Selenito Caldo

Medio de enriquecimiento para el aislamiento de Salmonella spp. a partir de materiales clnicos, especialmente heces.

FundamentoEste caldo selectivo favorece el crecimiento de Salmonella spp.En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, el selenito de sodio inhibe la flora Gram positiva y la mayora de la flora entrica excepto Salmonella spp. durante las primeras 8-12 horas de incubacin.Frmula (en gramos por litro)Instrucciones

Peptona5.0Suspender 23 g del polvo en un litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar ligeramente hasta su disolucin completa. Evite el calentamiento excesivo.No esterilizar en autoclave.Distribuir en tubos estriles un volumen no menor a 5 ml. Se recomienda guardar en heladera si no se usa de inmediato.

Lactosa4.0

Fosfato de sodio10.0

Selenito de sodio4.0

pH final: 7.0 0.2

Siembra-Materia fecal: a un tubo con 10-15 ml de caldo selenito, agregar 1-2 ml de una suspensin de materia fecal.-Tejido infectado: macerar 1-2 g de tejido en 10-15 ml de caldo selenito, usando una varilla estril.-Orina: a un tubo con unos 5 ml de caldo selenito doble concentracin, agregar igual volumen de orina.

IncubacinA 35-37 C, durante 16-24 horas, en aerobiosis.Luego, subcultivar en medios selectivos: Salmonella Shigella Agar (B02-138-05/06), Hektoen Entrico Agar (B02-110-05/06), Verde Brillante Agar (B02-124-05/06), Mac Conkey Agar (B02-114-05/06).

ResultadosMicroorganismosCrecimiento

Salmonella enteritidis ATCC 13076Bueno

Salmonella typhimurium ATCC 14028Bueno

Escherichia coli ATCC 25922Regular-Escaso

Proteus mirabilis ATCC 43071Regular-Escaso

Mac Conkey Agar.Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.FundamentoEn el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.Frmula (en gramos por litro)Instrucciones

Peptona17.0Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.

Pluripeptona3.0

Lactosa10.0

Mezcla de sales biliares1.5

Cloruro de sodio5.0

Agar13.5

Rojo neutro0.03

Cristal violeta0.001

pH final: 7.1 0.2

Siembra- Sembrar en superficie.- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.IncubacinDurante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbicaResultadosMicroorganismosColonias

Escherichia coli ATCC 25922Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC 14028Incoloras, transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022Incoloras, transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071Incoloras, transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212Diminutas, incoloras, opacas

Caractersticas del medioMedio preparado: rojo prpura

Salmonella Shigella Agar.Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia.

FundamentoEs un medio de cultivo selectivo y diferencial.La selectividad, esta dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp.Es diferencial debido a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del tiosulfato de sodio.Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo.Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro de hierro.Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05).Frmula (en gramos por litro)Instrucciones

Pluripeptona5.0Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.

Extracto de carne5.0

Lactosa10.0

Mezcla de sales biliares8.5

Citrato de sodio8.5

Tiosulfato de sodio8.5

Citrato frrico1.0

Agar13.5

Verde brillante0.00033

Rojo neutro0.025

pH final: 7.0 0.2

SiembraSembrar por estriado la superficie del medio de cultivo.Recomendaciones, se aconseja sembrar en forma conjunta una placa de agar E.M.B. (B02-101-05) o de agar Mac Conkey (B02-114-05).IncubacinDurante24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.ResultadosMicroorganismosColonias

Salmonella typhimurium ATCC 14028Transparentes, centro negro

Shigella flexneriIncoloras

Shigella sonneiIncoloras

Proteus mirabilis ATCC 43071Transparentes, centro negro

Escherichia coli ATCC 25922Rosadas a rojas

Klebsiella pneumoniae ATCC 700603Rosadas cremosas y mucosas

Enterococcus faecalis ATCC 29212Incoloras, de muy escaso crecimiento

Caractersticas del medioMedio preparado: rojo naranja.

CASENASIntroduccionLas protenas de la leche se dividen en tres grupos: Las casenas, las protenas del lactosuero y las que forman parte de la membrana del glbulo graso. Estas ltimas representan solamente del orden del 1% del total de la protenas de la leche

Las casenas son las principales protenas de la leche. Se sintetizan exclusivamente en la glndula mamaria, y en la leche se encuentran en su mayor parte formando agregados multimoleculares conocidos como micelas de casena. En la leche de vaca, la casenas representan alrededor del 80% del total de protenas, es decir, de 25 a 28 gramos por litro de leche. En la leche humana la presencia de protenas del lactosuero es mucho mayor, de tal forma que las casenas son solamente del orden de la mitad de las protenas totales, entre 5 y 8 gramos por litro.