medios de aislamiento.

PRINCIPIOSLIDEX Staph-Kit es un reactivo constituido por una mezcla de :

- Hematíes de cordero estabilizados, sensibilizados con fibrinógeno que aglutinan cuando se ponen en presencia de una cepa de Staphylococcus aureusque posea el receptor de afinidad por el fibrinógeno,

- Partículas de látex sensibilizadas con un anticuerpo monoclonal (IgG) que aglutinan cuando se ponen en presencia de una cepa de Staphylococcus aureus que tenga la proteína A y/o los antígenos proteicos de superficie.

COMPOSICION DEL EQUIPO PARA 50 PRUEBAS

R1S. aureus (H / L)1 x 1,7 ml Frasco cuentagotas** con tapón rojo

Reactivo anti-Staphylococcus aureus (listo al empleo, conservar en posición vertical) Hematíes de cordero sensibilizados con fibrinógeno humano * y látex sensibilizado con anticuerpo monoclonal de ratón anti-Staphylococcus aureus (ratón) (mertiolato sódico 0,13 g/l + azida sódica 1 g/l)

R2S. aureus (H / LC )1 x 1,7 ml Frasco cuentagotas** con tapón blanco

Reactivo control negativo (listo al empleo, conservar en posición vertical) Hematíes de cordero y látex no sensibilizados (mertiolato sódico 0,13 g/l + azida sódica 1 g/l)

1 ficha técnica

* Se ha verficado la ausencia de antígeno HBs, de anticuerpos anti-VIH1, anti-VIH2 y de anticuerpos anti-VHC. Sin embargo, ninguna prueba puede aportar una garantía absoluta, este producto debe manipularse con las precauciones de uso relacionadas con los productos potencialmente infecciosos.

** 1 gota = 0,03 mlHomogeneizar correctamente los reactivos antes de su utilización.

MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO Tarjetas desechable o.

Portas de cristal perfectamente limpios Asas de plástico o bastoncillos desechables Cronómetro

PRECAUCIONES DE UTILIZACION Para diagnóstico in vitro únicamente. Para uso profesional exclusivamente. Este equipo contiene componentes de origen humano. Ningún método de análisis actualmente conocido puede garantizar de forma absoluta que estos productos no contienen ningún agente patógeno transmisible. Se recomienda manipularlos con las precauciones de uso relacionadas con los productos potencialmente infecciosos (consultar Laboratory biosafety manual - OMS - Ginebra – última edición). Este equipo contiene componentes de origen animal. El certificado del origen y/o del estado sanitario de los animales no pueden aportar la garantía absoluta que estos productos no contienen ningún agente patógeno transmisible, se recomienda manipularlos con las precauciones de uso relacionadas con los productos potencialmente infecciosos (no ingerir, no inhalar). Todas las muestras, cultivos microbianos y productos inoculados deben considerarse como potencialmente infecciosos y se manipularán de un modo apropiado. Durante la manipulación, se respetarán las técnicas asépticas y las precauciones usuales de manipulación para el grupo bacteriano estudiado; consultar: "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of

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SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - es - 2006/12


Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections, Approved Guideline – Revisión en vigor". Para obtener informaciones complementarias sobre las precauciones de manipulación, consultar: "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Última edición", o la reglamentación en vigor en el país de utilización. No utilizar los reactivos después de la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del envase. Evitar el contacto con los ojos, la piel o la ropa. No intercambiar o mezclar los reactivos de lotes diferentes. No pipetear con la boca los reactivos. No utilizar un asa metálica para realizar la prueba de aglutinación con látex. No reutilizar las tarjetas desechables. Los reactivos del equipo contienen un conservante (azida sódica), susceptible de reaccionar con las tuberías de plomo o cobre formando azidas metálicas explosivas. Se recomienda enjuagar abundantemente con agua cualquier residuo. La interpretación de los resultados debe hacerse teniendo en cuentra la historia clínica, el origen de la muestra, los aspectos macro y microscópicos de la cepa y eventualmente los resultados de otras pruebas.

CONDICIONES DE CONSERVACION Conservar los reactivos a 2-8°C. No congelar los reactivos.Si los reactivos se han congelado de forma accidental, no deben utilizarse. Todos los componentes son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta del envase, si se conservan en las condiciones recomendadas.

MUESTRAS (recogida de muestra y preparación) Inocular la muestra en un medio de aislamiento selectivo (medio Chapman, medio Baird Parker, agar telurito glicina) o no selectivo [(agar Columbia con sangre de cordero (5 %), agar Trypcase soja con o sin sangre de cordero (5 %), medio Mueller Hinton con o sin sangre de cordero, medio CLED, agar BCP, agar CPS ID] : las prestaciones técnicas pueden variar en función del tipo de medio utilizado. Un estudio interno realizado con 191 cepas de S.aureus (MRSA y MSSA) y 89 cepas de S. no aureusmuestra una sensibilidad idéntica independientemente del medio utilizado. El estudio demuestra igualmente que los resultados de especificidad no son estadísticamente diferentes en función del medio utilizado (ver la siguiente tabla). Sin embargo, se recomienda utilizar los siguientes medios: Medio Columbia con sangre, Columbia ANC + sangre, TSA, TSA + sangre, CPS y Baird Parker.

Medio Sensibilidad Especificidad

Medio Columbia con sangre Columbia ANC + sangre TSATSA + sangre CPSBaird Parker

94,2 % 89,5 %

Mueller Hinton Mueller Hinton + sangre Agar Telurito Glicina BCPCLED

94,2 % 88,4 %

Chapman 94,2 % 87,2 %

Después de incubar de 18-24 horas a 33-37°C, las colonias sospechosas deben ser estudiadas con los métodos clásicos de tinción de Gram, morfología y la catalasa, para confirmar que se trata de un estafilococo.

INSTRUCCIONES DE USO 1. Dejar que los reactivos alcancen la temperatura

ambiente (18-25°C) antes de utilizarlos. 2. Poner correctamente en suspensión los reactivos.

Eliminar las burbujas retenidas en el cuentagotas. 3. En una tarjeta desechable o porta de cristal

perfectamente limpio, depositar en 2 círculos diferentes: - 1 gota de R1 (reactivo anti-Staphylococcus aureus) ;

- 1 gota de R2 (reactivo control negativo). Mantener la posición vertical de los frascos cuentagotas durante la distribución de las gotas.

4. En cada una de las gotas, añadir cuidadosamente 1-2 colonias sospechosas de tamaño medio aisladas a partir de un medio no selectivo o de 3-6 colonias de tamaño muy pequeño aisladas a partir de un medio selectivo (ej. Medio Chapman). Mezclar bien con un asa o con un bastoncillo desechable.

5. Dar al porta un ligero movimiento de rotación durante 20 segundos y leer la reacción con luz normal sin utilizar lupa.

LECTURA E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Un resultado positivo viene indicado por la aparición en el reactivo R1 de una aglutinación en 30 segundos (tiempo de realizar la mezcla + tiempo de rotación del porta) bien en los hematíes sensibilizados (color rojo), o bien en las partículas de látex (color blanco), o en ambos simultáneamente (color rojo anaranjado). Un resultado negativo viene indicado por la ausencia de aglutinación con los reactivos R1 y R2. La reacción es ininterpretable si el reactivo R2 presenta una aglutinación. La aglutinación de los hematíes sensibilizados indica la presencia del factor de afinidad por el fibrinógeno. La aglutinación del látex indica que la cepa posee la proteína A o el antígeno contra el cual está dirigido el anticuerpo monoclonal. Si la aglutinación es muy débil con el reactivo anti-Staphylococcus aureus, si el reactivo control está aglutinado o si se obtienen grumos, la identificación de la cepa debe efecturarse por la detección de la coagulasa o por el estudio de las características bioquímicas.



CONTROL DE CALIDAD Cada vez que se abra un nuevo equipo debe efectuarse un control de calidad de los reactivos con las siguientes cepas:

Cepas control Hematíes Látex recomendadas R1 R2 R1 R2


Realizar las etapas de metodología y de lectura a partir de las colonias correspondientes a las cepas citadas anteriormente. Las cepas que sirven de control de calidad deben cultivarse en los medios habitualmente utilizados en el laboratorio.

Se debe sospechar un deterioro de los reactivos si : - el reactivo R1 no aglutina una cepa de

Staphylococcus aureus conocida y usada como referencia positiva ;

- el reactivo R1 aglutina una cepa de Staphylococcus epidermidis conocida y usada como referencia negativa;

- los reactivos están autoaglutinados en los frascos; - los reactivos están contaminados, evaporados o

hemolizados. Advertencia : Es responsabilidad del usuario garantizar que el control de calidad se realiza conforme con la normativa local en vigor.

LIMITES DE LA PRUEBA Algunas cepas pueden ser difíciles de emulsionar y formar grumos o filamentos con el reactivo. Estas imágenes no deben confundirse con una aglutinación. Sin embargo, puede ser visible una aglutinación entre los grumos.

Las reacciones pueden dar un resultado falso negativo si : - si se utiliza un número insuficiente de colonias para

realizar la prueba (en este caso, debe efectuarse un subcultivo para obtener un crecimiento suficiente) ;

- la cepa no produce el factor de afinidad para el fibrinógeno, la proteína A (medio con sangre) ;

- el antígeno contra el cual va dirigido el anticuerpo monoclonal se encuentra ausente.

Deberían realizarse otras pruebas (6). Pueden obtenerse reacciones positivas con otras especies de Staphylococcus que poseen habitualmente un factor de afinidad por el fibrinógeno y/o una coagulasa: S. schleiferi, S. lugdunensis,S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7). Es posible obtener reacciones falsas positivas con algunas cepas de estreptococos (A, C y G) que poseen sitios receptores para las inmunoglogulinas (8) y para el fibrinógeno (9). Pueden observarse reacciones no interpretables con algunas cepas de enterococos y micrococos. SLIDEX® Staph-Kit no puede utilizarse con hemocultivos debido a las posibles interferencias con el fibrinógeno y/o las inmunoglobulinas incluidas en la sangre.

PRESTACIONES TECNICAS La evaluación de los reactivos se ha realizado a partir de cepas recién aisladas (centros hospitalarios) y a partir de cepas congeladas en varios centros hospitalarios y los resultados obtenidos en el estudio multicéntrico han sido publicados (10). Todas las cepas de Staphylococcus han sido confirmadas mediante la tinción de Gram, la prueba de la catalasa, la coagulasa libre (en tubo) y eventualmente por identificación bioquímica. En todas las cepas se estudió su sensibilidad frente a la meticilina. En este estudio, se analizaron 940 cepas de S. aureusy 441 cepas de S. no aureus. SLIDEX Staph-Kit fue también comparado con otros dos reactivos comercializados. SLIDEX Staph-Kit presentó la mejor sensibilidad para las cepas de S. aureus resistente a la meticilina (excluyendo los resultados no interpretables).

La sensibilidad es del 95,4 % para las cepas MRSA y del 100 % para las cepas MSSA :

S. aureus únicamente

+ – Intervalo de confianza del 95%

MRSA 523 25 93,2% - 97,0%

MSSA 392 0 99,0% – 100%

Total S. aureus + S. no aureus

Identificación confirmada de S. aureus

+ –

+ 913 5

– 25 424

SLIDEX Staph-Kit

No interpretable 2 12

- SENSIBILIDAD: 97,3 % (913/938) con un intervalo de confianza del 95 % : 96,0 % - 98,3 %

- ESPECIFICIDAD : 98,8 % (424/429) con un intervalo de confianza del 95 % : 97,3% - 99,4 %

ELIMINACION DE RESIDUOSLos reactivos del equipo contienen un derivado de mercurio.Es responsabilidad de cada laboratorio gestionar los residuos y los efluentes que producen según su naturaleza y su peligrosidad, y garantizar (o hacer garantizar) el tratamiento y la eliminación según la normativa aplicable.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE


2. FLANDROIS J.P., CARRET G. - Study of the staphylococcal affinity to fibrinogen by passive hemagglutination : a tool for the Staphylococcus aureusidentification. Zbl. Bakt. Hyg. Orig., 1981, A251, 171-176.




6. VANDENESCH et al. - The Lancet, 1993, 342, 995-996.



69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com Impreso en Francia

bioMérieux, el logo azul y SLIDEX son marcas utilizadas, depositadas y/o registradas pertenecientes a bioMérieux SA o a cada una de sus filiales.

7. FRENEY J., BRUN Y., BES M., MEUGNIER H., GRIMONT F., GRIMONT P.A.D., NERVI C., FLEURETTE J. - Staphylococcus lugdunensis sp nov and Staphylococcusschleiferi sp nov, two species from human clinical specimens. International Journal of Systematic Bacteriology, 1988, 38, 168-172.




TABLA DE SIMBOLOS

Símbolo Significado

Número de referencia

Producto sanitario para diagnóstico in vitro

Fabricante

Límite de temperatura

Fecha de caducidad

Número de lote

Consultar las instrucciones de utilización

Contenido suficiente para ensayos

ATCC es una marca utilizada, depositada y/o registrada perteneciente a American Type Culture Collection.

bioMérieux SA Italiano - 1

REF 73 112 06125 K - it - 2006/12SLIDEX® Staph-KitSLIDEX® Staph-Kit è un test rapido di agglutinazione di particelle di lattice e di emazie per l'identificazione dei ceppi di Staphylococcus aureus partendo dai terreni di isolamento.

INTRODUZIONE E OBIETTIVO DEL TEST Gli stafilococchi fanno parte dei batteri riscontrati più frequentemente nelle patologie umane. Le infezioni più comuni provocate dallo Staphylococcus aureus sono a livello cutaneo, ma in ambito ospedaliero possono essere osservate patologie di notevole gravità (setticemie, endocarditi, meningiti, polmoniti, osteomieliti) (1). Il metodo più diffuso per l'identificazione dello Staphylococcus aureus è stato per molto tempo la ricerca della coagulasi. Questo test si basa sulla capacità dei ceppi di Staphylococcus aureus di produrre questo enzima extra-cellulare che coagula il plasma di coniglio. Questo test permette dunque di differenziare lo Staphylococcus aureus dalle altre specie di stafilococchi, che sono principalmente coagulasi negativi. Tuttavia questo metodo necessita dalle 4 alle 24 ore d'incubazione. Attualmente per la ricerca dello Staphylococcus aureusvengono utilizzate anche altre tecniche, basate sull’agglutinazione di emazie o di particelle di lattice (1, 2). In effetti, lo Staphylococcus aureus possiede un recettore proteico per un frammento del fibrinogeno. Questo recettore è presente sul 96 % dei ceppi di origine umana (3) e sulla maggior parte degli altri biotipi. Alcuni ceppi resistenti alle Penicilline M non presentano questo fattore di affinità per il fibrinogeno (4). Sulla superficie dello Staphylococcus aureus una proteina, la proteina A, reagisce elettivamente con il frammento Fc della maggior parte delle immunoglobuline dell'isotipo G (IgG). Questa proteina viene prodotta su tutti i terreni, ma debolmente su agar al sangue ed è presente nel 90 % dei ceppi (5). Infine, sulla superficie dello Staphylococcus aureus sono presenti proteine, glicoproteine e acidi teicoici le cui specifiche antigeniche sono estremamente variabili(1) SLIDEX Staph-Kit permette l’identificazione dei ceppi di Staphylococcus aureus a partire da terreni di isolamento.

PRINCIPIOSLIDEX Staph-Kit è un reattivo costituito da una miscela :

- di emazie di montone stabilizzate, sensibilizzate con fibrinogeno, che agglutinano in presenza di un ceppo di Staphylococcus aureus portatore del recettore di affinità per il fibrinogeno,

- di particelle di lattice, sensibilizzate con un anticorpo monoclonale (IgG), che agglutinano in presenza di un ceppo di Staphylococcus aureus portatore della proteina A e/o degli antigeni proteici di superficie.

COMPOSIZIONE DELLA CONFEZIONE DA 50 TEST

R1S. aureus (H / L)1 x 1,7 ml Flacone conta-gocce** con tappo rosso

Reattivo anti-Staphylococcus aureus (pronto per l’uso, conservare in posizione verticale) Emazie di montone sensibilizzate con fibrinogeno umano* e lattice sensibilizzato con anticorpi monoclinali di topo anti-Staphylococcus aureus (topo) (mertiolato di sodio 0,13 g/l + sodio azide 1 g/l)

R2S. aureus (H / LC )1 x 1,7 ml Flacone conta-gocce** con tappo bianco

Reattivo di controllo negativo (pronto per l’uso, conservare in posizione verticale) Emazie di montone e lattice non sensibilizzato(mertiolato di sodio 0,13 g/l + sodio azide 1 g/l)

1 scheda tecnica

* E' stata verificata l'assenza di antigene HBs, di anticorpi anti-HIV1, anti-HIV2 e di anticorpi anti-HCV. Tuttavia, poiché nessun test può darne garanzia assoluta, questo prodotto deve essere manipolato con le precauzioni d'uso relative ai prodotti potenzialmente infettivi.

** 1 goccia = 0,03 mlOmogenizzare bene i reattivi prima dell’uso.

MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO Cartoncini monouso o,

Vetrini porta-oggetto perfettamente puliti Anse di plastica o bastoncini monouso Contaminuti

AVVERTENZE E PRECAUZIONI Unicamente per diagnostica in vitro.Esclusivamente per uso professionale. Questa confezione contiene componenti di origine umana. Poiché nessuno dei metodi di analisi attualmente conosciuti può garantire in maniera assoluta che questi prodotti non contengano nessun agente patogeno trasmissibile, si raccomanda di manipolarli con le precauzioni d'uso riservate ai prodotti potenzialmente infettivi. (consultare Laboratory biosafety manual - WHO – Geneva - ultima edizione). Questa confezione contiene dei componenti di origine animale. Poiché i controlli sull’origine e/o sullo stato sanitario degli animali non possono garantire in maniera assoluta che questi prodotti non contengano nessun agente patogeno trasmissibile, si raccomanda di manipolarli con le precauzioni d’uso relative ai prodotti potenzialmente infettivi (non ingerire, non inalare). I prelievi, le colture batteriche ed i prodotti seminati devono essere considerati come potenzialmente infettivi e devono essere manipolati in maniera appropriata. Le tecniche di asepsi e le precauzioni d’uso per il gruppo batterico studiato devono essere rispettate durante tutta la manipolazione; fare riferimento a "CLSI/NCCLS M29-A, Protection of Laboratory Workers from Occupationally Acquired Infections, Approved Guideline - Revisione in vigore". Per ulteriori informazioni sulle precauzioni di manipolazione, consultare "Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories – CDC/NIH – Ultima

IVD

SLIDEX® Staph-Kit 06125 K - it - 2006/12


edizione", oppure fare riferimento alla normativa vigente nel Paese. Non utilizzare i reattivi dopo la data di scadenza indicata sull’etichetta della confezione. Evitare il contatto con gli occhi, la pelle o gli indumenti. Non invertire o mescolare reattivi di lotti differenti. Non pipettare i reattivi con la bocca. Non utilizzare anse metalliche per eseguire il test di agglutinazione al lattice. Non riutilizzare i cartoncini monouso. I reattivi della confezione contengono un conservante (sodio azide), suscettibile di reagire con le tubature in piombo o in rame formando azidi metalliche esplosive. Per prevenirne la formazione, si consiglia di sciacquare con acqua dopo ogni rigetto. L'interpretazione dei risultati del test deve essere fatta tenendo conto del contesto clinico, dell’origine del prelievo, degli aspetti macro e microscopici ed, eventualmente, dei risultati di altri test.

CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE Conservare i reattivi a 2-8°C. Non congelare i reattivi.Non utilizzare i reattivi che siano stati accidentalmente congelati. Tutti i componenti, se correttamente conservati alle condizioni prescritte, sono stabili fino alla data di scadenza indicata sull'etichetta della confezione.

CAMPIONI (prelievo e preparazione) Seminare il prelievo su un terreno di isolamento selettivo (agar Chapman, agar Baird Parker, agar tellurito glicina) o non selettivo [agar Columbia al sangue di montone (5 %), agar Tripticasi soia con o senza sangue di montone (5 %), agar Mueller Hinton con o senza sangue di montone, agar CLED, agar BCP, agar CPS ID] : le performance possono variare in funzione del tipo di terreno utilizzato. Uno studio interno realizzato su 191 ceppi di S. aureus(MRSA e MSSA) e su 89 ceppi di S. non aureus mostra una sensibilità identica indipendentemente dal terreno utilizzato. Lo studio mostra inoltre che i risultati della specificità non sono statisticamente differenti se vengono utilizzati terreni di coltura differenti (vedere la tabella sotto riportata). Tuttavia si raccomanda di utilizzare i seguenti terreni : Agar Columbia al sangue, Columbia CNA + sangue, TSA, TSA + sangue, CPS e Baird Parker.

Terreno Sensibilità Specificità

Agar Columbia al sangue Columbia CNA + sangue TSATSA + sangue CPSBaird Parker

94,2 % 89,5 %

Mueller Hinton Mueller Hinton + sangue Agar Tellurito Glicina BCPCLED

94,2 % 88,4 %

Chapman 94,2 % 87,2 %

Dopo 18-24 ore di incubazione a 33-37°C, prelevare le colonie sospette. Assicurarsi che si tratti realmente di uno stafilococco avvalendosi delle tecniche classiche (morfologia, Gram, catalasi).

PROCEDIMENTO1. Lasciare i reattivi a temperatura ambiente (18-25°C)

prima dell’uso. 2. Omogeneizzare accuratamente i reattivi al lattice.

Eliminare le bolle contenute nel conta-gocce. 3. Deporre in 2 campi di reazione di un cartoncino

monouso o di un vetrino porta-oggetto perfettamente pulito : - 1 goccia di R1 (reattivo anti-Staphylococcus aureus);

- 1 goccia di R2 (reattivo di controllo negativo). Tenere i flaconi conta-gocce verticalmente durante

la distribuzione delle gocce.4. Emulsionare accuratamente e completamente per 10

secondi In ciascuna goccia 1-2 colonie sospette di media grandezza da un terreno nutritivo o 3-6 colonie molto piccole da un terreno selettivo (per es.: agar Chapman) con un’ansa o un bastoncino monouso.

5. Imprimere al cartoncino un leggero movimento rotatorio per 20 secondi e leggere sotto una luce normale senza utilizzare lampade.

LETTURA E INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI Un risultato positivo è indicato dalla comparsa nel reattivo R1 di una agglutinazione entro 30 secondi (tempo del mescolamento + tempo di rotazione del vetrino) delle emazie sensibilizzate (colorazione rossa), delle particelle di lattice (colorazione bianca), o di entrambi simultaneamente (colorazione rosso arancio). Un risultato negativo è indicato dall’assenza di agglutinazione con i reattivi R1 ed R2. Reazione è ininterpretabile se il reattivo R2 presenta un’agglutinazione. L'agglutinazione delle emazie sensibilizzate indica la presenza del fattore di affinità per il fibrinogeno. L'agglutinazione del lattice indica che il ceppo possiede la proteina A o l'antigene contro cui è diretto l'anticorpo monoclonale. In caso di agglutinazione estremamente debole con il reattivo anti-Staphylococcus aureus, di agglutinazione del reattivo di controllo o di formazione di grumi, l’identificazione del ceppo deve essere effettuata mediante la ricerca della coagulasi o con lo studio delle caratteristiche biochimiche.

CONTROLLO DI QUALITÀ Un controllo di qualità dei reattivi deve essere effettuato all’apertura di una nuova confezione con i ceppi seguenti:

Ceppi di controllo Emazie Lattice raccomandati R1 R2 R1 R2


Seguire le tappe del procedimento e della lettura utilizzando le colonie corrispondenti ai ceppi sopra indicati. I ceppi che servono al controllo di qualità devono essere coltivati sui terreni abitualmente utilizzati dal laboratorio.



E’ possibile che i reattivi siano deteriorati se : - il reattivo R1 non agglutina più un ceppo di

Staphylococcus aureus conosciuto ed utilizzato come riferimento positivo ;

- il reattivo R1 agglutina un ceppo de Staphylococcus epidermidis conosciuto ed utilizzato come riferimento négativo ;

- i reattivi si sono autoagglutinati nei flaconi ; - i reattivi sono contaminati, evaporati o emolizzati.

Nota : E’ responsabilità dell'utilizzatore assicurare che il controllo di qualità corrisponda a quanto previsto dalla legislazione locale vigente.

LIMITI DEL METODO Alcuni ceppi possono essere difficili da emulsionare e dare grumi o filamenti nel reattivo. Queste condizioni non devono essere confuse con un’agglutinazione. Tuttavia, un’agglutinazione può essere visibile tra i grumi.

Le reazioni possono risultare falsamente negative se: - viene utilizzato un numero insufficiente di colonie (in

questo caso, occorre eseguire una subcoltura per ottenere una crescita sufficiente) ;

- il ceppo non produce il fattore di affinità per il fibrinogeno e la proteine A (agar al sangue) ;

- l'antigene contro cui è diretto l'anticorpo monoclonale è assente.

Nei suddetti casi occorre eseguire altri test (6). Reazioni positive possono essere ottenute con altre specie di Staphylococcus che possiedono abitualmente un fattore d'affinità per il fibrinogeno e/o una coagulasi: S. schleiferi, S. lugdunensis, S. intermedius, S. delphini, S. hyicus (1, 7). Reazioni falsamente positive sono possibili con alcuni ceppi di streptococchi (A, C e G) che possiedono siti recettori per le immunoglobuline (8) e per il fibrinogeno (9).Reazioni non interpretabili possono essere osservate con alcuni ceppi di enterococchi e di micrococchi. SLIDEX® Staph-Kit non può essere utilizzato direttamente sulle emocolture a causa delle possibili interferenze con il fibrinogeno e/o le immunoglobuline presenti nel sangue.

PERFORMANCE La performance dei reattivi è stata valutata su ceppi isolati di fresco (centri ospedalieri) e da ceppi congelati di più centri ospedalieri; i risultati dello studio multicentrico sono stati pubblicati (10). Tutti i ceppi di Staphylococcus sono stati confermati con la colorazione di Gram, con il test della catalasi, con la coagulasi libera (in provetta) ed, eventualmente, con l’identificazione biochimica. Tutti i ceppi sono stati saggiati per la sensibilità alla meticillina. In questo studio sono stati esaminati 940 ceppi di S.aureus e 441 ceppi di S. non aureus. SLIDEX Staph-Kit è stato inoltre comparato a due altri reattivi del commercio. SLIDEX Staph-Kit ha presentto la migliore sensibilità con i ceppi di S. aureus resistenti alla meticillina (escludendo i risultati non interpretabili).

La sensibilità è del 95,4 % per i ceppi MRSA e del 100 % per i ceppi MSSA :

Solo S. aureus

+ – Intervallo di confidenza al 95%

MRSA 523 25 93,2% - 97,0%

MSSA 392 0 99,0% – 100%

Totale S. aureus + S. non aureus

Identificazioni confermate di S. aureus

+ –

+ 913 5

– 25 424

SLIDEX Staph-Kit

Non interpretabili

2 12

- SENSIBILITA’ : 97,3 % (913/938) con un intervallo di confidenza al 95 % : 96,0 % - 98,3 %

- SPECIFICITA’ : 98,8 % (424/429) con un intervallo di confidenza al 95 % : 97,3% - 99,4 %

SMALTIMENTO DEI RIFIUTI I reattivi della confezione contengono un derivato mercuriale.E’ responsabilità di ogni laboratorio gestire i rifiuti e gli effluenti prodotti a seconda della loro natura e della loro pericolosità ed assicurarne (o farne assicurare) il trattamento e lo smaltimento conformemente alla legislazione vigente. RIFERIMENTI BIBLIOGRAFICI 1. FLEURETTE J. - Staphylocoques et microcoques in L. LE













69280 Marcy-l'Etoile / France Tél. 33 (0)4 78 87 20 00 Fax 33 (0)4 78 87 20 90 http://www.biomerieux.com Stampato in Francia

bioMérieux, il logo blu e SLIDEX sono marchi utilizzati, depositati e/o registrati di proprietà di bioMérieux SA o di una delle sue filiali.

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Dispositivo medico-diagnostico in vitro

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ATCC è un marchio utilizzato, depositato e/o registrato di proprietà di American Type Culture Collection.

bioMérieux SA Português - 1

REF 73 112 06125 K - pt - 2006/12SLIDEX® Staph-KitSLIDEX® Staph-Kit é um teste rápido de aglutinação de partículas de látex e de hemácias para a identificação de estirpes/cepas de Staphylococcus aureus a partir de meios de isolamento.

INTRODUÇÃO E OBJECTIVO DO TESTE Os estafilococos fazem parte das bactérias que se encontram com mais frequência em patologia humana. As infecções mais comuns provocadas por Staphylococcus aureus são cutâneas, mas podem também observar-se infecções severas (septicémias, endocardites, meningites, pneumonias, osteomielites) em meio hospitalar (1). O método que foi durante mais tempo escolhido para a identificação de Staphylococcus aureus foi a pesquisa da coagulase. Este teste baseia-se na capacidade das estirpes/cepas de Staphylococcus aureus produzirem esta enzima extra-ceclular que coagula o plasma de coelho. Este teste permite assim diferenciar Staphylococcus aureus das outras espécies de estafilococos, maioritariamente, coagulase negativa. No entanto, este método necessita de 4 a 24 horas de incubação. Outros métodos, baseados na aglutinação de hemácias ou de partículas de látex, são actualmente reconhecidos para a identificação de Staphylococcus aureus (1, 2). Com efeito, Staphylococcus aureus possui um receptor proteico para um fragmento do fibrinogénio. Este receptor apresenta-se em 96% das estirpes/cepas de origem humana (3) e, na maioria dos outros biotipos. Algumas estirpes/cepas resistentes às Penicilinas M não apresentam este factor de afinidade para o fibrinogénio (4).Uma proteína de superfície do Staphylococcus aureus, a proteína A, reage electivamente com o fragmento Fc da maioria das imunoglobulinas de isotipo G (IgG). Esta proteína é produzida em todos os meios, mas diminutamente na gelose de sangue. Está presente em cerca de 90% das estirpes/cepas (5). Enfim, as proteínas ou glicoproteínas e os ácidos teicóicos cujas especificidades antigénicas são extremamente variáveis (1) existem na superfície de Staphylococcus aureus.O SLIDEX Staph-Kit permite a identificação das estirpes/cepas de Staphylococcus aureus a partir de meios de isolamento.

PRINCÍPIOSLIDEX Staph-Kit é um reagente constituído por uma mistura:

- Hemácias de carneiro estabilizadas, sensibilizadas por fibrinogénio e aglutinadas quando colocadas na presença de uma estirpe/cepa de Staphylococcus aureus que contém o receptor de afinidade para o fibrinogénio,

- Partículas de látex sensibilizadas por um anticorpo monoclonal (IgG) e aglutinadas quando colocadas na presença de uma estirpe/cepa de Staphylococcus aureus que contém a proteína A e/ou antigénios proteicos de superfície.

COMPOSIÇÃO DA EMBALAGEM PARA 50 TESTES R1S. aureus (H / L)1 x 1,7 ml Frasco com conta-gotas** de tampa vermelha

Reagente anti-Staphylococcus aureus (pronto a usar, armazenar em posição vertical) Hemácias de carneiro sensibilizadas por fibrinogénio humano* e látex sensibilizado por anticorpo monoclonal de rato anti-Staphylococcus aureus (rato) (mertiolato de sódio 0,13 g/l + azida sódica 1 g/l)

R2S. aureus (H / LC )1 x 1,7 ml Frasco com conta-gotas** de tampa branca

Reagente de controlo negativo (pronto a usar, armazenar em posição vertical) Hemácias de carneiro e látex não sensibilizado (mertiolato de sódio 0,13 g/l + azida sódica 1 g/l)

Documents

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