Upload
simiona0
View
222
Download
11
Embed Size (px)
Citation preview
Genul Staphylococcus
Etapele diagnosticului de laborator in infectia cu
Staphylococcus spp.
Stafilococi coagulazo-pozitivi: S. aureus
Stafilococi coagulazo-negativi (SCN) cu importanţă clinică: S. lugdunensis, S.
schleiferi, S. epidermidis, S.haemolyticus, S. saprophyticus. etc
Produse patologice
portaj: secreţie din cavitatea nazală anterioară, secreţie faringiană, probe de pe
tegumente (zona axilară, perianală)
plăgi, otite, infecţii tegumentare Þ puroiul (S. aureus)
infecţii urinare Þ urină (S. saprophyticus, S. aureus)
infecţii gastro-intestinale, toxiinfecţii alimentare Þ materii fecale, vomismente,
alimente.
meningite LCR
septicemie, febră puerperală, sânge pt hemocultura (S. aureus, SCN)
pneumonie, spută.
infecţii nosocomiale - S. aureus meticilino-rezistent (MRSA, SARM ),
SCN meticilino-rezistent-(MRS)
S. aureus intermediar vancomicina (VISA)
S. aureus rezistent la vancomicina ( VRSA)
1
Recoltare produs patologic
PRODUS RECOLTAREa)CANTITATE b)TRANSPORT
OBSERVATIIRESPECTA PRECAUTIUNILE
UNIVERSALE
ABCES
DESCHIS
INCHIS
Dezinfecteaza cu alcool etilic 70%, betadina. Daca este necesar iriga leziunea cu o solutie salina non-inhibitorie. Aspira cu o seringa sterila ( de preferat ) sau cu tampon steril, profund din leziune.
Aspira cu o seringa sterila. Transfera imediat aseptic tot materialul intr-un sistem anaerob.
a) > 1ml, sau 2 tampoane din acelasi loc. b) < 2 h.
a) > 1 ml b) < 2 h, sistem anaerob de transport
Se recomanda recoltarea cu seringa sterila prin aspiratie sau biopsie. Daca se recolteaza cu tamponul, este obligatorie recoltarea a doua tampoane din profunzimea leziunii ( 1 tampon pentru insamantare si 1 tampon pentru frotiul Gram ). Mediul de transport Stuart sau Amies. Evita contaminarea produsului patologic in momentul recoltarii cu bacterii ce nu sunt implicate in procesul infectios. Sistemul anaerob de transport este obligatoriu pentru a asigura supravietuirea bacteriilor anaerobe implicate in procesul infectios. Sistem anaerob : PRAS transport medium, Accu- CulShure -oxygen free-swab, containere fara oxigen pentru biopsiile de tesut.. (vezi anexa nr.3)
Aceleasi recomandari la recoltare pentru: vezicule, pustule,plaga, flictene, furuncule, arsuri, ulcer decubit, fistule, plaga muscata,etc Gangrena : se recolteaza si hemocultura in acelasi timp.
2
Examenul macroscopic: puroi cremos, filamentos, gălbui.
Examenul microscopic direct = frotiu din produsului patologic (pp)
coloraţia Gram: coci Gram pozitivi, dispuşi în grămezi asemănătoare ciorchinilor
de strugure
coci Gram pozitivi localizati intra si perileucocitar; prezenta celulelor inflamatorii
este dovada ca s-a recoltat un produs patologic real, de la nivelul procesului
infectios
Gram stain of Staphylococcus aureus in pustular exudate
3
Insamantarea pp
se insamanteaza in poligon deschis ( fara o latura) – pe medii solide, in scopul
obtinerii coloniilor microbiene izolate: geloza-sange sau Columbia –sange,
mediul Chapman
4
se insamanteaza si in mediu lichid de imbogatire – BHI
Incubare aerobă la 37°C, 18 – 24 ore.
Identificarea bacteriei:
Caractere morfotinctoriale: frotiu din cultură pură : coci Gram pozitivi, în
grămezi.
Caractere de cultură: colonii “S” pigmentate sau nepigmentate ( medii solide)
Medii lichide- tulbura uniform bulionul cu depozit moderat la fundul tubului
5
Producerea de hemolizine – pe geloză-sânge
hemoliza beta (S. aureus,) datorată hemolizinei alfa nu prezintă hemoliză (majoritatea tulpinilor SCN)
Descompunerea manitolului pe mediul Chapman (manito-pozitiv, colonii galbene, S.
aureus)
6
A) Staphylococcus aureus, (B) Staphylococcus epidermidis, and (C) Escherichia coli streaked on a mannitol salt agar plate. The mannitol fermenting colony (yellow) is S. aureus, while the mannitol nonfermenting colony (pink) is S. epidermidis. The growth of E. coli was inhibited by the high salt concentration.
7
Caractere biochimice:
Testul catalazei
Diferentiaza coloniile de staphylococ de cele de streptococ.
Deoarece ambele bacterii cresc pe mediu cu sange se recomanda folosirea doar a
varfurilor coloniilor de stafilococ sau streptococ pentru a evita reactii fals pozitive
datorita catalazei eritrocitare(din mediu cu geloza –sange).
Pe o lama de microscop depune 1-2 picaturi de H2O2 , peste picatura de reactiv se adauga
coloniile testate.
Citire si interpretare:
Test pozitiv-aparitia bulelor de gaz pana la efervescenta
Test negativ-absenta bulelor
Identificarea Staphylococcus aureus
Se face prin testul coagulazei pe lama , stafilococul auriu fiind producător de coagulază.
Pe o lamă de microscop se pune o picătură de plasmă . În picătură se omogenizează cu
grijă o ansă din cultura pură a bacteriei de identificat. Omogenizarea se continuă
imprimând lamei mişcări de rotaţie.
Citire si interpretare
Test pozitiv-apariţia de grunji, care lasă picătura limpede înseamnă reacţie
pozitivă.
Test negativ- amestecul rămâne omogen;Orice reactie negativa se continua cu
testarea coagulazei in tub.
8
Testul coagulazei in tub -0,5 ml plasma se incubeaza cu 0.5 ml cultura de 24 ore a
tulpinii de testat in bulion glucozat,.la 37 C pentru patru ore.
Citire si interpretare
Rezultat pozitiv presupune aparitia unui coagul, se poate prelungi incubarea
probei pana la 16-18 ore, daca coagulul nu a aparut in primele patru ore, cu
verificarea periodica a probei
Rezultat negativ-lipsa coagulului
coagulaza liberă pozitiv: S. aureus;
coagulaza liberă negativ: stafilococi coagulazo-negativi (SCN)
9
Identificarea S.aureus -test rapid:
Slidex Staph Plus este un test rapid de latex aglutinare
pentru identificarea Staphylococcus aureus izolat pe mediile de cultura
rezultat negativ, absent S.aureus
1
Fermentează glucoza, manitolul, lactoza, zaharoza etc. cu producere de acid
Truse API de identificare biochimica
Tipizarea bacteriilor: pentru identificarea sursei de infecţie, compararea tulpinilor
izolate
prin lizotipie (determinarea sensibilităţii stafilococului faţă de bacteriofagi;)
prin metode de biologie moleculară
Antibiograma – testeaza sensibilitatea tulpinilor izolate
Mediul Muller Hinton, inocul 0.5 McFarland, temp 35 C, incubare 18 pana la 24 ore
Alegerea discurilor pentru testarea sensibilitatii prin metoda difuzimetrica, interpretarea
rezultatelor conform Performance standards for antimicrobial susceptibility
testing;
CLSI /2009( anterior numit NCCLS)
1
antibiograma E-TEST
pentru tulpinile cu inalta rezistenta la antibiotice
Modul de desfasurare a lucrarii practice
studentii primesc manuscrisul cu „etapele diagnosticului de laborator in
infectia cu Staphylococcus spp.
1. Lp se desfasoara interactiv- se discuta pe marginea manuscrisului primit
anterior LP-ului
2. Fiecare student efectueaza reactia catalazei
3. material demonstrativ- lucreaza doar asistentul -testul slidex Staph Plus
1
4. material demonstrativ-medii de cultura-Columbia-sange -colonii de
S. aureus, studentii recunosc coloniile de tip S, recunosc coloniile beta
hemolitice si non-hemolitice
5. material demonstrativ-trusa API pentru identificarea biochimica
6. antibiograma S.aureus, studentii masoara diametrele si noteaza in caiet,
interpretare conform CLSI/2009, Staphylococcus spp.
7. Fiecare student prinde imaginea la microscop si examineaza frotiuri :coci
Gram pozitivi in gramezi
Bibliografie
Bacteriologie Medicala, Olga Dorobat, editura UTM, 2006
Clinical Microbiology Procedures Handbook, Henry D. Isenberg, editata
American Society for Microbiology, 2004
Koneman's Color Atlas and Textbook of Diagnostic Microbiology , Washington
C Winn, Stephen D. Allen, Gail L. Woods, William M. Janda, Paul C.
Schreckenberger , editura Lippincott Williams & Wilkins, 2005
Manual of Clinical Microbiology , Patrick R. Murray , Ellen Jo Baron , Michael A. Pfaller , Fred C. Tenover , Robert H. Yolken, editura ASM, 2007Performance
Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing”.M 100, S19 CLSI /2009
1