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RENNAN LUIZ OLIVEIRA DOS SANTOS
Estudo da eficincia bactericida do biocida policloreto de
dialildimetilamnio
em materiais usados para confeco de prteses orais e faciais
So Paulo
2016
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RENNAN LUIZ OLIVEIRA DOS SANTOS
Estudo da eficincia bactericida do biocida policloreto de
dialildimetilamnio
em materiais usados para confeco de prteses orais e faciais
Verso corrigida
Dissertao apresentada Faculdade de Odontologia da Universidade
de So Paulo para a obteno do titulo de Mestre em Cincias
Odontolgicas. rea de Concentrao: Prtese Bucomaxilofacial.
Orientador: Prof. Dr. Reinaldo Brito e Dias.
So Paulo
2016
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Autorizo a reproduo e divulgao total ou parcial deste trabalho,
por qualquer meio convencional ou eletrnico, para fins de estudo e
pesquisa, desde que citada a fonte.
Catalogao-na-Publicao Servio de Documentao Odontolgica
Faculdade de Odontologia da Universidade de So Paulo
Santos, Rennan Luiz Oliveira dos.
Estudo da eficincia bactericida do biocida policloreto de
dialildimetilamnio em materiais usados para confeco de prteses
orais e faciais / Rennan Luiz Oliveira dos Santos ; orientador
Reinaldo Brito e Dias. -- So Paulo, 2016.
109 p. : fig., tab.; 30 cm.
Dissertao (Mestrado) -- Programa de Ps-Graduao em Cincias
Odontolgicas. rea de Concentrao: Prtese Bucomaxilofacial. --
Faculdade de Odontologia da Universidade de So Paulo.
Verso corrigida
1. Polmeros. 2. Elastmeros de silicone. 3. Materiais. I. Dias,
Reinaldo Brito e. II. Ttulo.
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Santos RLO. Estudo da eficincia bactericida do biocidas
policloreto de dialildimetilamnio
em materiais usados para confeco de prteses orais e faciais.
Dissertao apresentada
Faculdade de Odontologia da Universidade de So Paulo para obteno
do ttulo de Mestre
em Cincias Odontolgicas.
Aprovado em: / /2016
Banca Examinadora
Prof(a).
Dr(a).______________________________________________________
Instituio: ________________________Julgamento:
______________________
Prof(a).
Dr(a).______________________________________________________
Instituio: ________________________Julgamento:
______________________
Prof(a).
Dr(a).______________________________________________________
Instituio: ________________________Julgamento:
______________________
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Aos meus amados pais, Maria de Ftima da Silva Santos e Luiz Jos
dos
Santos Filho, que sempre me encheram de amor, luz e paz.
Ao meu irmo, Ruan Henrique Oliveira dos Santos, companheiro de
muitas
aventuras e testemunha do que fomos, do que somos e do que
iremos ser.
Ao meu av e minhas avs; Oliveira Celerino e Maria Otelina ,em
memoria, e
Arlete Gomes; por todos os cuidados, por todos os "xeros" e por
tudo construdo na
famlia.
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AGRADECIMENTOS
Comeo esses agradecimentos parafraseando Geraldo Vandr:
"Prepare seu corao para as coisas que eu vou contar. Eu venho l
do serto, eu
venho do serto. Eu venho l do serto e posso no lhe agradar."
Como bom Pernambucano e orgulhoso dessa origem, no poderia
fazer
diferente... Agradecerei em forma de Cordel.
Lembro-me bem do final da faculdade
Do dia da aprovao na USP e desse novo comear
Terminar esse ciclo
de fazer qualquer "cabra" se emocionar
Comeo agradecendo
A quem mais devo ateno
A Deus, meu grande Deus
Que nunca me deixou na mo
Sem ti
No sei como seria
A vida seria mais feia
E o cu sem alegria
Obrigado, meu bom Deus.
Pois tu fostes o principal disso tudo
A minha vida devo a ti
A ti devo tudo
Obrigado a Maria
Minha santa de devoo
Tu s to misericordiosa
To grande de corao
-
Aos meus pais
Esses seres de muita luz
Obrigado por tudo
Pois sei o quanto vocs me conduz
Ao meu irmo
Pessoa difcil e bem emburrada
Ou ser que sou eu
Essa pessoa citada?
Aos meus avs
Que desde pequeno me ensinam sobre a vida
Que sempre estiveram do meu lado
E que livravam de boas brigas
Ao meu orientador
O Professor Reinaldo
Que com seu jeito solene
Sempre mostrou ser um "cabra arretado"
A todos os professores que conheci na USP
Em especial, a Professora Neide
Pessoa alegre e feliz
Com uma alma to leve quanto se diz
A todos os meus professores
Em especial tenho vrios
Mas cito o Nelson e a Socorro
Que so meus grandes amados
Aos meus amigos e colegas
Agradeo de corao
Seriam tantas pessoas citadas
Que pra no esquecer, no vou citar nenhum no
-
Cada um sabe o quanto me ajudou
O quanto esteve do meu lado
Sabe tambm que minha amizade ser eterna
E que sempre poder contar com esse "cabra" abobalhado
E no poderia esquecer da minha incrvel madrinha
Pois grande parte disso tudo devo a essa senhorinha
Mulher guerreira e amvel
Um exemplo notvel
E para terminar esse cordel
Agradeo aos funcionrios e pacientes
E do fundo do meu corao
Obrigado, minha gente.
-
"Eu no tenho paredes.
S horizontes!"
Mario de Andrade
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RESUMO
Santos RLO. Estudo da eficincia bactericida do biocida
policloreto de dialildimetilamnio em materiais usados para confeco
de prteses orais e faciais. So Paulo: Universidade de So Paulo,
Faculdade de Odontologia; 2016. Verso Corrigida.
As prteses faciais e intraorais tem um importante papel na
devoluo da esttica e
de algumas funes para os pacientes. Por meio da restaurao da
imagem corporal
possvel reintegr-lo a sociedade, resgatando assim a identidade
do indivduo. A
boa condio dessas prteses primordial para que estas possam
exercer suas
funes adequadamente e manter o local, onde esto inseridas, livre
de infeces e
inflamaes. Portanto, a no formao de colnias e biofilmes
bacterianos em
materiais eleitos para confeco dessas prteses, traro benefcios
aos pacientes
reabilitados. Visando isso, a presente dissertao verificou a
capacidade de incluso
e a eficincia bactericida do biocida policloreto de
dialildimetilamnio (PDADMAC)
em resina acrlica autopolimerizvel (RAAQ) e termopolimerizvel
(RAAT), e silicone
de uso mdico. Os resultados mostraram que o biocida PDADMAC
quando
dissolvido no tetrahidrofurano apresentou boa incorporao tanto
nas resinas
acrlicas, quimicamente ativas e termo ativas, quanto no silicone
de uso mdico e
que apenas os corpos de prova que receberam 2 mililitros do
PDADMAC em massa
polimrica tiveram uma resposta bactericida eficaz.
Palavras-chaves: Polmeros. Elastmeros de silicone.
Materiais.
-
ABSTRACT
Santos RLO. Study of the bactericidal efficiency of the biocide
poly(diallyldimethylammonium chloride) used in materials for the
manufacture of oral and facial prostheses. So Paulo: University of
So Paulo, College of Dentistry; 2016. Corrected Version.
The facial and intraoral prosthesis has an important role in the
aesthetics and return
of some functions to patients. Through restoration of the body
image can reistante to
can society , thus recovering the individual's identity . The
good condition of these
prostheses is essential so they can perform their function
properly and maintain the
the area where the prostheses are inserted free of infection and
inflammation.
Therefore, no formation of bacteria colonies and biofilms in the
chosen materials for
making these prostheses , will bring benefits to patients
rehabilitated. The present
work evaluated the capability of inclusion and the bactericidal
efficiency of the biocide
poly(diallyldimethylammonium chloride) ( pDADMAC ) of acrylic
resin
autopolymmerized ( RAAQ ) and thermal polymerized ( RAAT ) , and
silicone medical
use. The results showed that the biocide pDADMAC when dissolved
in
tetrahydrofuran presented a good incorporation in both acrylic
resins and in the
medical grade silicone and that only the samples that received 2
ml of pDADMAC in
polymer had an effective bactericidal response.
Keywords: Polymers. Silicone Elastomers. Materials.
-
LISTA DE ILUSTRAES
Figura 1.1 - Composio dos
procariontes.................................................................39
Figura 1.2 - Bactrias submetidas a colorao Gram. As bactrias que
esto coradas
de violeta so classificadas como bactrias Gram-positivas. J as
que
esto coradas com o contraste vermelho so classificadas como
bactrias
Gram-negativas.......................................................................40
Figura 1.3 - Morfologia bacteriana e suas
caractersticas..........................................41
Figura 1.4 - Esquemas das etapas do
biofilme..........................................................43
Figura 1.5 - Locais com potencial ativo nas bactrias para ao dos
biocidas........48
Figura 4.1 - Estrutura qumica do policloreto de
diallildimetilamnio.........................57
Figura 4.2 - Representao da interao entre ctions de amnio
(tringulo
vermelho) e
bactrias..............................................................................58
Figura 4.3 - Estrutura qumica do
tetrahidrofurano.....................................................59
Figura 4.4 - Biocida sendo elevado a temperatura vtrea do
material e formando uma
pelcula no aderente e
frivel..............................................................60
Figura 4.5 - Confeco dos corpos de prova. Adequao da geometria e
altura a
partir de uma forma
pr-confeccionada................................................61
Figura 4.6 - Exemplo de resultado dado pelo teste de superfcie
no software
SurfaceWare9.......................................................................................62
Figura 4.7 - Interao do raio gama com o eltron que est em
orbita.....................63
Figura 4.8 - Composio do meio Muller Hinton
Agar...............................................65
Figura 4.9 - Meio de cultura preparado e
esterilizado................................................66
Figura 4.10 - Placas de petri recebendo a luz geminicida com o
meio Mueller Hinton
Agar distribudo em toda sua
extenso................................................66
Figura 4.11 - Escherichia coli ATCC 8739 sendo duplicada. A:
Bactrias logo depois
de serem riscadas sobre do meio de cultura. B: Cepas formadas
aps
24 horas na
estufa................................................................................67
Figura 4.12 - Composio do caldo NB
1/500...........................................................67
Figura 4.13 - Microtubo s submetido ao vibrador para
homogeneizao
da
soluo.............................................................................................68
Figura 4.14 - Corpos de prova separados por grupos, tipo de
bactria e presena
ou no de corante includos em placa de 12
locos....................................69
-
Figura 4.15 - Composio do Caldo
SCDLP..............................................................70
Figura 4.16 - Microtubos organizados e demarcados em uma bandeja
com as
concentraes da soluo
Y.............................................................71
Figura 4.17 - Bancada montada e com as placas de petri j
confeccionadas nas
devidas concentraes que sero posteriormente
avaliadas.............72
Figura 4.18 - Contagem das cepas que se reproduziram no grupo
controle 0 horas
com relao ao corpo de prova da resina termopolimerizvel com
e
sem corante no tempo de 24
horas....................................................73
Figura 5.1 - Exemplo da comparao entre os materiais testados. A:
Resina
termopolimerizavel sem biocida dissolvido em THF e sem corante.
B:
Resina termopolimerizavel com biocida dissolvido em THF e
com
corante................................................................................................75
-
LISTA DE TABELAS
Tabela 5.1 - Teste de superfcie nos corpos de prova de resina
autopolimerizavel..76
Tabela 5.2 - Teste de superfcie nos corpos de prova de
resina
termopolimerizavel..................................................................76
Tabela 5.3 - Teste de superfcie nos corpos de prova de silicone
de
uso
mdico.............................................................................................77
Tabela 5.4 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli nos
corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo controle sem corante as 0
horas.........78
Tabela 5.5 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli nos
corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo controle com corante as 0
horas.........78
Tabela 5.6 : Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli nos
corpos de provada
resina autopolimerizavel grupo controle sem corante as 24 e
48
horas.....................................................................................................78
Tabela 5.7 : Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli nos
corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo controle com corante as 24 e
48
horas.....................................................................................................78
Tabela 5.8 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli nos
corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo com 1 ml de biocida sem
corante as
24 e 48
horas........................................................................................79
Tabela 5.9 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli nos
corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo com 1 ml de biocida com
corante as
24 e 48
horas........................................................................................79
Tabela 5.10 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo com 2 ml de biocida sem
biocida as
24 e 48
horas........................................................................................79
Tabela 5.11 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina autopolimerizavel grupo com 2 ml de biocida com
corante as
24 e 48
horas........................................................................................79
Tabela 5.12 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo controle sem corante
as 0
horas.....................................................................................................80
-
22
Tabela 5.13 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo controle com corante
as 0
horas.....................................................................................................80
Tabela 5.14 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo controle sem corante
as 24
e 48
horas.............................................................................................80
Tabela 5.15 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo controle com corante
as 24
e 48
horas.............................................................................................80
Tabela 5.16 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo 1 ml de biocida
sem
corante as 24 e 48
horas......................................................................81
Tabela 5.17 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo 1 ml de biocida
com
corante as 24 e 48
horas......................................................................81
Tabela 5.18 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo 2 ml de biocida as 24
e 48
horas.....................................................................................................81
Tabela 5.19 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina autopolimerizavel grupo 2 ml de biocida as 24
e 48
horas.....................................................................................................81
Tabela 5.20 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo controle sem biocida as 0
horas..82
Tabela 5.21 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo controle com biocida as 0
horas..82
Tabela 5.22 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo controle sem corante as 24 e
48
horas.....................................................................................................82
Tabela 5.23 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo controle com corante as 24 e
48
horas.....................................................................................................82
Tabela 5.24 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo com 1 ml de biocida sem
corante
as 24 e 48
hora.....................................................................................83
-
Tabela 5.25 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo com 1 ml de biocida com
corante
as 24 e 48
horas...................................................................................83
Tabela 5.26 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo com 2 ml de biocida sem
corante
as 24 e 48
horas...................................................................................83
Tabela 5.27 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
da resina termopolimerizavel grupo com 2 ml de biocida com
corante
as 24 e 48
horas...................................................................................83
Tabela 5.28 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo controle sem corante
0
hora.......................................................................................................84
Tabela 5.29 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo controle com corante
0
hora.......................................................................................................84
Tabela 5.30 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos
corpos de prova da resina termopolimerizavel grupo controle
sem
corante 24
horas...................................................................................84
Tabela 5.31 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo controle com corante
24
horas.....................................................................................................84
Tabela 5.32 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo com 1 ml de biocida
sem
corante as 24 e 48
horas......................................................................85
Tabela 5.33 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo com 1 ml de biocida
com
corante as 24 e 48
horas......................................................................85
Tabela 5.34 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo com 2 ml de biocida
sem
corante as 24 e 48
horas......................................................................85
Tabela 5.35 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova da resina termopolimerizavel grupo com 2 ml de biocida
com
corante as 24 e 48
horas......................................................................85
-
24
Tabela 5.36 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo controle sem corante 0
horas.....86
Tabela 5.37 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo controle sem corante 0
horas.....86
Tabela 5.38 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo controle sem corante 24 a
48
horas.....................................................................................................86
Tabela 5.39 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de
prova de silicone de uso mdico no grupo controle com corante 24
a
48
horas................................................................................................86
Tabela 5.40 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo com 1 ml sem corante as 24 e
48
horas.....................................................................................................87
Tabela 5.41 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo com 1 ml com corante as 24 e
48
horas.....................................................................................................87
Tabela 5.42 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo de 2ml sem corante as 24 a
48
horas..............................................................................,......................87
Tabela 5.43 - Testes biolgicos com a bactria Escherichia coli
nos corpos de prova
de silicone de uso mdico no grupo de 2ml com corante as 24 a
48
horas.....................................................................................................87
Tabela 5.44 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo sem corante 0
horas..88
Tabela 5.45 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo com corante 0
horas..88
Tabela 5.46 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo controle sem corante
24
e 48
horas.............................................................................................88
Tabela 5.47 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo controle com corante
24
e 48
horas.............................................................................................88
-
Tabela 5.48 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo de 1 ml de biocida
sem
corante as 24 e 48
horas......................................................................89
Tabela 5.49 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo de 1 ml de biocida
com
corante as 24 e 48
horas......................................................................89
Tabela 5.50 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo de 2 ml de biocida as
24
e 48
horas.............................................................................................89
Tabela 5.51 - Testes biolgicos com a bactria Staphylococcus
aureus nos corpos
de prova de silicone de uso mdico no grupo de 2 ml de biocida as
24
e 48
horas.............................................................................................89
Tabela 5.52 - Eficcia dos corpos de prova confeccionados de
resina
autopolimerizavel com biocida frente a bactria Escherichia
coli........90
Tabela 5.53 - Eficcia dos corpos de prova confeccionados de
resina
autopolimerizavel com biocida frente a bactria
Staphylococcus
aureus...................................................................................................90
Tabela 5.54 - Eficcia dos corpos de prova confeccionados de
resina
termopolimerizavel com biocida frente a bactria Escherichia
coli.....90
Tabela 5.55 - Eficcia dos corpos de prova confeccionados de
resina
termopolimerizavel com biocida frente a bactria
Staphylococcus
aureus...................................................................................................91
Tabela 5.56 - Eficcia dos corpos de prova confeccionados de
silicone de uso
mdico com biocida frente a bactria Escherichia
coli.........................91
Tabela 5.57 - Eficcia dos corpos de prova confeccionados de
silicone de uso
mdico com biocida frente a bactria Staphylococcus
aureus...........91
-
22
-
LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
PBMF Prtese Bucomaxilofacial
PDADMAC Policloreto de dialildimetilamnio
RAAQ Resina acrlica autopolimerizvel
RAAT Resina acrlica termopolimerizvel
RTV Vulcanizados temperatura ambiente
m Micromtro
DNA cido desoxirribonucleico
LPS Lipopolissacardio
EPS Substncia polimrica extracelular
PMMA Polimetilmetacrilato
HTV Vulcanizados pelo calor
UTI Unidade de terapia intensiva
THF Tetrahidrofurano
FOUSP Faculdade de Odontologia da Universidade de Pernambuco
CP Corpo de prova
wt Peso
ml Mililitro
IQUSP Instituto de qumica da Universidade de So Paulo
kGy Quilogray
60CO Cobalto
137Cs Csio
MeV Milhes de eltron volts
IPEN Instituto de Pesquisas Energticas Nucleares
USP Universidade de So Paulo
ICB Instituto de Cincias Biolgicas
UFC Unidade formadora de colnia
SCDLP Soya Casein Digest Lecithin Polysorbate Broth
-
24
-
SUMRIO
1 INTRODUO
.......................................................................................................
35
2 REVISO DA LITERATURA
.................................................................................
37
2.1 Prtese Bucomaxilofacial
.................................................................................
37
2.2 Bactrias
............................................................................................................
38
2.3 Biofilme
..............................................................................................................
42
2.4 Principais fatores que influenciam na adeso microbiana
............................ 44
2.4.1 Superfcie do
material.......................................................................................
44
2.4.1.1 rugosidade
superficial....................................................................................
45
2.4.1.2 textura superficial
..........................................................................................
45
2.4.1.3 hidrofobicidade superficial
.............................................................................
46
2.4.2 Composio qumica
........................................................................................
46
2.5 Biocidas
.............................................................................................................
47
3 PROPOSIO
.......................................................................................................
51
4 MATERIAL E MTODOS
......................................................................................
53
4.1 Materiais
.............................................................................................................
53
4.1.1 Materiais de uso para prtese bucomaxilofacial
............................................... 53
4.1.1.1 Resinas acrlicas
...........................................................................................
53
4.1.1.2 Silicone de uso mdico
..................................................................................
54
4.1.2 Escherichia coli
................................................................................................
55
4.1.3 Staphylococcus aureus
....................................................................................
56
4.1.4 Biocida
..............................................................................................................
57
4.1.4.1 policloreto de dialildimetilamnio
...................................................................
57
4.1.5 Solventes
..........................................................................................................
58
4.1.5.1 gua
.............................................................................................................
58
4.1.5.2 tetrahidrofurano
.............................................................................................
59
4.2 Mtodos
..............................................................................................................
59
4.2.1 Testes da incluso do material
.........................................................................
59
4.2.2 Testes de superfcie
.........................................................................................
61
4.2.3 Esterilizao com radiao Gama
....................................................................
62
4.2.4 Testes biolgicos
..............................................................................................
63
-
26
4.2.4.1 produo de placas de petri com meios de culturas ricos
............................. 65
4.2.4.2 duplicao das bactrias Staphylococcus aureus
e Escherichia
coli..........................................................................................
66
4.2.4.3 produo do inoculo
......................................................................................
67
4.2.4.4 seleo do corpo de prova e colocao nas placas
de 12 locos
....................................................................................................
68
4.2.4.5 colocao do inoculo nos corpos de prova
e logo aps a colocao do meio SCDLP
.................................................... 69
4.2.4.6 diluio seriada da soluo formada
.............................................................
70
4.2.4.7 colocao nas placas de petri marcadas com
as diluies, tipo de corpo de prova e data
.................................................. 71
4.2.4.8 contagem de cepas
.......................................................................................
71
4.2.4.9 clculos referenciais
......................................................................................
73
5 RESULTADOS
.......................................................................................................
75
6 DISCUSSO
..........................................................................................................
93
7 CONCLUSO
........................................................................................................
97
REFERNCIAS..........................................................................................................99
-
35
-
35
1 INTRODUO
A Prtese Bucomaxilofacial (PBMF) a especialidade odontolgica que
se
destina ao estudo, planejamento, confeco e instalao de prteses
intra e
extrabucais, indicadas quando as regies maxilofaciais so
perdidas devido a
patologias, traumas ou cirurgias oncolgicas (1,2).
Diante de pacientes mutilados, pode-se recorrer a trs tipos de
modalidades
teraputicas: a cirrgica, a prottica e a mista. Visando a
reabilitao prottica ou
mista das mutilaes faciais e orais, a Prtese Bucomaxilofacial
tem por objetivos
bsicos restaurar a esttica, funo, proteo dos tecidos e auxiliar
na terapia
psicolgica (3).
Dentre os materiais de eleio para confeco dessas prteses, os
silicones
mdicos e as resinas acrlicas tem um papel de destaque graas a
sua
biocompatibilidade, seu custo, sua maleabilidade e fcil uso
(3,4).
Como qualquer outra prtese, a PBMF tem seu tempo limitado de uso
devido
a fatores como: desadaptao das prteses, proliferao de fungos e
bactrias,
perda de esttica e algumas modificaes no estado geral. Assim, o
paciente
periodicamente busca trocar ou reparar esse dispositivo para que
as funes, que
ele exerce, no sejam comprometidas (1,3,5,6).
Um dos principais fatores que rotineiramente antecipa o retorno
do paciente
para a troca da prtese, a proliferao de fungos e bactrias que
comprometem a
esttica e portanto trazem incomodo e inflamaes na regio
afetada.Essa
proliferao microbiana causada pela falta de higiene do paciente
com a prtese,
por excesso de uso do meio qumico para o suporte prottico,pela
rotina de uso no
qual o material em seu desgaste agrega cada vez mais ranhuras ou
pela juno
desses fatores(3,6).
Isso leva a uma das principais questes da sociedade moderna: o
controle
das proliferaes e infeces microbianas. Hoje em dia, esse
controle est cada vez
mais difcil graas a resistncia microbiana que se enfrenta. Por
isso, alguns agentes
antimicrobianos foram testados e os resultados so os mais
variados possveis e
alguns ainda no so totalmente compreendidos (7,8,9).
-
36
O policloreto de dialildimetilamnio (PDADMAC) possue
capacidade
antibacteriana inerente sendo usado pelas indstrias qumicas na
purificao de
guas. J foi comprovado, em seu uso isolado,a eficcia contra os
microrganismos
B. subtilis, E. coli, and S. aureus, C. albicans, A. flavus e F.
oxysporumfungi (10).
A presena desses agentes na superfcie de alguns materiais so
capazes de
resolver varias questes importantes como a proliferao de
microrganismos nos
equipamentos para intubao, na desinfeco de utenslios domsticos,
proliferao
da variada microbiota criada nas prteses, entre outros
(4,6,11,12).
Para tanto, os mais diferentes tipos de materiais podero atuar
como uma
matriz que prendem os agentes antimicrobianos. Prem, h a
necessidade de
anlisar as caractersticas dessa matriz de materiais, pois poder
haver uma grande
influncia sobre a atividade antimicrobiana definitiva (10).
Com isso, o presente trabalho busca avaliar a eficcia do biocida
PDADMAC
incorporado a resinas acrlicas, termoativadas (RAAT) e
autoativadas (RAAQ), e o
silicone mdico RTV, materiais de eleio para a confeco das
prteses orais e
faciais.
-
37
2 REVISO DA LITERATURA
2.1 Prtese Bucomaxilofacial
A face humana provavelmente uma das estruturas mais belas do
universo. Ela composta por tecidos moles e mveis sobre os
tecidos duros, que
lhe serve de suporte. Sua funo caracterizar as expresses,
graas
movimentao da pele sob o efeito dos msculos, e as percepes. O
conjunto
destas duas entidades permite ao homem expressar seus
sentimentos, suas
necessidades, suas aspiraes e, sobretudo o poder de comunicao.
Em
decorrncia destas funes da face, necessrio reabilit-la quando
ocorre algum
tipo de mutilao nessa regio (13,14,15).
Essas mutilaes podem causar defeitos funcionais e cosmticos na
regio
maxilofacial pelas mais variadas etiologias, que podem ser
congnitas, patolgicas,
traumticas ou iatrognicas, como fissuras orofaciais, exrese de
tumor e necrose
ps-radiao, respectivamente(16,17).
Salienta-se ainda que ferimentos diversos como acidentes de
trnsitos, armas
de fogo, agresses interpessoais, acidentes esportivos,
queimaduras e choques
eltricos tambm podem trazer danos aos tecidos moles e duros de
todo o corpo e
da regio maxilofacial, em particular (18).
Antigamente as amputaes, termo usado em cirurgia referente
retirada de
um rgo ou de parte dele, eram muito usadas em situaes de
extremidade, como
lngua, apndice nasal, pavilho auricular, mama, intestinos, reto,
colo uterino, pnis
e membros. Atualmente, o pensamento cirrgico mudou e as
cirurgias passaram a
ser reconstrutivas, quando possvel. Esse tipo de cirurgia visa
restaurar o membro
"doente" ou planejar para que o coto se transforme em um
arcabouo til para
posterior reabilitao prottica (19,20).
Quando a cirurgia plstica invivel ou no consegue obter o
devido
sucesso, a reabilitao prottica bucomaxilofacial se torna a
melhor soluo para os
-
38
casos. Portanto, o campo da prtese bucomaxilofacial definido
como a
reconstruo prottica de tecidos da cabea e do pescoo perdidos ou
desfigurados
(21).
Essas prteses tm um importante papel na devoluo da autoestima
do
paciente pois, esses pacientes apresentam importantes
caractersticas
comportamentais, tais como: depresso, vergonha, ansiedade,
timidez, passividade,
revolta e baixa autoestima. Atravs da restaurao prottica ser
possvel reintegr-
lo, buscando assim, resgatar a identidade do indivduo. Alm
disso, essas alteraes
tambm precisaram ser trabalhadas psicologicamente, caso
contrrio, a reabilitao
prottica no atingir os seus objetivos (1,22,23,24).
Como em todas as reconstrues, a da regio oral e maxilofacial uma
tarefa
difcil. Seus aspectos anatmicos, funcionais e estticos tem um
papel primordial
durante a realizao de uma reconstruo. Os contornos faciais tm de
ser
alcanados, a fala com padres de normalidade, a deglutio adequada
e os
movimentos devem ser considerados. A esttica precisa ser mantida
e o
comprometimento de estruturas nobres deve ser evitado (25).
2.2 Bactrias
Bactrias so estruturas relativamente simples, unicelulares,
medem
normalmente de 0,2 a 1,5 micromtro (m) e podem viver
isoladamente ou
agrupadas. Esses organismos so procariontes, no apresentam
carioteca e se
reproduzem assexuadamente. Entre as principais estruturas que as
formam esto os
retculos endoplasmticos, a parede celular, o material
cromossmico, os
ribossomos, os plasmdios, a membrana celular e a parede celular
como vemos na
figura 1.1 (26).
-
39
Fonte: Murray (2006, p. 37) (26)
Figura 1.1 - Composio dos procariontes
O material cromossmico bacteriano um isolado circulo de DNA
nico
estando em uma rea chamada de nucleide. Os plasmdios, que so
DNAs
extracromossmicos, conferem as bactrias uma resistncia
bacteriana elevada,
acarretando em uma vantagem seletiva (27).
J os ribossomos bacterianos so estruturas unidas (30S+50S) que
formam
um corpo s, o ribossomo 70S. Essa estrutura de extrema
importncia por serem
os principais alvos de drogas antibacterianas. Alm disso, a
membrana
citoplasmtica desses microrganismos se diferencia dos
eucariontes na sua
composio. Essa membrana tem como base uma bicamada lipdica
contendo
protenas de transportes, bombas de ons e enzimas; mas no contm
esteris em
sua rede (27).
A parede celular, formada por camadas rgidas e repetitivas
de
peptidoglicanos, acarreta respostas imunes inativas protetoras
dos seres humanos.
Essa composio importante, pois distingue as bactrias de acordo
com a
classificao de colorao Gram (28).
A classificao de colorao Gram um dos diferentes meios de
classificar os
tipos bacterianos e se baseia em um teste rpido, fcil e poderoso
que com o auxlio
da microscopia ptica permite ao Cirurgio-Dentista e ao Mdico um
meio de
direcionamento teraputico. O processo se desenvolve quando as
bactrias so
fixadas atravs do calor e coram com a aplicao do corante de
cristais violetas.
Logo aps, aplica-se ento o iodo para retirar do excesso de
corante e lava-se com
lcool. Dando continuidade, outro corante colocado com contraste
vermelho, a
-
40
safranina, para corar o restante de clulas descoradas(26). Como
vemos na figura
1.2:
Fonte:Murray (2006, p. 45) (26) Figura 1.2 - Bactrias submetidas
a colorao Gram. As bactrias que esto coradas de violeta so
classificadas como bactrias Gram-positivas. J as que esto coradas
com o contraste vermelho so classificadas como bactrias
Gram-negativas
As bactrias Gram-positivas se tornam violetas, pois o corante
fica
aprisionado na grossa camada peptidoglicana que a circunda. J as
bactrias Gram-
negativas possuem uma fina camada de peptdeos e no conseguem
reter o corante
violeta, mas retm a Safranina, tornando-se vermelhas (26).
As bactrias Gram-positivas possuem uma parede celular de
mltiplas
camadas com os peptidoglicanos sendo o principal componente de
formao.
Somando a ele, os cidos teicicos, os cidos lipoteicicos e os
complexos
polssacardios tambm fazem parte dessa composio da parede celular
(27).
J as bactrias Gram-negativas, tem uma composio diferente e bem
mais
complexa dessa estrutura. Fundamentalmente, a parede celular
desse tipo de
bactria contm duas camadas. A primeira camada uma bastante fina
e tem sua
composio formada por uma cadeia de, apenas, peptidoglicanos.
Logo em seguida
-
41
a segunda camada, tambm chamada de membrana externa, se
caracteriza por ser
uma barreira assimtrica de permeabilidade para as molculas
grandes e se divide
em dois folhetos: o folheto interno e o folheto externo.O
folheto interno tem em sua
composio os fosfolipdios e o folheto externo, porm, formado por
uma molcula
anfiptica, molcula que possui terminaes hidroflicas e
hidrofbicas, nomeadas
de lipopolissacardio (LPS) (27).
Em tempo, os peptidoglicanos que esto presentes nos tipos de
bactrias
citados acima so formando por dois tipos de acares, o cido
N-acetilmurmico e
a N-acetilglucosamina, e alguns aminocidos. So estruturas
importantes para a
replicao, para a sobrevivncia em condies hostis e durante a
infeco estimula
a fagocitose e a resposta inativa. A unio desse composto forma
uma malha de
superfcie porosa e rgida que permite a difuso dos metablitos
para a membrana
plasmtica. Deste modo, o fato do peptidoglicano proporcionar
certa rigidez na
estrutura da parede celular faz com que esse composto influencie
na geometria da
clula bacteriana (28).
Outra forma de classificar os tipos bacterianos de acordo com
sua morfologia.
Dentre os diferentes tipos morfolgicos podemos citar as bactrias
esfricas ou
cocos, as bactrias em forma de basto ou bacilos, as bactrias em
formato de
cobra ou espirilos, as bactrias em forma de vibries e entre
outras formas. Na
figura 1.3 observado os diferentes tipos morfolgicos bacterianos
e o como se
caracterizam (26).
Fonte: Murray (2006, p. 52) (26)
https://pt.wikipedia.org/wiki/Monossacar%C3%ADdeohttps://pt.wikipedia.org/w/index.php?title=%C3%81cido_N-acetilmur%C3%A2mico&action=edit&redlink=1https://pt.wikipedia.org/w/index.php?title=N-acetilglucosamina&action=edit&redlink=1https://pt.wikipedia.org/wiki/Amino%C3%A1cido
-
42 Figura 1.3 - Morfologia bacteriana e suas caractersticas
Esses seres habitam vrios tipos ambientes tais como o ar, a
terra, as
plantas, a gua, os seres humanos, os alimentos, mas pelo fato da
grande maioria
no ter capacidade patognica, no trazem riscos de vida aos
diversos seres vivos.
Essas bactrias, por meio de suas toxinas, podem produzir muitas
doenas (26).
Portanto, uma das principais razes de se estudar esses
microrganismos se
baseia em entender as doenas que eles provocam e a maneira mais
correta de
preveni-las e control-las.
2.3 Biofilme
O biofilme definido como um aglomerado de clulas ssseis envoltos
por
uma matriz de polmeros extracelulares (29). Sendo acrescido por
Donlan e
Costerton (2002) (30) que observou os biofilmes e definiu como
uma biocenose
caracterizada por clulas que esto ligadas a um substrato,
interface ou a ambas.
Esse composto desfruta de um modo de crescimento bastante seguro
e protegido,
isso faz com que ele sobreviva em ambientes hostis. Outrossim,
podem consistir em
uma nica espcie bacteriana ou em vrias espcies interagindo
cooperativamente
(29,30,31,32).
Essa estrutura preponderantemente constituda por gua. Do seu
arcabouo, 15% correspondem as bactrias e o restante, 85%, em
volume de
substncias polimricas extracelulares (EPS) que constituem a
matriz (31,33).
Didaticamente, a formao desse composto dividida em cinco etapas.
A
primeira etapa, a etapa de formao do filme condicionador, se
baseia na cobertura
da superfcie com uma camada de pequenas molculas orgnicas que
esto
presentes no meio aquoso que o circunda (34,35,36).
Em seguida, comea-se a segunda etapa caracterizada pela
adeso
reversvel de microrganismos superfcie. Esses seres vivos
agregam-se uns aos
outros formando conjuntos microbianos, antes de aderirem
superfcie do filme
condicionador. Logo aps, aderem-se ao filme condicionador e
formam o biofilme
inicial (34,36).
-
43
Essa adeso inicial reversvel transforma-se em irreversvel,
caracterizando a
terceira etapa, sobretudo pela produo de substncias polimricas
pelos
microrganismos (35,37).
Portanto, quando aderidas superfcie de maneira irreversivelmente
os
microrganismos multiplicam-se e comeam a produzir as EPS,
determinando a
quarta etapa. Por fim, a ltima etapa acontece quando se sucede a
libertao de
microrganismos ou lascas de biofilme para o meio circundante
como vemos na figura
1.4 (34,37,38).
Fonte: Lasa (2006, p 23) (35)
Figura 1.4 - Esquemas das etapas do Biofilme
Com relao aos microrganismos,os que formam o biofilme apresentam
a
capacidade de sobrevivncia quando esto aderidos em tecidos duros
e moles,
como por exemplo, os dentes ou os revestimentos protticos. Na
regio bucal, a
energia livre e a rugosidade superficial tm uma relevncia
significativa na aderncia
bacteriana e na maturescncia do biofilme caracterizando o
aumento de
microrganismos, o aumento do risco de inflamaes na mucosa, cries
e infeces
periodontais (39).
J a poro anterior dos cornetos nasais e as passagens nasais,
so
colonizadas por Staphylococcus epidermidis, Streptococcus
pneumoniae, Neisseria,
Enterobacter, Candida albicans, entre outros microrganismos. Em
relao as
passagens nasais, os seios paranasais quando ntegros so
normalmente estreis
(40,41).
Sob o mesmo ponto de vista, estudos com usurios de prteses
oculares
elucidaram que as bactrias mais comuns nas cavidades anoftlmicas
so o
-
44
Staphylococcus aureus e Pseudomonas sp. Porm nas duas ltimas
dcadas,
observou-se um aumento de infeces nessas cavidades devidas a
Staphylococcus
coagulase negativa, em especial com a espcie Staphylococcus
epidermidis
(42,43,44,45,46).
A partir de anlises microscpicas foi descoberto que mais de
99,9% das
bactrias multiplicam-se em biofilmes nas mais variadas de
superfcies, incluindo os
tecidos vivos, os dispositivos mdicos, os sistema de canalizao
de gua potvel,
os sistemas aquticos naturais, entre muitos outros (30,47).
No entanto, para que essas bactrias consigam se anexar no
biofilme existem
alguns elementos que influenciam nessa fixao como a
disponibilidade de
nutrientes na superfcie e a sua concentrao, o pH, a temperatura,
a concentrao
de eletrlitos, a osmolaridade, o fluxo de materiais e os tipos
de superfcie, isso
levando em considerao as individualidades de cada espcie de
microrganismo
(31, 48). Outros fatores como a disponibilidade de superfcie,
estmulos ambientais e
regulao de genes tambm afetam na construo de um biofilme
(47).
2.4 Principais fatores que influenciam na adeso microbiana
2.4.1 Superfcies dos materiais
Existem vrios fatores que influenciam a adeso bacteriana quando
os
correlacionamos com as superfcies dos diversos materiais, dentre
esses fatores
podemos incluir a composio qumica dos materiais, a carga
superficial, a
hidrofobicidade, a rugosidade e a configurao fsica.
Acrescenta-se tambm que a
energia da superfcie influncia os stios de adeso, que podem
alterar-se mudando
os atributos de hidroflicidade e hidrofbicidade com os
diferentes tipos de
biofilme(38).
Portanto, se torna fulcral uma anlise desses pontos importantes
para os
diferentes tipos de superfcies dos materiais relacionando com a
superfcie das
bactrias que sero encontradas. Visando solues,o pr-tratamento da
superfcie
tem um papel primordial na inibio dessa adeso de bactrias
(49).
-
45
A composio qumica dos materiais, a carga superficial, a
hidrofobicidade, a
rugosidade e a configurao fsica sero abordadas com maior nfase
no decorrer
desse tpico.
2.4.1.1 rugosidade superficial
A rugosidade superficial descreve a distncia medida entre os
picos e os
vales na superfcie. Diversos estudos mostram uma proporo direta
entre as
rugosidades na superfcie e a adeso de microrganismos. Isto se
fomenta pela
menor intensidade das foras de corte e tambm pela rea de
superfcie encontrar-
se aumentada(50).
Dentre os diversos tipos de materiais; as prteses clnicas, os
instrumentos
mdicos e os materiais de implante tm diferentes rugosidades
superficiais.
Portanto, so necessrios cada vez mais estudos para testar as
repercusses de
superfcies rugosas e os biofilmes (51).
2.4.1.2 textura superficial
Diferentemente da rugosidade superficial, a configurao fsica se
baseia no
desvio da superfcie ou ondulaes com relao a forma ideal que se
pretendia ter,
causado; por exemplo, por uma falha no nivelamento.
Rotineiramente, as condies
fsicas so avaliadas por microscopia de varredura eletrnica
(38,52).
Entretanto, essa textura superficial se comporta como as
rugosidades
acumulando e promovendo a adeso bacteriana, com isso a deposio
do biofilme,
enquanto que as superfcies lisas tem um comportamento contrrio.
Alm disso, as
superfcies porosas tem um acmulo de biofilme em uma velocidade
muito mais
elevada, pois as bactrias aderem e colonizam preferencialmente
nessas reas (49).
-
46
2.4.1.3 hidrofobicidade das superfcies
Os materiais podem ser separados em dois grupos: os materiais
com alta
energia e os de baixa energia de superfcie. Os primeiros so os
materiais
hidroflicos, constantemente carregados negativamente e so
usualmente os
materiais inorgnicos como metais ou minerais (49).
Todavia, a segunda classificao se refere normalmente aos
materiais
hidrofbicos, com baixa energia eletrosttica sendo, geralmente,
polmeros
orgnicos como plsticos e o teflon (52,53).
Dependendo da hidrofobicidade, as bactrias se aderem melhor ou
pior as
superfcies dos materiais. Muitos estudos revelam que os
materiais hidroflicos so
mais resistentes h adeso bacteriana que os materiais
hidrofbicos. A
hidrofobicidade da superfcie determinada por medidas de ngulos
de contato
atravs dos mais variados tipos de programas (49,53).
2.4.2 Composio qumica do material
A composio qumica dos materiais um ponto importante para a
aderncia
dos biofilmes pois, por exemplo, estudos relatam que os
Staphylococcus epidermidis
aderem melhor as superfcies dos polmeros, em contrapartida as S.
aureus fixam-se
principalmente em superfcies metlicas (49).
Dessa forma, fica explicitado o fato das infeces por S.
epidermidis estarem
ligadas com implantes polimricos enquanto os S. aureus esto
associados a
infeces em implantes metlicos. Mais recentemente, foi descoberto
que o
Staphylococcus epidermidis adere com maior preciso hidroxipatita
do que aos
outros materiais (50, 53).
-
47
2.5. Biocida
Os biofilmes representam um papel importante em muitos processos
como o
equilbrio microbiano dentro de um ser vivo, por exemplo. O seu
modo de
crescimento est relacionado com o conhecimento de futuras
resistncias
bacterianas. Porm, muito desses aglomerados atuam de maneira
indesejada
causando srios impasses em vrias reas, entre elas os campos
industriais, os
biomdicos, a sade pblica e os impactos ambientais (30, 54).
Os dispositivos protticos, que podem ser de longa ou curta
permanncia,
tm sido primordiais para aumentar e melhorar a expectativa e
qualidade de vida de
muitos pacientes. O envelhecimento da populao e crescente
necessidade da
utilizao de dispositivos mdicos para substituir e/ou para
reparar tecidos tendem a
aumentar consideravelmente a formao do biofilme (30, 31,
55).
Fatores especficos como a durao de utilizao, nmeros e tipo
de
organismos qual o dispositivo est exposto, a taxa de fluxo, a
composio do
meio, o material de construo do dispositivo e caractersticas
fsico-qumicas da
superfcie determinam a suscetibilidade de um dispositivo com a
contaminao
microbiana e formao de biofilme (56).
Essa existncia de microrganismos dificulta a aniquilao das mais
diversas
infeces, sendo assim, um problema para a sade pblica mundial.
Dentre as
demais formas de erradicar os biofilmes, as variaes qumicas
constituem a
preponderante estratgia aplicada em dispositivos mdicos de longa
e curta
permanncia. Com isso, o uso de agentes antimicrobianos nesses
materiais vem
aumentando com o objetivo de controlar a formao desses biofilmes
no desejados
(57, 58, 59).
Portanto, de extrema importncia esse processo desde que no
haja
alteraes importantes em sua estrutura e nem que se retire a
biocompatibilidade
deste artifcio (3,60).
O biocida um termo genrico usado para agentes qumicos,
geralmente de
amplo espectro, que inativam ou matam determinados
microrganismos. Por isso,
podem ser considerados uma possvel soluo eficiente para esses
problemas (12).
-
48
Na literatura, os biocidas j esto presentes em algumas cincias
como a
Qumica, Biologia, Medicina, Geografia, Economia, Ecologia e
Agronomia. Elas
relatam a adio desses produtos na vida dos seres humanos nos
mais diferentes
nveis e complexidades. Mas na rea Odontolgica ainda no se tem
estudos
relevantes sobre o assunto (61).
Portanto, deve-se saber que para a escolha de um biocida,
existem certos
requisitos que se deve considerar (62), como ser pontuado a
seguir:
Atividade contra uma grande quantidade de microrganismos.
Biocompatvel com o ser humano.
No ser corrosivo.
Biodegradveis, qualquer biocida residual deve ser inofensivo
ecologicamente.
Eficcia no comprometida pela presena de materiais orgnicos e
inorgnicos.
Estabilidade com relao a temperatura e pH.
No interferir com outras solues presentes nos compostos.
Fcil manuseamento e armazenamento.
Nenhum biocida ir preencher todos os pontos supra citados,
portanto, sua
escolha dever ser uma unio dos adequados pontos de acordo com a
finalidade
que se queira usar (38).
Esse material reage com os microrganismos e para serem efetivos
precisam
causar a morte microbiana. A reao do biocida com a clula
microbiana envolve
uma ligao inicial com a superfcie da clula, embora em alguns
microrganismos os
locais dessa interao devam ser encontrados no interior da clula.
Os locais de
preferncia para a ao dos biocidas so a parede celular, os
componentes da
membrana citoplasmtica e o citoplasma (63,64,65).
A Figura 1.5 representa esquematicamente os locais nos quais os
biocidas
tem preferncia para interagir nas bactrias gram-positivas e
gram-negativas.
-
49
Fonte: Caador (2009, p. 27) (38)
Figura 1.5 - Locais com potencial ativo nas bactrias para ao dos
biocidas
As bactrias gram-positivas so em geral mais sensveis aos
biocidas do que
as bactrias gram-negativas devido a falta da membrana exterior.
Assim, os biocidas
tendem a requintar o mecanismo de entrada para as bactrias
gram-negativas e
com isso conseguir a eficcia desejada (66,67).
Portanto, a juno entre os biocidas e materiais como as resina
acrlicas e o
silicone de uso mdico, usados para a confeco de prteses orais e
faciais, podem
trazer grandes benefcios aos pacientes portadores desse tipo de
prtese.
-
51
3 PROPOSIO
Verificar a capacidade de incluso e a eficincia bactericida do
biocida
policloreto de dialildimetilamnio (PDADMAC) em resina acrlica
autopolimerizvel
(RAAQ) e termopolimerizvel (RAAT), e silicone de uso mdico.
-
53
4 MATERIAL E MTODOS
4.1 Materiais
4.1.1 Materiais de uso para prtese bucomaxilofacial
Atualmente, as prteses bucomaxilofaciais podem ser
confeccionadas por
vrios materiais. Entre eles, a resina acrlica e o silicone de
uso mdico.
4.1.1.1 resinas acrlicas
As resinas acrlicas so compostos orgnicos classificados como
polmeros.
Sua estrutura qumica produzida de maneira sinttica e em sua
composio
carbono, o hidrognio e elementos no metlicos. Podem apresentar
caractersticas
fibrosas, borrachides, resinosas e rgidas, estas sendo
determinadas por sua
morfologia molecular (68).
Nos anos de 1937 e 1940, o avano tecnolgico a partir de estudos
levaram a
resina base de polimetilmetacrilato (PMMA) ou resina acrlica a
ser uma
surpreendente alternativa para confeco de prteses odontolgicas e
tambm para
uso em outras reas (69).
Entre as principais caractersticas que levaram ao sucesso e
difuso desse
material por todo mundo esto a biocompatibildade, a ausncia de
sabor e odor, as
propriedades trmicas adequadas, a estabilidade dimensional, o
bom potencial de
polimento, a esttica agradvel e o fcil manuseio. Atualmente, as
resinas acrlicas
vm sendo aprimoradas com relao a suas propriedades fsicas e
mecnicas para
que ento as indstrias consigam ampliar cada vez mais seu uso
(70,71).
Por ser um compsito, este material est predisposto a modificaes
de
temperatura, tenses e tambm a presena de lquidos oriundos das
mais diversas
origens. Esses acontecimentos ocasionam diversos tipos de
degradao como
-
54
alterao de cor, desgaste, infiltrao marginal, absoro de
contaminantes
(3,72,73,74).
Essas resinas tem uma ampla aplicao na odontologia como na
confeco
da base de prteses bucais, placas miorelaxantes, moldeiras
individuais, padres
fundio, prteses faciais, prteses provisrias imediatas, coroas
provisrias, dentes
artificiais, reparo de prteses no geral, acrilizao de aparelhos
ortodnticos,
confeco de prteses internas, prteses oculares, obturadores
palatinos, entre
outros. Por todos esses fatores, os dentes artificiais
confeccionados com esse
material, por exemplo, chegam a marca de 60% dos vendidos nos
Estados Unidos
da Amrica (3,75,76).
4.1.1.2 silicones de uso mdico
Os silicones so polmeros de alto peso molecular que se
constituem em uma
repetio de unidades bsicas que formam longas linhas ou cadeias
cclicas. Esse
composto muito bem tolerado pela pele, relativamente duradouro,
so resistentes
ao atrito, de fcil higienizao, flexveis e no condutores de
calor. So classificados
no tipo HTV, os vulcanizados pelo calor, ou do tipo RTV, os
vulcanizados
temperatura ambiente. O HTV mais durvel e resistente quando
comparado com o
RTV, porm exige uma tcnica de trabalho muito mais sofisticada e
rebuscada (77).
Neves e Vilella (1998), em meados da dcada de 80, desenvolveram
uma
escala de silicone nas tonalidades da pele humana. Nesse estudo
foram
confeccionados vinte e sete corpos-de-prova em silicone actico e
incrementados os
pigmentos xidos de ferro e o dixido de titnio. O volume de
silicone actico foi
mantido constante em todos os corpos de prova e os pigmentos
foram aplicados
vrias propores at a obteno de vinte e sete diferentes
tonalidades. Com isso,
as tonalidades dos corpos de prova foram comparadas com a cor de
pele dos
pacientes, compondo desta forma um a escala de tonalidade. Esse
estudo foi de
extrema importncia para a Prtese Bucomaxilofacial, pois
evidenciou a possvel
definio das tonalidades da pele com esse material, alm de
facilitar essa definio
para as confeces dessas prteses em silicone (78).
-
55
Uma vantagem do silicone essa disponibilidade de uma colorao
intrnseca
por pigmentos durante o preparo. Todavia, essa adio na massa do
material
poder modificar suas propriedades fsicas e mecnicas (77,78).
Segundo a literatura, os problemas mais rotineiros associados s
prteses
faciais confeccionadas em silicone so a perda das propriedades
fsicas quando
comparada com as resinas, a dificuldade de reparo, a descolorao
da prtese
continua e o pequeno tempo de vida til que depende dos hbitos
pessoais do
indivduo, do clima e do meio ambiente(79).
4.1.2 Escherichia coli
Dentre o gnero Escherichia existem cinco tipos de espcies
bacterianas, a
mais comum se denomina a Escherichia coli. Esse tipo de bactria
esta classificada
na famlia das Enterobacteriaceae sendo um bastonete
Gram-negativo de tamanho
moderado e de grande importncia clnica (26).
As bactrias que formam essa famlia so imveis ou se movimentam
atravs
de flagelos peritrquios, no so esporulados, so anaerbios
facultativos, presentes
em grande parte da microbiota endgena e podem ser proliferados
em ambos os
meios - seletivos e no seletivos -, por possurem necessidades
nutricionais
simples(26).
Essa espcie est relacionada tambm com a instalao de diversas
doenas
no ser humano, entre elas esto a sepse, a infeco do trato
urinrio, a meningite
neonatal e a gastroenterite. Alm disso, ela est associada a
cerca de 80% de todas
as infeces em unidades de terapia intensiva (UTI) comunitrias em
pases
desenvolvidos (80,81).
Acrescentando, quando essa espcie bacteriana causa a
gastroenterite, elas
so divididas em cinco tipos de organismos diferentes; a E. coli
enteropatognica, E.
coli enterotoxignica, E. coli enterohemorrgica, E. coli
enteroinvasora, E. coli
enteroagregativa. Essa diviso se baseia no local de ao, no
aspecto clnico da
doena e na patognese desses microrganismos (82).
O diagnstico deve ser feito e pode ser fechado com alguns
procedimentos
laboratoriais. A cultura de bactrias um meio eficaz para esse
tipo de diagnstico,
-
56
pois como dito acima essas bactrias proliferam nos dois tipos de
meio de cultura.
Alm dele, existem tambm a identificao bioqumica e a classificao
sorolgica
que explanam uma grande taxa de sucesso nesse tipo de diagnstico
(81).
O tratamento para essas infeces deve seguir cautelosamente os
testes de
suscetibilidade in vitro e a experincia clnica. Aplica-se estar
atento para as
concentraes subteraputicas, pois essa famlia bacteriana tem uma
capacidade de
desenvolver bactrias resistentes rapidamente (81).
4.1.3 Staphylococcus aureus
Essa bactria faz parte de um grupo heterogneo aonde existem
algumas
atribuies gerais, e dessas caractersticas destacam-se: so cocos
gram-positivos,
com ausncia de endsporos, com tamanho variando de 0,5 a 1,5 m,
so imveis e
so aerbicas facultativas (26).
O nome do gnero Staphylococcus vem do grego staphyl, que tem
como
significado "cacho de uva". Portanto, esse nome surgiu pela
forma de crescimento
que essa bactria adere. Esse gnero, atualmente, contm 35 espcies
e 17
subespcies e podem ser encontradas em interao com os seres
humanos (26).
Normalmente, so encontradas na epiderme e nas membranas
mucosas
podendo causar uma relao patolgica atravs da produo de toxinas,
na violao
direta ou na presena de leses nos tecidos. Dentre as patologias
que esse
microrganismo pode causar esto: a sndrome da pele escaldada
estafiloccica,
intoxicao alimentar estafiloccica, sndrome do choque txico,
terol, foliculite,
infeces cutneas, endocardite, pneumonia, empiema, osteomielite e
artrite sptica
(83).
O diagnstico, assim como a Escherichia coli, se baseia em
exames
laboratoriais como a microscopia, a cultura, a sorologia e os
testes bioqumicos para
a identificao (83).
O tratamento sofreu varias evolues no decorrer do tempo.
Antigamente, as
penicilinas eram muito usadas para a cura das infeces causadas
por essas
espcies. Porm, atualmente, menos de 10% das cepas bacterianas
de
Staphyloccus so sensveis a esse tipo de medicamento. Graas a
resistncia
-
57
bacteriana muitas estruturas qumicas vm sendo testadas para que
criao de
novas estratgias de tratamento (84).
4.1.4 Biocida
4.1.4.1 policloreto de dialildimetilamnio
O policloreto de diallildimetilamnio (PDADMAC) um polmero
hidrossolvel
usado para purificao de gua e na fabricao de papel (Figura 4.1).
Graas as
suas molculas de sais de amnio quaternrio esse composto
apresenta a ao
biocida (85,86).
Fonte: Turrer (2004, p. 39) (89)
Figura 4.1 - Estrutura qumica do policloreto de
diallildimetilamnio
Um dos mecanismos mais aceito para essa ao ruptura da
membrana
celular causada pela a interao eletrosttica entre a carga
positiva do ction
amnio com as cargas negativas da membrana celular, como mostra a
figura 4.2.
(87,88,89,90)
-
58
Fonte: Siedenbiedel (2012, p.59) (87)
Figura 4.2 - Representao da interao entre ctions de amnio
(tringulo vermelho) e bactrias
4.1.5 Solventes
4.1.5.1 gua
A gua considerada um dos maiores solventes encontrados na
natureza,
capaz de dissolver as mais diferentes substncias como os sais,
os gases, os
aucares,as protenas, os aminocidos, por isso, ela recebe o nome
de solvente
universal. Portanto, se caracteriza por ser um solvente polar,
alm de ser inorgnico,
no txico, no inflamvel, de baixo custo, baixa periculosidade
operacional e no
poluente (91,92,93).
Essa capacidade de solvatao bastante elevada graas sua alta
polaridade. As ligaes hidrognio so ligaes qumicas formadas por
um tomo de
hidrognio que se posiciona entre dois tomos fortemente
eletronegativos; estes
podem estar em molculas diferentes ou em posies diferentes na
mesma
molcula (94).
Hoje, a gua tem sido bastante visada graas ao campo da qumica
verde.
Esse campo busca a preveno da poluio causada pelas diversas reas
da
qumica. Esse setor vem crescendo bastante devido a nova poltica
ambiental que
visa a proteo do meio ambiente e da sade do trabalhador. Com
isso, fica notria
a importncia desse material como solvente na sociedade atual
(95).
-
59
4.1.5.2 tetrahidrofurano
O tetrahidrofurano, que tem como sigla o THF, fundamenta-se em
um
composto orgnico heterocclico que se assemelha ao composto
acetona na sua
predisposio a evaporao. Trata-se de um solvente polar aprtico,
contm uma
molcula de H+ dissocivel, capaz de dissolver componentes polares
e apolares
(96).
Esse composto apresenta caractersticas que se aproximam das
propriedades
dos solventes empregados nas formulaes de diversos materiais.
Alguns estudos j
foram desenvolvidos como o de Fontes em 2009, como mostra a
figura 4.3, mas,
ainda hoje, as informaes encontradas com relao a esse solvente
sobre a sua
atuao nos materiais odontolgicos pouco conhecida (97,98).
Fonte: Fontes (2009, p 15)
Figura 4.3 - Estrutura qumica do tetrahidrofurano
4.2 Mtodos
4.2.1 Testes da incluso do material
Foi realizado um pr-teste para avaliar o mtodo de incluso dos
biocidas nos
materiais, resina acrlica e silicone mdico. Essa etapa foi
realizada a partir da
criao e realizao da Iniciao Cientfica na Faculdade de
Odontologia da
Universidade de So Paulo (FOUSP). A ideia foi pincelar o biocida
na superfcie dos
materiais e elevar a temperatura vtrea para assim conseguir a
interao entre esses
dois compostos. Porm, os resultados mostraram que o biocida
pincelado nas
-
60
superfcies tornava-se frivel, sem aderncia e comprometia a
esttica do material
(Figura 4.4).
Figura 4.4 - Biocida sendo elevado a temperatura vtrea do
material e formando uma pelcula no aderente e frivel
Logo em seguida, foi pensado na utilizao desses biocidas no
momento da
manipulao desses materiais. Desta maneira, foram utilizados para
os testes de
interao o polictions policloreto de dialildimetilamnio (PDADMAC)
na
concentrao 4% em peso (wt) por 10 milimetros (ml) de solvente,
gua ou
tetrahidrofurano, e aplicados durante a manipulao dos corpos de
prova (CP)
confeccionados nesses materiais (Figura 4.5). Os materiais
usados foram as resinas
acrlicas Jet auto e termopolimerizaveis da Clssico e silicone de
uso mdico da
Factor II respeitando as propriedades dos fabricantes.
-
61
Figura 4.5 - Confeco dos corpos de prova. Adequao da geometria e
altura a partir de uma forma pr-confeccionada
A incluso da soluo de biocida no material se caracteriza como
um
importante passo para que se obtenha sucesso no presente
estudo.
4.2.2 Teste de superfcie
Os corpos de prova foram submetidos a testes de superfcies
visando saber
como as solues com o biocida estavam distribudas na matria. Esse
teste foi
realizado no Instituto de Qumica (IQUSP) com o auxilio do
programa de
computao SurfaceWare9 Phoenix como mostra a figura 4.6.
-
62
Figura 4.6 - Exemplo de resultado dado pelo teste de superfcie
no software SurfaceWare9
Esse teste se baseia na comparao entre os corpos de prova sem
biocida,
com solvente gua mais o biocida e com o solvente THF mais o
biocida para
verificar se os biocidas esto na superfcie desse material. O
biocida por ser um
composto hidrfilo tende a interagir melhor com a gua, com isso,
quando o biocida
estiver na superfcie do corpo de prova o ngulo formado entre o
corpo de prova e a
gota d'gua ser menor do que quando o biocida no estiver.
Portanto, os ngulos foram formandos e o programa SurfaceWare9
que aferiu
e obteve o ngulo formado entre a gota d'gua e a superfcie do
corpo de prova do
lado direito e o ngulo do lado esquerdo. O prprio programa
calculou uma mdia
aritmtica dos valores dos ngulos e tambm o volume da gota
d'gua.
4.2.3 Esterilizao com radiao Gama
A esterilizao a partir da radiao gama usada h mais de 45 anos e
na
ltima dcada tem crescido as suas aplicaes. Dentre elas, os
dispositivos
mdicos, produtos farmacuticos e tecidos biolgicos tem usufrudo
desse processo
com uma dose mnima de 25quiloGray (kGy) (99).
-
63
Esse processo de radiao parte do princpio bsico de aproveitar a
radiao,
onde energia emitida na forma de energia eletromagntica ou
partculas para um
determinado fim. Atualmente, utilizada a radiao gama emitida a
partir da
desintegrao radioativa do cobalto de massa 60 (60CO) ou do csio
de massa 137
(137Cs)(100).
A esterilizao ocorre atravs de colises entre a radiao e os
eltrons dos
tomos do material irradiado, fazendo assim com que o tomo do
material perca
seus eltrons e formem ons, caracterizando essa radiao como
ionizante. Alm
disso, essa radiao altamente penetrante, conseguindo quase
alcanar a
velocidade da luz e eliminando qualquer presena de ser vivo
mesmo em
embalagens lacradas (101) (Figura 4.7). Por isso, qualquer
produto que seja
irradiado estar estril ate que a embalagem seja violada.
Fonte: Da Silva (2014, p. 1630) (102)
Figura 4.7 - Interao do raio gama com o eltron que est em
orbita
Esse tipo de radiao consegue matar qualquer componente vital por
dois
processos distintos. O primeiro nomeado de ao direta, esse faz
com que a
radiao colida diretamente com a clula e acarrete uma falncia ou
inibio da sua
reproduo e o segundo tipo denominado de ao indireta, que visa a
formao de
radicais qumicos altamente ativos, produzindo assim uma interao
com as
molculas de gua dos organismos ali presentes (102,103).
-
64
Quanto aos nveis de energia que so empregados para os compostos
das
diversas indstrias e pesquisas, eles so extremamente baixos, no
acarretando
assim nenhum risco ao meio externo. Esses material no se tornam
radioativos
desde que seja dada uma radiao de at 10 milhes de eltron volts
(MeV) (101).
Assim, os corpos de prova foram submetidos a radiao gama na
dosagem
de 25kGy, no Instituto de Pesquisas Energticas Nucleares (IPEN -
USP), para sua
esterilizao. Os corpos de prova foram enviados em sacos
devidamente lacrados.
4.2.4 Testes biolgicos
Os corpos de prova foram submetidos presena das bactrias
Staphylococcus aureus e Escherichia coli para verificar a
eficcia biocida. Esses
testes foram realizados no Instituto de Cincias Biolgicas (ICB -
USP)
departamento de microbiologia no laboratrio de resistncia
bacteriana e alternativas
teraputicas.
Os testes biolgicos se baseiam no protocolo da Japanese
Industrial Standard
nomeado Antibacterialproducts - Test for antibacterialactivity
and efficacy JIS Z
2801: 2010.
O protocolo segue a seguintes etapas:
4.2.4.1 produo de placas de petri com meios de culturas
ricos.
4.2.4.2 duplicao das bactrias Staphylococcus aureus e
Escherichia coli.
4.2.4.3 produo do inculo.
4.2.4.4 seleo do corpo de prova e colocao nas placas de 12
locos.
4.2.4.5 colocao do inculo nos corpos de prova e logo aps a
colocao do
meio SCDLP.
4.2.4.6 diluio seriada da soluo formada.
4.2.4.7 colocao nas placas de petri marcadas com as diluies,
tipo de
corpo de prova e data.
4.2.4.8 contagem de cepas.
4.2.4.9 clculos referenciais.
Aps isso, os resultados sero tabulados e avaliados para ver se
os biocidas
so eficazes com relao as bactrias.
-
65
4.2.4.1 produo de placas de petri com meio de cultura rico
Para a produo das placas de petri com meio de cultura foram
usadas cento
e quarenta e quatro placas de petri, pois para cada corpo de
prova utilizado foram
usadas trs placas de petri com meio de cultura.
A escolha do meio de cultura depende do tipo de bactria que se
quer a
proliferao e do que ser feito com elas. Existem dois tipos de
meios de cultura
com relao aos nutrientes dissolvidos na soluo: os meios
seletivos e os meios
ricos. Como o presente trabalho usou as bactrias Staphylococcus
aureus e
Escherichia coli que so de diferentes tipos, Gram + e Gram -
respectivamente, foi
utilizado ento um meio de cultura rico. Os meios ricos se
caracterizam pelo
crescimento de qualquer tipo de bactria, pois o prprio meio
apresenta nutrientes
para ambas. (104)
Os meios tambm podem ser classificados de acordo com seu estado
de
matria em meios lquidos e slidos. Entre eles o meio slido foi
escolhido pela a
vantagem de imobilizar as clulas permitindo um crescimento de
forma visvel.
Essas massas isoladas so chamadas de cepas ou colnias,
dependendo do
conhecimento ou no da sua espcie bacteriana (104).
Dentre os meios que so slidos e ricos, o Mueller Hinton Agar
(Figura 4.8)
foi o escolhido para a cultura bacteriana. Ele se apresenta em
forma de p e deve
ser dissolvido em gua destilado na proporo de 38 gramas para 1
litro. Aps ser
feita a mistura deve-se homogeneizar e levar a autoclave para a
esterilizao
(Figura 4.9).
Figura 4.8 - Composio do meio Muller Hinton Agar
-
66
Figura 4.9 - Meio de cultura preparado e esterilizado
Com isso, o meio foi distribudo nas placas de petri e depois
submetidas a luz
germicida. Essa luz faz com que o meio, que se encontrava no
estado lquido fosse
gelificados. Em tempo, a mesma luz tambm tem um poder
bactericida (Figura 4.10).
Figura 4.10 - Placas de petri recebendo a luz geminicida com o
meio Mueller Hinton Agar distribudo em toda sua extenso
4.2.4.2 duplicao das bactrias Staphylococcus aureus e
Escherichia coli
A duplicao das bactrias se caracteriza num processo simples e
rpido.
coletada uma cepa da bactria e em seguida riscam-se as bactrias
na superfcie do
-
67
meio sem rasga-lo. Logo aps, essa placa levada para a estufa a
36C e aguarda-
se 24 horas para que as novas cepas sejam formadas (Figura
4.11).
Figura 4.11 - Escherichia coli ATCC 8739 sendo duplicada. A:
Bactrias logo depois de serem riscadas sobre do meio de cultura. B:
Cepas formadas aps 24 horas na estufa
4.2.4.3 produo do inculo
Seguindo o protocolo, o inculo se caracteriza pela produo de
uma
substncia que esteja com a concentrao bacteriana de 1 x
106unidade formadora
de colnia por mililitro (UFC/ml) aonde o caldo usado para diluio
ser o NB 1/500
(Figura 4.12).
Figura 4.12 - Composio do caldo NB 1/500
Ser adicionado em um microtubo, tambm chamado de eppendorf,1 ml
de
NB 1/500 e uma cepa da bactria desejada. Deve-se ento levar ao
vibrador para
que se homogeneze toda essa soluo (figura 4.13).
-
68
Figura 4.13 - Microtubo s submetido ao vibrador para
homogeneizao da soluo
Logo aps, ser realizada a leitura no espectrofotmetro ( = 625
nm) para
alcanar absorvncia de 0,12 (A=0,12). O valor obtido ir
equivaler,
aproximadamente, a escala 0.5 de Mc Farland que por sua vez
equivalente a 1 x 108
UFC/mL. A partir dessa concentrao sero realizadas diluies
seriadas at
obtermos 1 x 106 UFC/mL como concentrao final do inculo.
4.2.4.4 seleo do corpo de prova e colocao nas placas de 12
locos
Os corpos de prova foram selecionados e colocados dentro de uma
placa
com 12 locos para melhor distribuio e organizao. Depois sero
demarcados por
tipo de bactria, Staphylococcus aureus ou Escherichia coli, e
por grupos: controle 0
horas, controle 24 horas, 1 ml de biocida aglutinado e 2 ml de
biocida aglutinado.
Todos esses sendo um lado com corante e sem corante, como
podemos ver na
figura 4.14.
-
69
Figura 4.14 - Corpos de prova separados por grupos, tipo de
bactria epresena ou no de
corante;includos em placa de 12 locos
4.2.4.5 colocao do inculo nos corpos de prova e logo aps a
colocao do meio
SCDLP
Aps a seleo do material foi realizada a aplicao em cada corpo de
prova
de 100 microlitros (l) da inculo. Com isso, os locos que iram
ser avaliados em 24
horas da aplicao dessa soluo no material, foram condicionados
por um papel
metlico com medidas de 1,5 centmetro (cm) x 1,5 cm, ao necessria
para evitar
a evaporao da soluo. Em seguida foram levados para estufa a
36C.
J os corpos de prova que foram avaliados de imediato, o grupo
controle 0
horas, sofreram uma aplicao de 2,5 ml de caldo SCDLP (Figura
4.15).
-
70
Figura 4.15 - Composio do caldo SCDLP
Houve uma homogeneizao dessa soluo formada pelo inculo mais
o
caldo SCDLP formando ento a soluo Y. A partir de ento deu-se
continuidade
para prxima etapa: a diluio seriada da soluo Y.
4.2.4.6 diluio seriada da soluo Y
A soluo Y sofreu uma diluio seriada visando sua aplicao nas
placas de
petri com meio Muller Hinton gar. Essa diluio se baseia na
seguinte tcnica:
Foram colocados 900 microlitros do tampo Fosfato Salino PBS com
pH 7,0 em trs
microtubos. Cada microtubo foi marcado com 10-1, 10-2, 10-3 e
organizados em uma
bandeja (Figura 4.16).
-
71
Figura 4.16 - Microtubos organizados e demarcados em uma bandeja
com as concentraes da soluo Y
Depois de organizado o microtubo com 10-1 recebeu 100
microlitros da
soluo Y e foi levado ao vibrador para a homogeneizao. Logo aps,
foram pegos
100 microlitros do microtubo 10-1 e colocados no microtubo 10-2.
O microtubo 10-2
sofreu o mesmo processo para homogeneizao e com isso foram
recolhidos 100
microlitros dele e colocado no microtubo 10-3. Esse ltimo
microtubo foi
homogeneizado e 100 microlitros foram recolhidos e descartados.
Isso foi repetido
para cada corpo de prova testado.
4.2.4.7 colocao nas placas de petri marcadas com as diluies,
tipo de corpo de
prova e data
A partir disso, foram depositados 100 microlitros de cada
microtubo nas
respectivas placas. Usando como exemplo o microtubo 10-1, foram
recolhidos 100
microlitros desse dispositivo e colocado na placa demarcada com
o nome da
bactria que foi usada, a concentrao da soluo Y, a data, o
material testado e a
presena ou no de corante (Figura 4.17).
-
72
Figura 4.17 - Bancada montada e com as placas de petri j
confeccionadas nas devidas concentraes que sero posteriormente
avaliadas
Assim sendo, todas as placas foram levadas para a estufa na
temperatura de
36 C por 24 e 48 horas.
4.2.4.8 contagem de cepas
Com os tempos decorridos, foram realizadas as duas contagens de
cepas.
A primeira contagem foi com o tempo de 24 horas aps o depsito
das placas na
estufa e a segunda contagem aps 48 horas (Figura 4.18).
-
73
Figura 4.18 - Contagem das cepas que se reproduziram no grupo
controle 0 horas com relao ao corpo de prova da resina
termopolimerizvel com e sem corante no tempo de 24 horas
4.2.4.9 clculos referenciais
Para termos os resultados requeridos precisamos calcular a
partir dos
nmeros de colnias contados.
Clculo de nmero de bactrias viveis:
N de colnias contadas x Fator de diluio x Volume do SCDLP usado
na lavagem
rea do filme colocado na superfcie do corpo de prova
O resultado ser multiplicado pelo fator de diluio da soluo
lquida que foi
colocada para semear em Miller Hinton gar.
Observao 1: Deve-se usar o nmero de bactrias que estejam entre
os valores de
30 a 300. E com isso, o fator de diluio selecionado.
Observao 2: Quando o valor de nmero de colnias contadas for
-
74
Com esse resultado, foi calculado a porcentagem de eficincia
bactericida.
Esse clculo se baseia na seguinte formula:
Calculo porcentual de eficincia:
UFC Corpo de prova Branco 24h - UFC Corpo de prova com
biocida
UFC Corpo de prova Branco 24h
Observao 1: A sigla UFC significa Unidades Formadoras de
Colnias.
Observao 2: O resultado estar em casas decimal
-
75
5 RESULTADOS
Os primeiros testes foram realizados durante a confeco dos
corpos de prova
para evidenciar qual dos solventes testados com biocida o
PDADMAC tinham
melhor capacidade de se aglutinar s cadeias polimricas das
resinas acrlicas e as
cadeias cclicas dos silicones.
Durante o processo de aglutinao do biocida com o material ficou
evidente que
o Policloreto de dialildimetilamnio quando dissolvido em gua
tinha uma maior
dificuldade na incorporao quando comparado com o solvente THF,
ficando grande
parte desse biocida precipitado.
Porm, para termos a confirmao desse achado foram feitos os
testes de
superfcie no software SurfaceWare9 Phoenix. Como explicado nos
mtodos, esse
teste se baseia na comparao dos ngulos de contato criados entre
a gota de gua
e o corpo de prova (Figura 5.1). Os grupos avaliados foram os
corpos de prova sem
biocida, os corpos de provas com biocida dissolvidos em gua e os
corpos de prova
com biocida dissolvidos em THF. Sendo cada grupo ainda
subdividido em com
corante e sem corante.
Figura 5.1 - Exemplo da comparao entre os materiais testados. A:
Resina termopolimerizavel sem biocida dissolvido em THF e sem
corante. B: Resina termopolimerizavel com biocida dissolvido em THF
e com corante
-
76
Realizado o teste, quando comparados os corpos de prova sem
biocida e os
com biocida dissolvidos em gua ficou evidente a sua no
incorporao na massa,
como j havia sido notado durante a manipulao do material, pois o
ngulo de
contato em ambos os corpos de prova foram iguais.
Quando testados os corpos de prova sem biocida versus os corpos
de prova
com biocida dissolvidos em THF notamos uma significativa
diferena entre os
ngulos de contatos formados. Como evidenciamos nas tabelas 5.1 a
5.3.
Tabela 5.1 - Teste de superfcie nos corpos de prova de resina
autopolimerizavel
Resina acrlica autopolimerizavel
Grupo ngulo de contato
Sem corante e sem biocida 73,8
Com corante e sem biocida 68,5
Sem corante e com biocida in THF 69,2
Com corante e com biocida in THF 56,5
Tabela 5.2 - Teste de superfcie nos corpos de prova de resina
termopolimerizavel
Resina acrlica termopolimerizavel
Grupo ngulo de contato
Sem corante e sem biocida 75
Com corante e sem biocida 62,7
Sem corante e com biocida in THF 66,6
Com corante e com biocida in THF 60,6
-
77
Tabela 5.3 - Teste de superfcie nos corpos de prova de silicone
de uso mdico
Silicone de uso mdico
Grupo ngulo de contato
Sem corante e sem biocida 86,6
Com corante e sem biocida 85,1
Sem corante e com biocida in THF 78,3
Com corante e com biocida in THF 69,1
Esses resultados mostraram que os corpos de pro
